脐血单个核细胞颈内动脉输注对血管性痴呆大鼠学习记忆能力和海马神经元突触可塑性的干预

目的:以主动回避反应和脑海马齿状回长时程增强为指标,观察颈内动脉输注脐血单个核细胞后血管性痴呆大鼠学习记忆能力和脑海马神经元突触可塑性的变化。方法:实验于2005-03/07在解放军第三军医大学生理教研室和大坪医院野战外科研究所完成。选取清洁级24月龄Wistar大鼠36只,随机分为正常对照组、模型对照组、脐血单个核细胞组,12只/组。选取解放军第三军医大学大坪医院产科的健康足月妊娠产妇(产妇均签署知情同意书),无菌条件下穿刺脐静脉,收集胎盘脐血后体外分离脐血单个核细胞。模型对照组、脐血单个核细胞组应用改良Pulsinellis四血管阻断法建立血管性痴呆大鼠模型,正常对照组不进行椎动脉烧灼和颈总动脉夹闭。造模后24h脐血单个核细胞组颈内动脉输注5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记的脐血单个核细胞6×109L-1,正常对照组和模型对照组输注等量生理盐水。采用电脑控制的穿梭箱系统和海马齿状回长时程增强系统检测各组大鼠学习记忆能力及其电生理的改变。结果:实验选用36只大鼠,全部进入结果分析。①造模后4,8周各组大鼠主动回避反应率的比较:与正常对照组比较,模型对照组明显降低[(90.0±4.3)%,(42.5±5.0)%;(92.5±5.0)%,(45.8±3.6)%;P均<0.01];与模型对照组比较,脐血单个核细胞组显著提高(P均<0.01)。②造模后4,8周各组大鼠脑海马齿状回长时程增强诱导率的变化:模型对照组诱导率较正常对照组均明显降低(91%,17%,χ2=13.59,P<0.01;91%,25%,χ2=10.97,P<0.01);脐血单个核细胞组诱导率较模型对照组显著提高(χ2=4.44,P<0.05;χ2=4.20,P<0.05)。③各组造模后不同时间给予高频刺激后群体电位振幅的变化:造模后4,8周模型对照组较正常对照组均明显降低(P均<0.01);脐血单个核细胞组较模型对照组均显著提高(P均<0.01)。④各组高频刺激前后脑海马齿状回长时程增强潜伏期的变化:造模后4,8周模型对照组较正常对照组均明显延长(P均<0.01);脐血单个核细胞组较模型对照组均显著缩短(P均<0.05)。结论:慢性脑缺血可使大鼠脑海马齿状回长时程增强的诱导率、群体电位的振幅和潜伏期呈显著下降趋势,引起大鼠认知功能的损害,而颈内动脉输注脐血单个核细胞可显著易化脑海马齿状回神经元突触的可塑性,改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力。     

脑缺血大鼠缺血同侧海马齿状回突触可塑性的变化

目的：观察缺血性脑损伤对缺血同侧海马齿状回突触可塑性的影响。 方法：实验于2005-06／2005-08在中国科技大学生命科学院神经毒理实验室完成。24只雄性Wistar大鼠分为假手术2周组和缺血2周组两组，采用热凝闭大鼠大脑中动脉致局灶性脑缺血模型，待大鼠苏醒后（术后3h）及2周后分别观察大鼠行为表现并进行神经功能缺损评分。模型制作14d后进行海马齿状回区反应波形测定和实验参数测定，观察缺血同侧海马齿状回区的I／O曲线，缺血同侧海马齿状回区长时程增强，缺血同侧海马齿状回区长时程抑制。 结果：2组各12只大鼠均进入结果分析。假手术组有9只大鼠引出反应波形，缺血组有8只大鼠引出反应波形，排除过高或过低数值，每组有6只大鼠进人数据分析。①缺血2周后缺血同侧海马齿状回兴奋性突触后电位的I／O曲线幅度显著降低（F=43．95，P〈0．05），群峰电位的I／O曲线幅度也显著降低（F=4．58，P〈0．05）。②兴奋性突触后电位的长时程增强幅度在假手术组为（109．0&;#177;3．8）％，缺血2周后升高为（114．0&;#177;1．9）％（F=13．79，P〈0．05）。群峰电位的长时程增强幅度在假手术组为（201&;#177;13）％，而在缺血组群峰电位的长时程增强幅度明显降低为（179．0&;#177;13）％（F=4．56，P〈0．05）。③兴奋性突触后电位的长时程抑制幅度在假手术组为（98．7&;#177;3.4）％，缺血2周后明显降低为（89．0&;#177;3．5）％（F=18．95，P〈0．05）。群峰电位的长时程抑制幅度在假手术组为（84．7&;#177;5．3）％，而在缺血组群峰电位的长时程抑制幅度为（85．6&;#177;3．9）％，与假手术组无明显区别（F=0．63，P〉0．05）。 结论：脑缺血降低了海马齿状回区基本的突触传递，同时降低单脉冲刺激海马穿通纤维引起的齿状回颗粒细胞的共同发放幅度；缺血损伤了海马齿状回区群峰电位的长时程增强诱导，而对兴奋性突触后电位的长时程增强诱导有促进作用；缺血损伤了海马齿状回区兴备性突触后电位的长时程抑制诱导，而对群峰电位的长时程抑制诱导没有明显影响。     

人脐血细胞静脉输注对血管性痴呆大鼠血清神经元特异性烯醇化酶及S-100蛋白的作用术

目的：观察静脉输注人脐血细胞对血管性痴呆大鼠的行为学改善以及对血清脑特异性蛋白的影响。 方法：实验于2003-03／2005-12在解放军第三军医大学野战外科研究所中心实验室完成。①选择2003—10／2004-12解放军第三军医大学大坪医院妇产科住院的80例健康足月妊娠产妇，非高危妊娠，正常顺产，新生儿四肢活动良好，由产妇及家属填写知情同意书，用于脐血的采集。②选取清洁级11～13个月的老龄SD大鼠90只，随机数字表法分为假手术组、模型对照组、人脐血细胞治疗组，30只／组。③模型对照组、人脐血细胞治疗组大鼠以改良的Pulsinelli’s四血管阻断法建立血管性痴呆动物模型。假手术组处理步骤相同，但不进行椎动脉烧灼和颈总动脉夹闭。人脐血细胞治疗组在造模后3h内通过尾静脉注射给予人脐血细胞，浓度为3&;#215;10^9L^-1，注射500L。模型对照组、假手术组给予等量生理盐水。④各组大鼠分别于造模后2，4，8周采用电脑控制穿梭箱系统对大鼠学习记忆能力进行检测，10只／时相点。用ELISA法测定大鼠血清中神经元特异性烯醇化酶和S-100蛋白含量。 结果：实验选取11～13月龄的SD大鼠90只，全部进入结果分析。①造模前后各组大鼠学习记忆能力检测结果：造模前各组大鼠主动回避反应百分率无明显差异（P〉0．05）。造模后2，4，8周，模型对照组．人脐血细胞治疗组主动回避反应百分率均明显低于假手术组（P〈0．01）：但人脐血细胞治疗组高于模型对照组（P〈0．01）。②造模后各组大鼠血清神经元特异性烯醇化酶含量检测结果：与模型对照组比较，人脐血细胞治疗组术后2周血清神经元特异性烯醇化酶含量显著降低（P〈0．05）．术后4，8周明显升高（P〈0．05）。③造模后各组大鼠血清S-100蛋白含量检测结果：与模型对照组比较，人脐血细胞治疗组术后各时相点S-100蛋白血清含量均显著降低（P〈0．01），与假手术组基本相似（P〉0．05）。 结论：静脉输注人脐血细胞可明显改善血管性痴呆大鼠的行为学指标，提示人脐血细胞治疗对脑组织细胞具有一定的保护作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对海马伞切断大鼠海马神经的影响

目的 了解碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对海马伞切断造成的阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马齿状回神经发生的影响，探讨bFGF治疗AD的前景。方法 36只SD大鼠随机分成正常对照组(n=12)、AD对照组(n=12)和AD处理组(n=12)。AD处理组及AD对照组大鼠左侧海马伞切断制造AD模型；正常对照组注射生理盐水。AD处理组造模后每天侧脑室注射bFGF共7d；AD对照组及正常对照组同时间注射生理盐水。BrdU标记增殖细胞。TUNEL方法标记DNA片段。原位检测凋亡细胞。计数海马齿状回BrdU阳性细胞与凋亡细胞数。结果 AD处理组大鼠与AD对照组大鼠相比，海马齿状回BrdU阳性细胞增加[两组在颗粒细胞层阳性细胞分别为(163&;#177;37)，(53&;#177;5)个／切片平面；海马门(28．5&;#177;5．5)，(12．3&;#177;2．8)个／切片平面；分子层(10．7&;#177;2．2)，(6．0&;#177;1．4)个／切片平面]，差异有非常显著性意义(F=103．4，83．4，33．4,P&;lt;0．01)，而凋亡细胞差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。AD对照组大鼠与正常对照组大鼠相比，海马齿状回BrdU阳性细胞数及凋亡细胞差异均无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论 bFGF可刺激AD模型大鼠海马神经发生。     

行为学训练对大鼠海马梗死后齿状回区神经干细胞迁移能力的影响

目的 研究行为学训练对大鼠海马梗死后齿状回区多聚唾液酸神经细胞黏附分子（PSA-NCAM）表达及对神经干细胞迁移能力的影响。方法 将68只SD大鼠随机分为训练组（32只）、制动组（32只）及正常对照组（4只）。采用光化学法将训练组及制动组大鼠制成单侧海马区梗死模型，训练组大鼠于造模1 d后给予水迷宫训练，制动组大鼠于造模1 d后给予制动处理，观察各组大鼠海马齿状回区及梗死灶周围PSA-NCAM在不同时间点（实验后3，7，14，21，28，35，42及49 d）的表达情况。结果 正常对照组大鼠海马齿状回区PSA-NCAM有一定程度表达；与正常对照组比较，训练组在3，7，21及28 d时及制动组在14 d时其梗死侧齿状回区PSA-NCAM表达均有显著增高（P〈0．05）；而且训练组大鼠3，7，21及28 d时的PSA-NCAM表达显著高于制动组（P〈0．05）。训练组梗死灶对侧齿状回区PSA-NCAM表达在28 d及35 d时均明显高于正常对照组（P〈0．05），并且在第28天时也明显高于同期制动组（P〈0．01）。制动组及训练组大鼠脑梗死灶周边区均未见PSA-NCAM表达。结论 行为学训练能显著增强PSA-NCAM在脑梗死大鼠海马齿状回区的表达，而且还可增强神经干细胞的迁移能力，促进神经功能恢复。     

D-半乳糖对大鼠空间学习记忆行为与脑海马结构电生理以及突触形态学的影响

背景：学习记忆障碍是衰老的主要表现之一，D-半乳糖致衰老模型是近年来常用的动物模型，长期D-半乳糖处理可引起动物神经细胞形态学的改变。目的：对D-半乳糖引起拟衰老改变时大鼠的空间学习记忆行为进行观察，并结合其体内诱导海马齿状回长时程增强以及海马CA，区突触形态学的变化予以探讨。设计：随机对照观察。单位：上海第二医科大学解剖学教研室，上海中医药大学生理学教研室。材料：实验于2000-08／2001—04在上海中医药大学生理学教研室完成。选取3月龄雄性Wistar大鼠22只，随机分正常组和D-半乳糖组，11只／组。D-半乳糖（上海化学试剂二厂），Morris水迷宫（上海中医药大学老年所提供，自制）。方法：正常组每天皮下注射生理盐水1mL，D-半乳糖组每天皮下注射D-半乳糖800mg／kg，连续给药6周。大鼠空间学习记忆行为以Morris水迷宫潜伏期作为判定标准；应用体内记录单脉冲刺激穿通纤维在海马齿状回诱发的群体电位，测量高频刺激前后单脉冲刺激诱发的电位幅值变化，将高频刺激前的记录作为基线值，进行组间比较；应用透射电镜结合图像分析对大鼠海马CA，区突触形态结构进行观察。水迷宫潜伏期采用重复测量设计的方差分析，长时程增强各时段群体电位峰值潜伏期的组间差异采用t检验，长时程增强的诱导率用x^2检验，用XY-540型生物图像处理系统对电镜突触照片进行测量，对所得数据进行t检验。主要观察指标：①主要结局：Morris水迷宫潜伏期测试成绩以及长时程增强诱导率、群体电位的变化。②次要结局：海马CA，区突触形态结构的变化。结果：实验纳人大鼠22只，水迷宫测试中无脱落，其后在电生理实验中正常组和D-半乳糖组各有1只死亡，最后每组随机抽取3只用于电镜观察。①两组Morris水迷宫潜伏期成绩的比较：与正常组比较，D-半乳糖组寻找水下平台潜伏期明显延长[（14．77&;#177;10．10），（51．36&;#177;12．45）s，P〈0．05]。②高频刺激前正常组与D-半乳糖组海马齿状回诱发电位的比较：两组群体电位幅值及群体电位潜伏期均无明显差异[（1．05&;#177;0．47），（0．91&;#177;0．41）mV；（5．46&;#177;2．09），（5．38&;#177;2．26）ms；P〉0．05]。③两组齿状回长时程增强诱导率比较：与正常组比较，高频刺激后D-半乳糖组明显降低（80％，20％，x^2=7．20，P〈0．01）。④两组高频刺激后不同时间段的群体电位比值的比较：与正常组比较，D-半乳糖组于高频刺激后20，30，60min均明显降低（1．104&;#177;0．196，0．919&;#177;0．162；1．354&;#177;0．212，0．999&;#177;0．219；1．236&;#177;0．174，0．875&;#177;0．311；P〈0．05）。⑤两组大鼠海马CA3区突触结构各参数的比较：与正常组比较，D-半乳糖组海马CA，区突触后致密物厚度变薄[（40．60&;#177;18．26），（26．35&;#177;8．15）nm，P〈0．051，突触间隙宽度增大[（17．69&;#177;6．28），（26．95&;#177;5．67）nm，P〈0．05]，突触活性区长度缩短[（265．13&;#177;76．50），（229．13&;#177;90．68）nm，P〈0．05]。结论：皮下注射D-半乳糖可损害大鼠的空间学习记忆能力，降低大鼠在体海马齿状回长时程增强诱导率，使长时程增强增幅降低，并可显著影响大鼠脑海马CA，区的突触超微结构。提示D-半乳糖对大鼠海马齿状回长时程增强诱导的抑制和对CA，区突触形态结构的影响，是其导致空间学习记忆行为障碍的基础。     

运动训练结合电针治疗对脑缺血再灌注大鼠海马齿状回区巢蛋白表达的影响

目的探讨运动训练结合电针治疗对脑缺血再灌注大鼠海马齿状回区巢蛋白表达的影响。方法54只Wistar大鼠随机分为造模对照组（A组）、运动训练组（B组）和运动训练结合电针治疗组（c组），采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，大脑中动脉阻塞lh，再灌注7，14和21d，应用免疫组织化学方法分别检测各组大鼠缺血侧和对侧海马齿状回区巢蛋白的表达情况。结果3组大鼠均表现为7d时的海马区阳性细胞最多。而且在各时间点的缺血侧海马DG区的巢蛋白阳性细胞数均明显多于对侧DG区（P〈0．01）。7，14和21d时，c组和B组大鼠缺血侧海马区巢蛋白阳性细胞较A组明显增多，差异有统计学意义（P〈0．01），7d和14d时，c组大鼠缺血侧海马区巢蛋白阳性细胞较B组亦明显增多（P〈0．01）。结论脑缺血再灌注大鼠海马区巢蛋白阳性细胞的增多存在时间规律及原位增殖特性，运动训练和电针治疗可显著增加巢蛋白阳性表达的数量。     

叶酸对2型糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的：观察长期补充叶酸对2型糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的影响并分析其作用机制. 方法：实验于2004—05／10在泰山医学院机能实验室完成。选择SPF级5周龄雄性Wistar大鼠62只，51只大鼠采用膳食诱导加小剂量链脲佐菌素制备2型糖尿病大鼠模型，并设立普通饲料饲养的大鼠11只为正常对照组。将2型糖尿病模型造模成功的37只大鼠随机数字表法分为模型对照组（12只）、小剂量叶酸组（12只）和大剂量叶酸组（13只）。补充叶酸11周后，剪尾采血分别检测血清一氧化氮（硝酸还原酶法）、超氧化物歧化酶（黄嘌呤氧化酶法）及丙二醛（硫代巴比妥酸法）水平；取心肌标本，采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的地高辛标记的duTP缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡，采用免疫组织化学链霉亲和素-生物素复合物法检测心肌组织Bcl-2，Bax和Fas蛋白表达。 结果：纳入动物62只，造模成功37只，48只进入结果分析。①补充叶酸11周后，小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠血清一氧化氮水平较模型对照组有明显增高[分别为（28．77土6．71），（29．62土6．55），（22．95土5．22）μnol／L，P均〈0．05]，血清超氧化物歧化酶水平亦较模型对照组有明显增高[分别为（6．15土0．64），（5．97土0．56），（5．27&;#177;0．94）nkat／L，P〈0．01，0．05]，而血清丙二醛水平较模型对照组明显降低[分别为（11．24&;#177;3．52），（10．97&;#177;4．59），（18．95&;#177;4．59）nmol／L，P均〈0．01]。（2）模型对照组、小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠心肌细胞凋亡率均较正常对照组明显增加[分别为（8．28&;#177;1．06）％。（4．25&;#177;0．63）％，（2．27&;#177;0．86）％，（0．72&;#177;0．37）％，P均〈0．01]，小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠心肌细胞凋亡率均较模型对照组明显降低（P均〈0．01），大剂量叶酸组大鼠心肌细胞凋亡率又较小剂量叶酸组进一步降低（P〈0．05）。（3）模型对照组、小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠心肌细胞Bcl-2蛋白阳性表达的平均吸光度值（A）均较正常对照组明显增加（分别为230．15&;#177;4．50，236．24&;#177;7．75，241．58&;#177;5．83，224．51&;#177;3．01，P〈0．05或P〈0．01），小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠心肌细胞Bcl-2蛋白阳性表达的平均吸光度值均较模型对照组明显增加（分别为P〈0．05和P〈0．01），大剂量叶酸组大鼠心肌细胞Bel-2蛋白阳性表达的平均吸光度值又较小剂量叶酸组进一步增加（P〈0．05）；模型对照组、小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠心肌细胞Bax，Fas蛋白阳性表达的平均吸光度值均较正常对照组明显增加（分别为234．76&;#177;5．66,226．73&;#177;7．24,220．16&;#177;5．44，214．38&;#177;5．23；247．25&;#177;6．29，239．09土6．10，233-43&;#177;7-41，226．29&;#177;4．70，P〈0．01或P〈0．05），但小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠心肌细胞Bax蛋白阳性表达的平均吸光度值均较模型对照组明显降低（P均〈0．01），大剂量叶酸组大鼠心肌细胞Bax蛋白阳性表达的平均吸光度值又较小剂量叶酸组进一步降低（P〈0．05）。 结论：长期补充叶酸对2型糖尿病大鼠心肌细胞凋亡具有明显预防作用，它可明显上调心肌细胞凋亡抑制基因Bcl-2的蛋白表达并下调凋亡刺激基因Bax和Fas的蛋白表达；叶酸可能通过增加机体一氧化氮合成从而提高血清一氧化氮活性和提高机体抗氧化能力来预防2型糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的发生。     

经冠状动脉移植自体骨髓单个核细胞用于治疗心肌梗死后的心力衰竭

目的：观察经冠状动脉直接注射进行自体骨髓单个核细胞移植时细胞能否进入心肌组织并有效改善心肌梗死后的心脏功能。方法：成年犬24只，随机分为对照组与移植组，移植组于移植前一天抽取骨髓液分离骨髓单个核细胞（数量约为2&;#215;10^8）。结扎冠状动脉左前降支后．移植组于冠状动脉内注射骨髓单个核细胞悬液，对照组注射培养基。6周后处死动物，比较其心肌梗死面积、瘢痕区毛细血管数量、超声心动图指标及血流动力学指标的变化。结果：对照组和移植组各死亡4只犬，分别有8只犬进入结果分析。①各组犬心脏标本病理研究结果：骨髓单个核细胞经5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记的阳性率约为50％；移植6周后于梗死区的心肌组织内能够检测到5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记阳性的细胞；移植组的梗死区面积和梗死范围比对照组分别下降了30．9％和35．0％，但无显著性差别（P均〉0．05）；瘢痕区每个高倍视野（0．2mm^2）的毛细血管数量，移植组为5．33&;#177;0．58，明显高于对照组2．03&;#177;0．46（P〈0．01）。②血流动力学指标的变化：移植组与对照组相比，6周时左室内压最大上升速率、最大下降速率及心输出量均显著上升[（3039&;#177;1164）比（1569&;#177;618）mm Hg／s，P〈0．01;（2951&;#177;793）比（1465&;#177;647）mmHg／s，P〈0．01；（1．88&;#177;0．33）比（1．41&;#177;0．29）L／min，P〈0．05]。③超声心动图心功能指标的变化：移植组左室射血分数明显高于对照组（46．01％，35．28％，P〈0．05）。④不良事件和副反应：在实验中仅在移植组l例实验犬的细胞注射部位观察发现一炎性包块，移植后6周时观察未见明确的恶性心律失常出现及肿瘤组织形成。结论：经冠状动脉直接注射进行骨髓单个核细胞移植可行且安全，它能够促进梗死区的新血管生成并有效改善心肌梗死后的心脏功能。     

亚急性衰老大鼠垂体前叶细胞增殖和凋亡与天年饮的干预效应

目的：观察中药天年饮对亚急性衰老大鼠垂体前叶细胞增殖与凋亡的影响。方法：实验于2003-04／07在承德医学院基础医学研究所进行。将40只SD大鼠随机分为4组：正常组、模型组、用药组和阴性对照组，每组10只。模型组、用药组、阴性对照组采用D-半乳糖腹腔注射制作亚急性衰老模型。造模成功后．用药组给予中药天年饮（炙何首乌15g，怀牛膝15g，肉苁蓉10g，淫羊藿10g，丹参25g，茯苓15g，熬制后每毫升含生药1．5曲灌胃．阴性对照组给予同等剂量生理盐水灌胃。分别采用免疫组化方法和原位末端标记法检测垂体前叶细胞增殖核抗原的表达及凋亡的变化情况。结果：40只大鼠均进人结果分析。①垂体前叶细胞增殖核抗原阳性细胞数量：模型组明显低于正常组[（24．00&;#177;3．62），（78．00&;#177;3．80）个／视野．（t=81，P〈0．01）]；用药组明显高于模型组[（76．00&;#177;1．51）个／视野，（t=52，P〈0．01）]，并接近正常水平。②垂体前叶细胞凋亡数量：模型组明显高于正常组[（67．00&;#177;2．79），（19．00&;#177;1．94）个／视野．（t=49．32,P〈0．01）]；用药组明显低于模型组[（21．00&;#177;3．46）个／视野，（t=41．14，P〈0．01）。结论：天年饮可提高衰老大鼠垂体前叶细胞增殖核抗原表达水平，降低垂体前叶细胞的凋亡指数，说明天年饮可以减弱动物模型垂体功能的退化．具有一定延缓衰老的作用。     

干细胞：许旺细胞的新来源

背景：许旺细胞对神经系统损伤的修复与再生有着重要作用。然而,许旺细胞不易直接获取,使其在临床上的应用受到限制。目的：综述神经损伤及修复过程、许旺细胞的作用以及各种干细胞分化为许旺细胞的潜能。方法：使用计算机检索Pubmed数据库2000/2011有关许旺细胞参与神经损伤的修复、干细胞分化为许旺细胞验证及应用的文献,检索词为＂Schwann cells,nervous system,stem cells＂。排除重复性研究,对资料进行初审,并查看每篇文献及其引文。根据纳入标准,收集到29篇相关文献。结果与结论：许旺细胞通过分泌各种细胞因子和营养因子为受损的神经营造了适于修复与再生的微环境,从而促进轴突再生;同时通过增殖及分化等机制围绕新生轴突形成髓鞘。神经修复需要大量许旺细胞的参与,而许旺细胞不易直接获取。研究表明,各种干细胞,包括胚胎干细胞、间充质干细胞、神经嵴干细胞和嗅鞘细胞,能在一定诱导条件下分化为许旺细胞样细胞,为神经系统损伤的治疗带来了新的希望。其中,间充质干细胞的研究备受关注。     

卵圆细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞

背景:原代分离的肝卵圆细胞具有双向分化的能力和橫向分化的可塑性.目的:分离大鼠肝脏卵圆细胞,在化学诱导剂作用下使其定向分化为胰岛素分泌细胞.设计、时间及地点:对照观察细胞实验,于2007-05/2008-01在解放军总医院基础研究部,国家重点实验室完成.材料:SPF级SD大鼠,体质量(120±20)g.方法:采用改良梯度离心法分离、培养大鼠肝卵圆细胞,并行免疫组织化学鉴定.随后将卵圆细胞置于含有诱导剂Nicotimide和高浓度葡萄糖的RPMI 1640培养液继续培养,同时以不含诱导剂的RPMI 1640培养液培养的卵圆细胞作为阴性对照.主要观察指标:采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、酶联免疫吸附实验、放射免疫分析检测两组卵圆细胞胰岛素的表达.结果:改良的梯度离心方法分离的细胞具干细胞特点,可形成集落,并且OV6、CD34、Nestin染色呈阳性.分离的大鼠肝卵圆细胞,加入诱导剂Nicotimide和高浓度葡萄糖诱导培养l周后,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、酶联免疫吸附、RIA检测均显示胰岛素分泌量远高于不含诱导剂细胞(P<0.05).结论:化学诱导剂Nicotimide和高浓度匍萄糖可以在短时期内作用肝卵圆细胞可启动胰十二指肠同源盒基因-1基因,使之定向分化为胰岛素分泌细胞.     

体外诱导脂肪干细胞向内皮细胞及成血管的分化

背景：脂肪干细胞作为组织工程中种子细胞的选择,可以诱导为内皮细胞从而有效解决材料血管化困难的难题。目的：体外观察脂肪干细胞经诱导向内皮细胞转分化的可能性、以及在立体培养基上的血管形成情况。方法：切取人皮下脂肪,用酶消化法分离和培养脂肪干细胞,将传至第3代或第4代的脂肪干细胞用内皮细胞诱导液、同时在Matrigel三维培养基内诱导培养,观察细胞生长情况及变化。对脂肪干细胞和诱导细胞行免疫组织化学检查CD31的表达。结果与结论：免疫组织化学检测脂肪干细胞的CD31表达阴性,诱导细胞CD31可见阳性表达。在三维立体培养基内诱导的细胞24h逐渐迁徙成团,伸出伪足,诱导1周细胞形成网格样交叉,2周形成较长血管,后血管增粗,并出现分叉,CD31阳性表达。因此,脂肪干细胞体外可以被诱导向内皮细胞表型转分化,并形成血管,提示脂肪干细胞可以作为促进组织工程移植物血管化的种子细胞的理想选择。     

诱导间充质干细胞向心肌样细胞的分化

背景:目前很多体内外实验都已表明间充质干细胞具有向心肌样细胞或心肌细胞分化的能力,这使间充质干细胞治疗心脏疾病成为可能。目的:比较诱导间充质干细胞向心肌样细胞分化实验方法的异同及存在的问题。方法:以"mesenchymal stem cells,cardiomyocyte,differentiation;间充质干细胞,心肌细胞,诱导;分化"为检索词,应用计算机检索2000-12/2010-12 PubMed数据库与万方数据库,与间充质干细胞诱导分化为心肌细胞相关的文章。结果与结论:间充质干细胞向心肌细胞分化的方法主要有:①心肌细胞条件培养液:间充质干细胞在体外经药物诱导或模拟体内心肌微环境能定向诱导分化为心肌样细胞。②与希望诱导成的目的细胞共同培养:间充质干细胞可经药物诱导诱导分化为心肌细胞,也可不经任何诱导在心肌微环境中分化为心肌细胞。虽然间充质干细胞在体外心脏病理条件下可分化为心肌细胞,使间充质干细胞治疗心脏疾病成为可能,但其研究有待进一步完善。     

Tumors of Schwann's cells and pigmented skin cells

Both melanocytes and peripheral nerve sheath cells have an established origin from the neural crest. Benign and malignant neoplasms of these cells have distinctive ultrastructural features, but there is a group of tumors that has some characteristics of both cell types. The distinguishing feature of melanocytic neoplasms is the presence of cytoplasmic premelanosomes, which indicates cellular synthesis of melanin. Nerve-sheath neoplasms may show ultrastructural variation, but are generally found to have long cell processes associated with basal lamina-like material. Immunocytochemistry can be used to help distinguish tumors of melanocytic and Schwann's cells from unrelated neoplasms.     

NK 细胞上清液提高CTL 细胞对肝癌细胞杀伤力的研究

目的：研究用白细胞介素2（IL‐2）联合IL‐12、IL‐18以及三者共同活化NK细胞所提取的上清液与肝癌细胞共培养是否能提高AFP特异性的细胞毒性T细胞（CTL）对小鼠肝癌细胞的杀伤性。方法提取NK 细胞,分别用IL‐26000 IU／mL、IL‐26000 IU／mL＋ IL‐1210 ng／mL、IL‐26000 IU／mL＋IL‐l8100 ng／mL、IL‐26000 IU／mL＋IL‐1210 ng／mL＋IL‐18100 ng／mL活化NK细胞,3 d后提取上清液,ELISA检测上清液IFNγ表达量,然后将上清液与Hepa1‐6细胞培养过夜,流式细胞仪检测肿瘤细胞表面I类组织相容性抗原（M HC I）表达,以其为靶细胞检测AFP特异性的CTL细胞对 Hepa1‐6细胞杀伤率。结果NK＋IL‐2＋IL‐12、NK＋IL‐2＋IL‐18、NK＋IL‐2＋IL‐12＋IL‐18上清液的IFNγ含量高于NK＋IL‐2上清液的IFNγ含量（P＜0．05）,并且上述三组能有效提高小鼠 Hepa1‐6细胞表面M HC I的表达（P＜0．05）,从而显著提高了AFP特异性的CTL细胞对靶细胞的杀伤活性,然而阻断IFNγ分泌,AFP特异性的CTL细胞对靶细胞的杀伤活性降低。结论 NK 细胞上清液能够增强AFP特异性的CTL对肝癌细胞的杀伤作用。     

Thymic reticulo-epithelial cells: key cells of neuroendocrine regulation

The reticulo-epithelial (RE) cellular network of the thymic stromal cellular microenvironment plays a vital role in neuroendocrine regulation and lymphoid cell homing and development. Transmission electronmicroscopic observations have confirmed that there are four functional subtypes of medullar RE cells: undifferentiated; squamous; villous; and cystic. Immunocytochemical observations have shown that the secreted thymic hormones, thymosin alpha1 and thymopoietin (and its short form, thymopentin or TP5), are both produced by RE cells. Thymic RE cells also produce numerous cytokines, including IL-1 and -6, G-CSF, macrophage-CSF and GM-CSF that likely are important during the various stages of thymocyte activation and differentiation. The coexistence of pituitary hormone and neuropeptide secretion, such as growth hormone, prolactin, adrenocorticotopic hormone and thyroid-stimulating hormone, among many others, and the production of a number of interleukins and growth factors, as well as the expression of receptors for all, by the same RE cell, is an unique molecular biological phenomenon. The thymic RE cell network represents an important cellular and humoral microenvironment in the neuroendocrine homeopathic regulatory mechanisms of the multicellular organism.     

人羊膜上皮细胞有向心肌样细胞分化的特性

目的:通过体外诱导分化实验,评价人羊膜上皮细胞向心肌样细胞分化的能力.方法:实验于2005-09/2006-12在贵州省细胞工程重点实验室完成.①对象:经产妇知情同意,无菌采集健康足月剖宫产胎盘6份,实验经医院医学伦理委员会批准.②实验方法:采用机械法将羊膜从胎盘组织上剥离,D-Hank's液冲洗后剪成碎片,加入含有0.2 g/L乙二胺四乙酸的0.5 g/L胰蛋白酶溶液,离心、消化、过滤,收集滤液,加入胎牛血清终止消化,重复消化2次.合并3次消化所得的细胞悬液,离心后将细胞沉淀悬浮于L-DMEM培养基中,按1.25×108 L-1密度接种,常规培养3 d后更换培养基,待细胞达80%~90%融合后用胰蛋白酶 乙二胺四乙酸联合消化,终止后离心弃上清,细胞沉淀用培养基重新悬浮,按1×107 L-1密度传代.③实验评估:用流式细胞仪鉴定人羊膜上皮细胞表型;使用10 μmol/L 5-氮杂胞苷和1 mmol/L抗坏血酸磷酸盐诱导第2代人羊膜上皮细胞,免疫荧光染色法检测诱导后细胞中特异蛋白结蛋白和α-辅肌动蛋白的表达,RT-PCR检测心肌特异性转录因子Nkx2.5、GATA-4和心肌特异性收缩蛋白α-肌球蛋白重链mRNA的表达.结果:①人羊膜上皮细胞的免疫组化特征:人羊膜上皮细胞几乎不表达CD44,不表达波形蛋白,表达角蛋白19.②人羊膜上皮细胞α-辅肌动蛋白和结蛋白的表达:人羊膜上皮细胞经诱导分化后,表达肌系细胞标志α-辅肌动蛋白和结蛋白.③人羊膜上皮细胞Nkx2.5、GATA-4和α-肌球蛋白重链mRNA的表达:人羊膜上皮细胞经诱导分化后,表达心肌特异性转录因子Nkx2.5 mRNA和GATA-4 mRNA，心肌特异的可收缩蛋白α-肌球蛋白重链mRNA未见表达.结论:通过胰蛋白酶消化法分离获得的人羊膜上皮细胞具有向心肌样细胞分化的特性,可能成为细胞心肌成形术的候选供体细胞.