黑色素瘤抗原-A1基因多态性及其在肝癌组织中的表达

目的了解黑色素瘤抗原(MAGE)-A1基因在肝癌组织中的表达状况,探讨该基因是否存在单核苷酸多态性(SNP).方法用RT-PCR方法检测49例原发性肝细胞性肝癌(HCC)患者肝癌组织MAGE-A1基因mRNA的表达情况,同时提取其中43例HCC患者的肝癌组织、癌旁组织及外周血细胞基因组DNA,PCR扩增MAGE-A1 DNA,并对上述PCR产物进行测序.结果49例患者中MAGE-A1 mRNA阳性22例,阳性率44.9%.43例HCC患者癌组织、癌旁组织和外周血细胞中扩增的KAGE-A1 DNA序列测定显示MAGE-A1基因存在两类变异:TAG有16例,变异发生率为37.2%,包括3个位置的变异:C159T,A272G,G393A,GTG变异有7例,发生率为16.3%,亦包括3个位点的变异即:A272G,C991T,A1125G.因为C991T没有改变编码的氨基酸,A1125G不在编码区,故仅A272G引起一个氨基酸的替换(T32A).结论MAGE-A1在HCC中高表达,表达率为44.9%.MAGE-A1 mRNA的表达与AFP无关.MAGE-A1基因存在三种SNP,但不影响其mRNA的表达.     

肿瘤特异性肿瘤/睾丸抗原在肝癌组织中的表达

目的 研究7种主要肿瘤/睾丸(CT)抗原MAGE-1、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-10、NY-ESO-1、SSX-2、SCP-1在原发性肝细胞癌(HCC)患者癌组织中的表达、编码基因的变异状况及与临床指标的关系。 方法 收集30例肝癌患者的癌和癌旁组织,采用特异性引物逆转录聚合酶链反应检测7种CT抗原的表达,并对PCR产物进行测序分析。结果 在30例HCC患者中,MAGE-1、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-10、NY-ESO-1、SSX-2、SCP-1在癌组织中的表达率分别为66.7％、70.0％、20.0％、36.7％、40.0％、33.3％和33.3％,而癌旁没有表达。癌组织中至少表达1种、2种和3种CT抗原的阳性率分别为90.0％、70.0％和53.5％。我国肝癌表达的7种CT抗原编码基因与国外报道的相比,同源性非常高。MAGE-10和SCP-1的表达与甲胎蛋白的水平相关,MAGE-3和SSX-2表达与平均年龄相关。 结论 7种CT抗原在HCC患者癌组织中均有表达,阳性率为20.0％-70.0％,其编码基因序列高度保守。一些CT抗原的表达与临床指标存在相关性。     

OY-TES-1在肝细胞癌中的表达及抗体血清学分析

目的:了解OY-TES-1在肝细胞癌(HCC)中的表达及其抗体出现情况,探讨将OY-TES-1用于肿瘤免疫诊疗的可能性.方法:利用实时定量PCR和免疫组织化学技术,从mRNA和蛋白质两个水平研究OY-TES-1在HcC中的表达特点;采用酶联免疫吸附实验检测HCC患者及正常人血清中相应的抗体,并对其临床意义做初步的分析.结果:经实时定量PCR检测,HCC中OY-TES-1mRNA阳性率为73.21%(41/56),癌旁阳性率为64.86%(24/37),有17对HCC及配对癌旁组织均表达阳性,OY-TES-1mRNA在HCC及癌旁组织两者的表达阳性率无差异(P>0.05);在37对HCC及配对癌旁组织中,HCC中OY-TES-1mRNA水平明显高于对应的癌旁组织,其差异与病理分级有关CP<0.05).HCC中OY-TES-1蛋白阳性率为40%(4/10).血清学检测未发现76例正常人和17例肝硬化患者血清中有相应抗体,HCC患者血清抗体阳性率为20%(12/58),OY-TES-1血清抗体的出现与HCC患者的年龄、性别等临床资料无相关.结论:OY-TES-1在HCC中有较高的表达频率及表达水平,该蛋白具有较强的免疫原性,他有望作为用于HCC辅助诊断及免疫治疗的肿瘤抗原.     

癌-睾丸抗原SSX基因在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的: 检测癌-睾丸抗原SSX1-5 mRNA在肝细胞癌(HCC)组织中的表达, 探讨其用于HCC免疫治疗的可能性.方法: 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术, 检测61例HCC组织及52例配对的HCC癌旁组织中SSX1-5 mRNA, 结合临床相关指标进行统计学分析. 随机抽取PCR阳性产物进行DNA测序.结果: SSX1、SSX2、SSX4和SSX5 mRNA在HCC中的表达率分别为42.6%(26/61)、8.2%(5/61)、39.3%(24/61)和6.6%(4/61);未检测到SSX3的表达. 在癌旁组织中, 未检测到SSX1-5 mRNA;HCC组织中, 至少表达1个SSX基因者达50.8%(31/61);表达2个或2个以上者达32.8%(20/61), 表达3个或3个以上者达9.8%(6/61), 同时表达4个者达3.3%(2/61). SSX的表达与临床相关指标关系的分析结果显示:门静脉癌栓形成与SSX1的表达、患者的年龄与SSX4的表达均具有显著性差异( P<0.05);DNA测序证实PCR阳性产物为目的基因.结论: SSX1、SSX2、SSX4和SSX5在HCC组织中表达频率不尽相同, 但具有较强的特异性, 提示有可能成为HCC免疫治疗的靶抗原.     

肿瘤-睾丸抗原SPANX-C基因mRNA在肝细胞癌中的表达及HLA-A2限制性CTL表位的预测

目的:检测肿瘤-睾丸抗原SPANX-C基因在肝细胞癌(HCC)中的表达,预测SPANX-C/HLA-A2限制性CTL表位.为HCC的免疫治疗寻找新的靶位.方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对HCC患者癌组织、相应癌旁组织和对照组织(肝硬化和正常肝组织)中的SPANX-C基因mRNA进行检测,随机选取RT-PCR阳性扩增产物进行序列测定;用超基序法和量化基序法联合预测SPANX-C/HLA-A2限制性CTL表位.结果:在所检测的115例HCC组织中有70例(60.9%)表达SPANX-C基因mRNA,癌旁组织和20例对照肝组织均不表达.SPANX-C基因的表达与肿瘤分期、肿瘤分化程度、血清甲胎蛋白(AFP)水平等临床指标无相关性(P>0.05).用基序预测法筛选出5个HLA-A2限制性CTL表位(9肽),其中SPANX-C51-59(LVVRYRRNV)与HLA-A2分子具有较高结合力.结论:SPANX-C基因mRNA在HCC组织中呈高频率特异性表达,并存在HLA-A2限制性CTL表位,有望用于HCC的免疫治疗.     

黑色素瘤抗原基因MAGE-A1在直肠癌组织的表达

[目的]检测黑色素瘤抗原基因MAGE-A1在直肠癌组织中的表达,探索其与直肠癌临床病理的关系及其在直肠癌免疫治疗中的应用价值。[方法]采用RT-PCR法,对66例直肠癌患者的癌组织、癌旁"正常"黏膜组织和手术切缘组织(乙状结肠端)以及3例直肠息肉标本(无瘤)的MAGE-A1的表达情况进行检测,并对RT-PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA测序验证。[结果]66例直肠癌患者的直肠癌组织、癌旁"正常"黏膜组织、手术切缘组织MAGE-A1基因的表达阳性率分别为30.30%(20/66)、12.12%(8/66)、12.12%(8/66),3例直肠息肉标本未见MAGE-A1表达。肿瘤组织MAGE-A1基因表达阳性率均显著高于癌旁"正常"黏膜组织、手术切缘组织(P0.05);而与年龄、性别、组织学类型、Dukes分期及淋巴结转移无关(P0.05)。[结论]基于MAGE-A1基因在直肠癌中的高表达率,MAGE-A1表达蛋白可以作为一种有前途的靶点用于免疫治疗,同时有望成为一种筛查和随访指标。     

p14ARF、ARF-BP1及c-myc mRNA在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨肝细胞癌组织中p14ARF、ARF-BP1 及c-myc的mRNA表达及其与临床参数关系.方法:采用半定量逆转录.聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,对52例HCC组织及其中45例相应癌旁组织p14ARF、ARF-BP1及c-myc的mRNA表达丰度进行检测并分析他们之间的关系及其与临床参数的关系.结果:在52例HCC组织中p14ARF、ARF-BP1c-myc的mRNA各表达77.0%、77.0%和75.0%,与45例相应癌旁组织(11.1%、20.O%、53.3%)比较,呈高表达.p14ARF、ARF-BP1 mRNA的表达与肿瘤大小有关(t=2.169,2.087,均P＜0.05);而c-myc mRNA表达与肿瘤大小无关.p14ARF、ARF-BP1及c-myc的mRNA表达在性别、年龄、AFP、临床病理分级、浸润转移、HBV、包膜等无统计学差异.p14ARF与ARF-BP1、p14ARF与c-myc及ARF-BP1与c-myc的mRNA表达两两成正相关(r=0.565,0.436,0.584,均P＜0.01).结论:p14ARF、ARF-BP1、c-myc过度表达可能是HCC发生的早期指标;ARF-BP1过度表达可能是影响HCC发生、发展的关键,干预ARF-BP1可能是治疗HCC的新途径.     

精氨酸酶1在肝细胞癌中的表达及其临床病理意义

目的 检测人类精氨酸酶1(ARG1)在肝细胞癌(HCC)中的表达,分析其与患者临床病理特征的关系.方法 利用高通量组织芯片技术和免疫组织化学方法评价167例HCC及癌旁肝组织中ARG1蛋白的表达情况,采用x2检验和Spearman秩相关分析ARG1蛋白表达与各临床病理特征间的关系.应用实时荧光定量PCR方法检测68例HCC及其癌旁肝组织中的ARG1 mRNA表达水平.结果 HCC中ARG1蛋白表达水平为3.540±3.702,明显低于癌旁肝组织(10.290±2.303;t=-22.421,P=0.000).ARG1表达与HCC分化程度、组织学分级、微血管侵犯、术前甲胎蛋白水平、术后复发有关(P值均＜0.05).68例HCC组织中ARG1 mRNA表达水平为0.0997(0.213),低于癌旁肝组织0.563(0.459);u=-6.544,P=0.000].结论 ARG1在HCC中低表达,其可能参与HCC发生发展.检测ARG1表达可能有助于HCC辅助诊断、评估分化程度及预后判断.     

蛋白翻译起始因子C_2在原发性肝细胞肝癌中表达的意义

目的研究C_2mRNA及其蛋白在原发性肝细胞肝癌(HCC)中的表达及意义。方法用原位杂交检测C_2mRNA住21例HCC及其癌旁组织中的表达,ABC免疫组化法检测C_2蛋白在60例HCC及其42例癌旁组织中的表达,Western blot法检测C_2蛋白在HCC及其癌旁组织中的表达。结果 21例HCC及其癌旁组织中,C_2mRNA阳性率分别占23.8％(5/21)和85.7％(18/21),60例HCC及42例癌旁组织中,C_2蛋白阳性分别占27.3％(17/60)和83.3％(35/42),27例肝硬变中,C_2蛋白阳性率为77.8％(21/27)。χ~2检验:C_2mRNA及其蛋白在HCC癌旁组织中表达明显高于癌组织(P<0.001);C_2蛋白在肝硬变中的表达明显高于HCC癌组织(P<0.01);C_2的表达与患者年龄、HBsAg及AFP有明显关系(P<0.05);而与癌组织的分化程度、肿瘤大小、淋巴转移无关;Western blot与免疫组化结果一致。结论 C_2基因表达下调可能与HCC的发生、发展及早期诊断有关。     

lncRNA-SChLAP1在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的探究lncRNA-SChLAP1在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义。方法收集经手术切除的92例HCC标本及46例癌旁肝组织标本,采用RT-PCR方法检测SChLAP1的mRNA表达水平,分析其与临床病理学参数及生存期的相关性。结果 SChLAP1在HCC组织中的表达水平明显高于癌旁肝组织,差异有统计学意义(P0.05)。SChLAP1的高表达率与肿瘤大小、临床分期、是否有门脉癌栓明显相关。门脉未侵犯组、早期组和晚期组患者行组内比较显示,SChLAP1高表达者的无病生存率和总生存率均低于低表达者。SChLAP1高表达是HCC患者预后不良的独立风险因子。结论 lncRNA-SChLAP1可作为评估HCC预后不良的潜在标志物。     

肿瘤-睾丸抗原MAGE-1、MAGE-3、SSX-2及NY-ESO-1在胃癌中的表达

目的　检测肿瘤 睾丸 (cancer testis ,CT)抗原MAGE 1、MAGE 3、NY ESO l及SSX 2基因mRNA在胃癌组织中的表达 ,探索其在胃癌免疫治疗中的应用价值。方法　用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法对胃癌患者癌组织、相应癌旁组织和对照组织(慢性胃炎和正常胃组织 )中的MAGE 1、MAGE 3、NY ESO 1及SSX 2基因mRNA进行检测 ,结合临床指标进行分析 ,随机选取RT PCR阳性扩增产物进行序列测定。结果　在在检测的 5 0例胃癌组织中 ,MAGE 1、MAGE 3、NY ESO 1及SSX 2基因mRNA阳性率分别是 48% (2 4/5 0 )、42 % % (2 1/5 0 )、11% (6/5 0 )和 8% (4 /5 0 ) ;多个CT抗原基因mRNA在胃癌中同时表达 ,至少表达一种CT抗原者达76% (3 8/5 0 ) ,表达两种或两种以上者为 40 % (2 0 /5 0 ) ,表达三种或三种以上者为 10 % (5 /5 0 ) ,同时表达四种者为 6% (3 /5 0 )。而相应的癌旁组织和对照组织中均未检测到四种目的基因的表达。DNA测序结果表明RT PCR产物确为这四种基因的目的片段。MAGE 1、MAGE 3、NY ESO 1及SSX 2基因的表达与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、浸润深度和淋巴结转移等无显著相关性 (P >0 .0 5 )。结论　CT抗原 (MAGE 1、MAGE 3、NY ESO 1及SSX 2 )基因在胃癌组织中呈高特异表达 ,这使得以这些基因编码的蛋     

MIF与JNK1在原发性肝细胞癌中的表达及相关性研究

目的研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和c-Jun氨基末端蛋白激酶1(JNK1)蛋白在肝细胞癌(HCC)组织和HepG2肝癌细胞中的表达,并探讨二者的相互关系。方法选择有乙肝肝硬化基础的HCC患者52例,取手术切除的癌组织及相应的癌旁组织为实验组,另选取20例肝血管瘤、肝破裂手术切除的肝组织标本作正常对照,应用免疫组织化学法检测MIF、JNK1和pJNK1的表达;原位杂交法检测MIF mRNA和JNK1 mRNA表达。将不同浓度的rMIF分别与HepG2肝癌细胞和L-O2人正常肝细胞共培养,通过Western blotting法检测JNK1和pJNK1蛋白的表达,通过RT-PCR检测相应蛋白在核酸水平的表达。结果 MIF、JNK1、pJNK1和MIF mRNA、JNK1 mRNA在HCC癌组织和癌旁组织中的阳性表达率均明显高于正常肝组织(P均0.05);经不同浓度的rMIF刺激后,HepG2肝癌细胞中pJNK1和JNK1mRNA的相对表达量均呈浓度依赖性升高,尤以rMIF浓度为200 ng/ml升高最明显,与L-O2细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论 MIF、MIF mRNA、JNK1、JNK1 mRNA、pJNK1在HCC组织和HepG2肝癌细胞中均呈高表达,MIF参与HCC进展,可能是通过激活JNK1信号通路来实现的。     

肝细胞癌中ZHX2 mRNA的表达及其临床意义的研究

目的探讨转录抑制因子ZHX2(zinc-fingers and homeoboxes 2,ZHX2)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其与转移的关系.方法通过RT-PCR方法,检测35例HCC癌组织及相应癌旁组织和8例正常肝组织中ZHX2 mRNA的表达,并分析其与临床病理参数的关系.结果 HCC癌组织中ZHX2 mRNA的表达率明显低于癌旁组织与正常肝组织(P<0.05).术中发现伴随转移的HCC癌组织中ZHX2 mRNA的阳性表达率明显低于无转移的HCC(P<0.05).ZHX2 mRNA的表达与血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)水平呈负相关(P<0.05),而与年龄、性别、HBsAg感染、肿瘤直径、分化程度、是否伴随肝硬化无明显关系.结论 ZHX2低表达与HCC转移密切相关,并与AFP的高表达有关.     

HBV感染对肝细胞癌生物学行为及APE1表达的影响

[目的]检测乙型肝炎病毒(HBV)HBsAg和HBV DNA在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达,探讨HBV标志物协同脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(APE1)表达与HCC侵袭转移的关系及意义。[方法]利用免疫组织化学、原位核酸杂交和组织芯片技术,分别检测HCC 130例(HCC组)、肝内外转移灶29例(转移组)、癌旁肝脏组织96例(距肿瘤2cm,癌旁组)、远癌肝脏组织(距肿瘤5cm,远癌组)46例、肝良性肿瘤的瘤旁肝组织5例(正常组)中HBsAg和HBV DNA的表达,并结合各临床病理参数分析其与各指标之间的关系及意义。[结果]HBV蛋白与HBV DNA在癌旁组、远癌组中的表达明显高于HCC组和转移组,差异具有统计学意义(P0.001)。除HBsAg表达与APE1mRNA存在负相关,差异具有统计学意义(P=0.014)外,其余各指标之间均无相关(P0.05)。[结论]HBsAg表达与APE1mRNA存在负相关,HBV感染可抑制APE1的表达。     

c-myb在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的 研究c-myb基因在HCC组织中的表达,探讨其在HCC发生、发展中的作用及临床意义.方法 应用免疫组织化学法检测55例HCC组织、55例癌旁组织、12例肝硬化组织和11例正常肝组织中c-myb蛋白表达情况.结果 癌组织相对于正常的肝组织,癌旁组织相对于肝硬化组织,c-myb蛋白的表达明显增高(P=0.000).结论 提示,c-myb过表达是HCC发病中的早期事件,在HCC的发生、发展中可能起重要作用,检测c-myb的表达具有一定的临床意义.     

原发性肝细胞癌GOLM1基因异常表达和相关miRNA和lncRNA预测

目的通过GOLM1(GP73)在原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达,分析其作为HCC诊断标志物的可行性,并预测其相关RNA。方法分析在线数据库HCC中GOLM1 mRNA表达,用含90对HCC组织和癌旁正常组织的组织芯片和免疫组化方法检测GOLM1蛋白表达;用TCGA转录组数据预测GOLM1相关的miRNA和lncRNA。结果 HCC中GOLM1 mRNA的表达高于癌旁正常组织,与HCC患者临床分期、肿瘤分级和总生存时间相关。GOLM1蛋白在HCC与癌旁组织中的表达差异无统计学意义(P 0. 05)。生物信息学分析预测到与GOLM1存在可能调控关系的lncRNA 6个、miRNA 48个。结论 GOLM1 mRNA可作为HCC的诊断和预后标志物,成功预测到与GOLM1相互作用的lncRNA 6个、miRNA 48个。     

肝细胞癌组织中PPARα mRNA的表达规律及其意义

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(pemxisome proliferator activated receptor α,PPARα)mRNA在肝细胞癌(HCC)中的表达规律及其临床意义.方法 通过荧光定量PCR法测定22例患者HCC组织及相对应的癌旁组织PPARα mRNA表达变化.结果 79.4%(17/22)HCC组织PPARα mRNA表达显著低于癌旁组织(P＜0.05).结论 HCC组织中PPARα mRNA表达下调,这种变化可影响肝细胞的脂质代谢过程,与HCC的发展可能有关,可作为判断HCC预后的一种预测性指标.     

肝细胞癌癌组织Hic-5和COL1A1表达及其对术后生存的预测价值*

目的 探讨肝细胞癌(HCC)组织氧化氢诱导的克隆基因-5(Hic-5)和I型胶原α1链(COL1A1)表达及其对HCC患者术后生存时间的预测价值。方法 2013年9月～2016年7月我院行肝癌切除术的HCC患者97例,术后取癌组织和癌旁肝组织。采用RT-PCR法和免疫组化法分别检测组织Hic-5和COL1A1 mRNA和蛋白表达。随访3年。结果 HCC患者癌组织Hic-5蛋白表达阳性率为53.6%,显著高于癌旁组织(16.5%,P＜0.05),其mRNA阳性率为66.0%,也显著高于癌旁组织(25.8%,P＜0.05);HCC患者癌组织COL1A1蛋白表达阳性率为71.1%,显著高于癌旁组织(25.8%,P＜0.05),其mRNA阳性率为78.4%,也显著高于癌旁组织(30.9%,P＜0.05);TNM Ⅰ～Ⅱ期患者癌组织Hic-5 mRNA阳性率为56.4%,显著低于Ⅲ～Ⅳ期者(78.6%,P＜0.05),COL1A1 mRNA阳性率为70.9%,也显著低于Ⅲ～Ⅳ期者(88.1%,P＜0.05),存在门静脉癌栓患者癌组织Hic-5 mRNA阳性率为82.5%,显著高于无门静脉癌栓者(54.4%,P＜0.05),COL1A1 mRNA阳性率为90.0%,显著高于无门静脉癌栓者(70.2%,P＜0.05);随访的87例患者生存时间为8.2~36.0个月,中位生存时间为36.0(14.6,36.0)个月;癌组织Hic-5阳性表达患者3 a生存时间为26.3(16.1,36.0)月,显著短于Hic-5阴性者【36.0(30.6,36.0),P＜0.05】,3 a无事件生存时间为21.4(11.7,36.0)月,也显著短于Hic-5阴性者【36.0(24.2,36.0),P＜0.05】。结论 HCC患者癌组织Hic-5阳性表达预示术后生存时间缩短,其原因可能与肿瘤分期差或门静脉存在癌栓有关。     

磷脂酰肌醇蛋白多糖-3在肝癌组织中的表达及其临床病理学特征

目的:分析人肝细胞癌(HCC)组织中磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC-3)的表达、胞内分布及其临床病理学特征.方法:以自身配对法分别收集36例HCC患者经手术切除后的癌灶、癌旁和远癌组织,以免疫组织化学法检测组织中GPC-3表达及胞内分布与临床病理学特征.结果:HCC的癌灶组织GPC-3表达于胞质和细胞膜;癌旁组织GPC-3阳性表达主要定位于胞质,而远癌组织未见明显表达.癌灶组织GPC-3表达强度明显高于癌旁和远癌组织(X2=11.445,P<0.01),表达阳性率分别为80.6%、41.7%和0.结论:HCC组织GPC-3过表达与其的发生、发展密切相关.     

原发性肝细胞癌组织中Ang-2的表达及意义

采用逆转录聚合酶链反应和免疫组化PowerVision两步法检测60例原发性肝细胞癌患者癌组织和癌旁组织中的血管生成素(Ang)-2,并分析其与肝癌临床病理参数的关系.结果 癌组织中Ang-2 mRNA(1.21±0.19)和蛋白表达水平(60.0%)均高于癌旁肝组织(1.02±0.20,25.0%),且其表达与原发性肝细胞癌的组织学分级、侵袭性、是否伴有肝硬化及是否感染HBsAg相关(P均＜0.05).认为Ang-2能够促进原发性肝细胞癌的生长、转移和侵袭,检测Ang-2表达有助于肝癌的预后评估.