抗猪囊虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和特性鉴定

目的：培养、筛选和克隆鼠源杂交瘤细胞株，生产相应特异的针对猪囊虫的单抗并用于临床。方法：用含有弗氏不完全佐剂和1单位IFN的猪囊虫下液皮下注射免疫7周龄小鼠3次后，无菌取出脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP^2/O，在含有50％PEG（分子量4000）的HAT培养液中进行融合，在37℃，含7％CO2的培养箱中培养，随后在正常培养液中进行筛选和克隆化。染色体分析用常规的中期染色体法，单抗类型的滴度测定用ELISA法。结果：用常规的有限稀释法对杂交瘤进行3次筛选和克隆化后获得3株杂交瘤细胞株2H10、5C2和5H6，分别有97、98、和106条染色体，均能稳定地分泌各自特异的单抗。2株单抗为IgG类，另1株为IgM类，滴度分别为1：1000、1：800和1：1600。结论：用杂交瘤技术，我们获得了3株杂交瘤细胞株，均能稳定地分泌高滴度的针对猪囊虫抗原的特异单抗。     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其特性鉴定

为制备抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶（LDHp）单克隆抗体（McAb）,并对其特异性进行鉴定,用纯化的LDHp重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,筛选出分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA、Westen blotting试验分析其特导性。结果,制备出2A5和 1H10两株能稳定分泌抗LDHp　McAb的杂交瘤细胞株,两株单抗均为IgG2b,2A5和1H10培养上清的ELISA效价分别为1:512和1:256,腹水效价分别为1:25600和1:12800,两株单抗与间日疟、红细胞、弓形虫、日本血吸虫等抗原均不发生交叉反应,能识别恶性疟原虫的33Kda虫源蛋白。证明制备的抗LDHp杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗。     

抗FLT3受体单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗FLT3受体的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以PET46-FLT3-His-tag表达蛋白作为免疫原免疫BALB／C小鼠,取其脾细胞与SP2／0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗FLT3受体的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA、Western blot、免疫组化对此抗体特性进行鉴定。结果筛选到两株能稳定分泌抗FLT3受体单克隆抗体的细胞株5F381181和D3H2C12,亚类鉴定两种单抗为IgG1,ELISA法测定两株细胞腹水抗体效价分别为1：409600和1：102400,抗体相对亲和力为7．85×10^6L／mol。Western blot显示抗体能特异识别免疫原。细胞免疫组化显示此单抗可以特异的识别急性髓系白血病病人骨髓中原始细胞表达的FLT3受体。结论成功制备抗FLT3受体单克隆抗体,为进-步研究其与白血病等血液疾病的关系奠定了基础。     

恶性疟原虫重组HRP-Ⅱ蛋白的纯化及抗体制备

目的 制备抗恶性疟原虫HRP－Ⅱ的多抗和单抗，为疟疾免疫诊断提供良好的材料。方法 Sephacryl-200柱层析分离纯化HRP－Ⅱ融合表达蛋白；纯化蛋白免疫新西兰兔及BALB/c小鼠制备抗HRP－Ⅱ多克隆抗血清，采用杂交瘤技术制备抗HRP－Ⅱ单抗；测定所获抗体的效价及其特异性反应。结果 表达产物获得高度纯化，纯度达86．21％；制备的多克隆抗血清双扩效价为1：4－1：16；获得6株能稳定分泌抗HRP－Ⅱ单抗的杂交瘤细胞株，其单抗亚型均为IgG1，各株单抗均与重组HRP－Ⅱ蛋白发生特异性反应，但只有3A3和2E7能与天然HRP－Ⅱ反应。结论 获得了敏感、特异的抗HRP－Ⅱ多克隆抗血清及稳定分泌抗HRP－Ⅱ单抗的杂交瘤细胞。     

抗人A型红细胞单克隆抗体的研究及其初步应用

在用人A型红细胞悬液免疫的Balb／c小鼠脾细胞与同系小鼠的骨髓瘤细胞进行融合屡遭失败的情况下，改用实体瘤分离出的骨髓瘤细胞进行融合，终获成功。融合后筛选出分泌盐水凝集抗体的杂交瘤细胞株，即为：3B2、3H2，8C3细胞株。3株抗人A型红细胞单克隆抗体3B2、3H2，8C3血清学检验和应用结果表明；3株单抗均可作为血型诊断试剂，可用以取代人源标准血清。     

抗结核杆菌单克隆抗体的研制及初步鉴定

运用单克隆抗体技术 ,以结核杆菌H37Rv的培养滤液免疫Balb/c小鼠 ,以H37Rv及BCG抗原同时筛选杂交瘤细胞 ,得到了 7株稳定分泌的抗结核杆菌的杂交瘤细胞株 ,并对它们的特性作了初步鉴定。在 7株单克隆抗体杂交瘤中 ,5株 (2C5、2C11、2D1、2E11及 3D3)为IgG1亚类 ,另两株 (3C3及 5D8)为IgM。腹水经ELISA检测 ,效价可达 10 -3 ～ 10 -4 ,同时应用ELISA及免疫印迹试验分析了 7株单抗的种间反应性 ,结果 7株单抗与其它结核杆菌有不同程度的交叉反应 ,其中 1株单抗 (5D8)与大肠杆菌超声抗原也有明显交叉反应 ,提示结核抗原组分十分复杂 ,不仅分支杆菌种间有共同抗原决定簇 ,甚至与其它种属也有相同或相似的抗原决定簇。将这 7株单抗用于结核血清学诊断的价值有待进一步评估     

医学期刊速览

高致病性H5亚型禽流行性感冒病毒血凝素单克隆抗体的制备与初步应用[摘要]以禽流感病毒株Ck/HK/Yu22/02(H5N1)作为免疫原,利用常规杂交瘤技术和血凝抑制试验法成功地筛选出6株稳定分泌抗高致病性H5亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体(单抗),分别命名为2F2、3C8、3FCl、7C6、10HD4和13G4。经血凝抑制试验法分析。结果发现这6种株单抗具有特异性高、反应性强、识别谱宽且互补等特点。基于单抗2F2,初步建立了三种H5N1病毒诊断方法,经评估证实具有很好的特异性。由此说明,研究制备的抗H5亚型禽流感病毒性血凝素单抗可适用H5N1病毒的诊断…     

幽门螺杆菌CagL蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的: 制备幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）CagL蛋白单克隆抗体（monoclonal antibody, mAb）,并鉴定其特性。方法： 用原核表达并纯化的CagL融合蛋白免疫BALB/c小鼠,6周后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经亚克隆筛选获得阳性杂交瘤细胞株;ELISA法鉴定mAb的亚型;间接ELISA法测定杂交瘤细胞培养上清和腹腔积液效价及其相对亲和力;相加ELISA法分析mAb的识别表位;蛋白质印迹法鉴定mAb特异性;冻溶法检测杂交瘤细胞株的稳定性。结果： 获得3株能稳定分泌抗CagL的杂交瘤细胞株,其中两株单抗属IgM类,一株单抗属IgG2a类,轻链型别均为κ型;杂交瘤细胞培养上清效价在1∶64～1∶128之间,腹腔积液的效价均达1∶16 000以上;相对亲和力较高;3株mAb识别3种不同的抗原表位;3株mAb都能与融合蛋白反应,其中两株能与H.pylori全菌蛋白发生特异性反应;杂交瘤细胞经冻存复苏后,体外传代仍能稳定分泌mAb。结论： 成功制备了抗H.pylori CagL蛋白的单克隆抗体,为深入研究幽门螺杆菌CagL蛋白的功能和Ⅳ型分泌系统的致病机制奠定了基础。     

PDGFR单克隆抗体的制备和鉴定

目的 通过谷胱甘肽转硫酶偶联的血小板衍生因子受体氮端的融合蛋白(GST-PDGFR-N)制备有生物活性的单克隆抗体.方法 用GST-PDGFR-N融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗PDGFR的单克隆抗体,用间接ELISA、Western blot、免疫组化等方法对抗体的抗原结合特性进行鉴定.结果 获得两株能稳定分泌抗PDGFR单克隆抗体的细胞3B12F5和3C6H7C11,亚类鉴定两种单抗均为IgG1.间接ELISA法测定两株细胞腹水抗体的效价分别为1:102400为和1:25600.Western blot法显示PDGFR单克隆抗体特异性地识别免疫原和胶质瘤细胞株U251中的抗原成分.细胞免疫组化显示此单抗可以特异的识别胶质瘤细胞株U251和膀胱癌细胞株BIU87中表达的PDGFR抗原.结论 成功制备PDGFR单克隆抗体,为研究PDGFR的表达情况和临床检测提供了一个有用的工具.     

人附睾蛋白4单克隆抗体的制备和鉴定

目的建立人附睾蛋白4(HE4)杂交瘤细胞株,并对其分泌的HE4单克隆抗体进行鉴定和初步应用,为HE4的功能研究和人源化抗体的制备奠定基础。方法使用pcDNA3.0-HE4重组质粒免疫BALB/C小鼠,采用PEG融合技术建立杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体。通过免疫荧光法、有限稀释法及金标斑点法测定单克隆抗体的交叉反应性及免疫球蛋白的类型和亚类。结果获得2株可稳定分泌HE4单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1C5和1C8,均为IgMκ类。2株单抗能够与表达HE4蛋白的卵巢癌细胞发生反应,而不与Sp2/0细胞、CHO细胞等发生交叉反应。杂交瘤细胞株1C5培养上清效价为1∶160,腹水效价为1∶1 280,而杂交瘤细胞株1C8培养上清效价为1∶128,腹水效价为1∶1 024。结论成功地制备出两株抗HE4单克隆抗体,均具有良好的特异性,为进一步建立免疫分析方法,进行HE4相关研究奠定了良好的基础。     

抗猪囊尾蚴KD26抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株建立和特性鉴定

目的: 建立针对猪囊尾蚴KD26抗原的单克隆杂交瘤细胞株,生产相应的单克隆抗体,用于囊虫病免疫保护机制的基础研究和囊虫病临床免疫诊断的应用。方法: 用SDS-PAG E电泳,分离纯化制备猪囊尾蚴KD26抗原免疫6周龄BALB/C小鼠3次,无菌取出脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/O(比率10:1),在50% PEG (4 000MW)作用下进行细胞融合,随后在HT培养液中进行选择性培养、筛选和克隆;常规的中期染色体法分析染色体,单克隆抗体鉴定采用免疫双扩散法测定其免疫球蛋白亚类,采用ELISA法测定单抗效价并作特异性鉴定。结果: 用常规的有限稀释法对杂交瘤细胞进行了3次筛选和克隆化后,获得了1株杂交瘤XH,染色体数为96,能稳定分泌抗猪囊尾蚴KD26单抗,单抗类型为IgG1,抗体滴度为1:1 000,其与血吸虫、弓形虫、细粒棘球绦虫抗原均不发生交叉反应。结论: 应用杂交瘤技术获得了1株能稳定分泌高滴度抗猪囊尾蚴KD26抗原的单克隆抗体细胞株。     

Production of monoclonal antibodies against Mycobacterium leprae]

A series of hybridoma cell lines, which secrete monoclonal antibodies (McAbs), were produced by means of fusion between mouse myeloma cells SP2/O and spleen cells from BALB/C mice immunized with whole M. leprae plus unique phenolic glycolipid I(PGL-I) of M. leprae and M. leprae sonicates supernatant fluid (MLSS) as immunogen. Primary identification indicated that H2 cell line can secrete McAb against the epitope of PGL-I; IIIE10 cell line can secrete McAb against PGL-I and MLSS and (5) 24 D6C8 cell line only against whole M. leprae. The uses of these McAbs in serodiagnosis of leprosy, identification of M. leprae, analysis and purification of M. leprae antigens, and key problems in technology for producing McAbs against M. leprae were also discussed.     

分泌抗白喉类毒秦单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

我们用白喉类毒素免疫小鼠的脾细胞与NS-1小鼠骨髓瘤细胞缸合,获得一株分泌抗白喉类毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。检测此杂交瘤细胞培养上清液中特异性抗体效价:间接血凝法为1:640～1280,ELISA法为1:800～1600。细胞注入同系小鼠可诱生含高效价抗体的腹水(高于培养液1000倍)。用免疫双扩散法鉴定此单克隆抗体属小鼠I。GI亚类。杂交瘤细胞染色体数为86～102。此细胞株经连续传代六个月和在液氮中冻存复苏后仍保持稳定的分泌抗体能力。     

抗重组人白细胞介素12单克隆抗体的制备及其生物学特性

以纯化的重组人白细胞介素12（rhIL-12）蛋白为抗原,制备具有生物活性的rhIL-12单克隆抗体（McAb）,并对其特性进行研究鉴定,为肿瘤及免疫相关性疾病的诊断与治疗提供具有实用价值的研究工具。方法： 以纯化的rhIL-12p70免疫BALB/C小鼠,采用杂交瘤技术,用间接ELISA法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞及多次克隆化,培养制备杂交瘤细胞系,用clutathione sepharose 4B进行纯化。采用间接ELISA及Western blotting等方法对McAb的Ig亚类（型）腹水效价及特异性进行鉴定。结果：建立了3株持续分泌rhIL-12p70　McAb的杂交瘤细胞株,3株细胞染色体数目均为100条左右,证实为杂交瘤细胞,所分泌的抗体为2株IgG1亚类及1株IgG2a亚类,轻链属k型,小鼠腹水效价测定分别为1∶5.9×106、1∶2.9×10⁷、1∶3.6×10⁷,亲和力依次为EM5>EM6>EV9。结论：成功地制备了3株能稳定分泌抗rhIL-12p70的杂交瘤细胞株,产生的McAb特异性好,亲和力高。     

抗腺病毒载体单克隆抗体的制备及其初步鉴定

目的 研制抗腺病毒载体(Adv)表面蛋白的单克隆抗体(McAb).方法 将Adv以Al(OH)3佐剂化,常规免疫BALB/c小鼠.采用细胞融合技术制备抗Adv McAb;采用ELISA、免疫细胞化学及Western blot法对McAb进行筛选与鉴定.结果 共获得6株可稳定分泌特异性McAb的细胞(A4H11、A8C7、F1H5、G1D2、G4E3、H2G8),其染色体数目为102～106条,所分泌McAb均属IgG1亚类,持续3个月适应培养仍能保持其稳定的抗体分泌能力.腹水抗体的ELISA效价在1∶106～1∶108之间;Western blot结果显示6株McAb均与来自腺病毒载体及野生3、5、7型腺病毒抗原提取物中分子量约为114 kD的多肽反应,据此推测它们均是抗ADV-TK六邻体蛋白的McAb.结论 成功制备出6株抗腺病毒载体六邻体单克隆抗体,为腺病毒载体应用于肿瘤基因治疗的临床前研究提供物质基础.     

甲型肝炎病毒单克隆抗体细胞株的建立及鉴定

目的 探讨建立和鉴定甲型肝炎(HAV)病毒单克隆抗体(McAb)细胞株的方法,为临床提供抗体来源.方法 通过McAb杂交瘤细胞培养方法进行甲型肝炎病毒单克隆抗体细胞株的培养后,选取实验培养的具有稳定性的McAb杂交瘤细胞后编号,对各细胞株进行特异性、效价的测定,并进行比对.结果 McAb杂交瘤细胞与甲肝病毒抗原的结合特...     

Induction of specific immunosuppression of cardiac allograft rejection with monoclonal antibodies to CD44, LFA-1 and ICAM-1

In the p~ess of allograft rejechon, the interactionbetween multiple adhesitin molecules Promotes the development Of the inflallnnatory ~on that leads to aliceddestruchon. Ih both aamal and hUInan models of aliced~splantation, the expression of adheSion molecules, including letlkocyte funchon-associated antigen-l (on-l ),intel'Cellular adhesion molecule-l (ICal-l ), vascularcell adhesion molecule~l (VCAM~l) and CD44 over thesurfaCe of the endothelial cells has been shown tO increasedwi al…     

调节Th1／Th2平衡对脑胶质瘤细胞增殖的影响

目的研究外源性细胞因子调节Th1/Th2平衡对脑胶质瘤细胞增殖的影响.方法分别将IFN-γ+IL-4单抗或IL-4+IFN-γ单抗与脑胶质瘤细胞共同孵育,半定量RT-PCR方法观察Th1/Th2类细胞因子基因表达的变化,并用MTT方法检测其对脑胶质瘤细胞生长情况的影响.结果脑胶质瘤细胞Th2类细胞因子的表达明显强于Th1类(P＜0.01),IFN-γ+IL-4单抗可以增强IFN-γ的表达,抑制脑胶质瘤细胞的增殖并呈剂量依赖性关系(P＜0.01);IL-4+IFN-γ单抗则使Th2类细胞因子的表达有所增强,促进脑胶质瘤细胞的增殖,也呈剂量依赖性关系(P＜0.01).结论 外源性的细胞因子或细胞因子单抗可以调节Th1/Th2平衡,逆转Th2优势,影响脑胶质瘤细胞的生长.     

人心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :制备抗人心肌肌钙蛋白 I(c Tn I)单克隆抗体 (c Tn I Mc Ab)并进行初步鉴定。 方法 :从健康意外死亡者的心肌中提取、纯化人 c Tn I,以其为抗原 ,免疫 BAL B/ c小鼠后 ,取其脾淋巴细胞与小鼠 Sp2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,反复筛选及克隆 ,得到能稳定分泌 c Tn I Mc Ab的杂交瘤细胞株。初步鉴定 c Tn I Mc Ab。结果 :经间接 EL l SA法筛选 ,3次克隆化后获得 5株能稳定分泌 c Tn I Mc Ab的杂交瘤细胞 (3A7、3A 11、3D2、3F10和 1H9) ,5株单抗免疫球蛋白亚类鉴定均为 Ig G2 a类。染色体数目 92～ 110条。 5株单克隆抗体腹水按 1∶ 10 0稀释 ,与 L DH、CK、CK- MB、AST和人心肌肌钙蛋白 T(c Tn T)行交叉反应为阴性。 5株 c Tn I Mc Ab腹水效价为 3.2× 10 - 6 ～ 1.6× 10 - 7。c Tn I Mc Ab相加试验表明 ,3D2、3F10与 3A7、3A11、1H9能识别不同的抗原表位。 结论 :本实验成功制备了具有较高活性的 c Tn I Mc Ab,具有良好应用开发价值。     

抗人hER单克隆抗体的制备及其应用

目的:制备抗人hER单克隆抗体。方法:用原核表达的人雌激素受体(hER)重组蛋白为抗原,免疫BalB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,进行细胞融合。结果:通过ELISA和免疫组织化学法筛选,有限稀释克隆化,得到一株分泌抗hER单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2B8/1C5/2C3),经鉴定2B8/1C5/2C3分泌的单克隆抗体为IgG2a,利用Western Blot分析,显示在23kU处针对hER重组蛋白位置有一特异性条带;利用乳腺癌组织进行的免疫组织化学染色结果显示该株细胞产生的单克隆抗体与细胞核呈强阳性反应。结论:该单克隆抗体适于乳腺癌组织hER的免疫组化检测。