PCNA反义寡核苷酸抑制膀胱癌细胞BIU-87体外增殖的研究

目的检测脂质体介导增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）反义寡核苷酸抑制人膀胱癌细胞ＢＩＵ８７体外增殖活性效果。方法采用细胞计数及ＭＴＴ比色法评价反义寡核苷酸对ＢＩＵ８７细胞体外增殖的影响;应用免疫组化法（ＳＡＢＣ法）检测ＰＣＮＡ蛋白表达情况。结果脂质体介导ＰＣＮＡ反义寡核苷酸组与对照组比较,ＢＩＵ８７细胞增殖活性受到明显抑制（Ｐ＜０．０５）,１２小时后可完全抑制ＰＣＮＡ蛋白表达,２４、３６小时后仍有极显著的抑制作用（Ｐ＜０．０１）;脂质体介导反义寡核苷酸组与单纯反义寡核苷酸组比较,前者抑制作用提高５０倍以上;脂质体介导正义寡核苷酸组、单纯脂质体组与对照组比较均无此抑制作用（Ｐ＞０．０５）。结论脂质体介导ＰＣＮＡ反义寡核苷酸可抑制人膀胱癌细胞ＢＩＵ８７体外增殖活性。应用反义技术封闭ＰＣＮＡ基因、抑制ＰＣＮＡ蛋白表达,为膀胱癌的基因治疗提供了新的思路和探索。     

PCNA反义寡核苷酸抑制人膀胱癌EJ细胞增殖活性的实验研究

目的 探讨全硫代修饰型ＰＣＮＡ反义寡核苷酸（ＡＳＯ）对人膀胱癌ＥＪ细胞体外增殖活性及裸鼠体内致瘤性的影响。方法 ＰＣＮＡ－ＡＳＯ在脂质体介导下转染ＥＪ细胞后,运用细胞计数,ＭＴＴ法,＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验,流式细胞术（ＦＣＭ）,克隆形成率（ＣＦ）,ＳＡＢＣ免疫组化,建立裸鼠动物模型等方法分析其体内外抗瘤活性及机制。结果 在脂质体介导下,０．４－２．０μｍｏｌ／Ｌ ＰＣＮＡ－ＡＳＯ对人膀胱癌ＥＪ细胞     

逆转录-聚合酶链反应检测增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸对BIU-87细胞mRNA表达的影响

我们试图通过基因转染技术将针对增殖细胞核抗原 (ＰＣＮＡ)的反义寡脱氧核苷酸转入ＢＩＵ 87细胞 ,与细胞ＰＣＮＡｍＲＮＡ形成ｍＲＮＡ ＲＮＡ杂交链 ,从而降低细胞的增殖水平 ,达到治疗肿瘤的目的。一、材料与方法1 .细胞培养和寡脱氧核苷酸的处理 :人膀胱移行细胞癌细胞株ＢＩＵ 87在含 1 0 %灭活小牛血清和双抗的ＲＰＭＩ1 640培养基 (ＧｉｂｃｏＢＲＬ公司 )、37℃、5 %ＣＯ2 恒温箱中培养 ,0 .2 5 %胰蛋白酶消化传代。我们采用与ＰＣＮＡｍＲＮＡＡＵＧ端互补的反义寡脱氧核苷酸 (Ａ ＳＯＤＮ)及正义寡脱氧核苷酸 (ＳＯＤＮ) ,序列如…     

端粒酶反义寡核苷酸对肾癌细胞端粒酶活性及其体外增殖的 …

目的 探讨端粒酶反义核酸对肾癌细胞端粒酶活性和体外增殖的影响。方法 以端粒酶ＲＮＡ模板区为靶点,序列为ＴＡＧＧＧＴＡＧＡＣＡＡ的硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸（ＡＳＯＮ）与肾癌细胞株ＲＣＺ细胞共同孵育,计１～２８天细胞数,ＭＴＴ比色法测细胞生长抑制率,ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ法检测端粒酶活性。结果 ＡＳＯＮ实验组与随机引物及空白对照组比较,端粒酶活性明显降低（Ｐ〈０．００１）,细胞增殖数目显著减少（Ｐ〈０．     

反义c-myc寡核苷酸对人肝癌细胞恶性表型的逆转作用

我们采用反义ｃ ｍｙｃ核酸技术观察反义ｃ ｍｙｃ寡核苷酸 (ＯＤＮ)对人肝癌细胞ＳＭＭＣ 772 1生长的抑制作用 ,现将结果报道如下。一、材料与方法1.寡核苷酸的合成及修饰 :正义、错配及反义ｃ ｍｙｃＯＤＮ (均为 15 ｍｅｒ)的合成和磷酸基硫代化修饰均由上海生物工程公司完成。设计的序列为 :5’ ＡＴＧＣ ＣＣＣＴＣＡＡＣＧＴＴ 3’正义寡核苷酸序列 ;5’ ＡＡＣＧＴＴＧＡＧＧＧＧＣＡＴ 3’反义寡核苷酸序列 ;5’ ＴＡＣＧＧＧＧＴＴＧＡＧＣＡＡ 3’错配链寡核苷酸序列。2 .人肝癌细胞ＳＭＭＣ 772 1培养和基因转染 :人肝癌细胞Ｓ…     

膀胱移行细胞癌增殖细胞核抗原表达的研究

采用免疫组化ＬＳＡＢ法对４８例膀胱移行细胞癌增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）进行检测，发现ＰＣＮＡ增殖指数随肿瘤分级的升高而增高，浸润生长肿瘤ＰＣＮＡ增殖指数明显高于乳头状生长者（Ｐ＜０．００１），ＰＣＮＡ高表达组（增殖指数＞５０％）预后明显差于ＰＣＮＡ低表达组（增殖指数≤５０％）。结果表明ＰＣＮＡ可作为膀胱移行细胞癌恶性程度及预后指标之一。     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人肝癌细胞生长抑制的研究

本实验旨在探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸 (ＡＳＯＤＮ ｔ)抑制端粒酶活性[1] ,诱导肝癌细胞凋亡 ,从而抑制肝癌细胞生长的作用[2 ] ,为肝癌基因治疗提供依据 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.ＡＳＯＤＮ ｔ对细胞抑制作用的观察 :取 2× 10 7个 /Ｌ对数生长期肝癌细胞 (肝癌细胞株ＳＭＭＣ 772 1引自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库 )接种于 96孔的细胞培养板中 ,每孔 10 0 μｌ,设3个复孔。分别加入ＡＳＯＤＮ ｔ(上海生工生物工程公司合成 ,序列为 5’ ＣＴＣＡＧＴ ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡ 3’ ,调节其终浓度分别为 1、2、3…     

脂质体介导c-myc基因反义寡核苷酸对人肝癌细胞的生物学影响

目的 探讨应用脂质体（ＬＲ）介导ｃ－ｍｙｃ基因反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）对人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１（７７２１细胞）的生物学影响。方法 利用１ｍｇ／Ｌ ＬＲ包裹２μｍｏｌ／Ｌ ｃ－ｍｙｃ ＡＳＯＤＮ转染于培养的人肝癌细胞,观察其对瘤细胞的作用。结果 四唑盐比色实验（ＭＴＴ）法测定ＬＲ－ＡＳＯＤＮ组作用４８ｈ对瘤细胞生长抑制率（５５％）较无ＬＲ的ＡＳＯＤＮ组的生长抑制率（１５％）显著提高（Ｐ〈０．     

颌下腺缺血再灌注后细胞凋亡与增殖的研究中国医科大学第一临床学院整形外科

我们应用几种形态学方法观察大鼠颌下腺缺血及再灌注不同时相上皮细胞的凋亡与增殖特征 ,以揭示缺血再灌注颌下腺组织损伤与修复过程中细胞凋亡和增殖与颌下腺上皮细胞丧失的关系。一、材料和方法1.材料 :增殖细胞核抗原 (ＰＣＮＡ)单克隆抗体、免疫组织化学染色ＳＦＴＭ试剂盒和二氨基联苯胺 (ＤＡＢ)呈色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司 ) ,ＡＦ试剂盒 (ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司 )。2 .实验方法 :雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 30只 ,体重 180～ 2 5 0 ｇ ,随机分为对照组 (ＣＯＮ)、缺血组 (ＩＳＣ)和缺血再灌注组 (Ｉ/Ｒ ) …     

反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞c—myc,增殖细胞核抗原 …

目的 研究反义ｃ－ｍｙｃ、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）基因片断对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣＳ）增殖的作用。方法 使用正义、反义及错配反义ｃ－ｍｙｃ、ＰＣＮＡ,分别艇于体外培养的ＶＳＭＣＳ,蛋白印迹和免疫组化法测定燕经计算机图像分析,观察其对ｃ－ｍｙｃ、ＰＣＮＡ蛋白表达的影响。结果 １０μｍｏｌ／Ｌ浓度的反义ｃ－ｍｙｃ、ＰＣＮＡ作用于ＶＳＭＣＳ后１￣５ｄ相庆ｃ－ｍｙｃ和ＰＣＡＮ蛋白表达减弱,计算机图像分     

丙泊酚、硫喷妥钠诱导插管对循环及血清NOS活性和NO水平的影响

丙泊酚预防插管反应的效果明显优于硫喷妥钠 ,可能与其扩张外周血管、降低体循环阻力 (ＳＶＲ)有关。有人报道[1] ,丙泊酚诱发血管内皮细胞中一氧化氮合酶 (ＮＯＳ)的生成 ,使一氧化氮 (ＮＯ)合成增加 ;而硫喷妥钠抑制ＮＯＳ活性和ＮＯ的合成[2 ] ,两者对ＳＶＲ的影响可能与内皮舒张因子ＮＯ有关。本文观察了诱导插管前后血清ＮＯＳ活性和ＮＯ水平的变化 ,并探讨插管期间血压、心率变化与循环ＮＯ的关系。资料与方法一般资料　插管全麻非癌患者 2 2例 ,ＡＳＡⅠ～Ⅱ ,无心血管和内分泌疾病 ,随机分为两组 :丙泊酚组 (Ｐｒｏ) 11例 ,男6例、…     

肾盂癌增生活性研究的临床意义

采用免疫组化技术和银染色技术对３１例肾盂癌及９例慢性肾盂炎症组织中增殖细胞核抗原、核仁组成区嗜银蛋白进行研究。结果发现肾盂癌ＰＣＮＡ增殖指数和ＡｇＮＯＲ颗粒计显著高于炎症组，且与肿瘤病理分级、临床分期及预后有关；肾盂癌ＰＣＮＡ增殖指数与ＡｇＮＯＲ计数间存在显著正相关性；还发现ＰＣＮＡ增殖指数＞７５％者术后易再发膀胱肿瘤。提示ＰＣＮＡ免疫染色和ＡｇＮＯＲ计数在鉴别肾盂良恶性病变和判断肾盂癌生物学行为     

阳离子脂质体介导DNA聚合酶α反义寡核苷酸转染并抑制人肝癌细胞的生长

ＤＮＡｐｏｌα是真核生物细胞ＤＮＡ合成的关键酶，与肿瘤的发生及发展密切相关〔１〕。其在肿瘤细胞中含量增加，酶活性增强，ｍＲＮＡ高表达〔２〕。因此以ｐｏｌαｍＲＮＡ为靶核酸而构建的反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）可进入细胞内与靶ｍＲＮＡ特异互补结合，抑制其翻译，使ＤＮＡｐｏｌα的表达减少，从而抑制了人胃〔３〕、肝、人卵巢及乳腺等癌细胞的增殖。我们选用阳离子脂质体脂染素（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｏｎ，Ｌｉｐ）与ＡＳＯＤＮ形成复合物，通过Ｌｉｐ介导使靶细胞快速大量摄入ＡＳＯＤＮ，并躲避细胞内外各种酶的降解，…     

抑制脂肪酸合成酶对乳腺癌细胞的影响及其机制

内源性脂肪酸由位于细胞胞浆中的脂肪酸合成酶 (ＦＡＳ)催化合成 ,有研究表明减少内源性脂肪酸合成可抑制乳腺癌细胞的增殖 ,但其机制尚未阐明[1] 。本研究旨在对其作用机制作进一步探讨。一、材料与方法1.细胞培养 :人乳腺癌细胞株ＭＣＦ 7购自中国科学院上海细胞研究所。常规培养于含 10 %小牛血清的ＲＰＭＩ 164 0培养液中 ,在 10 0 %湿度 ,5 %ＣＯ2 培养箱中3 7℃单层贴壁传代培养。2 .抑制ＦＡＳ对ＭＣＦ 7细胞周期的影响 :ＭＣＦ 7细胞以 1× 10 9个 /Ｌ浓度接种于 2 5ｃｍ2 培养瓶中 ,生长至 70 %融合 ,加入浅蓝霉素 (ｃｅｒｕｌｅｎ…     

诱导型一氧化氮合酶在膀胱移行细胞癌中表达与肿瘤血管生成的关系

一氧化氮 (ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ ,ＮＯ)是生物体内一种结构简单的自由基。业已证实ＮＯ是活化巨噬细胞杀伤肿瘤细胞时产生的毒性效应分子之一 ,近年来的实验和临床研究表明ＮＯ还具有促进肿瘤发生、发展和转移的作用[1] 。诱导型一氧化氮合酶 (ｉＮＯＳ)是催化合成ＮＯ的主要酶。在头颈部鳞癌和结肠腺癌等实体肿瘤中已发现ｉＮＯＳ的表达或活性与肿瘤血管形成呈正相关[2 ,3 ] ,但在膀胱癌中ｉＮＯＳ是否与肿瘤血管形成有关 ,目前尚无相关报道。本研究试图通过检测膀胱移行细胞癌组织中ｉＮＯＳ和第Ⅷ因子相关抗原 (ＦⅧ Ａｇ)的表达 ,探…     

热休克蛋白70反义寡核苷酸增加热应激的前列腺癌细胞凋亡的研究

研究证实 ,许多恶性肿瘤细胞在正常状况和热疗时都有热休克蛋白 70(ＨＳＰ70 )的高表达 ,并与其获得热耐受性[1] 、抗凋亡[2 ] 等恶性行为密切相关。我们探讨了ＨＳＰ70反义寡核苷酸抑制体外培养的人前列腺癌细胞株ＬＮＣａＰ及ＰＣ 3ｍＨＳＰ70的表达后 ,对热应激诱导其凋亡的作用。1.材料与方法 :全硫代ＨＳＰ70反义寡核苷酸序列为 5′ ＣＧＣＧＧＣＴＴＴＧＧＣ ＣＡＴ 3′ ,与人ＨＳＰ70ｍＲＮＡ的起始密码子及下游区 4个密码子互补 ;正义寡核苷酸序列为 :5′ ＡＴＧＧＣＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧ 3′作为对照。人前列腺癌雄激素依赖细胞株…     

烫伤后多器官功能衰竭及一氧化氮作用的研究

严重烧伤后延迟复苏、感染等因素可能造成多器官功能衰竭 (ＭＯＦ)的发生 ,其病死率高达 70 %～ 10 0 % ,国内外学者对其发病机制、防治措施进行过广泛探讨。近年来的研究表明[1,2 ] ,烧伤后发生ＭＯＦ或多器官功能不全综合征(ＭＯＤＳ)者 ,血中或脏器中血栓素Ａ2 (ＴＸＡ2 )、前列环素ＰＧＩ2 、ＰＧＦ2 α、丙二醛 (ＭＤＡ)、肿瘤坏死因子 (ＴＮＦ)等炎性介质或细胞因子含量明显增加 ,ＮＯ2 -/ＮＯ3-水平升高 ,一氧化氮 (ＮＯ)代谢产物增加 ,血浆及肺泡灌洗液中ＮＯ含量明显升高[2 ] 。琥珀酸脱氢酶 (ＳＤＨ )、超氧化物歧化酶(ＳＯＤ) ,…     

对人子宫内膜月经周期中增殖细胞核抗原标记细胞的探讨

本实验使用因子宫肌瘤摘出的子宫标本４０份。根据主诉与子宫内膜标本ＨＥ染色，将标本分成８个期。免疫组织化学法进行子宫内膜月经周期增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）染色反应。结果发现，ＰＣＮＡ标记细胞在增殖初期腺上皮（４０％）和增殖中期间质中部（４８％）标记率最高，而表面上皮细胞中很少；排卵期可见腺上皮的ＰＣＮＡ标记细胞再次增加；分泌期只有间质中可见ＰＣＮＡ标记细胞。本结果对人月经周期正常子宫内膜细胞增殖变化情况提供了新资料。     

肾癌增殖细胞核抗原与病理及预后关系的研究

为探讨肾癌增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）与临床病理及预后的关系，采用免疫组织化学Ｓ－Ｐ法对５３例肾癌组织中ＰＣＮＡ进行检测。其中ＰＣＮＡ阳性细胞数和分布呈异质性，ＰＣＮＡ表达与细胞类型、肿瘤分期与分级均相关，ＰＣＮＡ高表达（３￣４级）术后５年生存率明显低于低表达（１￣２级）。结果表明ＰＣＮＡ可以定量地肿瘤分化程度及恶性度，强度ＰＣＮＡ与临床分期结合能更好地判定肾癌的预后，ＰＣＮＡ高表达者易发生转移且预     

绝经后补充雌孕激素对子宫内膜增生与抑制的研究Ⅰ.用核分裂相与增殖细胞核抗原观察大鼠子宫内膜对雌激素的增殖反应

本实验采用核分裂相与增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ，ＰＣＮＡ）免疫组化染色阳性细胞作为指标，观察大鼠子宫内膜对不同剂量戊酸雌二醇的增殖反应，为激素替代治疗预防子宫内膜增生提供科学依据。实验选择成年ＳＤ雌性大鼠４０只作为动物模型，分为７组，分别给予不同剂量的戊酸雌二醇和安慰剂，２４小时后观察子宫内膜上皮细胞核分裂与ＰＣＮＡ染色情况。结果：对照组，子宫内膜腔上皮细胞与腺上皮细胞基本无核分裂及ＰＣＮＡ着色；给药组，在实验用的几个剂量中，子宫内膜腔上皮细胞与腺上皮细胞核分裂率及ＰＣＮＡ阳性细胞率随戊酸雌二醇剂量增加而递增，与剂量呈线性关系。在戊酸雌二醇８００μｇ／ｋｇ剂量组，核分裂率及ＰＣＮＡ阳性细胞率最明显。统计结果表明戊酸雌二醇剂量与核分裂率及ＰＣＮＡ染色阳性细胞率显著相关，两项指标之间在判断内膜细胞增生时亦呈显著性相关，表明ＰＣＮＡ染色阳性细胞率与细胞核分裂率同样具有良好的可靠性，为进一步观察内膜增殖情况奠定基础。