肿瘤基因工程抗体研究进展

综述单链抗体、抗体融合蛋白、抗独特型抗体、双特异性抗体的研究进展，显示它们在临床肿瘤治疗方面的良好应用前景。     

靶向杀伤高表达IL-2R恶性血液病细胞的新策略IL-2/IL-2系统介导重组IL-2-霉素融合蛋白的特异性杀伤

恶性血液病的靶向杀伤治疗已成为必然的发展趋势,利用细胞因子与其受体的特异性结合来导向传递重组细胞因子.毒素融合蛋白,以达到特异性杀伤高表达相应细胞因子受体恶性血液病细胞的新策略,标志着肿瘤导向杀伤研究的最新进展之一.它较以抗原一抗体为主体的第一代导向杀伤策略具有很多优势.鉴于恶性血液病细胞异常高地表达IL-2R这一事实,近年来研究者们提出了利用IL-2与其IL-2R的特异性结合来导向传递重组IL-2一毒素融合蛋白以达到特异性杀伤高表达IL-2R恶性血液病细胞的新策略.体外及动物实验的巨大成功极大地促进了重组细胞因子一毒素融合蛋白的临床应用.1991年FDA已获批准,多个临床试用项目,试用结果十分鼓舞人心.新近又发现,重组细胞因子一毒素融合蛋白能克服目前已知的各种耐药机理,如对同时表达多药耐药相关蛋白MDR表型、p53表达缺乏以及高表达bcl-2的各种放、化疗耐药或抗性的白血病细胞均产生高度特异性的杀伤.因此,从理论上讲,该新策略既能增强导向杀伤的特     

肿瘤基因工程抗体研究进展

综述单链抗体、抗体融合蛋白、抗独特型抗体、双特异性抗体的研究进展，显示它们在临床肿瘤治疗方面的良好应用前景。     

基因工程抗体在肿瘤诊治中的应用

基因工程抗体(GEA)发展十分迅速，利用其特异性的靶向作用，在肿瘤诊断、治疗及预后等方面已初步显示良好效果和广阔应用前景。随着研究的不断深入，基因工程抗体必将发挥更重要的作用。现综述基因工程抗体在肿瘤应用中的最新进展。     

单链抗体及其融合蛋白在肿瘤诊治中的应用

单链抗体由于分子量小,免疫原性低,组织穿透力强,特异性好等优点,与单克隆抗体相比,在肿瘤的诊断和治疗方面展示了更好的应用前景.全文对近年来单链抗体及其融合蛋白在肿瘤导向诊断和治疗,肿瘤基因治疗和肿瘤疫苗方面应用研究进展做一综述.     

ScFv及重组TNF-α双功能抗体融合蛋白的表达及其软件预测

目的：利用生物信息学网络资源分析融合蛋白的二级结构及其理化性质，以及探讨分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因的表达。方法：在构建融合蛋白之前，运用DNA分析软件（DNAssist）和蛋白质分析软件（ANTHEPROT V5）分析融合蛋白的氨基酸序列、二级结构及其理化性质。采用PCR方法将人工合成的抗体分泌信号肽序列加在抗肝癌ScFv基因5’端，其3’与人的肿瘤坏死因子TNF-α基因连接构成分泌型单链双功能抗体ScFv-TNF—α基因，将该基因克隆至逆转录病毒表达载体PLxSN，用NIH3T3测定病毒滴度，将重组病毒感染人肝癌细胞命名为HCC／ScFv-TNF-α，以PCR，RT—PCR以及Western blotting对ScFv—TNF-α基因修饰的HCC9204细胞进行鉴定。结果：运用DNAssist核酸序列分析软件分析ScFv-TNF-αDNA序列翻译并获得了氨基酸序列，运用ANTHEPROT V5蛋白质分析软件分析融合蛋白的二级结构及其理化性质。经酶切及PCR分析鉴定，成功地构建了融合基因表达载体pL（ScFv—TNF-α ）SN，并获得高滴度产毒细胞株，以及Western blotting分析证明ScFv—TNF-α基因融合蛋白的表达。结论：利用生物信息学网络资源进行分析预测融合蛋白的性质，为进一步探讨单链双功能抗体基因融合蛋白提供依据。     

基因工程抗体及免疫毒素抗肿瘤研究进展

基因工程免疫毒素由于具有高特异性、高细胞毒活性 ,是肿瘤治疗的方法之一。现就基因工程抗体及免疫毒素的改造、构建及其抗肿瘤研究进展作简要阐述     

基因工程抗体及免疫毒素抗肿瘤研究进展

基因工程免疫毒素由于具有高特异性、高细胞毒活性，是肿瘤治疗的方法之一。现就基因工程抗体及免疫毒素的改造、构建及其抗肿瘤研究进展作简要阐述。     

基因工程抗体在肿瘤诊治中的应用

基因工程抗体(GEA)发展十分迅速,利用其特异性的靶向作用,在肿瘤诊断、治疗及预后等方面已初步显示良好效果和广阔应用前景.随着研究的不断深入,基因工程抗体必将发挥更重要的作用.现综述基因工程抗体在肿瘤应用中的最新进展.     

IL-2/IL-2R系统介导靶向杀伤高表达IL-2R恶性血液病的新策略

鉴于恶性血液病细胞异常高地表达IL-2R这一事实,近年来研究者们提出了利用IL-2R与IL-2R的特异性结合来导向传递重组IL-2毒素融合蛋白以达到特异性杀伤高表达IL-2R恶性血液病细胞的新策略,它标志着肿瘤导向杀伤研究的最新进展之一.本文对近年来国际上利用IL-2/IL-2R系统介导重组IL-2-毒素融合蛋白选择性杀伤恶性血液病细胞以及对正常造血影响的某些进展加以概述.     

亲肝癌抗体的临床规律和双功能与基因工程抗体的研究

肝癌导向研究“六五”攻关主要筛选载体，“七五”选较好者作临床试验。上海医科大学肝癌研究所72例不能切除的肝癌缩小后切除的5年生存率达62．l％，其中使用导向综合治疗者占45．8％。75例不能切除肝癌用导向综合治疗的3年生存率高于对照组（35．2％对5．l％）。为此“八五”     

抗肿瘤基因工程单链抗体及其免疫霉素的研究

抗体V_H基因和V_L基因经寡核苷酸接头连接成ScFv基因,转入原核或真核表达系统中表达ScFv.ScFv具有亲本抗体相同的抗原结合特性和能力,且抗原性大大减弱.ScFv分子量小,易穿入肿瘤和实体组织内部, 也易进入病毒峡谷.ScFv与药物、毒素、同位素或酶等偶联构成的导向治疗制剂在血中清除迅速,不残留于正常组织,尤其不在肾脏中积聚,因而毒副作用很小.PCR技术的应用,使制备单链兔疫毒素在二周内即可实现,大大缩短了导向药物的制备时间.改善培养条件,E.coli能表达并装配和折叠成具有生物活性的双价ScFv及其免疫毒素.     

ScFv及重组TNF-α双功能抗体融合蛋白的表达及其软件预测

目的:利用生物信息学网络资源分析融合蛋白的二级结构及其理化性质,以及探讨分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因的表达。方法:在构建融合蛋白之前,运用DNA分析软件(DNAssist)和蛋白质分析软件(ANTHEPROTV5)分析融合蛋白的氨基酸序列、二级结构及其理化性质。采用PCR方法将人工合成的抗体分泌信号肽序列加在抗肝癌ScFv基因5′端,其3′与人的肿瘤坏死因子TNFα基因连接构成分泌型单链双功能抗体ScFvTNFα基因,将该基因克隆至逆转录病毒表达载体PLxSN,用NIH3T3测定病毒滴度,将重组病毒感染人肝癌细胞命名为HCC/ScFvTNFα,以PCR,RTPCR以及Westernblotting对ScFvTNFα基因修饰的HCC9204细胞进行鉴定。结果:运用DNAssist核酸序列分析软件分析ScFvTNFαDNA序列翻译并获得了氨基酸序列,运用ANTHEPROTV5蛋白质分析软件分析融合蛋白的二级结构及其理化性质。经酶切及PCR分析鉴定,成功地构建了融合基因表达载体pL(ScFvTNFα)SN,并获得高滴度产毒细胞株,以及Westernblotting分析证明ScFvTNFα基因融合蛋白的表达。结论:利用生物信息学网络资源进行分析预测融合蛋白的性质,为进一步探讨单链双功能抗体基因融合蛋白提供依据。     

mB7-1-GPI融合蛋白对小鼠肺癌的治疗作用研究

目的 将mB7-1-GPI融合蛋白锚定于小鼠肺癌细胞膜上，制备肿瘤细胞疫苗，研究该瘤苗的抗肿瘤作用。方法将mB7-1-GPI融合蛋白锚定于小鼠肺癌细胞膜上，制备肿瘤细胞疫苗。采用流式细胞术检测该蛋白的细胞膜锚定作用。建立C57BL小鼠的肺癌模型，观察用mB7-1-GPI融合蛋白制备的肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用。结果mB7-1-GPI融合蛋白能够锚定在小鼠肺癌细胞膜上，能有效刺激小鼠脾细胞增殖和分泌IL-2和IFN-γ。融合蛋白制备的肿瘤疫苗能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长，并延长其生存期。结论mB7-1-GPI融合蛋白制备的肿瘤疫苗具有较强的抗肿瘤作用，有可能作为一种有效的新型疫苗用于肿瘤的治疗和预防。     

mB7-1-GPI融合蛋白对小鼠大肠癌的治疗作用研究

目的将mB7-1-GPI融合蛋白锚定于小鼠大肠癌细胞膜上,制备肿瘤细胞疫苗,研究该瘤苗的抗肿瘤作用。方法将mB7-1-GPI融合蛋白锚定于小鼠大肠癌细胞膜上,制备肿瘤细胞疫苗。采用流式细胞术检测该蛋白的细胞膜锚定作用。建立C57BL／6小鼠的大肠癌模型,观察用mB7-1-GPI融合蛋白制备的肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用。结果mB7-1-GPI融合蛋白能够锚定在小鼠大肠癌细胞膜上,能有效刺激小鼠脾细胞增殖和分泌IL-2和IFN-γ融合蛋白制备的肿瘤疫苗能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,并延长其生存期。结论mB7-1-GPI融合蛋白制备的肿瘤疫苗具有较强的抗肿瘤作用,有可能作为一种有效的新型疫苗用于肿瘤的治疗和预防。     

热休克蛋白与肿瘤免疫治疗

热休克蛋白（HSP）与肿瘤免疫的关系是近年来的研究热点之一，HSP肽复合物携带有多个T细胞表位，通过与APC细胞上的受体结合而内化，经MHCⅠ类途径诱导特异性抗肿瘤免疫应答。HSP与抗原的融合蛋白也能激活性抗特异性的CTL反应，HSP肽复合物和HSP融合蛋白可用于肿瘤的特异性免疫治疗，临床应用前景广阔。     

抗体细胞因子融合蛋白治疗肿瘤的研究进展

抗体细胞因子融合蛋白保持了抗体和细胞因子两者的功能，能在肿瘤微环境浓集并直接增大抗体的抗肿瘤效应和／或宿主的抗肿瘤免疫。综述了IgG融合IL—2、GM—CSF和IL—12融合蛋白的结构、生物学特性和用于治疗人类肿瘤的潜能。     

基因工程抗体的研究

本文综述了本实验室近年来在基因工程抗体方面所做的工作：①从杂交瘤细胞基因组中筛选和鉴定出抗乙型脑炎病毒单克隆抗体的重链、轻链可变区基因，构建成人-鼠嵌舍基因并在骨髓瘤细胞中表达出抗乙型脑炎病毒的人-鼠嵌合抗体；②根据文献中抗CD3单抗的序列，进行了分子设计，设计出改形抗体的分子序列．用合成和PCR补齐的方法构建了改形的单域抗体（Vn)表达载体，并在大肠杆菌中表达；④构建了外分泌型-附着型的表达单链抗体的表达载体；④克隆和测序了抗人肺腺癌．膀胱癌、CD3的单抗重,轻链可变区基因，并正在构建鼠的抗体库。     

抗体细胞因子融合蛋白治疗肿瘤的研究进展

抗体细胞因子融合蛋白保持了抗体和细胞因子两者的功能 ,能在肿瘤微环境浓集并直接增大抗体的抗肿瘤效应和 或宿主的抗肿瘤免疫。综述了IgG融合IL 2、GM CSF和IL 12融合蛋白的结构、生物学特性和用于治疗人类肿瘤的潜能     

IL-3-LDM融合蛋白对CD123+白血病细胞的靶向杀伤作用

目的：构建以IL-3为靶向、力达霉素（lidamycin,LDM）为弹头的融合蛋白IL-3-LDM,观察其对多种CD123+白血病细胞的靶向杀伤作用。 方法: 原核表达IL-3-LDP（interleukin 3-lidamycin）融合蛋白,组装活性烯二炔（active enediyne,AE）发色团得到IL-3-LDM。流式细胞术检测不同白血病细胞系（KG1-a、TF-1、M07e、HL-60、K562、Raji）表面CD123分子的表达,并检测融合蛋白IL-3-LDM与各白血病细胞的结合能力;CCK-8检测IL-3-LDM融合蛋白对不同CD123阳性率的白血病细胞的杀伤能力。 结果: 组装活性发色团得到的IL-3-LDM蛋白纯度可达90%以上。急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）KG-1a细胞表面CD123阳性率最高（88.9%）,其次为MO7e和TF-1细胞（＞75%）,再次为HL-60细胞（7.8%）,而K562、Raji细胞CD123表达呈阴性。体外IL-3-LDM融合蛋白对CD123+白血病细胞(KG-1a、MO7e、TF-1和HL-60细胞）的结合能力和杀伤效率与细胞表面CD123的阳性率成正比,对于CD123表达率最高的KG-1a细胞,LDM的杀伤强度是多柔比星（adriamycin, ADR)的1 415.8倍,而IL-3-LDM 的杀伤强度又是LDM的9.6倍。 结论: IL-3-LDM融合蛋白可以有效携带细胞毒药物LDM 并高效靶向杀伤CD123+白血病细胞。