冻存克隆化LAK细胞净化骨髓的应用基础研究

在白血病的大量放疗和化疗中进行自体骨髓移植时必须解决骨髓中瘤细胞的清除问题.LAK细胞,具有广谱杀瘤细胞作用,IL-2、LAK细胞用于白血病自体骨髓移植,可净化残留白血病细胞.白血病骨髓的净化需要大量的LAK细胞,还需要选择治疗时机,必须解决LAK细胞冷冻保存问题.本文介绍在不同冻存条件下对冻存克隆化LAK细胞活性的影响;电镜观察其超微结构变化;冻存克隆化LAK细胞清除骨髓中白血病细胞的效果及对骨髓造血功能的影响.     

41例自体造血干细胞移植治疗白血病及其他恶性肿瘤临床研究

本文报告自体造血干细胞移植41例，其中未净化自体骨髓移植(ABMT)8例，净化后自体骨髓移植(PABMT)15例，外周血干细胞移植(ABHSCT)18例。治疗白血病35例、淋巴瘤4例、骨髓瘤及神经母细胞瘤各1例。经过强烈地化疗及全身放疗后移植；ABMT、PABMT、ABHSCT三组移植，其骨髓造血功能恢复正常及GM-CFU恢复(中位数)时间分别为；60天、53天、29．5天和37天、44天、30．5天。     

41例自体造血干细胞移植治疗白血病及其他恶性肿瘤临床研究

本文报告自体造血干细胞移植41例,其中未净化自体骨髓移植(ABMT)8例,净化后自体骨髓移植(PABMT)15例,外周血干细胞移植(ABHSCT)18例。治疗白血病35例、淋巴瘤4例、骨髓瘤及神经母细胞瘤各1例。经过强烈地化疗及全身放疗后移植。ABMT、PABMT、ABHSCT三组移植,其骨髓造血功能恢复正常及GM—CFU恢复(中位数)时间分别为:60天、53天、29.5天和37天、44天、30.5天。全身感染合并征为:37.5%、     

自体造血干细胞移植治疗急性白血病50例临床研究

本文报告自体造血干细胞移植治疗急性白血病50例,其中,未净化自体骨髓移植(ABMT)10例,净化后自体骨髓移植(PABMT)22例,自体外周血干细胞移植(ASHSCT)18例.3年无病生存率,3组分别为75%、69.9%、72.7%.复发率分别为36.6%、27.2%、31.4%.确诊到缓解(CR)时间<2月、CR到移植时间>6月、预处理方案化疗放疗(TBI)及急性髓细胞白血病(AML)3年无病生存率较高,复发率较低.     

体外液体培养联合IL-2净化的自体骨髓移植治疗恶性血液病

目的 :提高自体骨髓移植疗效 ,减少移植后疾病的复发。方法 :应用液体体外培养联合白细胞介素 2( IL -2 )激活的骨髓净化骨髓细胞 ,进行了 10例恶性血液病的自体骨髓移植 ( ABMT)。结果 :净化后骨髓有核细胞和CFU -GM的回收率分别为 49.8%和 3 6.4%。移植后所有患者均顺利地重建了骨髓造血功能 ,7例患者的中位持续完全缓解 ( CCR)时间达 2 7.6个月 ,2例患者移植后 10个月死于非病意外 ,1例 CCR7个月后死于白血病复发。结论 :液体培养联合 IL -2激活骨髓体外净化进行骨髓移植疗效好 ,白血病复发率低 ,方法简便     

自体造血干细胞移植治疗白血病95例远期疗效及影响疗效因素分析

本文报告未净化自体骨髓移植(ABMT)17例,净化自体骨髓移植(PABMT)30例,自体外周血干细胞移植48例),男61例,女34例,中位年龄27岁(3.7～47岁),急性髓细胞性白血病(AML)58例,急性淋巴细胞性白血病(ALL)35例,慢性粒细胞白血病(CML)2例.移植时第1次缓解(CRl)72例,第2次缓解(CR2)22例,未缓解(NR)1冽,缓解(CR)到移植的时间中位数7个月(2～19月).骨髓净化方法:胎肝低分子抑物净化,长期体外液体培养净化及癌光啉加光照净化.移植前经强烈的化疗和全身放疗(TBI)后移植.ABMT组、PABMT组、APBHSCT组3年无病生存率(DFS)及复发率分别为64.8%,73.4%,70.5%和35.2% ,26.6%,29.5%.造     

白细胞介素2活化骨髓

近年来研究发现骨髓细胞在体外与白细胞介素2（IL-2)短期培养后，所产生的白介2活化骨髓(ABM)具有强的体内外抗肿瘤及抗病毒作用，对靶瘤细胞的杀伤效应明显高于LAK细胞或IL-2。采用ABM进行自身骨髓移植(ABMT）并联合IL-2输注治疗可诱发受者产生移植物抗肿瘤作用，且不影响骨髓造血功能的重建．ABM的发现使骨髓由被动的移植物转变为主动的抗瘤成份，从而为自身骨髓移植引入了移植物抗肿瘤作用．这一全新概念为临床骨髓移植减少复发率，进一步清除残留白血病细胞带来了新希望。     

103例造血干细胞移植治疗白血病及其他恶性肿瘤临床研究

本文报告造血干细胞移植治疗的白血病及其他恶性肿瘤103例．包括未净化自体骨髓移植(ABMT)12例，净化自体骨髓移植(PABMT)24例，异基因骨髓移植(ALLO-BMT)23例，自体外周血干细胞移植(ABH8CT)35例，胎肝造血干细胞移植(ELHSCT)9例。男66例，女37例年龄3．7-47岁。中位数26岁，     

白血病骨髓体外长期液相培养净化实验与临床

自体骨髓移植是白血病治疗的重要手段。完全缓解期白血病病人骨髓仍含有一定量的白血病细胞。为清除残留白血病细胞,人们通常采用一定的方法体外净化骨髓,这些方法包括:物理、药物、免疫等。骨髓长期液相培养可使白血病病人骨髓在体外得到不同程度净化,这种方法有选择性促进正常造血于细胞生长的优点,是近10年来自体骨髓移植中骨髓净化方面重要进展。本文就其研究概况及现状     

白血病细胞自分泌生长特性研究

骨髓净化是预防自身骨髓移植后白血病复发的有效手段之一。自身骨髓移植患者在移植前往往接受了多疗程化疗,缓解期体内残存的白血病细胞多具耐药性。因此选择新型的抗白血病药物作为体外净化剂,可能会收到较好的清除耐药白血病细胞的效果。本研究对4-去甲基柔红霉素(idarubicin,IDA)体外抗白血病细胞的作用及对正常造血祖细胞的作用进行了初步的实验研究。     

RON、Hepsin和C-Met在浸润性乳腺癌中的表达及其意义

目的探讨浸润性乳腺癌组织中RON和Hepsin、C—Met的免疫表达及其意义。方法采用免疫组化PV-6000法检测了87例浸润性乳腺癌组织中RON和Hepsin、C—Met基因的表达情况。结果Hepsin、C—Met、RON在87例浸润性乳腺癌组织中的阳性表达率分别为70．1％、64．4％、65．5％,三者的阳性表达两两呈正相关（P〈0．01）,同时与浸润性乳腺癌的病理学分级、淋巴结转移亦呈正相关性（P〈0．01）。结论Hepsin、C-Met、RON与浸润性乳腺癌的预后因素有相关性,联合检测可以更好地提示患者的预后。     

亚硒酸钠抗氧化作用与抑瘤效应的实验观察

人ｐ１６基因是最近发现的一种肿瘤抑制基因。ｐ１６蛋白作为一种细胞增殖的负调控因子，在恶性肿瘤发生发展中起重要作用。为了进一步探讨ｐ１６基因的抗肿瘤特性，我们通过运用分子克隆技术构建重组人ｐ１６基因表达载体（ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６），并通过电穿孔方法将ｐ１６基因导入到人肺腺癌ＮＣＩ－Ｈ４６０细胞中，经Ｃ４１８筛选获得可稳定表达ｐ１６的人肺腺癌细胞，观察ｐ１６基因对人肺腺癌细胞周期的影响和细胞增殖的作用     

基因突变与胰腺癌

胰腺癌的发病率在我国呈逐年上升趋势 ,由于其起病隐匿 ,恶性程度高 ,早期诊断困难 ,出现临床症状时多属晚期 ,因此患者的预后较差。近年来随着分子生物学技术的发展 ,对胰腺癌发生机制的研究已进入基因水平 ,研究表明胰腺癌的发生是多基因异常改变的结果。就 p16基因 ,p5 3基因 ,DPC4基因 ,Ras基因及MMR基因与胰腺癌的关系作一综述。     

肿瘤基因治疗阳离子载体应用中的问题与策略

采用阳离子载体将肿瘤治疗基因送入靶细胞中表达 ,须经历体内传递、穿过细胞膜、细胞内传递、细胞内表达等多个步骤。当前研究表明 ,阳离子载体在此过程中面临一系列独特的问题 ,对这些问题的研究与解决大大推动了对阳离子载体的认识与应用。     

鼻咽癌患者HER-2/neu基因扩增和表达及其临床意义

目的：研究鼻咽癌HER-2／neu基因扩增、表达及其临床意义。方法：采用原位荧光杂交、逆转录多聚链式反应和免疫组化技术检测鼻咽癌组织HER-2／neu基因扩增、表达。结果：HER-2／neu基因在鼻咽癌中无扩增，但有过表达，其原因是由于mRNA高表达所致；这种过表达与鼻咽癌预后之间未显示有相关性。结论：HER-2／neu基因在鼻咽癌无扩增，有过表达，这种过表达未显示预后意义。     

RFP标记的 YCD 基因在 HeLa 细胞中的表达及其介导的细胞毒性

背景与目的 :探讨红色荧光蛋白标记的酿酒酵母菌胞嘧啶脱氨酶(YCD)基因在人宫颈癌细胞(HeLa细胞)中的表达及其功能。材料与方法 :采用基因重组技术构建含有CMV启动子和RFP、YCD基因开放阅读框(ORF)的真核表达载体pIRES_YCD ,脂质体法转染HeLa细胞。荧光显微镜下观察转染细胞中红色荧光蛋白的表达 ,流式细胞术分析转染效率及荧光强度并筛选荧光阳性细胞 ,命名为HeLa_Y。以不同浓度的前药5_FC处理HeLa_Y细胞 ,MTT法检测细胞存活率。 结果 :荧光显微镜下可见红色荧光蛋白在HeLa_Y细胞中表达 ,流式细胞术成功筛选出HeLa_Y细胞。前药5_FC能明显杀伤HeLa_Y细胞 ,5_FC浓度与HeLa_Y之间存在对数曲线关系。结论 :RFP可作为报告基因快速筛选YCD表达载体转染的细胞 ,YCD/5_FC自杀基因系统可以进一步用于肿瘤的基因治疗研究     

肿瘤双自杀基因治疗系统pTRKH2-PsT/CD,pTRKH2-PsT/UPRT在厌氧婴儿双歧杆菌中的构建

Objective: We recombine the suicide gene CD, UPRT into plasmid pTRKH2 and clone the recombinant dual suicide gene therapy system into tumor-hypoxia-targeting vector Bifidobacterium infantis and characterize its function. Methods: CD gene, UPRT gene and lactic acid bacteria expression plasmid pTRKH2 were digested by restriction endonuclease BamH I and Sal I, and constructed recombinant plasmids pTRKH2/CD and pTRKH2/UPRT in E. coll. The recombinant plasmids were then transfected into Bifidobacterium Infantis by electroporation. Identification of pTRKH2/CD and pTRKH2/UPRT was processed by dual restriction endonuclease digesting and sequencing. RT-PCR and SDS-PAGE were used to examine the expression of CD and UPRT genes at RNA and protein levels. The killing effects on Melanoma B16-F10 cells by pTRKH2/CD and pTRKH2/UPRT suicide gene therapy system with 5-FC were examined by MTT assay. Results: The CD gene and UPRT gene was successfully recombined into lactic acid bacteria expression plasmid pTRKH2. After dual endonuclease digestion of plasmid purified from the positively transfected E. co/i, two fragments of 6.9 Kb and 1.3 Kb were found for CD gene and two fragments of 6.9 Kb and 620 bp were found for UPRT gene. The sequencing of CD gene and UPRT gene proved consistent sequences with Genebank published data. A fragment of 1.3 Kb for CD gene and fragment of 620 bp for UPRT gene was found in recombinant Bifidobac- terium by RT-PCR. A 52 KDa protein for CD gene was identified in whole-cell protein of recombinant Bifidobacterium and a 26 KDa protein for UPRT gene was identified in supernatant fluid of recombinant Bifidobacterium. The survival rate of tumor cells treated by extracts from culture of recombinant Bifidobacterium with 5-FC showed a strong killing effects of pTRKH2/CD and pTRKH2/UPRT dual suicide gene therapy system on Melanoma B16-F10 cells. Conclusion: CD gene and UPRT gene are suc- cessfully inserted into pTRKH2 and transfected into tumor-hypoxia-targeting vector Bifldobacterium Infantis. This dual suicide gene therapy system shows a high efficiency for tumor cells killing.     

肺癌患者FLK-1、LRP和MDR1的表达与临床研究

目的:探讨血管内皮生长因子受体 (Flk 1),肺耐药蛋白 (LRP)基因以及多药耐药基因 (MDR1)蛋白与肺癌患者临床及病理指标的关系。方法:用免疫组化技术(ABC法)对原发性肺癌组织中三种基因的表达进行检测。结果: 70例肺癌中,非小细胞肺癌MDR1阳性率 49. 2% (29 /59),明显高于小细胞肺癌 (SCLC) 18. 2% (2 /11)(P<0. 05);非小细胞肺癌LRP阳性率 69. 5% (41 /59),明显高于小细胞肺癌 27. 3% (3 /11) (P<0. 05)。腺癌中MDR1与LRP的表达明显高于鳞癌(P<0. 05)。LRP与Flk 1在NSCLCs中共同表达 49. 2% (29 /59),LRP的表达与肺癌的组织学分级相关,MDR1和LRP的表达与肺癌的组织学类型有关,Flk 1与TNM分期相关,均有统计学意义(P<0. 05)。Flk 1 LRP均阳性、FLK 1 LRP MDR1均阳性、中药治疗、复发与患者的生存率有关(P<0. 05)。结论:FLK 1、LRP和MDR1基因蛋白产物的检测对肺癌患者的诊治和预后评估有积极意义。     

探讨HBV X、TGF-alpha,c-myc及beta-catenin基因与高发区肝癌的相关性

目的　研究HBVX基因、TGF alhpa、c myc、beta catenin等癌变相关基因及 2 49密码子突变的p5 3蛋白在高发区肝细胞癌癌变发生及其恶性表型维持所发挥的作用。方法　以肝癌高发区启东的肝癌细胞株 770 1和 770 3标本作为研究对象 ,以PCR及DNA测序分析方法确定HBVX基因在细胞DNA水平的整合。以RT PCR及Western blot检测HBVX基因的转录与表达。用PCR RFLP方法确定 p5 3基因 2 49密码子的错义突变。应用免疫组织化学法分析TGF alhpa ,c myc ,beta catenin的表达。结果　 2株细胞在DNA水平都存在HBVX基因片断的整合 ,但未见完整的转录和蛋白水平表达。序列分析显示 2株细胞的HBVX基因的序列各有特异性 ,并存在 13 0、13 1密码子的热点突变。PCR RFLP分析说明 2个细胞株中p5 3基因 2 49密码子均属野生型。免疫组化显示 2株细胞中TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白均有显著的积累。 结论　本实验的结果显示HBVX基因对这 2株细胞恶性表型的维持并不存在必然的关联 ,而是 1种HBV感染的遗传标志。未见HBVX基因蛋白表达 ,可能由于X基因 3′端缺失变异所致。免疫组化的结果显示TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白的显著积累 ,说明多种癌基因的相互协同 ,可能与肝癌的发生、发展及恶性表型的维持相关联     

人白细胞介素2重组逆转录病毒载体的构建与表达

通过RT-PCR克隆到含有全部编码序列的人IL-2 cDNA,并经核苷酸测序加以证实。将其克隆至逆转录病毒载体pLXSN,构建成人IL-2的重组逆转录病毒表达载体pLXSN-hIL2,体外经CRIP细胞包装后病毒滴度达7.6×10~5CFU/ml。NIH3T3小鼠成纤维细胞感染hIL-2重组逆转录病毒后,分泌IL-2水平达118.2U/ml;PCR从其基因组DNA中扩增到NeoR基因片段,提示重组逆转录病毒载体己整合至宿主细胞的基因组DNA中。本研究为开展人IL-2基因治疗奠定了基础。