多聚二磷酸腺苷核糖合成酶抑制剂对血管紧张素Ⅱ诱导心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶表达的影响

目的:观察多聚二磷酸腺苷核糖合成酶(PARP)抑制剂对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激的乳鼠心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)基因转录的影响.方法:新生SD大鼠心脏成纤维细胞原代培养,传代.用PARP抑制剂--3-氨基苯甲酰胺(3-AB)预处理细胞,观察3-AB对AngⅡ诱导心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9及TIMP-1基因表达的影响.结果:AngⅡ刺激心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9及TIMP-1基因表达明显增加,成纤维细胞内PARP活性及PARP1的表达显著增强.使用3-AB抑制PARP1的活性及表达,可以明显降低AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9及TIMP-1基因表达的增加.结论:PARP在AngⅡ诱导的心脏重构过程中发挥了重要的调控作用.     

罗格列酮对高糖环境下大鼠肾脏成纤维细胞MMP-1TIMP-1及Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的观察罗格列酮(RGZ)对高糖环境下大鼠肾脏成纤维细胞(NRK)基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)及Ⅲ型胶原(COLⅢ)基因表达的影响,探讨罗格列酮对糖尿病肾病的保护作用及其机制。方法2005年1月至2005年9月对郑州大学第一附属医院的体外培养NRK细胞,分成正常对照组(NG含1000mg/LD-葡萄糖)、高糖组(HG含4500mg/LD-葡萄糖)、HG RGZ组(5μmol/L)、HG RGZ组(10μmol/L)和HG RGZ组(15μmol/L),作用24h后,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测MMP-1、TIMP-1和collagenⅢmRNA表达。结果HG组细胞MMP-1mRNA水平较NG组下降,差异有显著性(P<0·01),罗格列酮可以一定程度上恢复MMP-1的表达。HG组TIMP-1和COLⅢmRNA水平较NG组升高,差异有显著性(P<0·01),罗格列酮可以剂量依赖性抑制这种高表达。结论罗格列酮可以通过调节MMP-1和TIMP-1的基因表达,抑制高糖导致的肾脏成纤维细胞外基质的蓄积。     

成纤维细胞与肺癌细胞相互作用对膜型基质金属蛋白酶-1及基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的 研究胚肺成纤维细胞对肺癌H460细胞膜型基质金属蛋白酶-1(MTl-MMP)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响.方法 采用Western blot方法检测各组MT1-MMP的表达.取其上清,采用酶联免疫吸附法检测各组细胞培养液中活性MMP-2的浓度.结果 H460细胞、胚肺成纤维细胞单独培养时均有MT1-MMP表达,但混合培养后MT1-MMP表达增强(P＜0.05).H460细胞、胚肺成纤维细胞单独培养时MMP-2均有分泌,混合培养MMP-2分泌增强(P＜0.05).结论 胚肺成纤维细胞和肺癌H460细胞相互作用能通过上调MT1-MMP、MMP-2的表达从而促进肺癌的侵袭和转移,这可能为肺癌侵袭转移的一个重要机制.     

基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶-9及其抑制剂-1对心房颤动患者心房结构重构的影响

目的研究心房颤动患者心房组织基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶-9(MMP-1,MMP-9)及其组织型基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达,并探讨其与心房结构重构的关系。方法将28例风湿性心脏病接受换瓣手术患者的右心耳标本分为3组,窦性心律组8例,阵发性房颤组8例,持续性房颤组12例,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测心房组织中MMP-1、MMP-9和TIMP-1基因表达。结果(1)与窦性心律组比较,阵发性房颤组MMP-1的mRNA表达虽有增加,但无显著性差异,而持续性房颤组MMP-1的mRNA表达显著增加(P<0.05);(2)MMP-9的mRNA表达在窦性心律组、阵发性房颤组和持续性房颤组心房组织的表达逐渐增加(P<0.05)。MMP-9的mRNA水平与房颤持续的时间、左心房的内径成显著的正相关(r=0.509,0.543,P<0.01);(3)与窦性心律组比较,阵发性房颤组和持续性房颤组TIMP-1的mR-NA水平明显下降(P<0.05,P<0.01)。TIMP-1的mRNA水平与房颤持续的时间、左心房的内径成显著的负相关(r=-0.43,-0.387,P<0.05)。结论房颤患者的MMP-1、MMP-9和TIMP-1相互间的作用失衡可能与慢性房颤时的心房结构重构有关。     

诱导型一氧化氮合酶参与白细胞介素-1β对人心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶-2作用的实验研究

目的 观察白细胞介素-1β(IL-1β)对人心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的作用及相关机制.方法 将3～6代人心脏成纤维细胞接种于6孔培养板内接受各种干预措施.待实验细胞接受刺激12 h后,用RT-PCR法观察MMP-2的mRNA表达量.细胞接受各种刺激24 h后,收集细胞总蛋白和培养上清,通过凝胶酶谱法进行上清MMP-2的活性检测,采用Western blot法测定细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的表达,采用Griess法衡量细胞上清中一氧化氮(NO)水平.结果 IL-1B作用人心脏成纤维细胞24 h后,促进了细胞MMP-2的活性增加,其中4 ng/ml的IL-1β刺激作用达到高峰,与对照组相比活性增加了(170.24±13.12)%(P＜0.01),并且该浓度IL-1β能时间依赖性地促进心脏成纤维细胞MMP-2的活性增加.IL-1β作用心脏成纤维细胞12 h后,与正常对照组相比4 ng/ml和10 ng/ml IL-β组MMP-2 mRNA表达明显增加(P＜0.01).IL-1β(4 ng/ml)可以明显促进细胞NO水平升高(P＜0.01),而NOS抑制剂NG-甲基-L-精氨酸(10-3 mol/L)显著抑制了IL-1β诱导的MMP-2 mRNA表达(P＜0.01)、MMP-2活性(P＜0.01)以及NO水平的升高(P＜0.01).通过Western blot发现在生理水平的心脏成纤维细胞上未能检测到iNOS蛋白的表达,而不同浓度的IL-1β明显促进了细胞iNOS的蛋白水平的升高.结论 IL-1β能促进人心脏成纤维细胞MMP-2的mRNA表达和活性,并提示其作用与细胞iNOS-NO水平有关.     

TIMP-2、MMP-2和MT1-MMP在活化肝星状细胞中的表达及对细胞外基质合成分泌的影响

目的 研究金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)在活化肝星状细胞(HSCs)中的表达,观察其对细胞外基质(ECM)合成分泌的影响.方法 原代分离培养大鼠HSCs活化后,分别给予40～160 pmol化学合成经修饰抗TIMP-2 siRNA进行干预,检测培养细胞上清液透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和羟脯氨酸(Hyp)的含量,采用荧光实时定量PCR法检测TIMP-2、MMP-2、MT1-MMP、MMP-13、COL Ⅰ和COL Ⅲ mRNA的表达,western印迹检测TIMP-2、MT1-MMP和MMP-13蛋白表达及明胶酶谱法检测MMP-2蛋白表达.结果 应用化学合成经修饰抗TIMP-2 siRNA后,TIMP-2、MMP-2、MT1-MMP、COL Ⅰ和COL Ⅲ的表达明显降低,而MMP-13的表达则明显增加,培养细胞上清液中HA、PCⅢ和Hyp的含量也明显减少.结论 TIMP-2通过MT1-MMP介导MMP-2的活化,抑制TIMP-2的表达,MT1-MMP和MMP-2的表达随之降低,而HSCs合成分泌ECM也相应减少.     

转化生长因子-β1对绒癌JEG-3细胞MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA表达的影响

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)不同浓度和作用时间对绒癌JEG-3细胞基质金属蛋白酶-9基因(MMP-9 mRNA)及基质金属蛋白酶抑制剂-1基因(TIMP-1 mRNA)表达的影响.方法 先分别用TGF-β1 0、100、200 ng/ml作用于绒癌JEG-3细胞,48 h收获细胞;再以TGF-β1 100 ng/ml分别与JEG-3细胞作用0、12、24、48、72 h;最后用RT-PCR技术检测TGF-β1不同浓度和作用时间收获JEG-3细胞的MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA表达.结果 随TGF-β1浓度升高和作用时间延长,各收获细胞的MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA表达均明显升高,且MMP-9 mRNA与 TIMP-1 mRNA比值均＞1(P＜0.01或＜0.05).结论 在一定浓度和作用时间内,外源性TGF-β1可促进绒癌JEG-3细胞MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA表达.     

腰椎间盘退变组织中NF-kB、MMP-1/TIMP-1的表达及意义

目的 探讨NF-KB、基质金属蛋白酶(MMP)-1/基质金属蛋白酶抑制剂(TMP)-1表达在椎间盘退变过程中的作用.方法 应用免疫组织化学方法和ELISA方法检测38例椎间盘退变所致腰椎间盘突出症患者退变椎间盘髓核组织(观察组)和8例腰椎爆裂骨折患者的正常椎间盘髓核组织(对照组)中NF-KB,MMP-1、TIMP-1的表达,计算MMP-1与TIMP-1的比值.结果 观察组的NF-KB表达及MMP-1/TIMP-1均明显高于对照组,P均<0.05.结论 NF-KB,MMP-1/TIMP-1在腰椎间盘退变过程中起重要作用.     

女性压力性尿失禁患者阴道壁组织中MMP-13、MMP-14和TIMP-1的表达变化及意义

目的探讨女性压力性尿失禁（SUI）患者阴道壁组织中基质金属蛋白酶13、14（MMP-13、14）和组织基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的表达变化及意义。方法收集30例女性SUI患者的阴道壁组织（SUI组）、30例盆腔器官脱垂患者（POP）的阴道壁组织（POP组）、30例无SUI及POP患者的阴道壁组织（对照组）,采用免疫组化SP法检测这三组的MMP-13、MMP-14、TIMP-1。结果MMP-13、MMP-14在POP组、SUI组中的表达明显高于对照组（P均〈0.05）,TIMP-1在POP组、SUI组的表达明显低于对照组（P均〈0.05）;SUI组MMP-13的表达与TIMP-1表达呈负相关（r=-0.281,P〈0.05）,MMP-14与TIMP-1的表达呈负相关（r=-0.381,P〈0.05）,MMP-13与MMP-14的表达呈正相关（r=0.992,P〈0.05）。结论女性SUI患者阴道壁组织中MMP-13、14表达增加,TIMP-1表达减少,导致胶原降解增加,从而诱发SUI。     

MMP-1、MMP-9在结核性胸腔积液中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)在结核性胸腔积液(胸液)中的表达及意义。方法选择胸液患者91例,其中结核性胸液44例(结核组)、恶性胸液30例(恶性组)、漏出性胸液17例(漏出组)。采用酶联免疫吸附法检测各组胸液MMP-1、MMP-9、TIMP-1,以及胸液白细胞总数、单叶核细胞计数、蛋白、乳酸脱氧酶(LDH)及腺苷脱氨酶(ADA)。结果结核组胸液MMP-1、MMP-9、MMP-1/TIMP-1、MMP-9/TIMP-1高于恶性组和漏出组(P均<0.05);结核组胸液MMP-9水平与TIMP-1、白细胞总数、单叶核细胞计数、LDH及ADA均呈正相关(P均<0.01)。结论 MMP-1、MMP-9可能在结核性胸液形成中起重要作用,其对结核性胸膜炎的诊断有一定价值。     

MMP-9和TIMP-1在各期大鼠压力性损伤模型中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶(MMP)-9和MMP组织抑制剂(TIMP)-1在各期大鼠压力性损伤模型中的表达及临床意义。方法按照随机数字表将64只大鼠随机分为空白组、对照组、1期压力性损伤组(1期组)、2期压力性损伤组(2期组)、可疑深部组织损伤组(可疑组)、3期压力性损伤组(3期组)、不可分期组、4期压力性损伤组(4期组)各8只,造模方法是将大鼠臀部肌肉钝性分离后将圆形铁片放到大鼠臀肌下,通过筋膜固定铁片,外用磁铁加压2 h,拿下磁铁0.5 h让局部组织充血再灌注,此为一个循环,每天5个循环,每天重复以上步骤。复制出不同期大鼠压力性损伤模型,采集压力性损伤部位组织,通过免疫组化法观察MMP-9和TIMP-1的表达情况。结果 MMP-9和TIMP-1在空白组和对照组中几乎不表达,且两组的表达情况无统计学差异(P>0.05);随着压力性损伤程度的加深,MMP-9表达增加,TIMP-1表达先上升后下降,MMP-9/TIMP-1的比值增大。结论压力性损伤程度越深MMP-9的阳性率越高,MMP-9/TIMP-1阳性率的比值越大,压力性损伤的发生发展可能与MMP-9的表达增多和MMP-9/TIMP-1比例失衡有关。     

金属基质蛋白酶9及其组织抑制物1在肾组织中的表达和调控

目的:观察STZ鼠肾组织及高糖状态下正常人类系膜细胞(NHMC)中金属基质蛋白酶9(MMP-9)、金属基质蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)表达状况及磷酸肌酸激酶(PKC)抑制剂对其表达的影响,探讨糖尿病肾病(DN)时PKC抑制剂在细胞外基质降解中的作用。方法:Wistar大鼠随机分为正常对照组、DN模型组、PKC抑制剂组。PKC抑制剂组采用根皮素10mg/(kg.d)混悬液灌胃进行干预。第8周处死大鼠(每组6只)。检测24h尿蛋白定量、血肌酐水平。用免疫组化方法检测肾脏组织MMP-9、TIMP-1的表达。用ELISA方法检测肾脏组织PKC活性。体外实验,将NHMC置37℃,5%CO2培养箱中进行培养。并将NHMC分为N组(对照组):糖浓度5mmol/L,H组(高糖组):糖浓度30mmol/L,P组(高糖加PKC抑制剂):糖浓度30mmol/L加chelery thrine chloride 10-5mmol/L,M组(甘露醇组):甘露醇30mmol/L。于培养24、48、72h后用MTT法测定细胞增值。采用ELISA方法检测四组PKC活性。分别用RT-PCR及Western Blot检测各组MMP-9、TIMP-1mRNA及蛋白表达。结果:DN模型组尿蛋白排泄明显增加(P<0.01),血肌酐上升(P<0.05),PKC活性明显增高,MMP-9和TIMP-1出现表达,MMP-9/TIMP-1比值降低。PKC抑制剂干预后其尿蛋白排泄明显减少,血肌酐水平降低,PKC活性下降,MMP-9、TIMP-1表达上调,其MMP-9/TIMP-1比值增高。体外实验中,高糖能促进NHMC增殖,且NHMC的增殖状况随时间的递增而明显增加。高糖(30mmol/L)能增加系膜细胞PKC的活性,MMP-9、TIMP-1较高表达,MMP-9/TIMP-1比值降低。而PKC抑制剂使PKC的活性降低同时,MMP-9、TIMP-1表达上调,MMP-9/TIMP-1比值增高。结论:高糖可诱导PKC活性,PKC抑制剂能使MMP-9、TIMP-1表达上调,MMP-9/TIMP-1表达比值升高,推测PKC的活性状况可影响DN细胞外基质降解过程。     

碱性成纤维细胞生长因子联合间充质干细胞构建组织工程瓣膜的研究

目的:探讨采用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)联合间充质干细胞(MSCs)体外构建组织工程瓣膜(TEHV)过程中,MSCs表型特性和基质金属蛋白酶及其抑制物的表达情况.方法:分离培养大鼠MSCs,进行细胞鉴定后种植于去细胞瓣叶支架上.将瓣叶置于含5 ng/ml bFGF的培养液中,培养14 d构建的TEHV作为A组;B组除培养液中不添加bFGF外,其余同A组;C组为大鼠肌成纤维细胞构建TEHV的对照组.RT-PCR检测各组TEHV中α-SMA、MMP-13和TIMP-1 mRNA的表达.结果:MSCs表达CD29(94.82%)和CD44(93.59%).A组与C组α-SMA、MMP-13和TIMP-1 mRNA表达比较均差异无统计学意义(P>0.05),但均高于B组(P<0.05).结论:采用bFGF联合MSCs体外构建TEHV过程中,通过bFGF的调控作用,可以使MSCs的表型特性和基质金属蛋白酶及其抑制物表达与肌成纤维细胞相当.     

成纤维细胞激活蛋白和基质金属蛋白酶-1在小鼠肝纤维化组织中的表达及其相关性

目的探讨成纤维细胞激活蛋白(FAP)和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)在小鼠肝纤维化组织中的表达和两者之间的关系,及其在肝纤维化形成过程中的作用机制。方法建立四氯化碳诱导的小鼠实验性肝纤维化模型,HE染色和Masson染色法判定肝纤维化程度,采用免疫组织化学染色法测定FAP、MMP-1在肝纤维化过程中的时序动态表达。结果模型组中FAP和MMP-1的表达部位和范围都一致,阳性表达主要分布于门管区内血管壁周围及纤维间隔内的成纤维细胞的胞浆中。线性相关分析显示FAP和MMP-1与小鼠肝纤维化程度呈正相关(r分别为0.672,0.684;P0.0001);且FAP与MMP-1的表达也呈正相关(r为0.828;P0.0001)。结论 FAP和MMP-1可能协同作用参与降解细胞外基质和促进肝星形细胞的活化,从而在肝纤维化的发生发展中起作用。     

MMP-1、TIMP-1及其在肝纤维化中的作用

基质金属蛋白酶(MMP)和金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)是细胞外基质(ECM)合成和降解调节中的两个重要的因素。其中MMP-1主要降解细胞外基质的主要成分Ⅰ、Ⅲ型胶原,TIMP-1可抑制MMP-1的活性。肝纤维化时MMP-1活性下降,而TIMP-1活性不断升高。研究显示,二者活性失衡是导致肝纤维化进展的重要因素。它们的来源结构、活性的调节及功能成为目前的研究热点。     

老年男性糖尿病脑梗死患者血MMP-9和TIMP-1水平变化

用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测糖尿病脑梗死组、非糖尿病脑梗死组、糖尿病非脑梗死组、健康对照组的基质金属蛋白酶9(MMP-9)、组织基质金属蛋白酶抑制物1(TIMP-1)的水平.结果 显示糖尿病脑梗死组MMP-9、TIMP-1水平明显明显高于其他3组(P＜0.05),提示其可能在糖尿病脑梗死发病过程中有重要作用.     

基质金属蛋白酶-9与脑血管病

基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase,MMP-9)可降解细胞外基质中的Ⅳ型胶原,在脑基底膜的降解中起主要作用.组织金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP-1)是天然的MMP-9特异性抑制剂.MMP-9与TIMP-1平衡关系的失调与缺血性和出血性脑损伤有关,与动脉瘤、动脉粥样硬化等的形成和发展也有关.因此,人为地调节MMP-9与TIMP之间的平衡,有可能成为治疗脑血管病的新途径.     

肾上腺髓质素缺失对单侧输尿管结扎小鼠MMP-1/TIMP-1表达的影响

目的 探讨肾上腺髓质素在肾间质纤维化实验动物肾脏基质金属蛋白酶-1/基质金属蛋白酶抑制剂-1(MMP-1/TIMP-1)表达中的作用.方法 结扎肾上腺髓质素基因敲除小鼠及野生小鼠单侧输尿管,制备肾间质纤维化实验动物模型并给予缬沙坦灌胃治疗,采用免疫组化、原位杂交、RT-PCR方法检测MMP-1及TIMP-1的表达.结果 单侧输尿管结扎 (UUO) 小鼠肾脏MMP-1的表达减弱,而TIMP-1的表达显著上调,基因敲除小鼠较野生小鼠更为明显,采用缬沙坦治疗可部分抑制TIMP-1的表达.结论 肾上腺髓质素可以通过纠正MMP-1/TIMP-1的失衡,对UUO介导的肾间质纤维化起到保护作用.     

成纤维细胞激活蛋白和基质金属蛋白酶1在小鼠肺纤维化中的表达及相关性

目的 探讨成纤维细胞激活蛋白(FAP)在小鼠肺纤维化组织中的表达,及其与基质金属蛋白酶1(MMP-1)之间的关系.方法 制备小鼠肺纤维化模型,采用免疫组织化学技术、Western-bolt检测肺组织中FAP、MMP-1和α-SMA的表达.结果 ①博莱霉素-A5盐溶液诱导后,FAP、MMP-1和α-SMA的表达与小鼠肺泡炎和肺纤维化程度呈正相关;FAP与MMP-1的表达呈正相关.②Westernbolt结果显示FAP对照组表达弱阳性,随肺纤维化程度的增强,表达增强;MMP-1、α-SMA随肺纤维化程度的增加表达亦增强.结论 FAP的表达与肺泡炎和肺纤维化程度均呈正相关,FAP与MMP-1可能在肺纤维化基质重塑中起协同作用.     

ACS患者单核细胞MMP-9及其抑制物TIMP-1mRNA的表达

目的 探讨单核细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及组织型基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)mRNA表达与急性冠脉综合征(ACS)之间的关系.方法 分离8例ACS、8例稳定性心绞痛(SAP)及8例对照循环血单核细胞,采用异硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法提取总RNA,扩增目的 基因MMP-9及TIMP-1 mRNA.根据冠脉造影进行冠脉狭窄程度计分并测定血清ox-LDL水平.结果 ①ACS患者外周血单核细胞MMP-9 mRNA表达与对照组比较增加(P<0.05),而TIMP-1 mRNA表达在各组间无差异;②ACS组血清ox-LDL浓度高于SAP组及对照组(P<0.05),且SAP组高于对照组(P<0.05),③单核细胞MMP-9 mRNA表达与血清ox-LDL浓度正相关(r=0.458,P=0.024);而与冠脉狭窄计分(CSS)无相关性.结论 ACS患者外周血单核细胞MMP-9、TIMP-1 mRNA表达比例失衡,可能直接参与了不稳定斑块的形成及破裂.