苗药验方通过Wnt/β-catenin信号通路减轻家兔骨关节炎软骨细胞的损伤

摘要:目的 观察苗药验方对家兔骨关节炎模型软骨细胞的影响,并探讨其防治骨关节炎软骨退变的作用机制。方 法 36只家兔随机分为正常对照组、模型组、苗药熏蒸组、苗药离子导入组,每组9只。除正常对照组外,其余3组家兔 右膝关节腔内注射木瓜蛋白酶制造膝骨性关节炎模型。造模成功后,苗药熏蒸组与苗药离子导入组家兔分别经苗药验 方熏蒸治疗及苗药验方离子导入治疗20d,取各组家兔软骨组织行苏木精-伊红染色,并取各组家兔血清备用。取正常 家兔软骨组织培养软骨细胞,将软骨细胞也分为4组:正常对照组、模型组、苗药薰蒸组、苗药离子导入组。除正常对照 组外,其余3组软骨细胞用10μg/L白细胞介素-1β(IL-1β)处理24h制备骨关节炎软骨细胞模型,造模期间分别用相应 组家兔血清对软骨细胞进行体外干预,酶联免疫吸附法(ELISA)检测软骨细胞上清液中β-连环蛋白(β-catenin)、肿瘤坏 死因子-α(TNF-α)的含量,免疫印迹(Westernblot)法检测软骨细胞中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、基质金属蛋白酶-3 (MMP-3)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、细胞外因子-16(Wnt-16)、β-catenin蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反 应(qPCR)检测软骨细胞中 BMP-2、MMP-3、MMP-13、Wnt-16、β-cateninmRNA 表达水平。结果 与模型组比较,苗药 熏蒸组、苗药离子导入组家兔关节软骨表面纤维化及其软骨细胞结构破坏均得到不同程度改善。与模型组比较,苗药薰 蒸组软骨细胞上清液 TNF-α、β-catenin的含量显著减少(均 P<0.05),软骨细胞 BMP-2、MMP-3、β-catenin蛋白表达以 及 BMP-2、Wnt-16mRNA 表达水平显著下调(均P<0.05);与模型组比较,苗药离子导入组软骨细胞上清液中 TNF-α、 β-catenin的含量显著 减 少 (均 P<0.05),软 骨 细 胞 BMP-2、MMP-3、MMP-13、β-catenin 蛋 白 表 达 水 平 以 及 BMP-2、 MMP-3、Wnt-16mRNA 表达水平显著下调(均 P<0.05)。结论 苗药验方薰蒸疗法及离子导入疗法,可能通过调节 Wnt/β-catenin信号通路减轻骨性关节炎软骨细胞的损伤。     

盘龙七片对膝骨关节炎大鼠关节软骨的保护作用及对Wnt通路的调控机制

目的 探讨盘龙七片对膝骨关节炎（KOA）大鼠关节软骨的保护作用及对Wnt通路的调控机制。方法 选用96只SPF级8周龄雄性SD大鼠构建膝骨关节炎大鼠模型,观察大鼠活动状态,并经CT验证。实验分为假手术组、模型组、塞来昔布组和低、中、高剂量盘龙七片组6组,每组16只。按照实验分组给药,观察各组大鼠软骨形态并进行大体评分,行HE染色,酶联免疫吸附（ELISA）法测定大鼠滑膜中TNF α、IL 1β及MMP-13水平,蛋白印迹（WB）法测定软骨中Wnt-4、β-catenin水平。结果 手术后,大鼠出现膝骨关节炎症状并经CT验证。与假手术组相比,模型组大鼠膝骨关节可见裂纹,表面呈毛刺状、暗黄色,软骨可见增生、赘生物;HE染色可见软骨细胞数减少,骨赘、血管增生,结构混乱不清,表面凹陷,深层结缔组织可见明显裂隙,潮线消失;大体评分、TNF α、IL-1β、MMP-13、Wnt-4及β-catenin水平显著升高（均P＜0.05）。与模型组相比,经低、中、高剂量盘龙七片治疗后,大鼠膝骨关节软骨表面趋向光滑,色泽逐渐明亮,增生、赘生物减少;HE染色可见软骨细胞数逐渐增多,结构趋向分明,裂隙减少,伴有少量炎症细胞浸润;大体评分、TNF α、IL-1β、MMP-13、Wnt-4及β-catenin水平明显降低（均P＜0.05）。结论 盘龙七片可缓解KOA大鼠症状,具有一定的临床应用价值,这提示盘龙七片可能成为治疗KOA的候选药物。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨阳和汤对兔膝骨关节炎的影响

目的基于Wnt/β-catenin信号通路探讨阳和汤对兔膝骨关节炎模型的作用机制。方法将4～6月龄新西兰兔随机分为空白组、模型组、西乐葆组和阳和汤组,每组6只。除空白组外,其余各组膝关节腔内注射木瓜蛋白酶造模。造模成功后,阳和汤组予阳和汤灌胃,西乐葆组予西乐葆灌胃,空白组和模型组予生理盐水灌胃,每日1次,连续给药2周。灌胃前后分别测量4组兔膝关节皮温、周径,进行膝关节Lequesne MG评分。停药1周后采集标本,ELISA法检测关节液中IL-1β、TNF-α、MMP-13含量;光镜下观察关节软骨病理改变并进行Mankin’s评分;免疫组化检测软骨组织Wnt4、β-catenin表达情况。结果与空白组比较,模型组膝关节皮温、周径和Lequesne MG评分,关节软骨病理切片Mankin’s评分及Wnt4、β-catenin表达,关节液IL-1β、TNF-α、MMP-13含量均明显升高（P<0.05）;与模型组比较,阳和汤组膝关节周径、Lequesne MG评分,软骨病理切片Mankin’s评分及Wnt4、β-catenin表达,关节液IL-1β、TNF-α、MMP-13含量均明显降低（P<0.05）。结论阳和汤能抑制骨关节炎炎症反应,修复软骨损伤,其机制可能与降低炎症因子TNF-α和IL-1β的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路和改善MMP-13有关。     

兔膝骨关节炎软骨组织损伤及发病机制的探讨

目的：观察兔膝骨关节炎(KOA)的组织病理变化并探讨其发病机制。方法：健康雄性新西兰兔膝关节强迫伸直位制动建立KOA模型,实验设对照组和模型组。4周后造模结束,取膝关节进行组织HE染色和免疫组织化学检测,观察并分析膝骨关节损伤及相关蛋白因子白细胞介素-1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶-4(ADAMTS-4)的表达情况。结果：HE染色显示,模型组膝骨关节滑膜组织均存在不同程度增生、纤维化、淤血和炎性细胞浸润;软骨增生、有裂隙,软骨细胞排列紊乱、簇集,细胞形态多样,表层细胞纤维化等。IL-1β、MMP-13、ADAMTS-4在对照组、模型组软骨细胞均有表达,而模型组表达明显高于对照组。结论：关节软骨的退变、滑膜组织的炎症是KOA的病理学特征,其发病机制与软骨细胞IL-1β、MMP-13、ADAMTS-4蛋白表达异常有关。     

电针大脑中动脉闭塞模型大鼠血清减轻体外神经细胞的缺糖缺氧损伤

摘要：目的：观察电针血清对新生乳鼠皮质神经元糖氧剥夺（OGD/R）损伤的作用。方法：将成年SD大鼠随机分为对照组,模型组,电针组。采用电凝法建立大脑中动脉闭塞模型（MCAO）。7d后,各组大鼠进行腹主动脉取血,离心抽取上清。分离新生24h内SD大鼠乳鼠皮质神经元,随机分为对照组、模型组、电针血清组。对照组以含正常大鼠血清的培养基培养,模型组进行OGD2h后复糖复氧24h处理,电针血清组先以含电针血清的培养基培养24h,余操作同模型组。MTT检测各组神经元的存活率;TUNEL法检测各组神经元凋亡情况;乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测各组神经元培养液中乳酸脱氢酶的漏出水平;试剂盒检测各组神经元内超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的水平。Western-Blot法检测各组神经元Wnt-1、GSK-3β、β-catenin、NeuN蛋白的表达情况。结果：与对照组比较,模型组神经元存活率显著降低（P<0.01）,神经元凋亡显著增多（P<0.01）;与模型组比较,电针血清组神经元存活率显著升高（P<0.01）,神经元凋亡显著减少（P<0.01）。与对照组比较,模型组SOD活性显著降低（P<0.01）,MDA含量、LDH漏出量显著增多（P<0.01和P<0.05）;与模型组比较,电针血清组SOD活性显著增加（P<0.01）,MDA含量、LDH漏出量显著减少（均P<0.01）。Western-Blot结果示,模型组Wnt-1、GSK-3β、β-catenin、NeuN蛋白表达显著减少（均P<0.01）;电针血清组Wnt-1、β-catenin、NeuN蛋白表达显著增多（均P<0.01）,GSK-3β表达显著减少（P<0.01）。结论：电针血清可以减轻缺糖缺氧诱导的皮质神经元损伤,减少神经元的凋亡,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路相关。     

电针法对兔膝关节炎模型治疗效果及机制研究

目的 观察电针法对兔膝骨关节炎(KOA)模型治疗效果，探讨电针法治疗兔KOA的机制。方法 将18只健康新西兰兔随机分为空白对照组、模型对照组、电针法组，每组6只。空白对照组正常饲养，模型对照组、电针法组采用改良韦德曼左后肢伸直位固定制动法固定6周制作KOA模型，造模完成1周后给予电针法组电针治疗4周，每周5次，每次20 min。用奎森(Lequesne)功能指数评价兔左膝关节功能评分；酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清及关节液白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平；亚硝酸盐比色(Griess)法检测血清及关节液一氧化氮(NO)水平；苏木精-伊红(HE)染色法观察膝关节软骨组织形态学改变，曼金(Mankin)评分法评价软骨退变程度；免疫荧光技术观察膝关节软骨组织p-P38MAPK阳性细胞表达。结果 与空白对照组比较，模型对照组Lequesne评分增高(P<0.05);血清及关节液中IL-1β、IL-6、NO水平升高(P<0.05);软骨面欠光滑，Mankin评分升高(P<0.05);免疫荧光染色阳性细胞增多(P<0.05)。与模型对照组比较，电针法组Lequ...     

独活寄生汤对膝骨关节炎模型大鼠Wnt/-catenin信号通路的作用研究

目的通过观察独活寄生汤对膝骨关节炎模型大鼠Wnt/-catenin信号通路的作用,探讨独活寄生汤治疗膝骨关节炎的作用机制。方法将大鼠随机分为空白组、模型组、双醋瑞因组和独活寄生汤组,除空白组外,其他各组通过关节腔注射木瓜蛋白制作骨性关节炎模型。造模成功后,双醋瑞因组给予双醋瑞因胶囊,独活寄生汤组给予独活寄生汤,空白组和模型组给予等体积的生理盐水。观察造模后及给药后各组大鼠膝关节直径变化。ELISA检测血清中BMP-2、MMP-9及MMP-9的表达水平;Real time-PCR和Western blot检测各组大鼠软骨中Wnt1、Wnt10b、-catenin的基因和蛋白表达水平。结果造模后,与空白组比较,模型组、双醋瑞因组和独活寄生汤组大鼠膝关节直径显著增加(P0.01)。给药后,与空白组比较,模型组大鼠膝关节直径明显增加(P0.01);与模型组比较,双醋瑞因组和独活寄生汤组大鼠膝关节直径显著减小(P0.01)。与空白组比较,模型组大鼠血清中BMP-2、MMP-3、MMP-9表达水平明显升高(P0.01);与模型组比较,双醋瑞因组和独活寄生汤组大鼠血清中BMP-2、MMP-3、MMP-9表达水平下降(P0.01,P0.05)。与空白组比较,模型组大鼠软骨中Wnt1、Wnt10b、-catenin的基因和蛋白表达水平明显升高(P0.01);与模型组比较,双醋瑞因组和独活寄生汤组大鼠软骨中Wnt1、Wnt10b、-catenin的基因和蛋表达水平下降(P0.01,P0.05)。结论独活寄生汤可通过下调大鼠Wnt/-catenin信号通路缓解膝骨关节炎模型大鼠的症状。     

骨痹通方对骨关节炎大鼠基质金属蛋白酶-3和Ⅱ型胶原酶的影响

目的:以盐酸氨基葡萄糖为阳性对照组,研究骨痹通方调控Wnt/β-catenin信号通路影响大鼠膝骨关节炎基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、Ⅱ型胶原酶(COL-Ⅱ)的表达的机制。方法:将35只大鼠分为正常组、假手术组、模型组、阳性药物对照组、骨痹通组,每组7只。造模成功后,正常组、假手术组和模型组给予生理盐水灌胃,阳性药物对照组及骨痹通组分别给予盐酸氨基葡萄糖及骨痹通方灌胃治疗。采用Real-time PCR和western blot检测大鼠软骨中Wnt5a、β-catenin、MMP-3、COL-Ⅱ的基因和蛋白表达量。结果:骨痹通方组与模型组、阳性药物对照组相比能够显著抑制Wnt5a、β-catenin、MMP-3的基因及蛋白表达(P<0.05),减少COL-Ⅱ的降解(P<0.05)。模型组与正常组相比Wnt5a、β-catenin、MMP-3的基因及蛋白的表达显著增多(P<0.05),COL-Ⅱ的表达显著减少(P<0.05)。结论:骨痹通方能明显抑制Wnt5a、β-catenin的表达,从而减少MMP-3的产生、促进COL-II的表达,起到保护关节软骨的作用。     

电针对T10脊髓横断后神经源性膀胱大鼠尿流动力学及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的：观察电针对T10脊髓横断（SCT）所致神经源性膀胱大鼠的干预作用,并阐明其作用机制。方法：48只雌性SD大鼠随机分为假手术组（12只）和模型组（36只）。通过手术建立T10 SCT模型,采用脊髓损伤行为学（BBB）评分和尿流动力学指标对术后大鼠进行模型评价。术后第15天,将模型复制成功大鼠再次随机分为模型对照组（12只）、电针组（12只）和电针对照组（12只）。电针组以"大椎"和"次髎"穴（"次髎"穴隔日左右更替）电针干预;电针对照组于相同时间以"大椎"和"次髎"穴远脊柱侧（"次髎"穴用法同上）1 cm处为针刺点,进行电针干预。电针采用疏密波（疏波10 Hz/9 s,密波50 Hz/5 s）,电针20 min,强度以针刺处出现规律性收缩抽动为宜,每日1次,连续1周。末次电针干预后各组大鼠行尿流动力学检测,采用RT-PCR和免疫荧光法检测各组大鼠脊髓组织中Wnt-1和β-catenin mRNA及蛋白表达水平。结果：与假手术组比较,模型对照组、电针对照组和电针组大鼠膀胱基础压力和最大压力升高（P<0.05或P<0.01）,膀胱最大容量和顺应性明显降低（P<0.01）;模型对照组和电针对照组大鼠膀胱漏尿点压力升高（P<0.01）。与模型对照组比较,电针组大鼠膀胱基础压力、最大压力和漏尿点压力明显降低（P<0.01）,膀胱最大容量和顺应性升高（P<0.01）。与电针对照组比较,电针组大鼠膀胱基础压力、最大压力和漏尿点压力降低（P<0.05或P<0.01）,膀胱最大容量和顺应性升高（P<0.05或P<0.01）。与假手术组比较,模型对照组、电针对照组和电针组大鼠脊髓组织中Wnt-1和β-catenin mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.01）;与模型对照组比较,电针组大鼠脊髓组织中Wnt-1和β-catenin mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.01）;与电针对照组比较,电针组大鼠脊髓组织中Wnt-1和β-cateninmRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。结论：电针"大椎"和"次髎"穴对T10 SCT后神经源性膀胱大鼠尿流动力学具有明显改善作用,其作用机制与调控Wnt/β-catenin信号通路活化有关联。     

电针大脑中动脉闭塞模型大鼠血清减轻体外新生乳鼠神经细胞的缺糖低氧损伤的作用研究

目的 观察“电针血清”对新生乳鼠皮质神经细胞糖氧剥夺/复氧（oxygen-glucose deprivation and reoxygenation,OGD/R）损伤的作用。方法 将成年SD大鼠随机分为对照组、模型组、电针组,采用电凝法复制大脑中动脉闭塞模型;7 d后对各组大鼠进行腹主动脉取血,离心,抽取上清,分离新生24 h内SD大鼠乳鼠皮质神经细胞,随机分为对照组、模型组、“电针血清”组。对照组以含正常大鼠血清的培养基培养,模型组进行OGD 2 h后复糖复氧24 h处理,“电针血清”组先以含“电针血清”的培养基培养24 h,其余操作同模型组。MTT法检测各组神经细胞的存活率;TUNEL法检测各组神经细胞凋亡情况;乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）释放实验检测各组神经细胞培养液中LDH漏出水平;检测各组神经细胞内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平。Western blot法检测各组神经细胞Wnt蛋白1（Wnt-1）、糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β）、β-连环蛋白（β-catenin）、神经细胞核抗原（neuronal nuclear protein,NeuN）蛋白的表达情况。结果 与对照组比较,模型组神经细胞存活率显著降低（P＜0.05）,神经细胞凋亡率显著增多（P＜0.05）;与模型组比较,“电针血清”组神经细胞存活率显著升高（P＜0.05）,神经细胞凋亡率显著减少（P＜0.05）。与对照组比较,模型组SOD活性显著降低（P＜0.05）,MDA含量、LDH漏出量显著增多（P＜0.05）;与模型组比较,“电针血清”组SOD活性显著增加（P＜0.05）,MDA含量、LDH漏出量显著减少（P＜0.05）。与对照组比较,模型组Wnt-1、GSK-3β、β-catenin、NeuN蛋白表达水平显著降低（P<0.05）;与模型组比较,“电针血清”组Wnt-1、β-catenin、NeuN蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,GSK-3β表达水平显著降低（P<0.05）。结论 “电针血清”可以减轻缺糖低氧诱导的皮质神经细胞损伤,减少神经细胞的凋亡,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路相关。     

β-catenin TCF-4和ADAMTS-4在人不同退变程度软骨组织中表达的相关性研究

目的检测β-链蛋白(β-catenin)、细胞因子4(Tcellfactor4,TCF-4)和带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶-4(ADAMTS-4)在人不同退变程度软骨组织中的表达,并对其在骨关节炎的发生机制中的作用进行分析与探讨。方法以2010年1月至2014年8月就诊于本院的60例骨关节炎患者为研究对象,按照Mankin评分标准将其分为无退变组、轻中度退变组与重度退变组,分析不同组中β-catenin、TCF-4和ADAMTS-4的表达的差异性。结果三项检测物质在不同退变程度软骨组织中的表达存在显著性差异(P<0.05)。组内两两比较结果显示β-catenin、TCF-4和ADAMTS-4的表达水平在3组间的关系为无退变组<轻中度退变组<重度退变组,差异具统计学意义(P<0.05)。结论软骨组织中β-catenin、TCF-4及ADAMTS-4的高表达与OA的发生与发展密切有关。     

USP49抑制IL-1β诱导的软骨退行性改变

目的 了解USP49对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及细胞外基质降解的影响。方法 首先基于数据库了解USP49在骨关节炎患者中的表达水平。原代培养软骨细胞并鉴定,使用不同浓度的IL-1β预处理软骨细胞,检测USP49基因表达与蛋白水平后,选择合适的IL-1β浓度模拟骨关节炎。使用IL-1β处理构建的USP49过表达软骨细胞,检测软骨细胞凋亡,测定USP49、β-catenin及软骨降解相关蛋白MMP-1、MMP-13表达。结果 较正常人样本,USP49在骨性关节炎患者中表达显著降低。原代软骨细胞经不同浓度IL-1β预处理后,USP49表达明显抑制,且随浓度增加,抑制作用增强。USP49过表达可显著减弱IL-1β诱导的细胞凋亡,抑制β-catenin、MMP-1、MMP-13表达。结论 USP49可能通过Wnt/β-catenin通路抑制软骨细胞凋亡及细胞外基质降解,减轻IL-1β诱导的软骨退变。     

乌头汤对膝骨关节炎大鼠细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP-3的影响

目的通过观察乌头汤对膝骨关节炎大鼠血清和关节液中IL-1β、IL-6、TNF-α和MMP-3的影响,探讨其治疗膝骨关节炎的作用机制。方法采用随机数字法将60只SD大鼠分为空白组15只和造模组45只。造模组在第1、4、7天采用4%木瓜蛋白酶关节腔内注射复制膝骨关节炎模型。成功造模后,随机分为模型组、对照组和治疗组各15只。空白组和模型组灌服0.9%生理盐水;对照组灌服双氯芬酸钠缓释胶囊;治疗组灌服乌头汤。2周为1个疗程,疗程期间休息2d,共干预4个疗程。观察4组大鼠一般情况、关节液情况及血清和关节液中IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP-3浓度变化。结果与空白组比较,模型组血清和关节液中IL-1β、IL-6、TNF-α和MMP-3浓度明显升;与模型组比较,对照组与治疗组血清和关节液中IL-1β、IL-6、TNF-α和MMP-3浓度均明显降;与对照组比较,治疗组血清和关节液中IL-6浓度明显升。结论乌头汤通过降低血清和关节液中IL-1β、IL-6、TNF-α和MMP-3含量,抑制炎症反应,降低细胞外基质降解,减缓软骨退变,从而起到治疗KOA的目的。     

不同针灸方法对膝骨关节炎模型细胞因子及基质金属蛋白酶影响的比较研究

目的比较针刺、温针灸、电针三种不同针灸方法对膝骨关节炎模型白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factors-α,TNF-α)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)及金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的影响,探讨不同针灸方法治疗膝骨关节炎在关节软骨基质代谢方面的差异。方法选用新西兰兔30只,随机分为正常组、模型组、针刺组、温针灸组及电针组,每组6只。通过切断前交叉韧带建立实验性膝骨关节炎模型,各治疗组选取"后三里"、"犊鼻"穴,分别施以单纯针刺、温针灸及电针治疗,共治疗20次。治疗结束后采用ELISA法检测各组血清中IL-1β、TNF-α、TGF-β1、MMP-1、MMP-3及TIMP-1水平,并比较组间各指标的差异。结果与模型组比较,各治疗组血清中IL-1β、TNF-α、TGF-β1、MMP-1水平均明显下降(P0.05或P0.01),温针灸组MMP-3水平明显升高(P0.05);各治疗组间比较,电针组MMP-3水平低于针刺组、温针灸组(P0.01),IL-1β、TNF-α、TGF-β1、MMP-1水平各治疗组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论针刺、温针灸、电针均能调节膝骨关节炎模型血清中异常的IL-1β、TNF-α、TGF-β1、MMP-1水平,使软骨退行性变的部分因素得到控制,从而起到延缓软骨退变的作用,其中温针灸的调节作用较为显著。     

绿原酸对颞下颌关节软骨细胞增殖、凋亡和炎症因子释放的影响及作用机制研究

目的探讨绿原酸对颞下颌关节骨关节炎的保护作用机制。方法采用10ng/ml的白细胞介素1β（IL-1茁）诱导大鼠颞下颌关节软骨细胞损伤,同时使用不同浓度绿原酸对软骨细胞进行干预。采用CCK-8法检测软骨细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,qRT-PCR法检测软骨细胞中肿瘤坏死因子琢（TNF-琢）、IL-6、基质金属蛋白酶3（MMP-3）、MMP-13、Wnt-5A和Ror2mRNA的表达水平,Westernblot法检测Wnt-5A和Ror2蛋白的表达水平。结果不同浓度绿原酸干预IL-1β诱导的颞下颌关节软骨细胞损伤后,绿原酸能够促进软骨细胞增殖,抑制软骨细胞凋亡,抑制TNF-琢、IL-6、MMP-3和MMP-13mRNA的表达水平,同时抑制Wnt-5A/Ror2信号通路中Wnt-5A和Ror2的表达。结论绿原酸或通过抑制Wnt-5A/Ror2信号通路调控IL-1茁诱导损伤的颞下颌关节软骨细胞增殖、凋亡和炎症因子释放。绿原酸或可作为治疗颞下颌关节骨关节炎的药物。     

益气化瘀方对膝骨关节炎大鼠关节软骨退变的防治作用

目的：研究益气化瘀方对膝骨关节炎大鼠模型关节软骨退变的防治作用及其机制。 方法：1月龄SD大鼠90只,随机分为正常对照组、模型组和益气化瘀方组,每组各30只。模型组,益气化瘀方组大鼠通过肩关节离断术＋直立位诱导法建立大鼠膝骨关节炎模型。益气化瘀方组大鼠分别于5、7、9月龄（即造模术后4、6、8月）开始用药,连续用药1个月。3组大鼠分别于6、8、10月龄（即造模术后5、7、9月）处死,每次10只。处死后取大鼠膝关节,行番红O／固绿染色观察关节形态学变化,实时荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测各组关节软骨内Ⅱ型胶原基因（type Ⅱ collagen gene,Col2A1）、聚集蛋白聚糖（aggrecan-1,Agc1）、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13,MMP-13）以及金属蛋白酶组织抑制剂-1（tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1）mRNA表达的情况。 结果：模型组关节软骨结构破坏严重,而益气化瘀方组大鼠关节软骨退变较模型组明显减轻。实时荧光定量PCR结果显示,益气化瘀方组6和10月龄大鼠膝关节软骨Col2A1、Agc1以及TIMP-1 mRNA表达量高于模型组（P〈0．01,P〈0．05）,MMP-13 mRNA表达与模型组比较差异无统计学意义;益气化瘀方组8月龄大鼠Agcl mRNA表达明显高于模型组（P〈0。01）,MMP-13 mRNA表达明显低于模型组（P〈0．01）。 结论：益气化瘀方可通过促进软骨合成聚集蛋白聚糖与Ⅱ型胶原,延缓膝骨关节炎大鼠关节软骨的退变。     

强筋合剂对骨关节炎大鼠关节炎症的影响及机制研究

目的 探究强筋合剂对骨关节炎大鼠膝关节炎症的影响及其作用机制。方法使用10%木瓜蛋白酶和0.03mol/LL-半胱氨酸的混合液造模，建立骨关节炎大鼠模型。36只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、强筋合剂低、中、高剂量组、盐酸氨基葡萄糖组，每组6只。其中强筋合剂低、中、高剂量组分别给予蒸馏水制备的体积分数为2.12%、4.35%、8.69%强筋合剂，10mL/（kg·d），盐酸氨基葡萄糖组给予13g/L盐酸氨基葡萄糖，10mL/（kg·d），对照组和模型组给予等量0.9%氯化钠溶液，灌胃治疗4周。治疗期间检测各组大鼠膝关节肿胀度。治疗结束后，采用ELISA法和qPCR法分别检测各组大鼠血清IL-1β水平及膝关节软骨组织中转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA相对表达量；采用Westernblot法检测各组大鼠膝关节软骨组织中基质金属蛋白酶（MMP）-13、环氧化酶（COX）-2、Ⅱ型胶原蛋白（CollagenⅡ）相对表达水平；采用HE染色法观察各组大鼠膝关节病理形态。结果与对照组大鼠相比，模型组大鼠膝关节骨细胞损害严重，可见大量炎性细胞，膝关节肿胀明显；血清IL-β1水平升高，软骨组织中TGF-β1mRNA和MMP-13、COX-2蛋白相对表达水平增加，CollagenⅡ蛋白相对表达水平降低，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与模型组大鼠相比，强筋合剂高剂量组和盐酸氨基葡萄糖组大鼠膝关节可见少量炎性细胞聚集，膝关节骨面趋于光滑，膝关节肿胀度降低；强筋合剂中、高剂量组与盐酸氨基葡萄糖组大鼠血清中IL-1β水平显著降低；软骨组织中MMP-13、COX-2蛋白相对表达水平下降，CollagenⅡ相对表达水平增加，TGF-β1mRNA相对表达量降低，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论强筋合剂可通过降低骨关节炎大鼠血液中IL-1β水平，抑制软骨组织中TGF-β1、MMP-13、COX-2蛋白表达和促进软骨组织中CollagenⅡ表达来改善膝关节炎症。     

依托咪酯调节MAPK/ERK信号通路对骨关节炎大鼠软骨损伤的影响

目的:探究依托咪酯(ET)对骨关节炎(OA)大鼠软骨损伤的影响以及对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的调节作用。方法:将SPF级SD雄性大鼠72只,随机分6组：假手术组、模型组、阳性组(15mg/kg的双氯芬酸钠)以及ET低(1.5mg/kg)、中(3mg/kg)、高剂量(6mg/kg)组。评估各组大鼠关节水肿和承重不对称情况;检测各组大鼠压痛阈值和热痛阈值;HE观察各组大鼠软骨病理损伤情况并进行Mankin评分;酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)以及软骨寡聚基质蛋白(COMP)的水平;Western blot检验软骨组织中基质蛋白酶-13(MMP-13)及通路蛋白ERK及其磷酸化p-ERK蛋白的表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠右后肢膝关节水肿和关节承重不对称性增大,软骨组织缺损且软骨层变薄,软骨细胞数量变少,血清中TNF-α、IL-1β、COMP水平升高,软骨MMP-13、p-ERK1/2蛋白表达及p-ERK1/2/ERK1/2比例升高(P<0.05)。与模型组相比,阳性...     

miR-138调控TrkA-TRPV1信号通路对KOA模型大鼠软骨损伤的影响

目的 探究miR-138调控TrkA-TRPV1信号通路对膝骨性关节炎(KOA)模型大鼠软骨损伤的影响。方法 选取40只健康SD大鼠,随机分为正常组、模型组、沉默组、过表达组,分别进行干预。对比各组大鼠行为学、软骨组织学评分,检测关节液中炎性因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-1、IL-6]及软骨组织中骨代谢标志物[基质金属蛋白酶(MMP-13)、Ⅱ型胶原(ColⅡ)]、TrkA、TRPV1、miR-138表达水平,分析miR-138对KOA大鼠软骨损伤的影响。结果 与正常组相比,模型组、沉默组、过表达组大鼠行为学、软骨组织学评分升高(P<0.05);与过表达组相比,模型组、沉默组大鼠行为学、软骨组织学评分升高(P<0.05)。与正常组相比,模型组、沉默组、过表达组大鼠TNF-α、IL-1、IL-6水平及MMP-13、TrkA、TRPV1表达升高,ColⅡ、miR-138表达降低(P<0.05);与过表达组相比,模型组、沉默组大鼠TNF-α、IL-1、IL-6水平及MMP-13、TrkA、TRPV1表达升高,ColⅡ、miR-138表达降低(P<...     

栀子对兔膝骨关节炎模型关节软骨病理改变及IL-1 β表达的影响

目的:观察栀子浸膏对兔膝骨关节炎模型中关节软骨病理改变及关节液、血清中IL-1β表达的影响。方法:24只大白兔随机分为给药组、模型组和对照组（n=8）。给药组、模型组行Hulth法复制骨关节炎模型,术后第5周,给药组以栀子浸膏600 mg/kg灌胃,模型组与对照组给予等量生理盐水灌胃,给药3周后处死动物,分别对软骨肉眼下行Pelletier评分及光镜下行Mankin评分,取股骨内侧髁关节软骨组织块行电镜、H-E染色观察软骨细胞形态及检测关节液与血清中IL-1β的含量。结果:栀子浸膏能延缓骨关节炎关节软骨病理损伤,给药组关节液与血清中IL-1β的含量明显低于模型组（P<0.05或P<0.01）。结论:栀子浸膏可能通过降低骨关节炎模型关节液与血清炎症因子IL-1β的表达发挥保护关节软骨的作用,从而延缓骨关节炎病程的进展。