重组人干扰素α-2b-卡介苗对膀胱癌MB49细胞的体外作用

目的 探讨重组人干扰素α-2b-卡介苗(hIFN-α-2b-BCG)对膀胱肿瘤细胞的直接效应及其作用机制.方法 采用体外实验,将重组hIFN-α-2b-BCG直接作用于小鼠膀胱癌MB-49细胞,荧光染色后,在光镜和电镜下观察细胞的变化.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)和流式细胞仪(FCM),检测野生型BCG和重组hIFN-α-2b-BCG对MIM9细胞的影响.结果 重组hIFN-α-2b-BCG与MB49细胞共培养后,光镜下见肿瘤细胞变圆,增殖速度明显减缓,部分细胞脱壁,胞浆呈大量空泡和颗粒状.透射电子显微镜下可见肿瘤细胞表面微绒毛脱落,细胞质坏死,大量空泡,细胞表面有出泡现象.吖啶橙染色后,在荧光显微镜下可见肿瘤细胞聚集成团状的细胞球体,胞突消失,凋亡小体出现.Hoechst33258染色后,可见大量肿瘤细胞呈明亮的蓝色荧光.MTT测定结果显示,随共培养时间延长,重组hIFN-α-2b-BCG可不同程度抑制肿瘤细胞的生长,抑制率高于野生BCG.FCM检测结果显示,24 h后野生型BCG诱导凋亡率为10.8%,重组hIFN-α-2b-BCG诱导凋亡率为19.7%;48 h后野生型BCG诱导凋亡率为20.9%,重组hIFN-α-2b-BCG诱导凋亡率为46.6%.两者比较,差异有统计学意义(P＜0.01).重组hIFN-α-2b-BCG上调MB49细胞MHC-Ⅰ表达,具有时间依赖性,且上调比例明显高于野生型BCG(P＜0.01).结论 重组hIFN-α-2b-BCG成功诱导肿瘤细胞凋亡,有更高的调节免疫原性、抗肿瘤作用和细胞毒性.     

干扰素-α联合姜黄素对B-NHL淋巴瘤Raji细胞的增生抑制作用

目的研究干扰素-α联合姜黄素对B-NHL淋巴瘤Raji细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法以不同浓度干扰素-α(500、1000、2000／L),不同浓度的姜黄素6．25、12．5、25μmol／L)和IC502000U／L的干扰素-α联合不同浓度姜黄素作用于体外培养的Raji细胞,观察细胞生长状态变化。MTT法检测细胞生长的抑制率,应用流式细胞仪法观察细胞凋亡,Western blot法检测24h,姜黄素IC5025μmol／L联合2000U／L的干扰素-α作用于caspase6、caspase8、caspase9的蛋白表达。结果干扰素-α与姜黄素联合应用可显著抑制Raji细胞的生长．诱导细胞发生凋亡,两者具有协同效应。凋亡蛋白caspase6、 caspase8、caspase9表达显著增高,其作用呈现出明显的量-效与时-效关系。结论干扰素-α与姜黄素联合应用对B-NHL淋巴瘤Raji细胞具有明显的增生抑制作用,促进凋亡蛋白的表达及诱导细胞凋亡,可能是其重要作用机制之一。     

α-干扰素对骨巨细胞瘤细胞凋亡和bFGF及其受体表达的影响

目的:探讨α-干扰素对体外培养的骨巨细胞瘤细胞碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及受体Bek表达与生物学行为的影响,为骨巨细胞瘤术后复发转移的防治探索新途径.方法:采用不同浓度的α-干扰素诱导体外培养的第三代骨巨细胞瘤细胞,观察α-干扰素对瘤细胞生物学行为的影响,流式细胞术与细胞-酶联免疫吸附法分析α-干扰素诱导48h后瘤细胞凋亡情况及Bek/bFGF表达的变化.结果:浓度为1 000IU/ml以上的α-干扰素作用10～12h左右,瘤细胞即出现退缩现象,生长明显受到抑制;至48h,瘤细胞数目明显减少,且出现大量细胞碎片.α-干扰素可诱导第三代骨巨细胞瘤细胞发生凋亡,其凋亡率随α-干扰素作用浓度增加而递增,呈明显的剂量依赖关系.α-干扰素可抑制第三代骨巨细胞瘤细胞bFGF和Bek的表达,其抑制强度也随α-干扰素作用浓度的增加而增加,呈明显的量效关系.当α-干扰素作用浓度达到1 000IU/ml以上时,其诱导凋亡与抑制Bek/bFGF表达的效应均发生显著性变化.结论:α-干扰素对体外培养的第三代骨巨细胞瘤细胞具有明确的抗肿瘤效应,可作为骨巨细胞瘤术后辅助治疗,以防治和减少其复发转移.     

干扰素调节因子3及其可变剪接体与肿瘤

干扰素调节因子3(IRF3)作为干扰素调节因子家族的重要成员,在调控(型干扰素及其下游基因中发挥关键作用,并参与多种生物学过程.研究发现其可抑制肿瘤细胞的生长和转移,并诱导细胞凋亡,发挥抑癌基因作用.该作用机制涉及肿瘤免疫与炎症反应、凋亡及上皮间质转化等过程.IRF3可变剪接体可负性调控IRF3功能,影响肿瘤发生发展.相关的信号通路、发病机制研究为肿瘤早期诊断、治疗提供了新的思路.     

干扰素-α联合姜黄素对B-NHL淋巴瘤Raji细胞的增生抑制作用

背景与目的：姜黄素（curcumin）是中药姜黄的主要成分，其选择性的抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡。干扰素-α是目前用于临床治疗最重要的细胞因子之一。本研究旨在探讨干扰素-α联合姜黄素对B-NHL淋巴瘤Raji细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法：以浓度2000u／L干扰素-α分别与6．25、12．5、25μmol／L浓度的姜黄素作用于体外培养的Raji细胞，观察细胞生长状态变化。MTT法检测细胞生长的抑制率，应用流式细胞仪法观察细胞凋亡，Western blot法检测24h，姜黄素（IC50 25μmol／L）以及联合干扰素-α（2000u／L）对caspase6、caspase8、caspase9蛋白的影响。结果：干扰素-α与姜黄素联合应用可显著抑制Raji细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，两者具有协同效应。凋亡蛋白caspase6、caspase8、caspase9表达显著增高，其作用呈现出明显的量效与时效关系。结论：干扰素-α与姜黄素联合应用对B-NHL淋巴瘤Raji细胞具有明显的增生抑制作用；促进凋亡蛋白的表达及诱导细胞凋亡，可能是其重要作用机制之一。     

氧化砷诱导人小细胞肺癌细胞凋亡的研究

目的 研究砷剂（As2O3)对人小细胞肺癌细胞凋亡诱导作用以及干扰素（IFNα－2b)对As2O3作用的影响。方法 采用DNA电泳、TUNEL原位末端标记和免疫细胞化学染色检测不同浓度As2O3作用不同时间对人小细胞肺癌细胞凋亡诱导作用及相关主相关基因蛋白的表达。结果 在一定的浓度范围内,As2O3可诱导人小细胞肺癌细胞凋亡,并且随浓度的升高和作用时间的延长,凋亡细胞数增加,相关基因蛋白Bcl-2、PCNA表达降低。联合使用IFNα-2b可增强凋亡诱导作用。结论 As2O3可诱导人小细胞肺癌细胞凋亡,且与药物浓度和作用时间有关。IFNα-2b可增强此作用。     

干扰素与TRAIL在诱导肿瘤细胞凋亡中的相互作用

干扰素(IFN)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)均可诱导肿瘤细胞凋亡,但两者作用机制不同,而且并不是所有肿瘤细胞都对它们诱导的凋亡作用敏感。已有研究发现二者共同作用具有协同诱导细胞凋亡的作用,并可使原先对单一物质抵抗的肿瘤细胞变得敏感,从而达到治疗的目的。     

加温联合钙剂诱导人神经母细胞瘤 SK-H-SN细胞凋亡的研究

目的探讨加温联合钙剂对诱导 SK-H-SN 细胞凋亡的作用及其意义.方法采用 3 种温度和 4 种浓度的外源性氯化钙(CaCl2)诱导 SK-H-SN 细胞凋亡.采用形态学观察、原位缺口末端标记(TUNEL)的方法检测细胞凋亡的结果,并用火焰原子吸收分光光度法测定细胞内钙含量([Ca]i).结果加温和/或加钙均可诱导 SK-H-SN 细胞凋亡.在有外源性钙剂存在时,加温可明显升高[Ca]i.同一温度下,各组的凋亡率(APO%)和[Ca]i均随外源性 CaCl2浓度的升高而升高;同一 CaCl2浓度下,APO% 和[Ca]i均随温度的升高而升高.析因设计的方差分析结果显示,加温和加钙在诱导细胞凋亡时有很强的协同作用,P<0.01.APO% 和[Ca]i之间呈正相关,r=0.983,P<0.01.结论加温和加钙在诱导 SK-H-SN 细胞凋亡方面有很强的协同作用,APO% 和[Ca]i呈正相关,通过增加[Ca2+]i 来诱导凋亡可认为是加温诱导凋亡的机制之一.     

蛋白酶体抑制剂PS-341诱导U266细胞凋亡与胞浆内[Ca2+]变化的关系

目的探讨蛋白酶体抑制剂PS-341(Bortezomib)诱导骨髓瘤细胞株U266细胞凋亡时对其胞浆内[Ca2 ]([Ca2 ]i)的影响。方法以浓度梯度的PS-341干预U266细胞4h后收集,荧光显微镜观察细胞凋亡,AnnexinV-FITC/PI双参数流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,Fluo-3/AM荧光素标记FCM检测[Ca2 ]i。结果(1)PS-341作用U266细胞4h后荧光显微镜观察到凋亡细胞数随浓度增加而增多;(2)FCM检测凋亡细胞的比例分别为0.56%、7.71%、19.84%、31.10%、40.72%,与PS-341浓度成正比;(3)PS-341作用后U266细胞[Ca2 ]i均值分别为403.65nmol/L、418.20nmol/L、378.65nmol/L、356.36nmol/L、349.21nmol/L;(4)PS-341诱导U266细胞凋亡时伴随[Ca2 ]i的改变,浓度>50nmol/L时诱导的细胞凋亡伴随[Ca2 ]i下降。结论蛋白酶体抑制剂PS-341诱导骨髓瘤细胞凋亡呈浓度依赖性;PS-341浓度>50nmol/L时下调[Ca2 ]i,并由此发挥抗骨髓瘤细胞作用。     

人α干扰素诱导骨肉瘤细胞Anoikis凋亡

目的: 恶性肿瘤细胞逃避Anoikis凋亡的特性是其原位侵袭和远处转移的一个重要原因.本文旨在研究应用人干扰素(IFN)α2a诱导骨肉瘤细胞出现Anoikis凋亡,并深入探讨其产生机理及信号传导途径.方法: 采用抑制接触培养法建立细胞Anoikis凋亡诱导模型.观测IFN-α2a诱导骨肉瘤细胞MG- 63产生的Anoikis凋亡.TUNEL法形态学检测MG- 63细胞凋亡,流式细胞仪定量检测细胞凋亡程度和细胞表面整联蛋白受体表达.特异性底物切开法检测半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶 (cysteine aspartate-specific proteases, caspase)信号途径.结果: 人IFN-α2a可明显诱导骨肉瘤细胞MG- 63产生Anoikis现象,并诱导了MG- 63细胞caspase-8和caspase-3的活性,但IFN对整联蛋白亚单位α4,α5及αv无明显影响,上述整联蛋白封闭抗体对IFNα-2a诱导的MG- 63细胞Anoikis凋亡无明显影响.结论: 人干扰素α2a可以在体外通过调节细胞caspase信号途径,诱导骨肉瘤细胞MG- 63产生Anoikis现象,从而抑制骨肉瘤的转移.     

survivin在他莫昔芬抑制肝癌HepG2细胞增殖和诱导凋亡中的作用

已有文献报道,他莫昔芬通过雌激素受体(ER)-α独立的信号通路发挥作用[1],其发挥抗增殖作用可能与钙离子内流增加、活性氧产生和(或)抑制蛋白激酶C活性有关[2-4].最近的研究表明,他莫昔芬对肿瘤细胞的生长抑制活性与细胞凋亡有关.     

益康唑诱导白血病细胞凋亡的实验研究

目的为了研究益康唑(Econazole)诱导鼠粒单核白血病细胞WEHI-3凋亡的机制。方法利用Annexin-V/PI双染实验测定细胞凋亡,Fura-2荧光负荷技术检测细胞内游离钙离子浓度([Ca2 ]i),并抽取WEHI-3 细胞内质网部分蛋白,利用Western blot测定Caspase-7、Caspase-12的蛋白表达。结果Econazole作用后WEHI-3出现典型的凋亡改变。细胞内游离[Ca2 ]i较对照明显升高,Western blot结果显示随着细胞内钙离子浓度的提高,Caspase-12和Caspase-7表达逐渐增加。结论Econazole能诱导WEHI-3细胞凋亡,Caspase-12在此过程中起重要作用。     

α干扰素联合阿糖胞苷对白血病K562细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的:研究α干扰素联合阿糖胞苷对白血病K562细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法:以浓度2 000 U/ml的α干扰素与不同浓度的阿糖胞苷作用于体外培养的K562细胞，观察细胞生长状态的变化，检测细胞生长抑制率及细胞凋亡率的变化，并对细胞端粒酶活性及P53蛋白的表达水平进行检测。结果:α干扰素与阿糖胞苷联合应用可显著抑制K562细胞的生长，诱导细胞发生凋亡。并降低K562细胞端粒酶活性，升高P53蛋白的表达水平，其作用呈现出明显的量效与时效关系。结论:α干扰素与阿糖胞苷联合应用对白血病K562细胞具有明显的生长抑制及诱导凋亡作用，降低细胞端粒酶活性及升高P53蛋白的表达水平是其重要作用机制之一。     

干扰素在肿瘤细胞凋亡信号传导通路中的作用及影响

干扰素(IFN)是一类具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的细胞因子。近年来研究发现, IFN与肿瘤细胞表面受体结合后,主要通过JAK／STAT信号途径来调节一系列IFN刺激基因的表达,影响肿瘤细胞凋亡传导通路及某些凋亡调节因子,增强肿瘤细胞对凋亡信号的敏感性,诱导肿瘤细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤效应。     

干扰素抗肿瘤实验及临床治疗观察

目的：分析梯度浓度的干扰素(IFN—α)对Burkitt淋巴瘤细胞株Daudi和T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat及15例难治性淋巴瘤患者的直接作用。方法：以MTT法测定梯度浓度的IFN—α对两种淋巴瘤细胞株Daudi、Jurkat增殖杀伤作用，以DNA末端标记法，流式细胞术，电镜观察测定IFN—α对淋巴瘤细胞的凋亡诱导作用，并采用瘤内注射IFN—α联合化疗治疗15例耐药的难治性淋巴瘤。结果：低浓度IFN—α对Daudi、Jurkat细胞无明显杀伤作用，高浓度IFN(10000U／m1)可显著杀伤两种肿瘤细胞，且有时间相关性，高浓度的IFN—α可诱导淋巴瘤细胞凋亡。15例患者CR2例，PR10例，有效率80％，无明显不良反应。结论：IFN—α可直接杀伤淋巴瘤细胞，诱导凋亡，有显著时间、剂量依赖性。局部应用IFN—α是治疗难治性淋巴瘤的有效方法之一。     

干扰素α对Raji细胞的生长抑制作用及其作用机制

目的：探讨干扰素α对白血病Raji细胞的生长抑制作用及其作用机制。方法：以不同浓度的干扰素α作用于体外培养的Raji细胞，MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪及hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡，FRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果：干扰素α可显著的降低Raji细胞端粒酶活性，抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡。并呈现出明显的量-效与时-效关系。结论：干扰素α能抑制Raji细胞的生长并诱导细胞发生调亡，降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

干扰素诱导肿瘤凋亡的分子机制

干扰素(interferons,IFNs)是一类重要的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节细胞因子。IFNs广泛用于造血系统恶性肿瘤、淋巴瘤及多种实体瘤的临床治疗。IFNs与细胞表面受体结合后,主要通过JAK/STAT信号途径,调节一系列干扰素刺激基因(IFN-sti mulated genes,ISGs)表达,这些功能性基因包括凋亡相关分子Fas/FasL、TRAIL/APO-2、抑癌基因bax、bak及p53等,这些ISGs与细胞凋亡及抑制细胞周期密切相关。此外,IFN还可放大由caspase诱导的线粒体功能紊乱效应,诱导细胞经线粒体途径凋亡。因而,IFNs主要通过抑制细胞周期、诱导抑癌基因的表达及增强肿瘤细胞对凋亡信号敏感性,诱导肿瘤细胞凋亡,而发挥其抗肿瘤生物学活性。     

乳腺癌凋亡过程中细胞内Ca2+的变化与Caspase3、Caspase8蛋白酶相关作用机制的研究

目的:探讨不同途径给药乳腺癌BCML-TA299移植瘤组织中Ca2 的变化与Caspase3、Caspase8蛋白相互作用的机制.方法:用a-干扰素不同给药途径处理BCML-TA299移植瘤组织.采用流式细胞仪、免疫组化技术分别测定乳腺癌BCML-TA299细胞的DNA含量、细胞周期变化及细胞内钙离子浓度水平变化与Caspase3、Caspase8蛋白表达相关性.结果:细胞形态学观察显示瘤内注射组出现典型的凋亡改变.瘤内注射组胞内Ca2 和Caspase3、Caspase8蛋白表达明显高于皮下注射组和预防注射组(P＜0.01).结论:1)Caspase3、Caspase8和胞内Ca2 共同参与了乳腺癌BCML-TA299细胞的凋亡调控过程,可能在乳腺癌发生、发展中起重要作用.2)不同途径给药对肿瘤细胞Caspase3、Caspase8表达和Ca2 浓度可产生不同的影响.     

γ-干扰素对冬凌草甲素抑制白血病K562细胞增殖的影响

[目的] 研究γ-干扰素对冬凌草甲素抑制白血病K562细胞增殖的影响。[方法] 以浓度1000U／ml的γ-干扰素与不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的K562细胞，观察细胞生长状态的变化。MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪、台盼蓝染色及Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡，TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。[结果] γ-干扰素与冬凌草甲素联合应用可显著抑制K562细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，并降低K562细胞端粒酶活性，其作用呈现出明显的量-效与时-效关系。[结论] γ-干扰素与冬凌草甲素联合应用对白血病K562细胞具有明显的增殖抑制作用，降低细胞端粒酶活性足诱导细胞发生凋亡。可能是其重要作用机制之一。     

内皮素-1对人肺腺癌SPC-A1细胞内游离钙离子的影响及机制

背景与目的 既往的研究发现内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)与肺腺癌细胞生长关系密切,其促肺腺癌细胞生长作用可能与细胞内游离钙离子增加有关.本研究探讨ET-1对人肺腺癌SPC-A1细胞内游离钙离子(Intracellular free calcium,[Ca2 ]i)的影响及其机制.方法采用Fura-2/AM荧光技术测[Ca2 ]i浓度,检测ET-1对SPC-A1细胞[Ca2 ]i的影响.应用钙离子通道阻滞剂、内皮素受体(Endothelin Receptor,ETR)拮抗剂及其细胞内信号传导通路阻滞剂,研究ET-1对SPC-A1细胞[Ca2 ]i影响的细胞学机制.结果 ET-1(1×10-15-1×10-8)mol/L呈浓度依赖性地促进SPC-A1细胞[Ca2 ]i升高,ETAR特异性拮抗剂BQ123(1×10-7mol/L)可完全抑制ET-1(1×10-10 mol/L)的促[Ca2 ]i升高作用(P<0.05),而ETBR特异性拮抗剂BQ788(1×10-7mol/L)无此作用(P>0.05);细胞外无钙离子或用Nifedipine(1×10-6mol/L)阻断钙离子内流后ET-1(1×10-10 mol/L)促[Ca2 ]i升高作用明显减弱(P<0.05);Ryanodine(50×10-6mol/L)抑制细胞内钙离子释放后ET-1(1×10-10 mol/L)促[Ca2 ]i升高作用减弱(P<0.05);磷脂酶C抑制剂U73122(1×10-5 mol/L)可以抑制ET-1(1×10-10mol/L)促[Ca2 ]i升高作用(P<0.05);U73122的无活性同分异构体U73433不能抑制ET-1促[Ca2 ]i升高作用(P>0.05);蛋白激酶C抑制剂Staurosporine(2×10-9mol/L)对ET-1(1×10-10mol/L)促[Ca2 ]i的作用无明显影响(P>0.05).结论 ET-1能够促进SPCA-1细胞[Ca2 ]i升高,其途径主要是通过L-型钙离子通道开放使细胞外钙离子内流,内流钙离子促发细胞内钙离子释放.同时ET-1激活细胞内磷脂酶C诱发的钙离子释放也是ET-1促进[Ca2 ],升高的机制之一.