人甲状腺球蛋白的提取和纯化

目的：提取高纯度的甲状腺球蛋白（Ｔｇ）,为制备Ｔｇ抗血清及Ｔｇ单克隆抗体,建立Ｔｇ的检验方法及ＴｇＡｂ的测定方法做准备。方法：将手术切除的新鲜人甲状腺组织,加入生理盐水匀浆、过滤,把滤液浓缩,经二次ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱层析,再经ＤＥＡＥ纤维素离子交换层析。结果：获得较高纯度的人Ｔｇ,经ＳＤＳＰＡＧＥ鉴定,显示为１条区带,表明纯度较高,经免疫电泳鉴定,提纯的Ｔｇ有较好的免疫活性。结论：这种提     

小鼠甲状腺球蛋白的提取、纯化和鉴定

目的 进行小鼠甲状腺球蛋白的纯化和鉴定。方法 小鼠甲状腺组织匀浆后进行盐析和Sphadex G-200凝胶层析2次纯化,纯化后的蛋白质产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western免疫印迹鉴定。结果 经纯化的蛋白产物为高纯度的甲状腺球蛋白。结论 Sphadex G-200凝胶层析和Western免疫印迹是进行甲状腺球蛋白纯化和鉴定的一种较好的方法。     

人载脂蛋白H的分离、纯化和鉴定

 目的 探索一种相对简便而高效的方法,从人血浆中分离、纯化载脂蛋白H。方法 用高氯酸预处理血浆,以离子交换色谱和亲和色谱相结合的方法进行蛋白质的分离和纯化。用SDS-聚丙烯凝胶电泳和Western blot对纯化产品进行鉴定。用BCA蛋白质定量测定试剂盒测定获得载脂蛋白H的量。结果 连续分离、纯化3次,每次获得的产品纯度均大于98%,且经Western blot分析均能与抗β₂-Glycoprotein I单克隆抗体呈阳性反应。3次纯化共获得apoH 12.56 mg,平均21 mg/L。结论 本方法重复性好、可靠性高,较传统方法更为简便和经济。     

人甲状腺过氧化物酶的提取,纯化及鉴定

目的：提取较纯的ｈＴＰＯ，为甲状腺激素合成过程的研究和建立ｈＴＰＯＡｂ检测方法提供了实验材料。方法：本文采用胰蛋白酶和脱氧胆酸钠处理手术切除人甲状腺组织，经超速离心和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－３００柱层析提纯人甲状腺过氧化物酶（ｈＴＰＯ），并进行了愈创木酚氧化法ｈＴＰＯ酶活性测定。结果：本研究获得的ｈＴＰＯ比生物活性为８．４３愈创木酚单位（ＧＵ）／ｍｇ。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定示提纯的ｈＴＰＯ在分子量１０７ｋＤ处有一清晰色带，而于９３ｋＤ处也有一色带，但较浅。结论：该方法提纯ｈＴＰＯ操作简便、快速，获得的ｈＴＰＯ较纯。     

人心肌肌钙蛋白T的纯化和初步鉴定

从人左心室心肌中成功纯化心肌肌钙蛋白。纯化过程包括匀浆。７０℃加热处理，硫酸铵盐析，咪唑盐酸缓冲液透析及ＤＥＡＥ纤维素层析。１００ｇ心肌获取ｃＴｎＴ５ｍｈ，纯度为９７．６％，其特性经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，氨基酸组分及间接ＥＬＩＳＡ法确定。     

猪心肌球蛋白及其轻,重链亚基的纯化和鉴定

采用一种改进的方法,从１００ｇ猪心室肌中提取心肌肌球蛋白３７０ｍｇ,并进一步分离和纯化其亚基成分,分别得到肌球蛋白轻链２４ｍｇ和重链２１０ｍｇ,核酸含量＜１％,不含有肌动蛋白、原肌球蛋白、肌钙蛋白及其它杂蛋白;ＳＤＳＰＡＧＥ显示,猪心肌球蛋白重链为２００～２２０ＫＤ一条带,肌球蛋白轻链则为２７ｋｄ、２１．４ｋｄ、１９ｋｄ三条带;纯化猪心肌球蛋白的Ｃａ２＋激活ＡＴＰ酶活性为０．２４μｍｏｌＰｉ／（ｍｇ·ｍｉｎ）,但其分离后的亚基则无此活性。     

人心肌肌钙蛋白T的纯化和初步鉴定

从人左心室心肌中成功纯化心肌肌钙蛋白Ｔ（ｃＴｎＴ）．炖化过程包括匀浆，７０℃加热处理，硫酸铵盐析，咪唑盐酸缓冲液透析及ＤＥＡＥ－纤维素层析，１００ｇ心肌获取ｃＴｎＴ５ｍｇ．纯度为９７．６％，其特性经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、氨基酸组分及间接ＥＬＩＳＡ法确定。     

肉苁蓉多糖的分离、纯化和鉴定

目的 分离、纯化和鉴定壮阳中药肉苁蓉Cistanche deserticola中的多糖成分。方法 经脱脂、沸水抽提、乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白得到的粗多糖，再经DEAE－Sephadex A-50离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶柱层析得到纯净的肉苁蓉多糖（CDPS），用红外光谱和紫外光谱分析鉴定该多糖。结果 红外光谱分析具有典型的多糖特征吸收峰，紫外光谱分析未见核酸和蛋白质的特征吸收峰。结论 本实验所提取的肉苁蓉多糖为单一、纯净的多糖。     

甲状腺球蛋白和甲状腺球蛋白抗体检测在甲状腺疾病中的临床应用

甲状腺球蛋白(TG)是甲状腺滤泡上皮细胞分泌的660 ku糖蛋白,由四个肽链组成,酪氨酸的碘化和碘化酪氨酸的耦联作用都是在甲状腺球蛋白的结构上进行的,溶酶体水解TG表面T4、T3并使之释放入血,同时少量的TG也释放入血,部分TG经甲状腺淋巴管分泌入血,血循环中的TG被肝脏的巨噬细胞清除.血清中TG水平与下列因素密切相关:(1)甲状腺组织或分化好的甲状腺癌组织的大小;(2)甲状腺腺体的物理损伤(如手术、活检、外伤、出血、放射线损伤)或炎症损害程度;(3)激素影响,如TSH、人绒毛膜促性腺激素及TSH受体抗体(TRAb).     

抗NGAL抗体的制备、纯化及其鉴定

目的制备出一定纯度、免疫反应性好的抗NGAL抗体。方法采用纯的NGAL蛋白免疫动物,制备抗血清,然后进行硫酸胺沉淀法纯化抗NGAL抗体,最后运用SDS-PAGE、Western blotting分别鉴定抗NGAL抗体的纯度与免疫反应性。结果硫酸胺沉淀法纯化抗NGAL,SDS-PAGE检测分析表明抗NGAL抗体的纯度大于70%,Western blotting检测分析表明抗NGAL抗体的免疫反应性良好。结论最后获得了一定纯度、免疫反应性良好的抗NGAL抗体。     

重组人甲硫氨酸硫氧化物还原酶的原核表达、纯化及鉴定

目的：表达、纯化并鉴定人甲硫氨酸硫氧化物还原酶(hMsrA)。方法：将含有hMsrA基因的重组质粒转化大肠杆菌，经诱导表达，表达蛋白主要存在于上清中，经破菌、Ni-NTA Agarose亲和层析分离纯化目的蛋白。结果：SDS-PAGE显示纯化的蛋白相对分子质量为26000的单一条带；Western-blot鉴定该纯蛋白有免疫活性；酶活性测定表明，该纯化蛋白具有还原甲硫氨酸硫氧化物的能力。结论：hMsrA能在原核体系中良好表达，经纯化后具有催化活性，为大量制备并进一步研究抗氧化剂在动脉粥样硬化中的作用提供了科学途径。     

新生C57BL/6小鼠成肌细胞体外培养、纯化和鉴定的实验研究

目的建立C57BL/6小鼠成肌细胞体外培养、纯化和鉴定的方法。方法采用Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶消化分离新生C57BL/6小鼠的成肌细胞,用Percoll分离液纯化细胞,在含15%胎牛血清的DMEM培养基中进行成肌细胞培养,倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,Desmin抗体鉴定成肌细胞。结果经过Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶消化分离,Percoll纯化的成肌细胞纯度较高,Desmin染色95%以上的细胞胞浆染色阳性。结论采用Percoll纯化、国产胎牛血清培养,可以获得高纯度的成肌细胞。     

甲状腺球蛋白及抗体在结节性甲状腺肿和甲状腺癌的鉴别诊断价值

目的回顾性分析患者术前甲状腺球蛋白（TG）及甲状腺球蛋白抗体（TGAb）的水平,探讨其在结节性甲状腺肿和甲状腺癌的鉴别诊断意义。方法选取2006年1月至2007年1月承德市中心医院普外科180例分化型甲状腺癌（differentiated thyroid carcinoma,DTC）为A组,150例结节性甲状腺肿为B组,健康人120例为对照组（C组）。所有入选对象均行甲状腺超声、甲状腺功能及甲状腺CT检查。结果A组TG和TGAb分别为40．0％和43．3％显著高于B组7．33％和9．33％及C组4．17％和7．50％,A组与B、C组之间差异有统计学意义（P〈0．05）,但B组与C组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论TG及TGAb测定在结节性甲状腺肿和甲状腺癌的鉴别诊断上有临床意义。     

冬凌草甲素提取纯化方法

目的:探讨香茶菜属植物冬凌草的主要有效成分冬凌草甲素提取纯化方法。方法:以HPLC法测定提取物中冬凌草甲素的含量为检测指标,考察影响冬凌草甲素提取分离的各种相关因素。结果:研究表明,按10 L/kg干草的比例使用80°C乙醇浸泡提取30 min得到的冬凌草浸膏是适合实验室大规模提取冬凌草甲素的方法,采用石油醚丙酮溶剂体系进行首次硅胶柱层析分离可以去除浸膏中大部分杂质,采用乙酸乙酯乙醇体系进行二次硅胶柱层析分离并加以乙醇结晶处理可以得到99%以上纯度的冬凌草甲素。结论:确定了适合实验室内较大规模提取冬凌草甲素的方法。     

重组sCR1在毕赤酵母细胞中的表达、纯化及鉴定

目的:酵母细胞SMD 1168表达人sCR1,并对重组蛋白进行纯化。方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,将其克隆入真核表达载体pPIC9K,构建含人sCR1的重组质粒(pPIC9K-sCR1);经测序鉴定正确后,将重组质粒转化入毕赤酵母菌细胞SMD 1168中,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析及W estern b lot鉴定,并通过N i2+-NTA agarose亲和层析纯化。结果:经甲醇诱导的含pPIC9K-sCR1的酵母细胞表达出重组人sCR1的融合蛋白,48~72 h sCR1融合蛋白表达量最高。此蛋白在凝胶上表现为M r大于31 KDa的蛋白区带,在W estern b lot分析中可被sCR1的CD35单克隆抗体(mAb)识别。经N i2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCR1融合蛋白。结论:人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原活性。     

兔血清白蛋白和IgG的分离纯化与鉴定

目的：以兔血清白蛋白和IgG的分离纯化与鉴定实验为例，阐述了血清蛋白制备与分析的过程。方法：使用了硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤层析、DEAE离子交换层析、亲和层析、醋酸纤维薄膜电泳、SDS—PAGE、HPLC等分离纯化鉴定蛋白质的方法。结果：制备了兔血清白蛋白和γ-球蛋白（IgG），测定被分离物质的相对分子量，鉴定纯化产品的均一性。结论：该实验作为一门生物综合性大型实验，非常有利于培养学生掌握蛋白质制备与分析的综合技能。