Wnt 5a在支气管肺发育不良模型中的作用机制探讨

目的 探究Wnt 5a在支气管肺发育不良(BPD)模型中的作用机制。方法 (1)细胞水平：将A549细胞分为对照组(CO₂体积分数5%)和BPD组(O₂体积分数85%)。在高氧48 h后采用Western blot方法检测肺表面活性物质相关蛋白质C(SPC)、水通道蛋白5(AQP5)和Wnt 5a蛋白水平，细胞增殖检测试剂盒检测细胞增殖能力变化。(2)动物水平：将新生大鼠随机分为对照组(O₂体积分数21%)和BPD组(O₂体积分数85%)。高氧7 d后取肺组织，采用HE染色评估BPD动物模型病理变化；采用Western blot检测肺组织中Wnt 5a、SPC及AQP5变化。(3)细胞水平：进一步在BPD细胞模型中添加Wnt 5a抑制剂，验证Wnt 5a对SPC、AQP5蛋白及细胞增殖能力的影响。结果 与对照组比较，BPD细胞模型中SPC和AQP5表达量降低，Wnt 5a表达量升高，细胞增殖能力降低。添加Wnt 5a抑制剂后SPC、AQP5蛋白表达升高，A549细胞增殖能力恢复。BPD动物模型中出现...     

PI3K/Akt/FOXO3a信号通路介导的保护性自噬参与肺腺癌获得性顺铂耐药表型重塑

目的:比较顺铂压力下人肺腺癌亲本A549细胞与获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞自噬水平,探寻肿瘤细胞获得性耐药表型重塑的分子机制。方法:不同浓度顺铂(cisplatin, DDP)干预亲本A549细胞及获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞,应用CCK-8法比较两株细胞耐药指数、免疫印迹法比较自噬相关蛋白(Beclin 1、LC3Ⅱ及p62)表达水平;应用10μmol/L顺铂(相当于亲本A549细胞半数抑制浓度,即A549 IC₅₀值)干预A549及A549/DDP细胞,构建细胞应激状态,CCK-8法比较两株细胞生存活力,免疫印迹法比较自噬相关蛋白(Beclin 1、LC3Ⅱ及p62)、凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3)、转录因子FOXO3a及其磷酸化蛋白(p-FOXO3a)表达水平,免疫荧光法观察FOXO3a亚细胞定位,并利用自噬晚期抑制剂巴弗洛霉素A1(Baf A1)干预A549及A549/DDP细胞,进一步验证顺铂压力下细胞自噬激活情况;利用蛋白激酶抑制剂干预PI3K/Akt信号通路,免疫印迹法检测顺铂压力下A5...     

黄芪多糖对肺癌A549细胞自噬的作用及机制研究

目的 探讨黄芪多糖（APS）对黄嘌呤氧化酶（XOD）诱导的肺癌A549细胞自噬模型及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路的影响及对自噬相关调节因子表达。方法 实验分为6组：正常组、模型组(20 U·L^-1 XOD处理24 h)、低、中、高3个浓度实验组(在模型组基础上分别使用100,200和400 mg·L^-1 APS进行处理)及3-MA抑制组(在模型组基础上使用2 mmol·L^-1 3-甲基腺嘌呤进行处理)。以免疫荧光法检测自噬相关蛋白,以蛋白质印迹法检测PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白,以实时荧光定量聚合酶链反应法检测mRNA的表达水平。结果 正常组、模型组、高浓度实验组及3-MA抑制组的微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）的蛋白荧光强度分别为6 368.50±17.90,2.57×10⁴±224.03,7 443.00±19.20和8 356.50±18.52;抗坏死骨片1（P62）的蛋白荧光强度分别为2.86×10⁴     

雷帕霉素对宫颈癌患者HeLa细胞侵袭转移抑制作用的实验

目的:研究雷帕霉素对宫颈癌患者HeLa细胞侵袭转移抑制作用。方法:取宫颈癌患者HeLa细胞标本进行实验,空白组不加雷帕霉素,雷帕霉素组加入雷帕霉素30 nmol/L,分别培养48 h后,采用MTT法检测细胞活力(计算细胞生长抑制率)、Transwell法检测细胞迁移侵袭能力,以及采用Western blot法检测蛋白激酶B(Akt)和兔抗雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的磷酸化水平以及兔抗基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、兔抗基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、波形蛋白(Vimentin)与钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平。结果:雷帕霉素组患者宫颈癌HeLa细胞生长抑制率、E-cadherin表达率明显多于对照组(P<0.05),且宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭数量、Akt与mTOR磷酸化水平、MMP-2、MMP-9与Vimentin表达明显少于对照组(P<0.05)。结论:雷帕霉素能抑制宫颈癌HeLa细胞的侵袭转移,主要是通过Akt/mTOR信号通路发挥作用。     

金宁方中β-谷甾醇增进槲皮素诱导肺癌A549细胞凋亡作用

目的 探讨β-谷甾醇联合槲皮素对A549细胞抑制作用以及机制。方法 将A549细胞分为对照组、槲皮素组、槲皮素+β-谷甾醇组、雌二醇组、雌二醇+槲皮素组以及雌二醇+槲皮素+β-谷甾醇组。采用细胞存活率检测A549细胞的抑制作用。采用流式细胞技术和免疫荧光法检测肺癌细胞的促凋亡情况。应用免疫印迹法检测磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的调控作用。结果 槲皮素可抑制A549细胞生存率且具量效关系(P <0.05);雌二醇可促进A549细胞生长;与槲皮素组或槲皮素+β-谷甾醇比较,雌二醇+槲皮素+β-谷甾醇组更抑制A549细胞增殖,提高细胞凋亡比例及caspase-3的表达水平(P <0.05);促进mTOR和Akt磷酸化,减少PI3K磷酸化。结论 在雌二醇干预下,β-谷甾醇联合槲皮素对A549细胞有抑制作用,其机制可能通过PI3K/Akt/mTOR通路对细胞凋亡起促进作用。     

自噬对多发性骨髓瘤细胞增殖的影响

目的：探讨自噬（ autophagy）对正常培养多发性骨髓瘤（ Multiple myeloma,MM）细胞株增殖的影响。方法 MM细胞株U266在正常培养条件下分别加入雷帕霉素和3－甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）,以正常血清培养U266细胞及淋巴瘤Jurkat细胞株为对照组;分别检测细胞的增殖及凋亡水平;单丹磺酰尸胺（ monodansylcadaverine ,MDC）荧光染色法检测细胞自噬水平;逆转录PCR检测自噬相关基因mtor、Beclin1、Atg5在细胞内水平,蛋白质印迹法检测细胞内自噬相关蛋白轻链3I／Ⅱ（ LC3I／Ⅱ）含量。结果 U266细胞及Jurkat细胞内均存在自噬,但前者水平高于后者。雷帕霉素可诱导MM细胞发生自噬,3-MA对自噬有双重作用。雷帕霉素及3-MA下调细胞增殖水平。雷帕霉素及3-MA处理24 h可上调正常培养条件下U266细胞凋亡水平（1．7％±0．2％,19．1％±1．0％和16．8％±0．61％）。延长培养时间至72 h,雷帕霉素处理组凋亡水平无明显变化（16．9％±0．48％）。而3-MA处理组凋亡水平下降（9．0％±0．70％）。结论 MM细胞株内会存在一定水平的自噬,并通过实验证明其高于淋巴瘤Jurkat细胞株的自噬水平。在正常培养条件下加入了雷帕霉素及3-MA可抑制MM细胞的增殖,并可诱导细胞凋亡。     

PI3K/Akt/mTOR通路在炎症相关疾病中分子机制研究进展

炎症是一种机体应对感染、组织损伤或者细胞应激的反应,并且可以通过修复机制恢复组织功能。炎症发生时会引起多条信号通路的激活,包括核转录因子-κB（NF-κB）通路、Janus激酶/信号转导与转录激活子（JAK/STAT）通路、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路以及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B /雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）通路等。本文综述了近年来磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B /雷帕霉素靶蛋白通路在炎症相关疾病中的分子作用机制,为研发以磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B /雷帕霉素靶蛋白为靶点的药物提供理论依据。     

7-去氧水仙环素通过靶向抑制Akt发挥抗肝癌作用

目的探讨7-去氧水仙环素调节肝癌的生长及分子作用机制。方法采用MTT和平板克隆形成实验检测7-去氧水仙环素作用对细胞活力及单细胞增殖能力的影响;Western印迹分析和流式细胞技术检测检测7-去氧水仙环素对肝癌细胞凋亡的影响;免疫荧光染色、透射电子显微镜观察及自噬双标腺病毒染色等检测7-去氧水仙环素对细胞自噬的影响;Western印迹法及免疫荧光染色检测对EMT现象的影响。应用自噬抑制剂(Bafilomycin A1)或采用小干扰RNA(si RNA)抑制自噬探究对凋亡和EMT的影响;应用细胞热转变分析实验(CETSA)和药物亲和力反应靶标稳定性测定(DARTS)实验分析7-去氧水仙环素与蛋白激酶B(Akt)之间的结合关系,采用分子对接模拟7-去氧水仙环素与Akt之间的作用位点,利用Western印迹实验对其进行验证;将两种肝癌细胞系HepG2和Hu H-7的Akt进行过表达,应用Western印迹和免疫荧光染色实验分析7-去氧水仙环素对肝癌细胞的凋亡、自噬和EMT的影响;建立原位肝癌小鼠模型,采用HE染色及免疫组化实验检测7-去氧水仙环素在体内调节的抗肿瘤作用;TCGA数据库进一步评估Ak磷酸化水平与肿瘤患者生存周期之间的关系,基因集数据库进一步探讨Akt与凋亡、自噬和EMT相关信号通路的关系。结果 7-去氧水仙环素显著下调肝癌细胞生存活力,降低单细胞增殖能力;显著改变凋亡相关蛋白PARP、活化胱天蛋白酶3、Bcl-2和Bax,自噬相关蛋白P62和LC3B,EMT相关蛋白E-cad、N-cad和Vim的表达水平。抑制自噬,在7-去氧水仙环素作用下,细胞活力进一步下降,单细胞增殖能力进一步降低,细胞凋亡进一步增加,EMT相关蛋白E-cad和Vim进一步改变。7-去氧水仙环素可减缓链金霉素或温度对Akt蛋白的降解速度,7-去氧水仙环素可以直接与Akt的C-末端结构域结合,并可以显著抑制Akt的磷酸化(S473位点)活性;过表达Akt后,7-去氧水仙环素抑制的细胞活力有一定程度的恢复,凋亡相关蛋白、自噬相关蛋白及EMT相关蛋白均有一定程度的逆转。7-去氧水仙环素治疗后,小鼠肝脏上的肿瘤数量和大小均有显著减少,对肝癌的肺转移也有一定程度的抑制,凋亡相关蛋白PARP-Ⅱ表达增加,EMT相关蛋白Vim表达增加,与氯喹(CQ)共同作用后,进一步抑制原位肝癌和肝癌的肺转移,TCGA数据库分析结果表明,p-Akt表达水平与多种癌种患者生存周期密切相关;GSEA结果表明Akt与凋亡、自噬和EMT相关信号通路关系密切。结论 7-去氧水仙环素通过促进肝癌细胞凋亡、诱导细胞自噬并抑制其EMT进程,进而发挥抗肝癌作用。     

抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对MPP+处理的SH-SY5Y细胞自噬、凋亡及PD特征蛋白表达的影响

目的 探讨抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP⁺)处理的SH-SY5Y细胞自噬、凋亡及帕金森病(PD)特征蛋白α-突触核蛋白(α-syn)、酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响。方法 以MPP⁺、PI3K/Akt激活剂胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、PI3K/Akt抑制剂LY294002作用于人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,CCK-8检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;吖啶橙(AO)染色检测自噬空泡;Western blot检测α-syn、TH、p62、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、p-mTOR、mTOR、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt蛋白水平。结果 MPP⁺干预显著降低SH-SY5Y细胞存活率,且呈现剂量依赖性(P<0.05)。MPP⁺和IGF-1处理后SH-SY5Y细胞存活率降低,凋亡率增高(P<0.05);细胞中自噬空泡减少,LC3BⅡ/Ⅰ降低,p62蛋白水平...     

雷帕霉素在延缓衰老及老年相关性疾病中的研究进展

随着生物学家对雷帕霉素(西罗莫司)靶蛋白(target of rapamycin,TOR)研究的深入,发现雷帕霉素通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的活性影响细胞的生长、增殖、蛋白质合成和细胞自噬,从而延长了无脊椎动物和哺乳动物的生命周期,并预防和延缓了老年相关性疾病的发生.本文对雷帕霉素在延缓衰老及预防老年相关性疾病中的研究进展进行综述.     

雷帕霉素用于治疗神经退行性疾病研究进展

越来越多的研究表明,雷帕霉素作为一种传统的抗生素,表现出很强的抗老化作用,通过阻断哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR),影响了多种基本的细胞周期,细胞的生长和增殖,蛋白质合成和细胞自噬过程,从而为神经退行性疾病模型提供神经保护作用,包括帕金森病、阿尔茨海默病、亨廷顿病等。对近期关于雷帕霉素神经保护作用的研究成果予以综述。     

A型流感病毒对肺巨噬细胞自噬的影响及麻杏石甘汤含药血清的干预作用

目的探讨麻杏石甘汤含药血清对A型流感病毒诱导的肺巨噬细胞自噬的干预作用。方法以A型流感病毒感染的RAW264. 7细胞为研究对象,分为麻杏石甘汤含药血清低、中、高剂量组、奥司他韦组、3-MA+流感病毒组、流感病毒组、3-MA组、雷帕霉素组、空白组,干预12 h后,分别用激光共聚焦显微镜和透射电镜技术检测细胞自噬情况;Western blot法检测自噬标志蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ表达。结果麻杏石甘汤含药血清能不同程度抑制流感病毒诱导的细胞自噬标志蛋白LC3的膜聚集,抑制细胞内自噬小体和自噬溶酶体的增加,以及LC3-Ⅱ的表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,且呈现一定的量效关系。结论麻杏石甘汤可能通过抑制A型流感病毒诱导的细胞自噬,最终调控A型流感病毒的致病作用。     

低氧微环境下自噬对顺铂处理的肺腺癌A549细胞增殖活性的影响

目的观察在低氧环境下自噬对人肺腺癌A549细胞化疗敏感性的影响。方法常规低氧培养人肺腺癌A549细胞,分为低氧对照组及低氧＋3-甲基腺嘌呤（3-MA）组,分别采用透视电子显微镜观察不同时间点细胞自噬体的变化,Western blot检测自噬标记蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）蛋白表达,分析LC3II/LC3I比值变化。随后每组再给予顺铂（DDP）处理后,采用MTT比色法检测细胞增殖活性。结果低氧状态下,A549细胞自噬体形成增加,LC3II/LC3I蛋白比值表达升高,加入自噬抑制剂3-MA后,自噬体数量、LCII/LCI比值较单纯低氧组均下降。予顺铂处理后,低氧＋3-MA组细胞增殖活性较低氧组下降。结论在低氧环境中,A549细胞保护性自噬增强,抑制自噬可增强A549细胞对顺铂化疗的敏感性。     

水仙环素活化AKT/mTOR通路减轻高氧诱导新生大鼠急性肺损伤

目的：探讨水仙环素对高氧诱导新生大鼠急性肺损伤的影响及其机制。方法：取足月新生Wistar大鼠40只,随机分为常氧组（21% O2）、常氧+水仙环素组、高氧组（85% O2）、高氧+水仙环素组,每组10只。各组大鼠于不同含氧量条件下暴露7 d,另取足月新生大鼠50只,随机分为常氧组、高氧组、高氧+水仙环素组、高氧+水仙环素+蛋白激酶B（AKT）抑制剂组及高氧+水仙环素+雷帕霉素组,每组10只。各药物组于出生后0、2、4、6 d时分别腹腔注射1 mg/kg水仙环素、1mg/kg AKT抑制剂和4mg/kg雷帕霉素,比较各组大鼠肺损伤、促炎细胞因子、纤维化及肺组织细胞凋亡水平。结果：与常氧组比较,高氧组大鼠体质量、肺组织B淋巴细胞瘤-2基因/Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2/Bax）水平明显降低,支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数、总蛋白及肺组织湿干质量、BALF与血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、单核细胞趋化因子（MCP-1）、IL-6含量、肺组织α平滑肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白及胶原蛋白Ⅰ表达、肺组织细胞凋亡率、原代肺成纤维细胞凋亡率、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）/AKT、磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）/mTOR升高（P<0.05）;常氧组与常氧+水仙环素组上述指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。与高氧组比较,高氧+水仙环素组体质量、肺组织Bcl-2/Bax水平升高,BALF中细胞总数、总蛋白及肺组织湿/干质量、BALF与血清中TNF-α、IL-1β、MCP-1、IL-6含量、肺组织α-SMA、波形蛋白及胶原蛋白Ⅰ表达、肺组织细胞凋亡率、原代肺成纤维细胞凋亡率、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR降低（P<0.05）。与高氧+水仙环素组比较,高氧+水仙环素+AKT抑制剂组TNF-α、IL-1β水平升高（P<0.05）,高氧+水仙环素+雷帕霉素组TNF-α、IL-1β、胶原蛋白Ⅰ表达升高,Bcl-2/Bax水平明显降低（P<0.05）。结论：水仙环素可保护新生大鼠高氧肺损伤,其机制可能与水仙环素活化AKT/mTOR信号通路,改善炎症反应、减缓肺纤维化程度、抑制肺组织细胞的凋亡有关     

缬沙坦对颈动脉粥样硬化大鼠AT1R/PI3K/Akt/mTOR通路及血管内皮细胞自噬的影响

目的探讨缬沙坦对颈动脉粥样硬化大鼠血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1R)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路及血管内皮细胞自噬的影响。方法采用高脂饲料饲喂结合颈动脉球囊损伤法制备颈动脉粥样硬化大鼠模型,随机分为模型组(生理盐水),缬沙坦低、中、高(10、20、30 mg/kg)剂量组和阳性对照组(阿托伐他汀,2.5 mg/kg),另取假手术大鼠作为对照组(生理盐水),每组15只,均每天ig给药1次,连续4周,给药体积10 mL/kg。末次给药结束24 h后,全自动生化分析仪检测各组大鼠血脂水平,包括总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C);酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠颈动脉血清中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠颈动脉内皮组织病理学变化;单丹磺酰尸胺(MDC)染色法检测各组大鼠颈动脉内皮细胞自噬率;蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测各组大鼠自噬标记蛋白LC3-Ⅱ、Beclin 1和通路蛋白AT1R表达水平及PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平。结果与对照组相比,模型组大鼠颈动脉组织内皮细胞排列紊乱,内皮破损,大量炎性因子浸润,TC、TG、LDL-C、IL-1β、TNF-α、IL-6水平及AT1R蛋白表达和PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平显著升高(P0.05),HDL-C水平、细胞自噬率、LC3-Ⅱ和Beclin 1蛋白表达水平显著降低(P0.05);与模型组相比,缬沙坦低、中、高剂量组大鼠颈动脉组织中内膜逐渐平滑,炎性因子浸润依次减少,TC、TG、LDL-C、IL-1β、TNF-α、IL-6水平及AT1R蛋白表达和PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平依次降低(P0.05),HDL水平、细胞自噬率、LC3-Ⅱ和Beclin 1蛋白表达水平显著升高(P0.05);缬沙坦高剂量组与阳性对照组大鼠各项指标差异无统计学意义。结论缬沙坦可能通过下调AT1R/PI3K/AKT/mTOR信号通路,提高LC3-Ⅱ和Beclin 1自噬相关蛋白表达水平,促进颈动脉粥样硬化大鼠血管内皮细胞自噬,减轻炎症反应。     

知母皂苷AⅢ通过miR-129-5p/STAT3轴调节肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨知母皂苷AⅢ(TAⅢ)对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响机制。方法:用不同浓度的TAⅢ处理A549细胞后,CCK-8法检测TAⅢ对A549细胞的细胞毒性。体外培养A549细胞,分为对照组(Control组)、TAⅢ组(20μmol·L^-1)、TAⅢ+anti-NC组、TAⅢ+anti-miR-129-5p组,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中miR-129-5p、信号转导和转录激活因子3(STAT3)mRNA表达,蛋白质印迹(Western blot)检测STAT3及其磷酸化蛋白(p-STAT3)表达,平板克隆实验检测细胞增殖活力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。双荧光素酶实验验证miR-129-5p和STAT3的靶向关系。BALB/c裸鼠移植瘤实验检测TAIII在体内的抗肿瘤活性,免疫组织化学(IHC)法检测肿瘤组织Ki-67、p-STAT3表达。结果:低浓度TAⅢ(1,5μmol·L^-1)对A549细胞存活率无显著影响(P>0.05),高浓度TAⅢ(10,20,30,6...     

雷帕霉素新衍生物FIM-X7通过促进自噬影响N2a-APP695细胞表达β淀粉样蛋白的研究#br#

目的 mTOR信号通路在Aβ诱导的神经退行性病变中起重要作用，mTOR抑制剂雷帕霉素具有潜在治疗作用。研究含噻唑侧链的雷帕霉素新衍生物FIM-X7对N2a-APP695细胞表达Aβ的影响，探讨FIM-X7在阿尔茨海默症的应用前景。方法 ELISA方法检测FIM-X7对N2a-APP695细胞表达Aβ40和Aβ42的影响，Western-blot检测FIM-X7对N2a-APP695细胞表达自噬相关蛋白和mTOR信号通路的影响，淋巴细胞转化实验测定FIM-X7的免疫抑制活性，MTT法检测FIM-X7对N2a-APP695细胞增殖的影响，流式细胞术分析FIM-X7对N2a-APP695细胞凋亡的作用。结果 FIM-X7通过抑制mTOR信号通路、降低自噬相关蛋白ULK1的磷酸化，促进细胞自噬进而降低N2a-APP695表达Aβ的水平；其对N2a-APP695细胞内Aβ40和Aβ42的作用效果与雷帕霉素相当。此外，FIM-X7几乎没有细胞毒性，对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的抑制活性仅为雷帕霉素的1/5000。结论 雷帕霉素新衍生物FIM-X7具有降低N2a-APP695细胞表达Aβ40和Aβ42的作用，且具有比雷帕霉素更低的细胞毒性和免疫抑制活性，因此可能在阿尔茨海默症的治疗上具有进一步研究的价值。     

淫羊藿苷调控mTOR/Akt/CREB通路对高糖诱导的足细胞自噬及凋亡的影响

目的 探讨淫羊藿苷对高糖诱导的足细胞自噬、凋亡及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)通路的影响。方法 将小鼠足细胞MPC5分为5组：正常对照组(5.5 mmol·L^-1葡萄糖)、高糖组(30 mmol·L^-1葡萄糖)、淫羊藿苷组(30 mmol·L^-1葡萄糖+5μmol·L^-1淫羊藿苷)、GDC-0349组(30 mmol·L^-1葡萄糖+50μmol·L^-1 GDC-0349)、淫羊藿苷+GDC-0349组(30 mmol·L^-1葡萄糖+5μmol·L^-1淫羊藿苷+50μmol·L^-1 GDC-0349)。培养48 h后，噻唑蓝法检测MPC5细胞活力；吖啶橙染色观察MPC5细胞自噬情况；流式细胞术检测MPC5细胞凋亡；蛋白印迹法检测MPC5细胞自噬[微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ、LC3Ⅰ、自噬相关蛋白(Beclin-1...     

磷脂酰肌醇-3磷酸激酶/AKT/雷帕霉素靶蛋白信号通路参与中枢神经损伤保护与修复的研究进展

中枢神经细胞对各种损伤刺激耐受差,损伤后神经修复困难.因此促进神经保护增强神经再生能力已成为神经治疗关键.磷脂酰肌醇-3磷酸激酶/AKT/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路是调节细胞周期的重要通路,在细胞增殖、生长、分化过程中起中心调控作用,在神经损伤过程中通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路可减少神经细胞死亡,促进神经修复.该文对PI3K/AKT/mTOR信号通路在中枢神经损伤保护作用、修复机制及可能风险作一综述,探讨将PI3K/AKT/mTOR信号通路作为靶点治疗中枢神经疾病.     

PI3K/mTOR信号通路及双重抑制剂NVP-BEZ235的开发

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路与肿瘤的发生发展密切相关.PI3K/mTOR双重抑制剂已成为抗肿瘤药物研发的热点之一.近年,NVP-BEZ235因其能有效并特异性地双重抑制PI3K/mTOR信号通路的异常活化而受到关注.本文综述PI3K/Akt/mTOR信号通路及NVP-BEZ235的开发.