桥粒斑蛋白在肺动脉高压中对血管肺动脉平滑肌的功能研究

目的探究桥粒斑蛋白(DSP)在肺动脉高压(PH)大鼠模型与人肺动脉平滑肌细胞(hPASMCs)的表达变化及其在PH发生、发展中的作用。方法 24只SPF级别雄性SD大鼠运用随机数字表法随机分为正常对照(NC)组、野百合碱(MCT)组、低氧(HYP)组及低氧联合Sugen5416(SuHx)组, 检测各组大鼠右心室收缩压(RVSP)及右心室肥厚指数(RVHI), 观察各组大鼠血管增厚程度;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠中肺组织中DSP的表达情况。体外培养hPASMCs, 分别用转化生长因子β1(TGF-β1)或HYP处理细胞24、48、72 h, Western blot检测各组细胞中DSP表达情况。采用小分子siRNA DSP干扰序列及阴性对照序列分别转染hPASMCs, 分为DSP干扰(siDSP)组及阴性对照(siNT)组。2组均进行TGF-β1、CoCl2或HYP处理48 h, Western blot检测增殖分化及凋亡相关蛋白[p-p38、增殖相关蛋白(PCNA)、抗凋亡蛋白(Bcl2)、促凋亡蛋白(Bax)]的表达情况, 划痕实验检测细胞的迁移能力变...     

干扰circ0063865的表达影响食管鳞状细胞癌的恶性表型

目的探讨circ₀063865在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织和细胞中的表达及其对细胞生物学特性的影响。方法应用Sanger测序、背靠背引物验证以及核糖核酸外切酶(Ribonuclease R, Rnase R)耐受实验鉴定circ₀063865的环状结构及稳定性。RNA荧光原位杂交实验检测ESCC病理组织芯片中circ₀063865的表达并分析其临床相关性。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测正常食管上皮细胞系以及ESCC细胞系中circ₀063865的表达水平。Cell Counting Kit-8实验、集落形成实验、划痕实验、transwell侵袭实验以及流式细胞术分别检测circ₀063865对细胞增殖、迁移、侵袭能力以及凋亡水平的影响。结果 Sanger测序、背靠背引物和Rnase R耐受实验验证了circ₀063865的成环性。RNA荧光原位杂交结果显示, circ₀063865在ESCC组织中表达的平均荧光强度...     

环状RNA hsacirc0001445在绝经后骨质疏松症患者中的表达及作用机制

目的探讨环状RNA(circRNA)hsa_circ₀001445在绝经后骨质疏松症(PMOP)患者中的临床意义和调控机制。方法从临床收集的血液样品中提取RNA, 使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa_circ₀001445的表达。荧光素酶报告基因分析、RNA下拉实验研究了RNA之间的相互作用。结果与健康对照组相比, PMOP患者血浆hsa_circ₀001445表达下调(P<0.001)。血浆中hsa_circ₀001445以高灵敏度和特异性将PMOP患者与健康对照组区分开来, 曲线下面积(AUC)为0.9654(95%CI0.9361～0.9947, P<0.001), 灵敏度为94.0%, 特异度为88.0%。Hsa_circ₀001445促进人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)的成骨分化、抑制成脂分化(P<0.001)。Hsa_c     

阿托伐他汀抑制C反应蛋白对肺动脉平滑肌细胞的增殖作用研究

目的近年的研究显示,炎症参与肺动脉高压的发生和发展。作为炎症的重要指标,C反应蛋白(CRP)是肺动脉高压的独立预测因子。本文通过观察CRP和阿托伐他汀对培养的肺动脉平滑肌细胞(hPASMCs)增殖的影响,探讨CRP和阿托伐他汀对肺血管疾病的可能作用。方法体外培养hPASMCs,以不同浓度的CRP(5-200μg/ml)刺激24h,或先加阿托伐他汀(0.1-10μmol/l)处理2h。核因子κB(NF-κB)的活性以非变性凝胶电泳迁移率(EMSA)方法进行分析。细胞增殖水平以5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrDU)掺入法和ELISA方法进行检测。结果 CRP刺激hPASMCs的增殖程度呈浓度依赖性,随着CRP浓度的增加,细胞增殖倍数逐渐上升,在CRP200μg/ml组,其增殖倍数为对照组的1.84±0.12(P<0.001)。CRP显著诱导NF-κB在hPASMCs中的激活。阿托伐他汀则通过抑制NF-κB的激活而减轻hPASMCs的增殖。结论 CRP促进肺动脉平滑肌细胞的增殖,具有浓度依赖性,这一作用是通过对NF-κB的核内转位激活而介导的。提示CRP在肺动脉高压的发病中有重要作用,阿托伐他汀可能对肺血管疾病有保护作用。     

钾通道与肺动脉平滑肌细胞凋亡

钾通道与肺动脉平滑肌细胞的生长、增殖和凋亡密切相关.在肺动脉高压的发生、发展中起着重要作用.肺动脉平滑肌细胞膜钾通道活性降低或表达下降不仅导致细胞浆游离Ca2+浓度升高,肺动脉平滑肌细胞收缩、增殖和肺血管重构,而且也与肺动脉平滑肌细胞凋亡减少有关.凋亡性容积减少是细胞凋亡的必要前提和早期标志.钾通道参与凋亡性容积减少调节、细胞色素C释放、Caspase激活和DNA降解等凋亡事件以及抗凋亡蛋白Bcl-2、survivin的调节.因此.钾通道有望成为诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡药物的靶点,为未来攻克肺动脉高压带来新希望.     

低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞tsRNA的表达谱分析

目的 观察低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary artery smooth muscle cells, RPASMCs)中1类新型非编码RNA-tRNA衍生的小RNA(tRNA-derived small RNA, tsRNA)表达情况。方法 采用1%O₂的低氧培养箱和常氧培养箱分别培养RPASMCs 24 h,通过tsRNA高通量测序技术和生物信息学检测并分析RPASMCs中tsRNA的表达差异。结果 tsRNA高通量测序检测到3 806个tsRNA,其中具有明确类型的有504个(上调的tsRNA有195个，下调的tsRNA有309个),差异表达的上调和下调的tsRNA分别为116个和156个，在进一步剔除掉片段长度<16 nt的tsRNA之后，与常氧培养比较，低氧处理的RPASMCs表达显著上调的tsRNA有59个(P<0.01),表达显著下调的tsRNA有9个(P<0.01)。结论 低氧刺激RPASMC后，tsRNA表达存在明显差异，可能影响PASMC增殖、凋亡和迁移等功能，可为深入阐明低氧性肺动脉高压的发生机制提供新方法...     

BMPR2基因突变的遗传性肺动脉高压家系病例汇报并文献复习

目的探讨遗传性肺动脉高压合并疑似遗传性出血性毛细血管扩张症(HHT)患者的临床特征、诊断要点、遗传学特点及治疗方法。方法分析中南大学湘雅二医院呼吸与危重症学科收治的遗传性肺动脉高压家系合并疑似遗传性出血性毛细血管扩张症的患者临床资料。对患者及患者家系外周血基因进行全外显子基因测序并进行sanger测序验证突变位点, 后进一步验证该突变所导致的mRNA缺失情况。以"HHT""FPAH""骨形态发生蛋白受体2(BMPR2)基因突变"为关键词, 检索自2000年1月至2021年11月的万方数据库和PubMed数据库相关文献并进行复习。结果我们发现来自湖南益阳的一个家系中的2例患者, 以咯血或肺动脉高压症状为主要临床表现, 无鼻出血等HHT临床特征, 然而2例患者肺部均出现肺血管异常、肺动脉高压, WES发现BMPR2基因突变(NM₀01204.7:c.1128+1G>T)阳性而ENG、ACVRL1、SMAD4基因阴性, 对家族4代16人进行调查家系分析和sanger验证(发现其中7人携带该突变基因), 然后转录水平mRNA测序进一步证实该突变导致8号9号外显子缺失...     

Survivin在肺动脉高压发病过程中的作用

Survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成员,也是目前发现的最强的凋亡抑制蛋白.Survivin参与调控细胞周期的两个基本过程,即抑制细胞凋亡和促进细胞增殖.目前研究表明survivin调节肺动脉平滑肌细胞的增殖,在肺动脉高压的肺动脉中膜高表达.通过研究survivin在肺动脉高压发病过程中的作用,可以为肺动脉高压的治疗提供新的思路和手段.     

室间隔缺损并肺动脉高压患者肺字疐Fas/FasL表达与细胞凋亡的研究

目的探讨细胞凋亡在室间隔缺损并肺动脉高压(VSD-PH)发病中的作用及基因调控机制,为本病防治提供理论依据.方法采用TUNEL法及免疫组化技术观察了30例VSD-PH患者(观察组)及10例室间隔缺损不伴肺动脉高压患者(对照组)肺组织细胞凋亡及Fas/FasL系统表达的变化.结果观察组肺泡上皮和肺血管内皮细胞凋亡率明显低于对照组;Fas、FasL在肺组织中的表达与对照组比较明显下调.结论肺血管内皮和肺泡上皮细胞凋亡不足可能参与肺动脉高压的形成.     

先天性心脏病患者免疫因子Th17/Treg失衡与肺动脉高压的关系

目的:探讨患者外周血中Th17细胞、CD4+D25+FoxP3+调节性T细胞(Treg)的变化及意义。方法:75例先天性心脏病(CHD)合并肺动脉高压(PAH)患者,分为轻度肺动脉高压组(28例)、中度肺动脉高压组(32例)及重度肺动脉高压组(15例),20例健康体检者作为对照组。采用流式细胞分析法检测外周血中Th17细胞、Treg细胞占CD4+T细胞的比例,分析Th17细胞与Treg细胞的比例与肺动脉压的相关性。结果:Th17/CD4+T细胞比例、Treg/CD4+T细胞的比例和Th17/Treg细胞比值,两组间差异具有统计学意义(P<0.05),随着肺mPAP的增加,Th17/CD4+T细胞比例明显升高;Treg/CD4+T细胞的比例明显下降;Th17/Treg细胞比值显著升高。mPAP与Th17/Treg比值呈显著正相关(r=0.95,P<0.05)。结论:先天性心脏病合并肺动脉高压患者外周血中存在Th17/Treg失衡,且与肺动脉高压程度呈正相关,Th17/Treg失衡可能参与了肺动脉高压的发生发展。     

PI3K/Akt/FoxO1信号通路对人源肺动脉平滑肌细胞及肺动脉高压大鼠细胞凋亡的影响

目的 探究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头框蛋白O1(FoxO1)信号通路对人源肺动脉平滑肌细胞(hPASMC)及肺动脉高压大鼠细胞凋亡的影响。方法 细胞实验部分,将hPASMC分为4组：(1)空白对照组;(2)血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)组;(3)PDGF-BB+LY294002组;(4)PDGF-BB+紫杉醇(paclitaxel)组。采用TUNEL检测细胞凋亡,采用蛋白质印迹法检测Bcl-2、裂解的胱天蛋白酶-3(cleaved caspase-3)和PI3K/Akt/FoxO1信号通路相关蛋白表达水平。动物实验部分,将12只SD大鼠随机分为4组：(1)空白对照组;(2)野百合碱(MCT)组;(3)MCT+LY294002组;(4)MCT+paclitaxel组。采用Western blot检测Bcl-2、cleaved caspase-3和PI3K/Akt/FoxO1信号通路相关蛋白表达水平。结果 细胞实验部分：相比于PDGF-BB组,PDGF-BB+LY294002组与PDGF-BB+paclitaxel组的Bcl-2表达水平下降(P&...     

肺动脉高压患者肺组织中 ADAMTS-7 的表达简

目的 观察ADAMTS-7在肺动脉高压患者肺组织中的表达情况.方法 取肺动脉高压患者肺组织20例（病例组）,肺动脉压力正常患者肺组织20例（对照组）.两组肺组织切片用免疫组化法观察肺中的ADAMTS-7的表达情况,肺组织提取RNA行RT-PCR对ADAMTS-7表达量进行半定量分析.结果 病例组肺组织中的ADAMTS-7表达显著高于对照组 （P〈0.05）.结论肺动脉高压患者肺组织中ADAMTS-7表达明显增多.     

球囊肺动脉成形术治疗肺动脉血栓内膜剥脱术后残余/复发肺动脉高压的疗效和安全性研究

目的对球囊肺动脉成形术(BPA)治疗慢性血栓栓塞性肺动脉高压(CTEPH)患者肺动脉血栓内膜剥脱术(PEA)术后残余/复发肺动脉高压的有效性和安全性进行评估。方法本研究为单中心病例对照研究。采用非随机抽样的方法纳入2004年11月至2021年12月于首都医科大学附属北京朝阳医院行PEA的CTEPH患者76例, 其中发生PEA术后残余/复发肺动脉高压的患者17例, 9例采用BPA治疗。收集患者基线资料、PEA及BPA前后平均肺动脉压(mPAP)、肺血管阻力(PVR), 超声心动图、WHO功能分级、N末端脑钠肽前体等数据, 并在末次BPA后进行至少6个月的随访。采用SPSS 26.0对数据进行统计分析。结果 PEA术后残余/复发性肺动脉高压发生率为22.4%(17/76)。9例残余/复发肺动脉高压患者在PEA术后进行了BPA治疗, 其中男6例, 女3例;年龄(52.6±10.8)岁, 年龄范围为36～71岁。PEA术后与BPA治疗前的间隔时间为(54.9±64.5)个月, 进行BPA次数为(2.7±1.1)次。末次BPA后与首次BPA治疗前相比, mPAP从(41.1±9.1) mmHg降...     

COPD并发肺动脉高压与Rho激酶表达的相关性分析

目的分析老年COPD患者并发肺动脉高压与血清Rho激酶表达的相关性。方法分析我院接受治疗的COPD患者的临床资料。依据患者是否合并肺动脉高压分为观察组、对照组。结果共纳入观察组38例,对照组40例。观察组患者肺动脉平均压、血清ROCK1、单核细胞ROCK1、肿瘤坏死因子α及C-反应蛋白水平均显著高于对照组(P0.001)。观察组患者血清ROCk1水平与肺动脉高压呈现显著性正相关(P0.001)。观察组患者单核细胞ROCk1水平与肺动脉高压呈现显著性正相关(P=0.004)。结论合并肺动脉高压的老年COPD患者,外周血及单核细胞内ROCK1表达均升高,且与肺动脉平均压力呈现正相关。提示ROCK1是干预COPD向肺动脉高压进展的新靶点。     

COPD患者肺内细胞增殖与凋亡的研究

采集慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者和非COPD患者术后的肺组织标本,应用增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学方法及原位缺口末端DNA碎片标记技术检测肺血管平滑肌细胞和肺泡上皮细胞增殖与凋亡.结果与非COPD组比较,COPD组肺泡上皮细胞、凋亡指数(AI)、增值指数(PI)、PI/AI升高;血管平滑肌细胞的AI、PI/AI降低、PI升高(P均＜0.01).提示COPD患者的肺实质细胞存在异常的细胞凋亡和增殖现象,肺泡上皮细胞凋亡、血管平滑肌增殖处于主导地位,细胞增殖与凋亡的失衡可能在COPD发病机理中起一定作用.     

内皮细胞凋亡与肺动脉高压

随着肺动脉高压研究的不断深入,肺血管内皮细胞凋亡在肺动脉高压形成过程中的重要作用被逐步认识。多种疾病和环境因素导致肺血管内皮损伤、内皮细胞凋亡增加、功能障碍,从而促进肺动脉平滑肌细胞和成纤维细胞增殖、肺动脉重构和血栓形成;肺血管内皮细胞凋亡还诱导产生凋亡抵抗表型的内皮细胞过度增殖,形成丛样病变和肺血管闭塞,最终导致严重肺动脉高压。因而在肺动脉高压发生发展的不同时期,调控肺血管内皮细胞凋亡可能是预防和治疗肺动脉高压的一种新策略。     

低氧肺动脉高压大鼠的肺动脉组织凋亡

目的 研究bcl-2、bax凋亡相关基因在低氧处理大鼠肺动脉中的表达,探讨低氧肺动脉高压的发病机制及防治措施.方法 36只Wistar大鼠随机分为3组,分别为正常对照组、低氧肺动脉高压组、低浓度一氧化碳(CO)组,每组12只,采用原位细胞凋亡、原位杂交、免疫组化等方法检测肺动脉的凋亡状况.结果 ①原位凋亡检测示,正常对照组、低氧肺动脉高压组、低浓度CO组的凋亡率分别为8.1%,37.6%,76.5%,三者间差异显著;②原位杂交显示,正常对照组bax、bcl-2杂交呈弱阳性表达.低氧肺动脉高压组bax杂交呈弱阳性表达,低浓度CO组呈强阳性表达,但bcl-2杂交可见低氧肺动脉高压组呈强阳性表达,低浓度CO组呈弱阳性表达;③免疫组织化结果表明,低浓度CO组bcl-2、bax蛋白均有升高,以bax为著.低氧肺动脉高压组虽然也有表达,但程度较弱,且bcl-2表达处于优势.结论 低浓度CO可以调节bcl-2、bax凋亡基因的表达,从而促进肺动脉组织的凋亡.     

miR-206在大鼠肺动脉高压模型中的表达和意义

目的 探讨miR-206在大鼠肺动脉高压（pulmonary hypertension，PH）模型中的表达和意义。 方法 构建肺动脉高压大鼠模型，按缺氧暴露时间分别标记为(1、7、14、21和28 d)组，并将常压常氧（FIO₂为0.21）作为对照组（n = 5），提取大鼠右下肺叶组织及外周血，实时定量PCR检测miR-206表达；分离大鼠原代肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cell，PASMC），以miR-206 mimics转染细胞并进行缺氧暴露，检测细胞增殖能力。生物信息学分析发现并选择缺氧诱导因子（hypoxia-inducible factor，HIF）-1α作为miR-206的候选靶基因，以双荧光素酶报告实验验证miR-206是否可直接调控HIF-1α，共转染miR-206mimics与HIF-1α过表达质粒，检测PASMC细胞增殖能力变化。 结果 与对照组相比，大鼠肺组织中miR-206的表达在缺氧暴露后即可出现miR-206表达降低（P < 0.05），大鼠血清miR-206亦明显降低（P < 0.05）；缺氧暴露后的大鼠肺组织分离培养的PASMC miR-206表达与对照组相比也明显降低（P < 0.05），miR-206低表达时PASMC增殖能力明显增加（P < 0.05）；miR-206 mimics转染可拮抗因缺氧暴露引起的PASMC增殖能力增加（P < 0.05）。生物信息学发现HIF-1α的3’非编码区（3’ untranslated region，3'UTR）具有miR-206的结合位点，用miR-206和HIF-1α（野生型3'UTR）共转染的PASMC中荧光素酶报告基因活性较对照组显著下调（P < 0.05），而miR-206 mimics和HIF-1α（突变型3'UTR）共转染组则较对照组无明显统计学差异。共转染miR-206 mimics后，HIF-1α上调引起的细胞增殖被逆转（P < 0.05）。 结论 缺氧诱导的miR-206下调通过靶向PASMC中的HIF-1α途径来促进PH，miR-206可能是缺氧诱导PH早期的触发因素。     

细胞色素C氧化酶-2/前列腺素E2信号通路对老年慢性阻塞性肺疾病患者肺血管内皮细胞凋亡的作用

目的探讨细胞色素C氧化酶(Cox)-2/前列腺素E2(PG)E2信号通路对老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺血管内皮细胞凋亡的作用。方法该行肺叶切除术的老年患者20例,根据吸烟情况和COPD诊断标准分为非吸烟非COPD组(对照组)6例,吸烟非COPD组(非COPD组)7例,吸烟且COPD组(COPD组)7例,取癌旁正常肺组织为研究标本。TUNEL法检测肺血管内皮细胞凋亡情况;免疫组化染色观察细胞中Cox-2、PGE2蛋白分布情况;RT-PCR检测Cox-2、PGE-2 mRNA表达;Western印迹检测Cox-2、PGE2蛋白的表达。结果肺血管内皮细胞凋亡指数由高到低依次为COPD组、非COPD组、对照组;Cox-2、PGE2蛋白呈棕色或棕黄色表达于肺血管内皮细胞质并在对照组中表达丰富。非COPD组、COPD组肺组织中Cox-2、PGE2 mRNA表达量明显低于对照组,COPD组明显低于非COPD组(P<0.05)。非COPD组、COPD组肺组织中Cox-2、PGE2 mRNA蛋白表达量明显低于对照组,COPD组明显低于非COPD组(P<0.05)。结论 COPD患者Cox-2、PGE2表达下调,肺血管内皮细胞凋亡增加且与吸烟相关;Cox-2/PGE-2信号通路参与介导COPD患者肺血管内皮细胞凋亡,呈负向调节。     

循环miR-19a作为先天性心脏病相关肺动脉高压的标志物

目的 miRNA是一类约高度保守的小分子非编码RNA,具有调控细胞分化、增殖、凋亡的功能,与心血管疾病密切相关。因肺动脉高压是血管增殖性疾病,与血管再生相关的miR-19a可能与肺动脉高压密切相关,循环miRNA可作为先天性心脏病相关肺动脉高压的无创诊断标志物。方法收集室间隔缺损合并重度肺动脉高压患者血浆14例(病例组),室间隔缺损不伴肺动脉高压患者血浆14例(对照组)。分别从血浆中提取总RNA并进行质量检测,进行逆转录反应,获得相应miRNA的cDNA,以U6snRNA为内参进行标定,进行实时荧光定量PCR反应,绘制标准曲线,根据标准曲线和各样本的定量PCR结果计算miR-19a的表达量并绘制ROC曲线。结果两组样本的总RNA均有较好的质量,可以满足miRNA芯片检测和实时定量PCR的实验要求。病例组血浆中miR-19a拷贝数明显高于对照组。ROC曲线下面积为0.865(95%可信区间,CI=0.727-1.002,P0.001),循环miR-19a诊断先天性心脏病相关肺动脉高压具有较高的敏感性和特异性。结论先天性心脏病相关肺动脉高压患者血浆中miR-19a显著增高,循环miR-19a可作为先天性心脏病相关肺动脉高压新的无创性诊断标志物。