G-CSP基因治疗对大剂量化疗后结肠癌小鼠中性粒细胞数量和功能的影响

中性粒细胞作为一种重要效应细胞在机体抗肿瘤过程中发挥重要的作用。为了探讨G-CSF基因治疗及大剂量化疗后对荷瘤小鼠中性粒细胞的影响以及G-CSF基因治疗后中性粒细胞在抗肿瘤中所起的作用,我们对G-CSF基因治疗后荷瘤小鼠中性粒细胞的数量和功能进行了研究。结果发现,G-CSF基因治疗与重组G-CSF(rhG-CSF)注射疗法相比,能更明显地提高结肠癌小鼠中性粒细胞的数量、中性粒细胞的吞噬功能、杀伤C-26细胞的活性以及分泌IL-1、TNF、NO水平。对大剂量化疗后的结肠癌小鼠,仍能明显提高中性粒细胞数量、吞噬功能、杀伤C-26结肠癌细胞的活性以及分泌IL-1、TNF、NO水平。表明G-CSF基因治疗比rhG-CSF注射疗法更有效地纠正并提高由于大剂量化疗后引起的外周血中性粒细胞的降低,增强中性粒细胞的杀伤活性,促进中性粒细胞分泌IL-1等细胞因子,发挥直接或间接的抗肿瘤作用。     

G-CSF基因治疗及配合大剂量化疗对结肠癌小鼠的治疗作用

粒细胞集落刺激因子(G-CSF)具有明显的促进粒系造血祖细胞分化成熟、有效地提高外周血白细胞数量的作用;体内单独应用还具有抑制肿瘤的生长、抗肿瘤转移的作用。为了探讨G-CSF基因治疗及其配合大剂量化疗后的体内抗肿瘤效果,我们以C-26结肠癌小鼠为模型,研究腹腔内移植成纤维细胞介导的G-CSF基因治疗,rhG-CSF直接注射治疗,以及分别配合化疗后对肿瘤的治疗作用。结果发现,rhG-CSF直接注射疗法可明显抑制早期结肠癌小鼠肿瘤的生长(P<0.01),明显延长早期荷瘤小鼠的存活期;G-CSF基因治疗可明显抑制早期、中期结肠癌小鼠肿瘤生长(P<0.01),明显延长早期、中期结肠癌小鼠的存活期(P<0.01)。配合大剂量化疗后,rhG-CSF注射疗法及G-CSF基因疗法可更明显地抑制结肠癌小鼠肿瘤的生长,更明显延长结肠癌小鼠的存活期。结果表明,G-CSF基因疗法可有效地延长结肠癌小鼠的存活期,配合大剂量化疗能更有效地发挥抗肿瘤作用,提高结肠癌小鼠的存活期;同时表明,G-CSF基因治疗具有比应用rhG-CSF更显著的体内抑制肿瘤的效果。     

单克隆抗体MGb2和LAK细胞的协同抗胃癌作用

本研究探讨了成纤维细胞介导的G-CSF基因疗法联合应用IL-2基因疗法及时对小鼠I期肾癌的治疗作用。经NIH3T3-IL-2基困疗法．NIH3T3-G-CSF基因疗法单独治疗后的荷瘤小鼠存话期明显延长，而经以上两者联合治疗后的荷癌小鼠存活期的延长更为明显，且有75％荷瘤小鼠长期存活。对经G-CSF基因疗法及IL-2基因疗法联合治疗后的荷瘤小鼠体内抗肿瘤免疫功能的检测表明，经治疗后第14天，荷瘤小鼠睥脏明显增大，睥脏淋巴细胞数量明显增多；肿瘤局部的常规病理检查可见数量较多的嗜酸性粒细胞浸润。荷瘤小鼠睥细胞NK活性、经诱导后的LAK话性及CTL，杀伤活性均明显升高，小鼠腹腔巨噬细胞杀伤活性在NIH3T3-IL-2基因疗法治疗组升高．而在NIH3T3-G-CSF基因疗法组未见明显升高。以上结果表明．联合应用成纤维细胞介导的G-CSF基因疗法与IL-2基因疗法可因对小鼠体内抗肿瘤免疫功能的联合增强作用而取得更佳的抗肿瘤效果。     

联合应用成纤维细胞介导的G-CSF基因疗法及IL-2基因疗法对肿瘤的治疗作用

本实验观察了成纤维细胞介导的G-CSF基因疗法对大剂量化疗后造血功能损伤小鼠的恢复作用。结果发现:接受G-CSF基因治疗的实验小鼠外周血白细胞尤其是中性粒细胞降低程度明显减弱,恢复速度明显加快;并可明显促进血小板的恢复,但作用较缓;其脾脏和骨髓CFU-GM、CFU-MK、CFU-S水平显著地高于对照组,表明成纤维细胞介导的G-CSF基因疗法可显著降低大剂量化疗后造血损伤程度,并明显加速受损的造血功能的恢复。     

PEG-rhG-CSF预防结肠癌双周剂量密集方案辅助化疗后中性粒细胞减少的临床疗效观察

目的:观察聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子（polyethylene glycol recombinant human granulocyte colony stimulating factor，PEG-rhG-CSF）预防结肠癌双周剂量密集方案（FOLFOX6）辅助化疗后中性粒细胞减少的疗效和安全性。方法:收集中国人民解放军北部战区总医院2016年12月至2017年9月间52例接受剂量密集方案辅助化疗的结肠癌患者，治疗组20例化疗后24小时皮下注射6 mg PEG-rhG-CSF，对照组32例化疗后未使PEG-rhG-CSF，患者出院后根据验血结果由经治医师决定是否加用重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）。主要观察患者再次应用rhG-CSF的频次、患者Ⅲ-Ⅳ 度中性粒细胞减少的发生率、患者粒缺性发热的发生率、因粒细胞减少而进行减量或延迟治疗的发生率以及患者生活质量改善情况（C-30量表）。结果:治疗组患者无需再次注射rhG-CSF，而对照组患者26例需加用rhG-CSF，并且对照组8例发生Ⅲ-Ⅳ度中性粒细胞减少、2例发生粒缺性发热、4例和7例分别因粒细胞减少而减量和延迟治疗。治疗组患者生理状况、社会/家庭状况和总评分显著高于对照组患者。两组患者不良反应发生率相当，无统计学差异。结论:应用PEG-rhG-CSF可有效预防结肠癌剂量密集方案辅助化疗后Ⅲ-Ⅳ度中性粒细胞减少的发生，减少因上述不良反应而延迟化疗的发生，化疗间歇期患者无需再次应用rhG-CSF治疗，同时提高患者生活质量。PEG-rhG-CSF安全性高，无明显不良反应。     

联合自杀基因与IL-2基因转移疗法的抗肿瘤效果及其抗肿瘤免疫应答的诱导作用

单用自杀基因疗法或单用细胞因子基因疗法抗肿瘤效果不理想,本研究中我们观察了大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶(CD)基因与白细胞介素2(IL-2)基因联合转移对荷瘤小鼠的治疗效果及其对抗肿瘤免疫的诱导作用。复制荷瘤小鼠模型后在荷瘤部位注射表达CD基因的重组腺病毒(AdCD)及表达小鼠IL-2基因的重组腺病毒(AdIL2),并连续10天、每天1次腹腔注射5氟胞嘧啶(5FC)对荷瘤小鼠进行治疗。结果表明,AdCD/5FC/AdIL2联合基因治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤的生长,并明显延长其生存期(P<0.01)。联合基因治疗组小鼠肿瘤细胞发生明显的坏死,瘤内及瘤周有大量的炎性细胞浸润,瘤内CD4~ 和CD8~ T细胞明显增加,脾细胞NK和CIL杀伤活性明显高于单用AdCD/5FC、对照病毒AdLacZ/5FC或PBS组。实验结果表明,联合应用自杀基因与细胞因子基因治疗可更有效诱导机体的抗肿瘤免疫反应,从而更显著地抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长。     

IL-3基因疗法对骨髓移植后免疫功能重建的影响

以大剂量化疗后进行同基因骨髓移植小鼠为实验模型,动态观察了成纤维细胞介导的IL-3基因疗法对骨髓移植后小鼠免疫功能重建的作用。结果发现,IL-3基因疗法能显著加快骨髓细胞的淋巴细胞增殖反应的恢复,并能显著增强腹腔巨噬细胞的杀伤功能,提高巨噬细胞分泌IL-1、TNF及脾细胞分泌IL-2等细胞因子的水平,从而证明IL-3基因疗法对骨髓移植后机体免疫功能重建具有促恢复作用。     

过继回输腺病毒介导的白细胞介素10基因转染CTL对机体抗肿瘤免疫功能的增强效应

本研究探讨了白细胞介紊10(IL-10)对小鼠体内抗肿瘤免疫功能的影响。鉴于C26结肠癌细胞转染了IL-10基因后在体内的致瘤性明显下降，本研究构建了一株对C26结肠癌细胞具有杀伤括性的CD8^ CTL并观察了IL-10基因转染的该细胞株对肿瘤的治疗作用。携带IL-10基因的重组腺病毒能有效介导小鼠琳巴细胞的基因转染并使之分泌较高水平的IL-10。IL-10基因转染的CTL过继回输荷瘤小鼠体内能明显增强荷瘤小鼠的体内抗肿瘤免疫功能，使实验性肺转移小鼠肺部转移结节数明显减少．这表明，IL-10对于过继回输的肿瘤特异性CTL的免疫功能具有明显的增强作用。     

G-CSF联合GM-CSF及高剂量G-CSF治疗急性髓系白血病化疗后中性粒细胞缺乏的疗效观察

目的:探讨高剂量G-CSF方案和G-CSF联合GM-CSF方案治疗及预防急性髓细胞白血病化疗后粒细胞减少的临床疗效与安全性。方法:回顾性分析53例接受化疗的急性髓系白血病患者,对比常规剂量G-CSF、高剂量G-CSF以及G-CSF联合GM-CSF在化疗后的应用,观察中性粒细胞绝对值、中性粒细胞减少持续时间、中性粒细胞减少伴发热发生概率及各组治疗不良反应的区别。结果:高剂量G-CSF组与G-CSF联合GM-CSF组较标量G-CSF组中位ANC减少的持续时间明显缩短,中性粒细胞减少合并感染的发生率明显减少,高剂量G-CSF组与G-CSF联合GM-CSF组之间无统计学差异,三组之间安全性相仿。结论:G-CSF联合GM-CSF方案以及高剂量G-CSF方案治疗及预防急性髓细胞白血病化疗后粒细胞减少安全有效。     

低剂量格拉诺赛特(rtG-CSF)防治卵巢癌化疗后白细胞减少症的疗效观察

目的:探讨低剂量格拉诺赛特(rhG-CSF)的不同用法对卵巢癌化疗后白细胞和中性粒细胞减少的防治作用。方法:43例的上皮性卵巢癌化疗患者随机分为3组,其中,A组(共66疗程)不用rhG-CSF;B组(共57疗程)为白细胞计数<2.0×109/L时给予rhG-CSF,C组(共73疗程)自化疗结束后48小时起给予rhG-CSF,剂量均为50μg/日,皮下注射。结果:C组白细胞最低值的持续时间明显短于A和B组,分别为白细胞计数10日;中性粒细胞计数11日(P<0.01),平均最低值分别为3.01×109/L和0.986×109/L。B和C组rhG-CSF的作用并不随年龄、体重和化疗次数而改变。结论:rhG-CSF可以维持白细胞和中性粒细胞的水平,早期应用G-CSF可能会增大化疗剂量或缩短化疗间歇时间,从而提高化疗强度。     

RT-PCR克隆人IL-6、IL-10、IL-13和SCF等四种细胞因子膜外区cDNA

在逆转录病毒介导下将TNF基因转染入小鼠LAK细胞中．结果发现．转染TNF基因的LAK细胞比正常LAK细胞和转染对照基因的LAK细胞分泌更高水平的TNF．其体外生长能力和杀伤活性均显著升高．抗TNF单抗可显著抑制其体外杀伤活性．表明其杀伤活性升高是由基因转染后所表达的TNF介导的。将较低数量的TNF基因转染的LAK细胞与IL-2联合腹腔内注射后，对腹水型肝癌小鼠有显著的治疗效果．     

巨噬细胞在MIF基因修饰瘤苗诱导小鼠抗肿瘤免疫中的作用 *

研究巨噬细胞游走抑制因子（MIF）基因修饰的瘤苗诱导抗肿瘤免疫反应的机理。方法： MIF基因修饰的FBL3瘤苗小鼠免疫后,观察腹腔巨噬细胞数量和功能的变化。结果： MIF基因修饰的瘤苗免疫后,小鼠腹腔巨噬细胞的数量,表面免疫相关分子的表达,以及TNF-α和NO的分泌水平增高,吞噬功能、杀伤活性和抗原提呈功能增强。结论： MIF基因修饰的瘤苗体内免疫后,其分泌的MIF显著增强了巨噬细胞的功能,被活化的巨噬细胞在瘤苗诱导机体抗肿瘤免疫中起重要的作用。     

不同剂量rhG-CSF预防晚期非小细胞肺癌化疗后白细胞减少的临床研究

背景与目的：肿瘤化疗最常见的剂量限制性毒性是骨髓抑制,其中白细胞和中性粒细胞减少最为常见。骨髓抑制不但使化疗药物的剂量提高受到限制,而且影响了化疗的正常进行。基因重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)不仅具有刺激粒细胞集落形成的能力,也有促进粒细胞生长、增殖和分化的能力,对化疗所致白细胞和中性粒细胞减少具有明显疗效。本研究观察晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者接受化疗后预防性应用低、中、高3种不同剂量的rhG-CSF升白效果及不良反应,探讨该药合理的应用策略。方法：126例经病理证实为晚期NSCLC化疗的患者,按数字随机法分为A、B、C共3组。3组患者于化疗结束后24 h给予rhG-CSF。其中A组(低剂量)：rhG-CSF300 μg,皮下注射,每日1次,共1天;B组(中剂量)：rhG-CSF 300 μg,皮下注射,每日1次,共2天;C组(高剂量)：rhG-CSF 300 μg,皮下注射,每日1次,共3天。观察患者用药后出现的症状和体征以及rhG-CSF的不良反应。结果：化疗后预防性使用中、高剂量rhG-CSF可以使近60%的患者白细胞高于4.0×10⁹个/L;对于Ⅲ级白细胞减少的患者,低剂量组白细胞水平回升天数更长,高剂量组白细胞回升天数明显缩短,高剂量组和低剂量组之间差异有统计学意义(P<0.05);从中性粒细胞的动态变化情况来看,化疗后加用高剂量rhG-CSF可以提高中性粒细胞的平均水平,能明显缩短化疗引起中性粒细胞低下的持续时间。126 例患者中感染发生率为4.76%,其中低剂量组为9.52%,中剂量组为4.76%。rhG-CSF引起的不良反应轻微,患者能耐受。结论：化疗后预防性使用不同剂量rhG-CSF 均可促进化疗患者白细胞和中性粒细胞的恢复,降低感染发生率。在相同化疗剂量下选用高剂量的rhG-CSF可使白细胞和中性粒细胞水平快速上升,安全可靠。     

瘤体内/瘤周注射TNF重组腺病毒和/或IL-2重组腺病毒对肝癌小鼠的治疗作用研究

选择两种具有协同免疫调节作用的细胞因子进行联合基因治疗是提高肿瘤细胞因子基因治疗的有效途径之一.目前对IL-2/TNF-α联合基因方案,特别是瘤体内注射途径的抗肿瘤研究尚未见报道.IL-2与TNF-α具有协同作用.因此我们分别将携带TNF-α基因和IL-2基因的腺病毒(Ad-TNF,Ad-IL-2)联合或直接注射于BALB/c小鼠肝癌内,观察其抗瘤效果,并探讨其抗肿瘤免疫机制.结果表明:1.TNF治疗组脾细胞NK、LAK、CTL活性及Mφ杀伤活性明显高于对照组,诱生的细胞因子包括IL-2、GM-CSF、IFN-γ、TNF和IL-     

北豆根提取物PE2成分的体内抗肿瘤作用及其免疫学调节机制研究

背景与目的探讨中药北豆根提取物的体内抗肿瘤作用和免疫学调节作用机制。材料与方法采用水提取、醇提取及水回流等方法对北豆根进行成分分离。采用四甲基偶氮唑蓝[3-(4,5-dimethy-2-thiazoly)-2,5-diphenyl-2-tetrazoliumbromide,MTT]显色法分析北豆根提取物对肿瘤细胞和淋巴细胞增殖反应的作用。采用中性红法检测了北豆根提取物对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响。采用皮下接种肿瘤细胞建立荷瘤小鼠动物模型,采用北豆根提取物灌胃,观察北豆根提取物对小鼠的体内抗肿瘤作用和免疫调节作用。结果北豆根乙醇提取物(RME)比水提取物(RMW)具有更强的抑瘤活性,醇提取物中的PE2成分可能是北豆根的主要抗肿瘤活性部分。经北豆根提取物PE2灌胃后的荷瘤小鼠,与对照组荷瘤小鼠相比其胸腺指数、脾指数明显增加;腹腔巨噬细胞吞噬功能和细胞因子分泌功能增强;NK细胞活性增加;一般情况较对照组小鼠好;肿瘤生长缓慢而局限;生存期明显延长。结论PE2是北豆根抗肿瘤作用的主要有效部分,PE2体内也具有抗肿瘤作用,能通过增强荷瘤小鼠巨噬细胞的吞噬功能,增强NK细胞和小鼠脾细胞的活性,而发挥抗肿瘤作用。     

pEgr-TNFα质粒的构建及基因-放射治疗小鼠黑色素瘤的实验研究

目的 研究pEgr-TNFα重组质粒的构建及其联合放射治疗抑制小鼠黑色素瘤的效果和对免疫系统的影响。方法 将TNFα cDNA插入pcDNA3．1质粒的多克隆位点，用：Egr-1的启动子替代pcDNA3．1质粒的CMV启动子，构建成pEgr-TNFα重组质粒；建立小鼠B16黑色素瘤动物模型，肿瘤局部注射脂质体包裹的质粒，在不同时问测量肿瘤体积，并检测照后15d部分免疫学指标。结果 pEgr-TNFα基因．放射联合治疗后第3～15天，肿瘤生长速率明显低于单纯照射组、单纯基因治疗组和空质粒对照组。小鼠脾脏NK细胞毒活性、IL-2分泌活性、腹腔巨噬细胞TNFα和IL-18活性均明显高于单纯放疗组。结论 pEgr-TNFα基因-放射联合治疗抗肿瘤作用明显优于单纯放疗组和单纯基因治疗组，同时可以减轻放疗对机体免疫功能的损伤。     

IL-3,IL-6和IL-4单独或联合G-CSF及GM-CSF对小鼠异基因骨髓移植后造血重建的影响

我们检测了IL-3，Il-6和IL-4单独和联合G-CSF和GM-CSF对小鼠异基因骨髓移植后造血重建的影响．IL-3 GM-CSF是增加移植后6d中性粒细胞绝对计数最有效的联合，显示显著的协同作用。当单独给予时，IL-6和G-CSF分别显著增加移植后6d血小板计数，而在联合给予中．只有IL-3 G-CSF显著增加移植后6d的血小板计数。IL-4对移植后7d中性粒细胞恢复有显著的抑制作用．对由IL-3和G-CSF加速的中性粒细胞恢复亦有显著的抑制作用。     

腺病毒介导IL-2基因转染的瘤苗体内抗肿瘤作用

目的 :探讨重组腺病毒介导的 IL- 2基因转染的瘤苗的体内抗肿瘤作用及其免疫学机制。方法 :应用腺病毒介导的鼠 IL- 2基因转染 CT2 6小鼠结肠癌细胞 ,灭活后用作瘤苗治疗荷瘤小鼠 ,观察皮下肿瘤生长及其存活期。采用乳酸脱氢酶释放法检测荷瘤小鼠脾细胞 CTL、L AK、NK细胞的杀伤活性。结果 :鼠 IL- 2基因转染瘤苗治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤生长并明显延长其存活期 (P<0 .0 1)。体内免疫功能检测表明 ,鼠 IL- 2基因转染疫苗治疗组小鼠脾细胞 CTL 活性、L AK活性和 NK活性显著高于对照组 (P<0 .0 1)。结论 :腺病毒介导鼠 IL- 2基因转染的瘤苗体内具有较强的抗肿瘤效应 ,其机制可能是提高了荷瘤小鼠特异性和非特异性抗肿瘤免疫反应     

溶血性链球菌制剂的抗瘤作用及机理研究

本试验检测了溶血性链球菌制剂(HSP)的抗瘤活性。当对小鼠移植ECA细胞前三天及后三天各ip0.5mgHSP一次,荷瘤小鼠生存期明显延长。在荷瘤鼠中经HSP或CP诱导的中性粒细胞的抗瘤活性与未经诱导鼠的相比,差异有显著性(P<0.01),与非荷瘤鼠经HSP诱导的中性粒细胞抗瘤活性相比,差异也有显著性(P<0.05)。HSP、BCG、CP都能促进C_(57)BL/6小鼠腹腔巨噬细胞分泌细胞因子,巨噬细胞培养上清促进胸腺细胞增殖的最适剂量约为1:32,其中以HSP致生效果较好。     

IL-2基因疗法对骨髓移植后免疫及造血重建的影响

本文以大剂量化疗后骨髓功能严重损伤做为实验模型．动态观察了成纤维细胞介导的IL-2基因疗法对同基因骨髓移植后免疫及造血功能重建的影响。结果表明，IL-2基因疗法能显著增强实验小鼠骨髓细胞的NK活性、LAK活性及ConA刺激的增殖反应，但对骨髓CFU-GM，CFU-MK、CFU-E集落形成无影响，提示成纤维细胞介导的IL-2基因疗法能加快和增强骨髓移植后的免疫功能重建过程，提高骨髓移植抗肿瘤作用，并可减少骨髓移植后感染等并发症。该结果为IL-2基因疗法应用于骨髓移植提供了一定的实验依据．