mB7-1-GPI融合蛋白对小鼠肺癌的治疗作用研究

目的 将mB7-1-GPI融合蛋白锚定于小鼠肺癌细胞膜上，制备肿瘤细胞疫苗，研究该瘤苗的抗肿瘤作用。方法将mB7-1-GPI融合蛋白锚定于小鼠肺癌细胞膜上，制备肿瘤细胞疫苗。采用流式细胞术检测该蛋白的细胞膜锚定作用。建立C57BL小鼠的肺癌模型，观察用mB7-1-GPI融合蛋白制备的肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用。结果mB7-1-GPI融合蛋白能够锚定在小鼠肺癌细胞膜上，能有效刺激小鼠脾细胞增殖和分泌IL-2和IFN-γ。融合蛋白制备的肿瘤疫苗能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长，并延长其生存期。结论mB7-1-GPI融合蛋白制备的肿瘤疫苗具有较强的抗肿瘤作用，有可能作为一种有效的新型疫苗用于肿瘤的治疗和预防。     

抗体细胞因子融合蛋白治疗肿瘤的研究进展

抗体细胞因子融合蛋白保持了抗体和细胞因子两者的功能，能在肿瘤微环境浓集并直接增大抗体的抗肿瘤效应和／或宿主的抗肿瘤免疫。综述了IgG融合IL—2、GM—CSF和IL—12融合蛋白的结构、生物学特性和用于治疗人类肿瘤的潜能。     

mB7-1-GPI融合蛋白对小鼠大肠癌的治疗作用研究

目的将mB7-1-GPI融合蛋白锚定于小鼠大肠癌细胞膜上,制备肿瘤细胞疫苗,研究该瘤苗的抗肿瘤作用。方法将mB7-1-GPI融合蛋白锚定于小鼠大肠癌细胞膜上,制备肿瘤细胞疫苗。采用流式细胞术检测该蛋白的细胞膜锚定作用。建立C57BL／6小鼠的大肠癌模型,观察用mB7-1-GPI融合蛋白制备的肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用。结果mB7-1-GPI融合蛋白能够锚定在小鼠大肠癌细胞膜上,能有效刺激小鼠脾细胞增殖和分泌IL-2和IFN-γ融合蛋白制备的肿瘤疫苗能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,并延长其生存期。结论mB7-1-GPI融合蛋白制备的肿瘤疫苗具有较强的抗肿瘤作用,有可能作为一种有效的新型疫苗用于肿瘤的治疗和预防。     

抗体细胞因子融合蛋白治疗肿瘤的研究进展

抗体细胞因子融合蛋白保持了抗体和细胞因子两者的功能 ,能在肿瘤微环境浓集并直接增大抗体的抗肿瘤效应和 或宿主的抗肿瘤免疫。综述了IgG融合IL 2、GM CSF和IL 12融合蛋白的结构、生物学特性和用于治疗人类肿瘤的潜能     

IL-2和IL-12基因联合治疗小鼠头颈鳞癌的实验研究

目的观察白细胞介素-2(IL-2)基因与白细胞介素-12(IL-12)基因联合治疗小鼠头颈鳞癌的疗效. 方法建立小鼠头颈鳞癌动物模型,在荷瘤部位将脂质体包裹的IL-2基因和IL-12基因直接注入肿瘤中,观察肿瘤大小变化,并检测此两种基因在肿瘤细胞中的蛋白表达情况、小鼠脾脏自然杀伤细胞(NK)和细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性. 结果 IL-2基因和IL-12基因联合治疗组,肿瘤生长明显受抑制,疗效显著优于单独治疗组和对照组(P<0.01).在注射有IL-2、IL-12基因的肿瘤组织中,其相对应的IL-2、IL- 12蛋白水平明显升高,小鼠脾细胞NK活性和CTL杀伤活性增强. 结论 IL-2、IL-12基因治疗可抑制小鼠头颈鳞癌生长,提高机体的抗肿瘤免疫应答.二者联合应用,可产生协同效应并加强其抗肿瘤效果.     

GM-CSF和多种细胞因子基因转导系统及其抗肿瘤免疫效应的研究

为了增强免疫基因治疗瘤菌诱导机体抗肿瘤系统免疫效应,我们应用逆病毒中介基因转移技术,将IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IFN-α、B7-1、TNF-α、GM-CSF等多种细胞因子基因导入肿瘤细胞,证实了这些基因修饰的肿瘤细胞.由于多种细胞因子基因的导入,诱导宿主抗肿瘤系统免疫能力明显增强.在此基础上,我们为了开发增强宿主免疫的肿瘤基因治疗新方案,构建了可以表达双价细胞因子GM-CSF、TNF-α、IL-4的逆病毒载体的基因修饰瘤苗.通过接种放射线灭活的分泌GM-CSF和IL-4细胞因子的肿瘤细胞即细胞因子肿瘤疫苗,来诱导有效地抗肿瘤系统免疫功能.应用构建的双价逆病毒载体和逆病毒中介基因转移技术,对肺癌、脑肿瘤小鼠模型进行了双价细胞因子基因瘤苗的抗肿瘤免疫增强效果和     

人白介素24单克隆抗体的制备与鉴定

目的：制备抗白细胞介素24（Interleukin 24,IL-24）的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法：应用分子生物学技术,构建含人IL-24编码序列的原核表达载体,表达并纯化了人IL-24融合蛋白。用纯化人IL-24融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,有限稀释法进行亚克隆,采用免疫印迹及免疫组化染色对抗体的特异性进行了鉴定。结果：获得3株能稳定分泌抗IL-24单抗的杂交瘤细胞,分别命名为1G2,3F4,4A6。通过免疫印迹及免疫组化染色检测显示,这3株单抗均能够与IL-24特异性结合。结论：成功制备抗IL-24单克隆抗体,为进一步探索IL-24在抗肿瘤中的作用机制奠定了基础。     

人白介素24单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗白细胞介素24(Interleukin 24,IL-24)的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法:应用分子生物学技术,构建含人IL-24编码序列的原核表达载体,表达并纯化了人IL-24融合蛋白。用纯化人IL-24融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,有限稀释法进行亚克隆,采用免疫印迹及免疫组化染色对抗体的特异性进行了鉴定。结果:获得3株能稳定分泌抗IL-24单抗的杂交瘤细胞,分别命名为1G2,3F4,4A6。通过免疫印迹及免疫组化染色检测显示,这3株单抗均能够与IL-24特异性结合。结论:成功制备抗IL-24单克隆抗体,为进一步探索IL-24在抗肿瘤中的作用机制奠定了基础。     

SA-IL-7融合蛋白的制备及其膀胱内灌注对小鼠表浅性膀胱癌的治疗效应

目的：制备链亲和素标记的白介素7（streptavidin-tagged interleukin-7, SA-IL-7）融合蛋白,评价其对小鼠表浅性膀胱癌治疗的效果。方法：构建pET24a-SA-IL-7重组质粒,制备SA-IL-7融合蛋白。流式细胞术检测SA-IL-7融合蛋白与生物素化膀胱癌细胞MB49的结合,胸腺细胞增殖法检测SA-IL-7融合蛋白促进胸腺细胞增殖的生物学活性。应用小鼠表浅性膀胱癌模型评价膀胱内灌注SA-IL-7的治疗效果,观察小鼠生存期,免疫组化法检测各组小鼠肿瘤浸润CD8+T细胞。结果：成功制备的SA-IL-7融合蛋白可锚定于生物素化的MB49细胞表面,结合率达（96.6±1.3）%;同时能够促进胸腺细胞的增殖。SA-IL-7融合蛋白能够锚定于小鼠生物素化的膀胱黏膜表面7 d以上,而未生物素化的膀胱黏膜在始终未检测到IL-7的存在。在小鼠表浅型膀胱癌模型中,MB49细胞接种后的第80天,IL-7灌注治疗组90%小鼠死亡,而SA-IL-7组60%小鼠存活且未出现肿瘤（P<0.05）;且SA-IL-7灌注治疗组小鼠肿瘤组织中浸润CD8+T细胞明显增多(P<0.01)。SA-IL-7治愈的15只表浅型膀胱癌模型小鼠中,11只能够抵抗膀胱内MB49细胞的第二次接种,而对照组15只小鼠仅1只幸存（P<0.01）。结论：SA-IL-7融合蛋白膀胱内灌注能够产生抗肿瘤免疫应答和明显的治疗效果,有可能成为免疫治疗浅表性膀胱癌的新方法。     

热休克蛋白与肿瘤免疫治疗

热休克蛋白（HSP）与肿瘤免疫的关系是近年来的研究热点之一，HSP肽复合物携带有多个T细胞表位，通过与APC细胞上的受体结合而内化，经MHCⅠ类途径诱导特异性抗肿瘤免疫应答。HSP与抗原的融合蛋白也能激活性抗特异性的CTL反应，HSP肽复合物和HSP融合蛋白可用于肿瘤的特异性免疫治疗，临床应用前景广阔。     

白细胞介素-12临床应用研究进展

白细胞介素-12（IL-12）最初称作自然杀伤细胞刺激因子（NKSF）或细胞毒性淋巴细胞成熟因子（CLMF）,是一种异二聚体细胞因子。直接使用重组蛋白IL-12或转基因载体都有显著的抗肿瘤作用,它通过诱发NK,NKT和T细胞增殖活化而介导主动和被动免疫保护反应。除此之外,通过趋化因子IP-10诱生IFN-γ阻止肿瘤血管发生。在动物肿瘤模型中,IL-12对移植瘤、化学诱变瘤及自发肿瘤均有明显治疗作用。IL-12可以刺激抗原特异性免疫反应而促进Th1和CTL的消瘤作用。大量的临床治疗肿瘤试验表明,IL-12在抗肿瘤方面效果明显。治疗中出现的不良反应应引起重视,需要制定合理的治疗方案以降低毒副反应确保临床效果。     

恶性肿瘤的基因治疗

白细胞介素2(IL-2)在体内能激活多种抗肿瘤免疫细胞。但生理条件下体内IL-2浓度极低,大量输注外源性IL-2除了费用昂贵外,还会导致严重的毒副作用。为了探讨IL-2用量少而有效的抗瘤方法,本文对19例晚期肿瘤患者的原位瘤或转移瘤瘤体IL-2局部治疗进行了临床观察。同时以自体肿瘤细胞为靶细胞/自体肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)为效应细胞,测定了IL-2诱导前后的细胞毒活性,比较观察了外周血PBL与肿瘤局部TIL的抗肿瘤能力,以探讨肿瘤局部的免疫状况,为IL-2瘤体注射提供实验依据。     

MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白的制备及其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用

目的：构建MDA-7/IL-24-HT7原核及真核表达质粒,制备MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白,研究该融合蛋白在肿瘤细胞内的定位及其对肿瘤细胞致凋亡作用。方法：PCR扩增MDA-7/IL-24基因,插入含有HaloTag (HT7)标签的载体中,构建MDA-7/IL-24-HT7原核及真核表达质粒;MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白经IPTG诱导表达后纯化。利用带有荧光标记的HT7配基观察MDA-7/IL-24-HT7在肿瘤细胞内的定位。MTT法及AnnexinV-PI染色法检测MDA-7/IL-24-HT7对肿瘤细胞生长和凋亡的影响。结果：成功构建了表达MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白的原核及真核表达质粒,MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白主要存在于E.coli BL21的包涵体内。MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白定位于肿瘤细胞的内质网上。MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白可抑制肿瘤细胞的生长,1 mg/ml MDA-7/IL-24-HT7 融合蛋白作用大肠癌HCT116细胞、肝癌SMMC7721细胞96 h后,细胞凋亡率分别为（34.7±1.3）% 和（22.1±0.9）%,显著高于未处理的肿瘤细胞（P<0.01）。结论：带有HaloTag标签的MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白可抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡。     

抗肿瘤基因治疗的目的基因选择

肿瘤的分子生物学及基因治疗技术的发展为从基因水平上寻找抗肿瘤治疗新途径提供了新的策略。本文综述了抗肿瘤基因治疗中几种常用的目的基因选择，如抗癌基因表达的反义基因、抑制基因、病毒基因、核酶的基因以及淋巴因子的基因等。通过基因治疗技术将这些目的基因导入到肿瘤细胞或正常细胞中，直接或间接抑制肿瘤的生长，使肿瘤遗传表型发生变化，对抗肿瘤化疗更为敏感，或激发抗肿瘤免疫等，以达到抗肿瘤基因治疗之目的。     

MIP-2γ/GM-CSF融合蛋白的构建、表达及其双重生物学功能的初步研究

目的：利用基因工程技术制备具有双重生物学活性的MIP2γ/GMCSF融合蛋白。方法：通过引物设计和分级克隆的策略构建了MIP2γ/GMCSF融合基因真核表达载体，MIP2γ与GMCSF由（Gly4Ser）3相连；瞬时转染293T细胞后收集含融合蛋白的细胞培养上清；研究了该融合蛋白在体外的促造血细胞增殖活性和对免疫细胞的趋化活性。结果： MIP2γ/GMCSF融合基因载体构建正确；融合蛋白分子量约为24.9 kD；初步生物学功能研究表明，融合蛋白能有效促进TF1细胞增殖，比活性约为2.2×107IU/mg,并能显著刺激骨髓细胞的集落形成；融合蛋白能有效趋化未成熟树突状细胞和CD3+T细胞。结论： MIP2γ/GMCSF融合蛋白具有促进造血和趋化免疫细胞的双重活性，有望成为在造血调控和抗肿瘤免疫中具有良好开发应用前景的新型细胞因子。     

HER2为靶点的抗肿瘤治疗

在人类多种肿瘤中发现了HER2基因扩增或过表达现象,并且与肿瘤的发生、发展及恶性生物学行为密切相关。包括单克隆抗体、酪氨酸激酶抑制剂、融合蛋白、瘤苗在内,以HER2为靶点的抗肿瘤治疗研究成为热点,并显示出广阔的应用前景。     

靶向杀伤高表达IL-2R恶性血液病细胞的新策略IL-2/IL-2系统介导重组IL-2-霉素融合蛋白的特异性杀伤

恶性血液病的靶向杀伤治疗已成为必然的发展趋势,利用细胞因子与其受体的特异性结合来导向传递重组细胞因子.毒素融合蛋白,以达到特异性杀伤高表达相应细胞因子受体恶性血液病细胞的新策略,标志着肿瘤导向杀伤研究的最新进展之一.它较以抗原一抗体为主体的第一代导向杀伤策略具有很多优势.鉴于恶性血液病细胞异常高地表达IL-2R这一事实,近年来研究者们提出了利用IL-2与其IL-2R的特异性结合来导向传递重组IL-2一毒素融合蛋白以达到特异性杀伤高表达IL-2R恶性血液病细胞的新策略.体外及动物实验的巨大成功极大地促进了重组细胞因子一毒素融合蛋白的临床应用.1991年FDA已获批准,多个临床试用项目,试用结果十分鼓舞人心.新近又发现,重组细胞因子一毒素融合蛋白能克服目前已知的各种耐药机理,如对同时表达多药耐药相关蛋白MDR表型、p53表达缺乏以及高表达bcl-2的各种放、化疗耐药或抗性的白血病细胞均产生高度特异性的杀伤.因此,从理论上讲,该新策略既能增强导向杀伤的特     

HER2为靶点的抗肿瘤治疗

在人类多种肿瘤中发现了HER2基因扩增或过表达现象,并且与肿瘤的发生、发展及恶性生物学行为密切相关。包括单克隆抗体、酪氨酸激酶抑制剂、融合蛋白、瘤苗在内,以HER2为靶点的抗肿瘤治疗研究成为热点,并显示出广阔的应用前景。     

IL-2/IL-2R系统介导靶向杀伤高表达IL-2R恶性血液病的新策略

鉴于恶性血液病细胞异常高地表达IL-2R这一事实,近年来研究者们提出了利用IL-2R与IL-2R的特异性结合来导向传递重组IL-2毒素融合蛋白以达到特异性杀伤高表达IL-2R恶性血液病细胞的新策略,它标志着肿瘤导向杀伤研究的最新进展之一.本文对近年来国际上利用IL-2/IL-2R系统介导重组IL-2-毒素融合蛋白选择性杀伤恶性血液病细胞以及对正常造血影响的某些进展加以概述.     

过继回输腺病毒介导的白细胞介素10基因转染CTL对机体抗肿瘤免疫功能的增强效应

本研究探讨了白细胞介紊10(IL-10)对小鼠体内抗肿瘤免疫功能的影响。鉴于C26结肠癌细胞转染了IL-10基因后在体内的致瘤性明显下降，本研究构建了一株对C26结肠癌细胞具有杀伤括性的CD8^ CTL并观察了IL-10基因转染的该细胞株对肿瘤的治疗作用。携带IL-10基因的重组腺病毒能有效介导小鼠琳巴细胞的基因转染并使之分泌较高水平的IL-10。IL-10基因转染的CTL过继回输荷瘤小鼠体内能明显增强荷瘤小鼠的体内抗肿瘤免疫功能，使实验性肺转移小鼠肺部转移结节数明显减少．这表明，IL-10对于过继回输的肿瘤特异性CTL的免疫功能具有明显的增强作用。