十二指肠钩虫谷胱甘肽转移酶AduGST-1基因的克隆和重组表达

目的克隆十二指肠钩虫谷胱甘肽转移酶（GST）AduGST-1基因,并在大肠埃希菌中表达获得重组AduGST-1。方法设计特异引物,以十二肠钩虫成虫cDNA为模板,通过PCR扩增AduGST-1基因。将获得的AduGST-1编码序列克隆至原核表达载体pETHF,构建重组表达质粒pETHF/AduGST-1。重组质粒转化至大肠埃希菌BL21（DE3）,用IPTG诱导表达、Ni亲和层析分离纯化重组AduGST-1,SDS-PAGE分析重组蛋白表达及纯化情况。结果成功扩增到AduGST-1全长编码序列,并登记到GenBank（accession no.JQ812812）。AduGST-1编码序列长度为624bp,编码307个氨基酸残基。成功构建了重组表达质粒pETHF/AduGST-1,在BL21（DE3）中表达并纯化了重组AduGST-1。结论首次报道从十二指肠钩虫中分离到GST基因,该基因可在大肠埃希菌中高效表达,并分离纯化了重组GST蛋白,为进一步研究AduGST-1功能与应用奠定了基础。     

重组蛋白PTD-HSP27的制备及其穿细胞膜和角膜组织的功能研究

目的:制备PTD-HSP27蛋白并研究其能否穿过人晶状体上皮细胞SRA01/04细胞膜及新西兰大白兔的角膜组织进入眼前房。方法:利用重叠延伸PCR法获得重组目的基因片段PTD-HSPB1-6His,构建重组质粒p KYB-PTD-HSP27-6His,原核诱导PTD-HSP27蛋白表达及纯化重组蛋白后对其进行Western blotting鉴定;用异硫氰酸荧光素(FITC)标记重组蛋白PTD-HSP27并检测其穿透SRA01/04细胞膜的能力及兔眼角膜组织的能力。结果:成功构建并纯化制备目的蛋白PTD-HSP27,在PTD-HSP27孵育后的SRA01/04细胞及结膜囊滴注PTDHSP27兔眼前房内均可检测出重组蛋白PTD-HSP27。结论:通过重叠延伸PCR法及镍柱层析纯化法可以获得较纯的重组蛋白PTD-HSP27;重组蛋白PTD-HSP27能够穿透SRA01/04细胞膜及穿越兔眼角膜进入房水。     

人睾丸精子结合蛋白-His6融合蛋白在真核细胞中的表达及亲和纯化

目的:构建含有人睾丸精子结合蛋白基因(testisspermbindingprotein,tsbp)的真核表达载体pcDNA3.1/mycHis(-)B/tsbp,并进行表达和纯化。方法:以克隆有tsbp全长cDNA序列的原核表达载体pGEX5X1/tsbp为模板,用PCR扩增tsbp,并通过DNA重组构建真核表达载体pcDNA3.1/mycHis(-)B/tsbp。以重组体稳定转染HEK293细胞后,应用RTPCR、Westernblot和细胞免疫荧光技术检测His6tsbp融合蛋白的表达。选择高表达量的细胞克隆,扩增并用Ni2 NTA金属亲和层析柱(IMAC)从细胞裂解液中纯化融合蛋白His6tsbp,纯化产物的纯度用SDSPAGE和Westernblot进行鉴定。结果:成功地构建了真核表达载体pcDNA3.1/mycHis(-)B/tsbp。以重组体转染HEK293细胞后,用RTPCR检测到tsbpmRNA的表达。细胞免疫荧光染色呈阳性反应,Westernblot检测到培养细胞中有融合蛋白His6tsbp的表达。经Ni2 NTA金属亲和层析柱分离纯化,得到纯化的重组蛋白His6tsbp。结论:构建了pcDNA3.1/mycHis(-)B/tsbp真核表达载体,并在HEK293细胞中表达和亲和层析纯化,为下一步的研究奠定了基础。     

嗜肺军团菌Ⅳ型菌毛蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化

目的扩增编码Ⅳ型菌毛蛋白的嗜肺军团菌pilE基因,构建重组质粒pET32a（＋）-pilE并在原核系统中表达．纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE．为进一步探讨Ⅳ型菌毛蛋白的作用及其作为军团病的诊断抗原提供实验基础。方法采用聚合酶链式反应（PCR）从嗜肺军团菌扩增得到pilE基因,构建重组质粒pET32a（＋）-pilE,转化大肠杆菌BL21（DE3）并用聚合酶链式反应、限制性酶切分析、序列分析鉴定后,IPTG诱导表达PIIJE蛋白,用硫酸十二烷酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）、Western印迹鉴定。使用HisTrap^TM HP亲和层析柱纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE。结果扩增出430bp的pilE基因;构建了重组质粒pET32a（＋）-pilE;表达并纯化出35700Mr的目标蛋白。结论成功构建了嗜肺军团菌pilE基因的原核重组质粒,并在原核系统中得到了高效表达。成功纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE。     

柔性肽串联四价Aβ15重组腺病毒的构建及纯化

目的构建并纯化含有柔性肽串联四价β-淀粉样蛋白（Aβ15）的重组腺病毒疫苗,用于老年性痴呆的预防和治疗。方法酶切获取带有IgGк轻链信号肽序列的柔性肽串联四价Aβ15基因,定向克隆于穿梭质粒pAdTrack-CMV中。通过与腺病毒骨架载体pAdeasy-1在细菌内同源重组形成重组腺病毒质粒pAd-4×Aβ15,转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒（Ad-4×Aβ15）。Western检测4×Aβ15在培养液中的分泌表达。氯化铯密度梯度离心纯化重组腺病毒Ad-4×Aβ15。结果 pAdTrack-4×Aβ15测序结果和预期一致,同源重组并经293细胞包装后形成重组腺病毒Ad-4×Aβ15,western检测4×Aβ15在培养上清中表达。经氯化铯密度梯度离心纯化后Ad-4×Aβ15病毒颗粒数约为4.6×1012 VP/mL。结论成功制备了重组腺病毒Ad-4×Aβ15,感染细胞证实其呈分泌表达,经氯化铯密度梯度离心纯化后得到高滴度的重组腺病毒。为老年性痴呆（Alzheimer’s disease,AD）的实验治疗打下基础。     

卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv 与鼠 HSP70 融合蛋白的构建、表达及鉴定

 目的 构建卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv 与小鼠热休克蛋白 70（mHSP70）融合蛋白 6B11ScFv/mHSP70,并初步鉴定其免疫活性。 方法 根据 Genebank 上已发表的 mHSP70 基因序列（NM_010478）合成引物行 PCR 扩增,以扩增所得 mHSP70 基因插入 pET30a（+）-6B11ScFv 质粒后转化入 E.coli DH5α,获得 pET30a（+）-6B11ScFv/mHSP70 重组质粒。将鉴定正确的 pET30a（+）-6B11ScFv/mHSP70 重组质粒转化入 E.coli BL21（DE3）,获得 E.coli BL21（DE3）[pET30a（+）-6B11ScFv/mHSP70]重组菌株。以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达并行 SDS-PAGE 分析,对表达产物进行复性和 Ni2+-NTA 柱亲和层析纯化后,采用蛋白质印迹法和 ELISA 方法进行鉴定和免疫活性检测。 结果 6B11ScFv/mHSP70 融合基因测序结果基本与理论序列相符。SDS-PAGE 分析显示,重组菌株表达产物相对分子质量与预期相符。复性、亲和层析纯化后的蛋白复性率达 20.9%,蛋白纯度达 95% 以上。蛋白质印迹分析证实 6B11ScFv/mHSP70 融合蛋白相对分子质量为 104 000,ELISA 检测表明其具有 6B11ScFv 和 mHSP70 的免疫 活性。 结论 构建表达的 6B11ScFv/mHSP70 融合蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究其体内外抗卵巢癌活性奠定了基础。     

金黄色葡萄球菌膜蛋白nEBPS原核表达及抗体制备

目的：构建金黄色葡萄球菌弹性纤维结合蛋白N端蛋白（N-terminal elastin binding proteins of S.aureus,nEBPS）的原核表达系统,制备其多克隆抗体。方法：设计引物,PCR方法扩增nEBPS基因（nebps）,分别构建克隆载体pMD19-T（＋）/nebps和原核表达载体pQE30（＋）/nebps,经PCR、双酶切和测序鉴定后,阳性表达载体转化大肠杆菌表达宿主菌M15[pREP4],经1mM异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达,表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹法（Western Bloting,WB）分析鉴定,经镍螯合亲和层析（Ni-NTAAgrose）纯化后再用SDS-PAGE和WB法鉴定。制备抗原,免疫新英格兰白兔,得到抗血清并对其进行鉴定。结果：pQE30（＋）/nebps重组表达载体构建成功,目的蛋白在构建的原核表达系统中较高表达,纯化后得到高纯度的nEBPS,免疫动物后得到理想的多克隆抗体。结论：通过基因重组技术,金黄色葡萄球菌膜蛋白nEBPS在构建的原核表达系统M15[pREP4]中得以成功表达,并获得了高纯度的目的蛋白及其多克隆抗体。     

ctB和ureⅠ双基因融合表达及其免疫特性分析

目的：构建霍乱毒素B亚单位（CtB）和幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白（UreⅠ）融合的原核表达质粒pET32a（＋）ctB/ure Ⅰ,并初步研究融合蛋白Ct B/Ure Ⅰ的表达特性和免疫特性.方法：PCR从pUC18 ctB中克隆ctB基因,定向在pET32a（＋）/ureⅠ的ureⅠ基因5＇端插入ctB基因,构建ctB和ure Ⅰ双基因原核表达质粒pET32a（＋）ctB/ure Ⅰ,转该质粒于E.coli BL-21（DE3）,经酶切和序列分析鉴定工程菌.IPTG诱导表达,HP-His亲和层析纯化,SDS-PAGE和Gel-Pro Analizer4分析,重组蛋白免疫BALB/c小鼠.用Western blot和ELISA分析重组蛋白的免疫特性.结果：工程菌含完整的ctB和ure Ⅰ基因,与相对应基因的序列同源性分别为100%.在22℃,1 mmol/L IPTG诱导4 h后,重组蛋白的表达占菌体总蛋白12%,亲和层析纯化后蛋白纯度为94.3%.Western blot表明重组蛋白分别能与相应的抗体反应,该蛋白免疫小鼠后能产生相应的IgG抗体.结论：成功构建了能表达CtB/Ure Ⅰ蛋白的大肠杆菌表达菌株.对融合蛋白表达和纯化后,初步证明了该重组蛋白有CtB和Ure Ⅰ的双特异反应原性和免疫原性,为研究新型幽门螺杆菌疫苗奠定了坚实的基础.     

肺炎衣原体感染通过PI3K激活Rac1而诱导血管平滑肌细胞迁移

 目的:研究Rac1活化在肺炎衣原体（C.pn）感染诱导血管平滑肌细胞（VSMCs）迁移中的作用及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）对其活化的影响。方法:谷胱甘肽巯基转移酶（GST）-p21活化激酶1 p21结合结构域（PBD）即GST-PBD重组质粒转化感受态细菌,诱导融合蛋白表达并纯化;GST-pull down实验检测C.pn感染VSMCs后Rac1活性的变化;PI3K特异性抑制剂LY294002 （25 μmol/L）预处理VSMCs,GST-pull down实验检测Rac1活性的变化;Rac1特异性抑制剂NSC23766（50 μmol/L）预处理VSMCs,wound-healing 实验和Transwell 实验观察VSMCs迁移能力的变化。结果:重组质粒转化感受态细菌后,经诱导表达和纯化,得到足量有效的GST-PBD融合蛋白;GST-pull down实验结果显示,C.pn感染VSMCs后Rac1活性增强且显著高于正常对照组（P<0.05）;LY294002预处理VSMC后,C.pn感染诱导的Rac1活性明显下降（P<0.05）;细胞迁移实验结果显示,NSC23766预处理的 C.pn感染组细胞迁移能力明显低于单纯感染组（P<0.05）。结论: C.pn感染可能通过PI3K激活Rac1,从而诱导VSMCs迁移。     

大鼠IgE依赖组胺释放因子重组蛋白纯化效果的优化

目的提高大鼠IgE依赖组胺释放因子（rHRF）的可溶性表达水平，改善其亲和层析纯化效果，为深入研究该重组蛋白的生物学功能奠定基础。方法选择多克隆酶切位点BamH Ⅰ和Xho Ⅰ,将rHRF完整编码区基因从原有的pET-30a—rHRF重组质粒亚克隆至pET-28a载体，构建重组质粒pET-28a-rHRF;转化大肠杆菌BL21（DE3）后，通过改变IPTG浓度（0．1～1．0mmol／L），调节诱导表达温度（25～370C）和时间（1-5h），筛选能够提高rHRF可溶性表达水平的条件；同时改进亲和层析纯化的条件，提高纯化效果。结果成功构建重组质粒pET-28a-rHRF，不同IPTG浓度、诱导温度和时间对重组蛋白的可溶性表达水平无明显影响。但是．与pET-30a-rHRF转化菌相比，pET-28a—rHRF转化菌所表达的重组蛋白因其N端和C端均带有6xhis标签．增强了目的蛋白与树脂的结合力，而使亲和层析纯化效果（重组蛋白的浓度和纯度）显著提高。结论rHRF重组蛋白的可溶性表达水平不受IPTG浓度、诱导表达温度和时间的影响，但是可溶性重组蛋白两端均携带6xhis标签可使亲和层析纯化效果显著提高，从而有利于获得足量rHRF用于进一步的生物学功能研究。     

重组人免疫缺陷病毒Ⅰ型逆转录酶的纯化及其动力学性质

目的纯化重组人免疫缺陷病毒Ⅰ型逆转录酶（ＨＩＶ－１ＲＴ），筛选新的ＨＩＶ－１ＲＴ抑制剂。方法在适宜的培养条件下诱导工程菌Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９（ＰＫＲＴ２）可高效表达重组人免疫缺陷病毒Ⅰ型（ＨＩＶ－１）逆转录酶（ＲＴ）。应用ＤＥＡＥ－纤维素和磷酸纤维素离子交换柱层析法从细菌裂解液中分离、纯化重组ＲＴ。结果１升细菌培养液可得到１．１ｍｇ产物。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示所纯化的重组ＲＴ为由两个分子量分别为６６ｋＤ和５１ｋＤ的亚基组成的杂二聚体。酶活性测定结果表明，经纯化的重组ＲＴ具有很高的逆转录酶活性（比活力为１．４×１０４ｕｍｇ）。结论本文通过对ＲＴ反应条件的研究，优化了ＲＴ反应系统，并测定了磷甲酸钠（ＰＦＡ）对重组ＲＴ的抑制效应，结果表明ＰＦＡ对重组ＲＴ的抑制反应动力学机制与天然ＲＴ相同，从而进一步说明用此法纯化的重组ＲＴ可直接用于抗ＨＩＶ药物的筛选与评价。     

抗AIF单链抗体在大肠杆菌中的可溶性表达和鉴定

目的:获得具有生物活性的抗酸性同功铁蛋白(AIF)单链抗体(scFv)。方法:将AIF4c9scFv基因亚克隆于原核表达载体pPOW3,构建重组表达质粒pPOW4c9,电转化大肠杆菌DH5α,以温度诱导重组抗AIFscFv表达,经镍螯合层析柱纯化后,用ELISA和Westernblot检测表达蛋白与AIF的结合特性。结果:抗AIFscFv抗体在大肠杆菌中获得可溶性表达,亲和力常数KD为3.18×10-8mol/L;纯化后的可溶性AIFscFv含量约为1.6mg/L。重组蛋白能特异识别AIF,并且具有良好的抗体生物学活性。结论:在大肠杆菌中表达并纯化了特异性可溶性抗AIFscFv抗体。     

丁型肝炎病毒抗原的原核表达及抗原性分析

目的 利用含T7启动子和His纯化标签pRSET B质粒构建丁型肝炎病毒抗原（HDAg）重组表达质粒（pRSETB-HDAg）,转化宿主菌,表达并纯化,获得生物活性高抗原性强的基因工程重组抗原.方法 将中国河南株HDAg基因片段插入pRSET B表达质粒,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导表达.表达产物经Chelating亲和层析纯化后,采用EIA方法分析HDAg的抗原性.结果 重组HDAg稀释1000倍（10 ng/ml）仍与抗体有较强的反应.经与美国HDAg和华美公司生产的HDV诊断试剂同时检测26份HDV阳性参比血清,三者结果比较,除美国抗原漏检1份,检出率为96.15%（25/26份）外,病毒CDC和华美试剂均无漏检,检出率为100%,三者检测结果具有很高的符合率.结论 成功构建了丁型肝炎病毒抗原重组表达质粒（pRSETB-HDAg）,在原核细胞获得稳定高效表达,EIA 检测证明HDAg抗原性好,可用于组装HDV诊断试剂,用于临床丁型肝炎患者的诊断和我国丁型肝炎病毒感染流行病学的调查.     

九种冠状病毒核衣壳蛋白的原核表达及纯化

目的 探索SARS冠状病毒（SARS-CoV）、HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1等5种人类冠状病毒以及牛冠状病毒（BCoV）、鼠肝炎病毒（MHV）、猫传染性腹膜炎病毒（FIPV）和禽传染性支气管炎病毒（IBV）4种动物冠状病毒核衣壳（N）蛋白在大肠杆菌中克隆表达及纯化条件。方法 利用原核表达载体pET30a（+）经IPTG诱导表达重组蛋白,并采用离子交换及镍离子螯合亲和层析法对重组蛋白进行纯化,用SDS-PAGE及Western blot对重组蛋白进行鉴定。结果 成功表达、纯化出9种冠状病毒N蛋白,纯度达90%以上。结论 在原核系统中表达得到了高纯度的9种冠状病毒N蛋白,为相关功能性研究奠定了基础。     

Array-ELISA 技术对肾综合征出血热病毒诊断抗原的评价

目的分段表达并纯化肾综合征出血热病毒核蛋白,应用array-ELISA技术评价重组表达的核蛋白片段的诊断价值。方法构建肾综合征出血热病毒核蛋白表达质粒pET-32a（＋）/Pn、pET-32a（＋）/Pc,在大肠杆菌中诱导表达并用亲和层析法纯化,运用array-ELISA方法鉴定重组蛋白的检测特异性,检测结果与商品化胶体金试剂盒进行比较。结果在大肠杆菌中正确表达了肾综合征出血热病毒的核蛋白,亲和纯化得到较高纯度的蛋白质;应用array-ELISA技术从16份临床疑似血清样本中检出13份阳性血清,与商品化胶体金试剂盒一致性达到94％。结论获得的重组蛋白His-Pn可作为肾综合征出血热特异性诊断抗原之一;array-ELISA方法可以作为检测病毒抗体的有效手段。     

HIV-1 gp41蛋白的表达及其免疫反应性

目的高效表达HIV-1gp41基因片段,满足生产HIV体外检测试剂的需要。方法以含HIV-1gp41基因的质粒X1为模板,采用PCR方法扩增出gp41基因,克隆入E1载体构建重组表达质粒E1—1,转化E．coliBL21DE3感受态细胞,经异丙基-D-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后,使用镍螯合琼脂糖亲和层析柱（Ni．NTAAgaros）纯化重组蛋白,通过ELISA法检测重组蛋白的免疫反应性和特异性。结果SDS．PAGE鉴定结果表明,重组E1-1蛋白获得了正确的表达;纯化的重组E1-1蛋白纯度〉95％;ELISA检测结果表明,重组E1-1蛋白具有较优的免疫反应性和特异性。结论成功表达出具有较高免疫反应性的重组E1—1蛋白,可应用于HIV体外检测试剂。     

人高迁移率族蛋白1的原核细胞表达及其功能研究

目的：构建带His标记的人高迁移率族蛋白1 （HMGB1）融合蛋白原核细胞表达质粒，表达并纯化人HMGB1重组蛋白，观察其对人脐静脉内 皮细胞（HUVEC）释放细胞因子的影响。方法：首先将目的片段HMGB1亚 克隆到改造的载体pET14b上，经鉴定、测序证实序列正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)，异 丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达His-HMGB1融合蛋白，用Ni-NTA亲和树脂纯化。将纯 化得到的HMGB1蛋白经透析和过滤除菌后，刺激人脐静脉内皮细胞，24 h后收集培养上清,经LiquiChip液相蛋白芯片系统检测细胞因子。结果:构建的pET14b/HMG B1表达质粒经酶切和测序验证正确；表达的目的蛋白经Western blotting验证能被His抗体 识别；检查了纯化的HMGB1蛋白对HUVEC 产生细胞因子的影响，发现重组的HMGB1可诱导白细 胞介素8（IL-8）上调，并且呈剂量依赖性关系。结论：成功构建了His- HMGB1原核细胞表达质粒并纯化得到重组的HMGB1；在HUVEC模型上证实所得到的HMGB1蛋白具 有生物学活性。本实验为进一步研究HMGB1的功能提供了重要的实验材料。     

趋化性细胞因子MTCK1/mPBP的原核表达、纯化及活性分析

目的 原核表达、纯化小鼠CXC亚家族趋化性细胞因子MTCK1／mPBP并测定其生物学活性。方法 构建原核表达载体pQE-30-MTCK1/mPBP；在大肠杆菌M15菌株中表达重组蛋白6xHisMTCK1/mPBP，利用镍-亚硝胺乙酸-组氨酸(Ni-NTA-His)亲和层析法对重组蛋白进行纯化。采用Boyden小室对纯化的MTCK1／mPBP蛋白进行趋化活性分析。结果 通过优化表达和纯化条件，获得了重组．MTCK1／mPBP蛋白，并对大肠杆菌包涵体蛋白进行变性和复性处理。趋化试验表明，原核表达的MTCK1／mPBP蛋白对转染有CXCR2受体的293细胞系具有明显的趋化能力，并呈现浓度依赖性。结论 利用原核表达系统，表达并纯化了重组趋化性细胞因子6xHis-MTCK1／mPBP蛋白，体外功能试验证实有生物学活性．     

假单胞菌表达重组人干扰素α-2b蛋白纯化用离子交换树脂的筛选

目的研究用于分离纯化假单胞菌表达重组干扰素α-2b蛋白的离子交换树脂。方法利用工程菌假单胞菌发酵获得的菌体进行裂解,经离心、沉淀、盐析、疏水层析、超滤、透析等步骤,获得重组人干扰素α-2b蛋白溶液,通过对比8种商品化离子交换树脂(DE 52、DEAE FF、Fractogel DEAE、Bio-sep DEAE、CM 52、CM FF、Fractogel COO-、Bio-sep CM)的动态载量、洗脱条件及纯化后的重组人干扰素α-2b蛋白的活性回收率,采用安捷伦2100生物分析仪比较纯化后的重组人干扰素α-2b纯度,考察离子交换树脂用于假单胞菌表达重组干扰素α-2b蛋白分离纯化的适用性。结果 FractogelDEAE和Fractogel COO-的动态载量最高,分别为183.04 mg/mL和107.00 mg/mL;Fractogel DEAE和CM 52洗脱效果较好;DEAE FF和CM FF纯化后的干扰素α-2b蛋白活性回收率较高,分别为82.38%和49.46%。结论 DEAE FF和CM FF适用于假单胞菌重组干扰素α-2b蛋白的分离纯化。     

链霉亲和素-自噬相关基因融合蛋白的原核表达及纯化

目的 构建链霉亲和素（streptavidin,SA）和自噬相关基因（Beclin 1）重组质粒,并对融合蛋白SA-Beclin 1进行表达和纯化.方法 利用基因重组技术将核心SA与Beclin 1序列连接,克隆人pQE80形成pQE80-SA-Beclin 1重组载体,IPTG诱导融合蛋白原核表达,镍亲和凝胶层析柱纯化融合蛋白,Western blot鉴定.结果 PCR成功扩增核心SA活性中心,酶切鉴定和测序均证实重组载体pQE80-SA-Beclin 1构建成功;IPTG诱导后SA-Beclin 1融合蛋白（含His标签）在大肠杆菌中高效表达,SDS-PAGE分析表达的融合蛋白以包涵体为主,经镍亲和凝胶层析柱纯化得到融合蛋白,Western blot鉴定其相对分子量约为72000kD,与预期相符.结论 本文成功构建了重组质粒并表达纯化了SA-Beclin 1融合蛋白,为进一步研究SA-Beclin 1的功能及临床应用奠定了基础.