转化生长因子-β激活的长链非编码RNA通过上皮-间充质转化调控人膀胱癌细胞生物学行为的机制

目的探讨转化生长因子-β激活的长链非编码RNA(lncRNA-ATB)与膀胱尿路上皮癌上皮-间充质转化(EMT)的相关性及lncRNA-ATB对膀胱癌细胞生物学行为的影响。方法应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测lncRNA-ATB在人正常尿路上皮细胞株SV-HUC-1和膀胱癌细胞株EJ中的表达, 在SV-HUC-1细胞通过转染pcDNA3.1-ATB过表达lncRNA-ATB, 在EJ细胞通过转染sh-ATB敲低lncRNA-ATB, 免疫荧光检测细胞形态学变化, RT-qPCR法和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测EMT相关基因mRNA及蛋白水平表达变化, 细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的增殖能力, Transwell检测细胞的侵袭能力。两组间比较采用独立样本t检验。结果 lncRNA-ATB在EJ细胞株的表达明显高于SV-HUC-1细胞株(2.836±0.317比0.981±0.234, t=-14.109, P<0.05), SV-HUC-1细胞转染pcDNA3.1-ATB后, 细胞由卵圆形转变为梭形(EMT表型变化)。pcDNA3....     

SRPK1基因对膀胱癌细胞生物学行为的影响及机制研究

目的观察丝氨酸/精氨酸蛋白特异性激酶1(SRPK1)对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响, 并进一步探究其分子机制。方法利用Oncomine癌症数据库分析SRPK1基因在膀胱癌组织及正常膀胱组织中的表达;构建SRPK1特异的慢病毒干扰质粒(sh1和sh2)和阴性对照质粒(NC), 包装慢病毒颗粒, 分别感染T24细胞和5637细胞。设空白对照组(T24和5637)、阴性对照组(T24/NC和5637/NC)、干扰组1(T24/sh1和5637/sh1)和干扰组2(T24/sh2和5637/sh2);采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测各组细胞中SRPK1 mRNA和蛋白水平的表达变化;采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力的变化;采用Transwell细胞迁移和侵袭实验检测各组细胞迁移和侵袭能力的变化;采用Western blot检测各组细胞上皮间质转化(EMT)及AKT通路相关蛋白表达变化。结果 Oncomine癌症数据库中SRPK1 mRNA在膀胱癌组织中的表达明显高于正常膀胱组织(P<0.001)。通过qRT-PCR和Western blot检...     

CEP55通过H3K9三甲基化对膀胱癌细胞增殖能力的影响

目的探索中心体蛋白55(centrosome protein 55, CEP55)对膀胱癌细胞增殖能力的影响及相关分子机制。方法利用蛋白免疫印迹检测正常膀胱组织细胞(SV-HUC-1)与膀胱癌细胞(T24)CEP55、H3K9 me3的表达量。将膀胱癌细胞T24分为实验组和对照组, 实验组细胞转染siRNA-CEP55, 对照组细胞转染siRNA-MOCK。利用蛋白免疫印迹实验检测各组细胞CEP55、H3K9、H3K9me3的表达量, 利用CCK8实验检测各组细胞的增殖能力。结果蛋白免疫印迹实验结果表明, 膀胱癌T24细胞CEP55表达量为0.83±0.15, H3K9me3表达量为1.01±0.19。膀胱上皮SV-HUC-1细胞CEP55表达量为0.35±0.09, H3K9me3表达量为0.44±0.10, 膀胱癌细胞CEP55、H3K9me3的表达均高于正常膀胱细胞(均P<0.05)。siRNA-CEP55成功降低膀胱癌细胞T24 CEP55的表达。实验组T24细胞吸光度为1.109±0.105, 明显低于对照组细胞的2.208±0.104, CEP55低表达会降低T24细...     

微小RNA-210-3p靶向ACVR1B抑制结直肠癌细胞的增殖和转移

目的探讨微小RNA-210-3p(miR-210-3p)在结直肠癌细胞中的表达以及对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法体外培养人结直肠癌细胞系RKO、SW480、SW620、DLD1和人正常结肠上皮细胞系NCM460。将miR-210-3p抑制剂(inhibitor)及inhibitor阴性对照(NC)转染于RKO细胞中, 设为miR-210-3p inhibitor实验组以及NC组。使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-210-3p表达水平。采用细胞计数实验(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖活性。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞的迁移及侵袭能力。qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测激活素A的ⅠB型受体(ACVR1B) mRNA和蛋白的表达水平。两样本间比较采取t检验, 多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果 miR-210-3p在结直肠癌细胞系中表达均高于人正常结肠上皮细胞, 以RKO中升高最为明显(2.33±0.51、5.54±0.95、1.80±0.15、3.34±0.45比1.00±0.02...     

叉头框家族蛋白A1在膀胱癌组织的表达及其对膀胱癌细胞生物学行为的影响

目的检测翼状螺旋转录因子叉头框家族蛋白(FOX) A1在膀胱癌组织及细胞中的表达水平, 探讨FOXA1对膀胱癌细胞生物学功能的影响及机制。方法收集郑州大学第一附属医院2016年1月1日至2020年1月1日膀胱癌根治术石蜡病理92例, 癌旁组织79例, 采用免疫组织化学检测膀胱癌患者及正常膀胱上皮组织中FOXA1蛋白的表达水平, 并分析FOXA1表达与患者临床病理特征的关系。在膀胱癌细胞系5637中转染小干扰RNA(siRNA)-FOXA1, 将细胞分为对照组(shctrl)及转染组(shFOXA1)采用蛋白质印迹法(Western blot)验证转染效率。采用荧光细胞增殖实验检测细胞增殖能力, 采用Matrigel检测细胞侵袭能力。采用Western blot检测snail、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平, 两组间比较采用t检验。结果免疫组化显示FOXA1在膀胱癌中表达水平显著低于正常膀胱上皮组织[0.45(41/92)比0.63(50/79), χ2=5.986, P<0.05], 高级别尿路上皮癌、Ⅲ+Ⅳ期、T3+T4膀胱癌组织中F...     

微小RNA-17-5p通过抑制转移生长因子β受体2的表达促进结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨微小RNA(miR)-17-5p对人结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭功能的影响及其机制。方法培养人结直肠癌细胞RKO、SW620、LOVO、HCT116和人正常结肠上皮细胞NCM460, 以上细胞购自美国典型培养物保藏中心。利用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-17-5p在各细胞系内的表达, 构建miR-17-5p抑制剂miR-17-5p inhibitor及其阴性对照negative control并转染至RKO细胞, 分别设为miR-17-5p抑制剂(miR-17-5p inhibitor)组和阴性对照(NC)组。qRT-PCR法检测miR-17-5p表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活性。平板克隆实验检测细胞克隆形成能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。qRT-PCR和蛋白印迹法(Western blot)检测转染后细胞内转移生长因子β受体2(TGFBR2)表达水平变化。两组间比较采用t检验, 多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果人结直肠癌细胞RKO、SW620、LOVO、HCT116中...     

NOB1基因对膀胱癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的探讨干扰NOB1基因对膀胱癌细胞凋亡和Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将膀胱癌T24细胞分为对照组(CON组),不进行转染、siRNA阴性对照组(siRNA-CON)、NOB1-siRNA组。分别采用RT-PCR和Western blot检测转染后三组细胞中NOB1 mRNA和蛋白的表达水平;MTT法检测细胞活力;流式细胞技术检测细胞凋亡情况;Western blot检测β-catenin和c-Myc蛋白表达水平。用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535处理NOB1-siRNA组细胞,设置为NOB1-siRNA-FH535组,检测细胞活力、细胞凋亡情况和β-catenin、c-Myc蛋白表达水平。结果NOB1-siRNA组NOB1 mRNA和蛋白表达水平均低于siRNA-CON组和CON组,差异有统计学意义(P<0.05)。NOB1-siRNA组细胞活力低于siRNA-CON组和CON组,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞检测结果显示,NOB1-siRNA组细胞凋亡率高于siRNA-CON组和CON组,差异有统计学意义(P<0.05)。NOB1-siRNA组β-catenin和c-Myc蛋白表达水平均低于siRNA-CON组和CON组,差异有统计学意义(P<0.05)。NOB1-siRNA-FH535组细胞活力低于NOB1-siRNA组(P<0.05)。流式细胞技术检测结果显示,NOB1-siRNA-FH535组细胞凋亡率高于NOB1-siRNA组(P<0.05)。Western blot检测结果显示,NOB1-siRNA-FH535组β-catenin及c-Myc蛋白表达水平低于NOB1-siRNA组(P<0.05)。结论干扰NOB1表达可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活而促进膀胱癌细胞的凋亡。     

转录因子E2F-3靶向FOSB对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探究转录因子E2F-3对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法在体外培养人的结直肠癌细胞系RKO、SW480、DLD1、LOVO和人的结肠正常上皮细胞NCM460, 并用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测结肠上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞SW480、RKO、DLD1、LOVO中E2F-3的转录水平。分别将E2F-3的siRNA-E2F3和siRNA-NC阴性对照转染于细胞系RKO中, 设为实验组(si-E2F3)与阴性对照组(NC)。采用平板克隆实验细胞与细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活性。Transwell迁移和侵袭实验与细胞划痕实验用来检测细胞的迁移及侵袭能力。RT-qPCR和蛋白质印迹法(Western blot)分别可以检测E2F-3靶向蛋白FOSB的表达水平。两样本间对比采取t检验, 多组间差异采用单因素方差分析。结果 miR-210-3p在结直肠癌细胞系中表达均高于人正常结肠上皮细胞, 其中以RKO中升高最为明显, 相较NC[(2.349±0.095)倍比(1.000±0.013)倍, t=65.82, P<0.01], 差异有统...     

miR-18a-5p通过靶向调控PTEN影响膀胱癌增殖迁移能力的研究

目的探索miR-18a-5p影响膀胱癌(BC)增殖迁移能力的分子调控机制。方法选取本院2019年至2021年行全膀胱切除手术的30例膀胱癌患者, 收集癌组织和癌旁组织样本。根据转染不同的小分子物质, 将T24和EJ细胞分为对照组、miR-18a-5p过表达组、miR-18a-5p干扰组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-18a-5p和PTEN基因的表达。采用Western blot检测PTEN蛋白水平的表达。采用EdU实验检测细胞增殖。采用Transwell实验检测细胞迁移。采用双荧光素酶实验验证miR-18a-5p与PTEN靶向关系。通过裸鼠皮下移植瘤实验验证miR-18a-5p对BC细胞增殖能力的影响。结果 miR-18a-5p在癌组织与T24和EJ细胞中均高表达(均P<0.05)。在PTEN-WT和miR-18a-5p模拟物共同转染后, 双荧光素酶表达明显下降(P<0.05)。miR-18a-5p过表达会导致PTEN表达水平下调(P<0.05)。裸鼠成瘤实验结果显示, 与对照组比较, miR-18a-5p过表达组的肿瘤体积和重量明显增加(均P&...     

胞质分裂蛋白调节因子1通过激活黏附斑激酶调控膀胱癌细胞的迁移和侵袭

目的探讨胞质分裂蛋白调节因子1(PRC1)对膀胱癌细胞迁移和侵袭的影响及黏附斑激酶(FAK)在其中的作用。方法设计合成靶向抑制PRC1的小干扰RNA(siRNA), 分别转染人膀胱癌细胞系EJ和T24, 两种细胞系各分为对照组(转染对照siRNA)和敲低组(转染PRC1 siRNA), 通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质免疫印迹法检测两组PRC1、FAK、桩蛋白(Paxillin)的mRNA和蛋白质表达水平以及FAK和Paxillin的磷酸化水平。通过细胞迁移和侵袭实验分析两组的迁移和侵袭能力。采用t检验进行组间比较。结果敲低组EJ、T24细胞PRC1 mRNA表达量(0.43±0.11、0.55±0.07)低于对照组(1.00±0.19、1.00±0.20, t=4.533、3.699, P<0.05)。敲低组FAK mRNA表达量(0.95±0.05、1.09±0.14)与对照组差异无统计学意义(1.00±0.20、1.00±0.20, t=0.423、0.622, P>0.05)。敲低组Paxillin mRNA表达量(1.12±0.01、1.02±0.1...     

miR-451对膀胱癌细胞迁移、侵袭及E-cadherin和Vimentin基因表达的调控作用

目的研究miR-451对膀胱癌细胞迁移、侵袭及E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)基因表达的调控作用。方法培养人膀胱癌细胞株T24、5637、SW790并采用荧光定量PCR检测miR-451的表达量;T24细胞随机分为不转染模拟物的对照组、转染NC模拟物的NC组、转染miR-451模拟物的miR-451组,采用荧光定量PCR检测miR-451的相对表达量,采用Western blot检测E-cadherin和Vimentin的相对表达量,采用Transwell检测细胞的迁移、侵袭能力。结果T24细胞中miR-451的相对表达量均低于5637细胞、SW790细胞;在T24细胞中,miR-451组的miR-451相对表达量、E-cadherin相对表达量明显高于对照组、NC组,迁移能力、侵袭能力均明显弱于对照组、NC组,Vimentin相对表达量明显低于对照组、NC组。结论miR-451能够抑制膀胱癌细胞的迁移、侵袭且该抑制作用与增加E-cadherin表达、减少Vimentin表达有关。     

长链非编码RNA MLK7-AS1在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞增殖的影响

背景与目的:长链非编码RNA(lncRNA)MLK7-AS1是一种新发现的与多种肿瘤发生发展密切相关的lncRNA,但其在结肠癌中的表达及其作用尚未见报道。因此,本研究旨在探讨lncRNA MLK7-AS1在结肠癌中的表达以及其对结肠癌细胞生物学行为的影响。方法:用qRT-PCR检测lncRNA MLK7-AS1在21对结肠癌组织与相对应的癌旁组织手术标本以及在不同结肠癌细胞系(SW480、HCT116、SW620、DLD1、HT29、LOVO)与正常结肠上皮细胞(NCM460)中的表达。将结肠癌细胞转染lncRNA MLK7-AS1过表达质粒后,分别用MTS、平板克隆试验、流式细胞术、Western blot及qRT-PCR分别检测细胞活力、克隆形成能力、细胞周期以及细胞周期相关蛋白表达水平的变化。结果:lncRNA MLK7-AS1在结肠癌组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织;在各结肠癌细胞株中表达水平明显高于正常结肠上皮细胞(均P<0.05)。将lncRNA MLK7-AS1表达量相对较低的SW480与HCT116转染lncRNA MLK7-AS1过表达质粒后,两种细胞的细胞活力和克隆形成能力均显著增强(均P<0.05);G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例明显增加(均P<0.05);细胞周期相关蛋白cyclin D1和CDK6的表达水平均明显上升(均P<0.05)。结论:lncRNA MLK7-AS1在结肠癌中高表达,其高表达可以促进结肠癌细胞增殖,其机制可能与上调细胞周期相关蛋白cyclin D1及CDK6表达有关。     

LncRNA PCGEM1对结肠癌SW480细胞增殖与侵袭的影响

目的 :探讨lncRNA PCGEM1对结肠癌SW480细胞的增殖与侵袭的影响。方法 :培养人结肠癌SW480细胞,将结肠癌细胞系SW480细胞分成3组进行处理,即空白对照组:不转染慢病毒;阴性对照组:转染无序序列慢病毒载体;试验组:转染沉默lncRNA PCGEM1序列慢病毒载体。荧光定量PCR(RT-PCR)检测RNA表达,CCK-8试剂盒、Transwell和AV-PI试剂盒检测增殖、侵袭与凋亡。结果:lncRNA PCGEM1沉默表达慢病毒载体的滴度为1×10~8TU/mL。RT-PCR结果显示:试验组与阴性对照组相比,lncRNA PCGEM mRNA表达较低,差异有统计学意义(q=8.141,P0.05);Caspase-3 mRNA和Caspase-9 mRNA的表达具有同样的表达趋势(P0.05)。Transwell实验结果显示,3组之间差异有统计学意义(F=21.982,P0.05),试验组和阴性对照组比较差异有统计学意义(q=4.223,P0.05)。CCK-8检测结果显示,3组差异有统计学意义(F=21.214,P0.05),试验组与阴性对照组比较差异有统计学意义(q=5.272,P0.05)。AV-PI检测结果显示,3组比较差异有统计学意义(F=31.009,P0.05),试验组与空白载体病毒组比较差异有统计学意义(q=9.131,P0.05)。结论:lncRNA PCGEM1在结肠癌细胞中高表达。沉默lncRNA PCGEM1表达可以抑制结肠癌细胞增殖和侵袭,促进凋亡。     

小干扰RNA特异性沉默c-myc基因对人胰腺癌SW1990细胞生物学影响

目的 观察小干扰RNA(siRNA)沉默c-myc基因的表达对人胰腺癌细胞株SW1990细胞生物学影响.方法 用siRNA沉默胰腺癌SW1990细胞中c-myc基因,用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot技术检测c-myc mRNA及蛋白的表达量;噻唑蓝(MTT)法检测siRNA沉默c-myc基因对SW1990细胞增殖的影响;膜联蛋白V/碘化丙锭(Annexin V/PI)双染流式细胞术检测沉默c-myc基因细胞凋亡水平;Transwell细胞迁移实验检测siRNA沉默c-myc基因对SW1990细胞迁移能力的影响.结果 靶向c-myc的特异性siRNA可以高效抑制人胰腺癌SW1990细胞c-myc基因表达,在mRNA水平(0.263±0.048)较转染对照质粒组(0.970±0.012)明显降低,c-myc蛋白质表达量及细胞增值率均较转染对照质粒组明显降低;转染后48 h c-myc siRNA组细胞凋亡率为(19.90±2.09)％,明显高于siRNA阴性对照组(4.93±0.25)％和空白对照组(4.40±0.34)％;Transwell实验结果示细胞穿膜数c-myc siRNA组[(34.3±1.2)个]较siRNA-NC组[(68.3±5.8)个]和空白组[(72.3±1.2)个]均明显降低.结论 c-myc siRNA能够显著抑制c-myc基因在人胰腺癌SW1990细胞中的表达,降低细胞的增殖和迁移能力,促进细胞的凋亡.     

lncRNA SNHG8通过靶向miR-335-5p调控膀胱癌T24细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨lncRNA SNHG8对膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及其分子作用机制。方法选取本院2017年1月至2019年1月收治的30例膀胱癌患者的癌组织及相应的癌旁组织;将膀胱癌T24细胞分为si-NC组、si-SNHG8组、miR-NC组、pcDNA组、pcDNA-SNHG8组、miR-335-5p组、si-SNHG8+anti-miR-NC组及si-SNHG8+anti-miR-335-5p组。对各组细胞采用qRT-PCR、MTT、Transwell、Western blot和双荧光素酶报告实验等检测并进行比较分析。结果与癌旁组织比较, 膀胱癌组织中SNHG8的表达水平升高, miR-335-5p表达水平下降(均P<0.001)。抑制lncRNA SNHG8或过表达miR-335-5p后, T24细胞的活力、迁移和侵袭能力显著下降, CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平降低, p21蛋白表达水平升高(均P<0.001)。lncRNA SNHG8靶向调控miR-335-5p的表达水平。与si-SNHG8+anti-miR-NC组比较, si-S...     

肌球蛋白重链11对肿瘤Hela细胞凋亡、迁移和侵袭的影响

目的探讨肌球蛋白重链11(MYH11)对人宫颈癌Hela细胞凋亡、迁移和侵袭作用的影响。方法应用实时荧光定量聚合酶联反应法(qRT-PCR)检测宫颈癌Hela细胞与正常宫颈上皮细胞Ect1/E6E7中MYH11的信使RNA(mRNA)表达水平, 通过流式细胞术、噻唑蓝(MTT)实验及Transwell实验测定过表达MYH11对宫颈癌细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭的影响, 两组间比较采用t检验。结果 qRT-PCR法检测mRNA表达, 结果显示, 宫颈癌Hela细胞中MYH11表达(0.52±0.04)明显低于正常宫颈上皮细胞(1.00±0.03), 差异有统计学意义(t=10.56, P<0.01)。细胞凋亡实验结果显示, 过表达MYH11组Hela细胞抗凋亡能力较ctrl组以及NC组表达显著降低。ctrl组、NC组、过表达MYH11组为(20.27±1.48)%、(19.83±1.85)%、(34.21±2.75)%, 差异有统计学意义(F=45.69, P<0.01)。MTT增殖实验结果显示, Hela细胞中ctrl组、NC组以及过表达MYH11组24、48、72 h细胞增...     

MTUS2-AS2在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)MTUS2-AS2在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测63例膀胱癌组织和癌旁组织、膀胱癌细胞系(BIU-87、J82、T24、5637)和正常膀胱上皮细胞系SV-HUC-1中的MTUS2-AS2表达。以MTUS2-...     

多嘧啶序列结合蛋白1对前列腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响

目的检测多嘧啶序列结合蛋白1(PTBP1)在前列腺癌中的表达水平, 并探究PTBP1对前列腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法运用UALCAN数据库分析PTBP1基因在前列腺癌组织中的表达水平、PTBP1基因与前列腺癌患者总生存期(OS)的关系, 收集前列腺癌及癌旁组织, 采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)技术检测前列腺癌及癌旁组织、正常前列腺上皮细胞及前列腺癌细胞中PTBP1 mRNA和蛋白质的相对表达水平。在前列腺癌PC3细胞中转染siRNA-PTBP1, 将细胞分为转染组(si-PTBP1)和对照组(NC), 采用RT-qPCR和Western blot验证转染效率。利用细胞克隆形成实验和细胞计数盒(CCK-8)实验检测细胞增殖能力;利用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;利用Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)及EMT标志蛋白的表达水平;所有结果应用SPSS 26.0统计软件分析。结果 UALCAN数据库显示PTBP1基因在前列腺癌组织中表达水平升高(P<0....     

shRNA抑制NOTCH1基因对膀胱癌细胞BIU87生物学行为的影响

目的:探讨NOTCH1基因沉默对人源性膀胱癌细胞增殖及分化的影响.方法:用pGenesil质粒构建靶向NOTCH1的shRNA真核表达载体psiRNA1并将其转染到膀胱癌细胞系BIU87中,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)、流式细胞术(FCM)检测NOTCH1沉默后膀胱癌细胞生长变化、细胞周期和凋亡情况.WesternBlot和RT-PCR法检测NOTCH1基因的蛋白和mRNA在转染前后表达变化.结果:转染psiRNA1质粒后BIU87细胞中NOTCH1基因在蛋白和mRNA表达水平相对于对照组明显下调(P<0.05),BIU87的生长受到明显抑制,呈现一定的时间依赖性(<60 h).凋亡率增加,G0/G1期细胞明显增多,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:沉默NOTCH1基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖和分化,NOTCH1在膀胱癌中可能具有癌基因的作用.     

LIN28A和LAMP1在膀胱癌细胞系中的表达及意义

目的:探讨LIN28A和LAMP1在膀胱癌细胞系中表达情况,以及两者之间的关系,推测其可能临床意义及对肿瘤进展的影响。方法:采用RT-PCR检测膀胱癌细胞系LIN28A、LIN28B和LAMP1表达,免疫荧光检测LIN28A和LAMP1二者蛋白表达定位;LIN28A敲减后通过qRT-PCR检测LAMP1的mRNA表达变化。结果:5个癌细胞系T24、UM-UC3、J82、5637和SW780和正常移行上皮细胞系SV-HUC-1均表达LIN28A,其中J82也表达LIN28B;5个癌细胞系均表达LAMP1,SV-HUC-1不表达LAMP1;LIN28A和LAMP1蛋白均定位在胞浆;LIN28A敲减后对LAMP1的mRNA表达变化无明显影响,相应蛋白变化需要进一步验证。结论:4个膀胱癌细胞系T24、5637、UM-UC3和SW780可以用于LIN28A与肿瘤相关的机制研究,而J82可用于LIN28B的机制研究。LIN28A对肿瘤细胞和干细胞的调控方面可能具有相似性,敲减后对其靶点mRNA表达量无明显影响,LAMP1蛋白可能对肿瘤细胞侵袭转移具有抑制作用。