CCK—8对内毒素休克大鼠肺泡巨噬细胞吞噬及p38MAPK 表达的影响

目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对脂多糖(LPS)引起的内毒素性休克(ES)大鼠脾脏和肺脏的TNF-α基因表达的影响,进一步探讨CCK-8的受体作用机制.方法尾静脉注入LPS(8mg/kgiv)复制大鼠ES模型、LPS注入前10min尾静脉注入CCK-8(40μg/kgiv)、单独注入CCK-8(40μg/kgiv)或生理盐水(对照)的四组大鼠分别于LPS注入后30min、2h和6h取脾脏和肺脏进行RT-PCR检测TNF-αmRNA表达.LPS注入后2h、6h和12h取脾脏进行RT-PCR检测CCKA/B受体mRNA表达.结果CCK-8可抑制LPS注入后30min和2h引起的脾脏和肺脏TNF-αmRNA表达的上调,注入LPS后6hTNF-αmRNA的表达与对照组比较没有显著差异.LPS注入后2h、6h和12hES大鼠脾脏CCK-8受体表达较对照组上调,以2h上调作用最为显著.讨论和结论TNF-α是一个早期的重要炎症介质,由于TNF-α能促进IL-1和IL-6等炎症介质的产生,而引起级链式的炎症反应,引起持续损害,LPS组6h尽管TNF-α下降,但病理损害仍比2h明显加重.我室以往研究已证实CCK-8有抗ES的作用.脾脏和肺脏是产生TNF-α的重要器官,CCK-8能抑制TNF-α的产生,可能通过抑制其转录而起作用.LPS诱导脾脏CCK受体表达增加,属疾病状态下的受体、配体间的正向调节.LPS致机体损伤的同时也启动了机体的保护机制,CCKA/B受体表达增加,是该保护机制之一.这些发现提示CCK-8逆转ES可能与其抑制TNF-α基因表达的作用有关;LPS可上调脾脏CCKA/B受体表达,说明CCK-8保护作用的受体机制.     

CCK-8减轻内毒素休克大鼠脾脏和肺脏损伤

目的: 研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对脂多糖(LPS)引起的大鼠内毒素性休克(ES) 的低血压及脾脏和肺脏超微结构改变的影响,进一步探讨与一氧化氮/一氧化氮合酶(NO/NOS)和MDA /SOD含量及活性变化的关系.方法: 使用生理多道记录仪,观察尾静脉注入LPS(8 mg/kg iv)复制的大鼠ES模型、LPS注入前10 min尾静脉注入CCK-8(40 μg/kg iv)、单独注入CCK -8(40 μg/kg iv)或生理盐水(对照)的四组大鼠血压的改变,应用光镜观察给药后30 min 、2 h 、6 h各组脾脏和肺脏结构改变,透射电镜观察6 h各组脾脏和肺脏超微结构改变.检测6 h各组血清、脾脏和肺脏NO/NOS和MDA/SOD含量及活性变化.结果:CCK-8可逆转LPS引起的大鼠平均动脉血压的下降.光、电镜结果显示LPS致肺脏和脾脏中出现炎细胞浸润、凋亡和坏死等征象,CCK-8可减轻LPS引起的脾脏和肺脏超微结构损伤.LPS组血清、脾脏和肺脏NO含量分别增加为对照组的2.6倍、1.5倍和2.1倍,NOS活性分别增加为对照组的3.5 倍、1 .2倍和1.9倍;CCK-8抑制LPS诱导的这种NO含量和NOS活性的增加.LPS组血清、脾脏和肺脏M DA含量显著高于其余组,SOD活力显著低于其余组;CCK-8+LPS组MDA含量和SOD活力接近对照组.讨论:LPS致大鼠血清、脾脏和肺脏MDA含量增高,SOD活性降低及NO过量生成可能是E S时脾脏和肺脏损伤的重要因素之一.SOD/MDA活性和含量是反映氧化损伤的重要指标,NO过量生成进而形成毒性更强的过氧亚硝基阴离子,可能是导致脾脏和肺脏损伤的重要因素之一 .CCK-8直接或间接影响自由基的生成,从而减轻脏器损伤.结论:这些发现提示 CCK-8减轻ES大鼠脾脏和肺脏的损伤,可能与其抗氧化作用及抑制NO的过量生成有关.     

CCK—8抑制内毒素休克大鼠细胞因子的生成

目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对脂多糖(LPS)引起的大鼠内毒素性休克(ES)的低血压及脾脏和肺脏超微结构改变的影响,进一步探讨与一氧化氮/一氧化氮合酶(NO/NOS)和MDA/SOD含量及活性变化的关系.方法使用生理多道记录仪,观察尾静脉注入LPS(8mg/kgiv)复制的大鼠ES模型、LPS注入前10min尾静脉注入CCK-8(40μg/kgiv)、单独注入CCK-8(40μg/kgiv)或生理盐水(对照)的四组大鼠血压的改变,应用光镜观察给药后30min、2h、6h各组脾脏和肺脏结构改变,透射电镜观察6h各组脾脏和肺脏超微结构改变.检测6h各组血清、脾脏和肺脏NO/NOS和MDA/SOD含量及活性变化.结果CCK-8可逆转LPS引起的大鼠平均动脉血压的下降.光、电镜结果显示LPS致肺脏和脾脏中出现炎细胞浸润、凋亡和坏死等征象,CCK-8可减轻LPS引起的脾脏和肺脏超微结构损伤.LPS组血清、脾脏和肺脏NO含量分别增加为对照组的2.6倍、1.5倍和2.1倍,NOS活性分别增加为对照组的3.5倍、1.2倍和1.9倍;CCK-8抑制LPS诱导的这种NO含量和NOS活性的增加.LPS组血清、脾脏和肺脏MDA含量显著高于其余组,SOD活力显著低于其余组;CCK-8+LPS组MDA含量和SOD活力接近对照组.讨论LPS致大鼠血清、脾脏和肺脏MDA含量增高,SOD活性降低及NO过量生成可能是ES时脾脏和肺脏损伤的重要因素之一.SOD/MDA活性和含量是反映氧化损伤的重要指标,NO过量生成进而形成毒性更强的过氧亚硝基阴离子,可能是导致脾脏和肺脏损伤的重要因素之一.CCK-8直接或间接影响自由基的生成,从而减轻脏器损伤.结论这些发现提示CCK-8减轻ES大鼠脾脏和肺脏的损伤,可能与其抗氧化作用及抑制NO的过量生成有关.     

CCK-8抑制内毒素休克大鼠细胞因子的生成

目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对脂多糖(LPS)引起的大鼠内毒素性休克(ES)的低血压及细胞因子产生的影响.方法使用生理多道记录仪,观察尾静脉注入LPS(8mg/kgiv)复制的大鼠ES模型、LPS注入前10min尾静脉注入CCK-8(40μg/kgiv)、单独注入CCK-8(40μg/kgiv)或生理盐水(对照)的四组大鼠血压的改变,应用ELISA试剂盒检测血清、脾脏和肺脏中前炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)的特异性差别.结果CCK-8逆转LPS引起的大鼠平均动脉血压的下降.与对照组相比,LPS显著增加血清IL-6水平(3566.92±686.95pg/mLvsl28.49±22.06pg/mL,P＜0.01),而TNF-α和IL-1β含量虽然显著增加(276.71±86.43pg/mLvs检测不到和43.19±9.41pg/mLvs检测不到,P＜0.01),但增加幅度低于IL-6.CCK-8显著抑制LPS诱导的血清TNFα、IL-β和IL-6的增加.与对照组相比,LPS显著增加脾脏和肺脏的IL-1β含量(分别为5183.56±84.91pg/mLvs1047.40±21.37pg/mL和4049.91±613.79pg/mLvs检测不到,P＜0.01),TNF-α和IL-6水平亦有增加但其程度低于IL-1β.CCK-8抑制LPS诱导的脾脏和肺脏的这些细胞因子的增加.讨论和结论TNF-α、IL-1β和IL-6是重要的前炎症介质,其内源性产生过量可能是全身性感染合并组织损伤和器官衰竭的原因.CCK-8可能通过某些环节抑制这些炎症细胞因子的过量生成.这些发现提示CCK-8逆转ES可能与其对细胞因子过量产生的抑制作用有关.     

p38 MAPK 和STAT3参与CCK-8抑制LPS诱导的大鼠促炎症细胞因子生成

 目的：观察八肽胆囊收缩素（CCK-8）是否改善脂多糖（LPS）引起的大鼠细胞因子的变化,并探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)和信号转导子及转录激活子3(STAT3)的信号转导作用,以及CCK受体（CCK-R）的作用。方法：4组大鼠尾静脉分别注入生理盐水（对照）、LPS (8 mg/kg)、CCK-8(40 μg/kg)和CCK-8(40 μg/kg)+LPS (8 mg/kg), 酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清、肺脏及脾脏中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）和IL-6的变化,Western blotting和免疫荧光双标激光共聚焦显微镜检测肺脏和脾脏磷酸化p38 MAPK和磷酸化STAT3的表达,RT-PCR检测脾脏CCK-R亚型的mRNA表达。结果：CCK-8可显著抑制LPS诱导的TNF-α、IL-1β和IL-6的增加。CCK-8可增加LPS诱导的大鼠肺脏和脾脏磷酸化p38 MAPK和磷酸化STAT3的表达。LPS有诱导CCK-AR及CCK-BR mRNA表达量增加的作用。结论：CCK-8对LPS刺激的大鼠促炎症细胞因子过量产生有抑制作用,p38 MAPK和STAT3可能参与了其信号转导机制。LPS刺激时,CCK-R受体发生正向调节,CCK-8有可能用于治疗全身性感染及其它的炎症性疾病。     

八肽胆囊收缩素对内毒素血症大鼠CD14表达的抑制作用

目的CD14是宿主识别细菌脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)的关键受体,以膜结合型(membrane-associatedCD14,mCD14)和可溶性(solubleCD14,sCD14)两种形式存在.CD14结合LPS的脂质A介导信号传递,诱生大量炎症介质.而LPS又可直接或间接上调CD14的表达,促进炎症反应,最终引起多器官衰竭.应用CD14抗体可明显减轻细胞对LPS的反应,提高内毒素血症家兔的生存率.目前CD14已成为治疗内毒素休克的新靶子.我们以往的研究表明八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)具有明显的抗内毒素休克(endotoxicshock,ES)作用,可减轻ES大鼠肺、肝、肾组织炎症反应,降低肺动脉压,提高平均动脉压,改善生存率,但其作用机制尚未完全阐明.为深入探讨CCK-8抗ES作用的机制,本研究观察了CCK-8对内毒素血症大鼠肺组织及血清中CD14蛋白表达的影响.方法静脉注入LPS(5mg/kgdw)6h复制大鼠内毒素血症模型,用Westernblot技术检测血清中sCD14蛋白的表达,用免疫组织化学技术检测肺组织中CD14的表达及分布.静脉预注入CCK-8(40μg/kgdw)和/或CCK受体拮抗剂丙谷胺(1mg/kgdw)10min后注入LPS6h,观察上述指标.结果(1)大鼠血清中sCD14蛋白存在两种分子形式sCD14α(49kD)及sCD14β(55kD),注入LPS后6h二者表达均明显增加,静脉预注入CCK-8则可显著抑制其表达,且该作用可被丙谷胺拮抗;(2)对照组大鼠肺组织CD14只表达在巨噬细胞,而在内毒素血症大鼠肺组织中,不仅巨噬细胞上的CD14阳性信号增强,表达CD14的巨噬细胞增多,而且在支气管上皮细胞表面也检测到CD14阳性信号;静脉预注入CCK-8则明显减少了CD14的表达,丙谷胺可拮抗CCK-8的作用.结论CCK-8对内毒素血症大鼠肺组织CD14及血清sCD14的表达具有抑制作用,降低大鼠对LPS的敏感性,可能是CCK-8抗ES作用的重要机制之一.     

“失血加LPS”大鼠肺脏IκBα和TLR4基因表达及参麦的肺脏保护作用

目的： 探讨参麦注射液的抗休克效果及其作用机制。 方法： 大鼠随机分为单纯失血性休克（HS）组、失血加脂多糖（HS+LPS）组、地塞米松（HS+LPS+Dex）组和参麦注射液（HS+LPS+SM）组。HS+LPS组大鼠模型复制：首先，大鼠放血至MAP 40 mmHg,维持10 min（失血性休克），然后舌下静脉注射LPS（1.5 mg/kg）。4h后留取肺脏组织,RT-PCR法测定IκBα和TLR4 mRNA表达、ELISA法测TNF-α含量，并进行肺脏组织电镜观察。 结果： HS+LPS+SM组TLR4 mRNA表达明显低于HS+LPS组（P<0.05）；HS+LPS+SM组IκBα mRNA表达明显高于HS+LPS组（P<0.05）；HS+LPS+SM组肺脏组织匀浆TNF-α含量明显低于HS+LPS组（P<0.05）；HS+LPS+SM组肺组织病理损伤显著轻于HS+LPS组。 结论： 参麦注射液能够下调肺脏组织中TLR4 mRNA表达，同时上调IκBα的表达，进而抑制促炎介质TNF-α释放，提示参麦注射液可能通过调节NF-κB信号转导途径抑制炎症反应而对机体细胞起保护作用。     

CCK-8上调LPS诱导的大鼠肺组织HO-1表达的信号转导机制

目的： 旨在研究八肽胆囊收缩素（CCK-8）上调脂多糖（LPS）诱导的大鼠肺组织中血红素氧合酶（HO）-1表达的信号转导机制。方法: 将42只雄性SD大鼠随机分为7组（每组6只）,即对照组、LPS组、LPS+SP600125（JNK特异性抑制剂）组、CCK-8+LPS组、CCK-8+LPS+SP600125组、CCK-8组、CCK-8+SP600125组。注药后6 h放血处死动物留取肺组织,应用RT-PCR、Western blotting和免疫荧光流式细胞术（FCM）等技术分别检测各组肺组织HO-1 mRNA和蛋白表达。结果: 与正常对照组相比,LPS组可见肺组织中出现明显的HO-1 mRNA表达的阳性信号,CCK-8可使LPS诱导的阳性表达信号进一步增强,CCK单独作用也可上调HO-1表达。信号密度扫描结果显示,LPS组、CCK-8+LPS组和CCK-8组HO-1 mRNA表达强度分别是正常对照组3.01（P<0.01）、5.88（P<0.01）和3.45倍（P<0.01）;JNK特异性抑制剂SP600125抑制了CCK-8和（或）LPS诱导的HO-1 mRNA表达;Western blotting、免疫荧光FCM检测结果显示,肺组织HO-1蛋白表达变化与其mRNA表达一致。结论: JNK/c-Jun通路在CCK-8上调LPS诱导肺组织HO-1表达过程中发挥重要作用。     

八肽胆囊收缩素对TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364 IL-6的作用及其可能的分子机制(英文)

目的: 观察硫酸化八肽胆囊收缩素（sCCK-8）对TNF-α诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364 IL-6 mRNA 表达及核因子NF-κB的影响及其可能的受体机制。方法: 大鼠滑膜细胞株RSC-364经TNF-α(10　μg/L)、sCCK-8(10^-8-10^-6 mol/L)、CCK受体拮抗剂丙谷胺（2 mg/L）及溶剂单独或联合孵育3 h，用RT-PCR检测细胞IL-6、CCK-AR及CCK-BR mRNA的表达，孵育1 h，用电泳迁移率检测NF-κB活性，孵育30 min，用Western blotting检测胞浆IκB蛋白表达。结果: RSC-364细胞固有表达CCK-A/B受体，sCCK-8（10^-8-10^-6 mol/L）使IL-6、CCK-AR和CCK-BR mRNA表达进一步增高，明显增加TNF-α诱导的NF-κB活性，降低胞浆中IκB蛋白水平，并可被丙谷胺所拮抗。结论: sCCK-8通过NF-κB途径上调TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞IL-6 mRNA表达，此作用可能通过滑膜细胞上的CCK受体实现，提示CCK-8在类风湿性关节炎（RA）发病过程中可能具有调控作用。     

八肽胆囊收缩素改善内毒素休克大鼠心肌损伤的实验研究

目的观察八肽胆囊收缩素(CCK-8)改善内毒素休克(ES)大鼠心肌损伤的变化,探讨CCK-8逆转ES心功能衰竭及顽固性低血压的作用机制.方法实验分4组(1)对照组,静脉注射生理盐水0.2mL;(2)LPS组,静脉注射8mg*kg-1LPS;(3)CCK组,静脉注射40μg*kg-1CCK-8;(4)CCK+LPS组,静脉注射40μg*kg-1CCK-8,10min后再注入LPS(8mg*kg-1).股动脉插管监测平均动脉压(MAP),尾静脉穿刺注射药物.分别测定2h、6h心肌组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量变化,用ELISA法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)含量.结果(1)MAP变化对照组MAP为(14.20±1.38)kPa,静脉注射LPS后MAP快速持续下降,75min降至低谷为(7.16±0.59)kPa;CCK+LPS在CCK注入20min时MAP下降幅度与LPS组无差异,20min后即迅速回升,至120min仍持续在较高水平(10.71±0.45)kPa,仍未恢复至正常水平.(2)SOD活性变化2h、6h对照组SOD为(60.51±2.23)×103U/L和(55.97±4.96)×103U/L,LPS组心肌组织匀浆中SOD活性则明显下降为(48.69±2.30)×103U/L和(34.49±4.69)×103U/L,CCK+LPS组较LPS组SOD活性则明显回升为(56.19±1.83)×103U/L和(41.95±7.44)×103U/L.(3)MDA含量变化2h、6h对照组MDA为(3.43±1.76)μmol/L和(3.68±1.58)μmol/L,LPS组心肌组织匀浆中MDA含量明显上升(19.71±3.02)μmol/L和(36.18±5.26)μmol/L,CCK+LPS组较LPS组MDA含量显著下降为(0.39±2.43)μmol/L和(15.10±2.12)μmol/L.(4)NO含量变化2h、6h对照组NO为(37.96±1.85)mmol/L和(41.98±6.59)mmol/L,LPS组心肌组织匀浆中NO含量明显上升(73.45±8.93)mmol/L和(105.4±3.61)mmol/L,CCK+LPS组较LPS组NO含量显著下降为(60.91±3.15)mmol/L和(70.37±7.68)mmol/L.(5)TNF-α含量变化2h对照组心肌组织匀浆中为(320.81±110.63)ng/L,LPS组TNF-α含量明显上升为(1599.08±227.03)ng/L,CCK+LPS组较LPS组TNF-α含量显著下降为(863.54±123.19)ng/L.(6)IL-1β含量变化6h对照组心肌组织匀浆中为(163.10±80.20)ng/L,LPS组IL-1β含量明显上升为(620.66±144.57)ng/L,CCK+LPS组较LPS组IL-1β含量显著下降为(282.07±92.68)ng/L.结论预先注射CCK-8可以减轻ES大鼠心肌氧化损伤,抑制炎性细胞因子TNF-α及IL-1β产生,影响NOS活性,使NO合成下降,发挥心肌细胞保护作用,恢复心肌收缩力,是其逆转ES心功能衰竭及顽固性低血压的主要机制.     

硼酸对脂多糖诱导的人单核细胞产生TNF-α的影响

目的 研究硼酸对脂多糖(LPS)激活后的人单核细胞THP-1产生,INF-α的影响.方法 采用 ELISA法检测硼酸对LPS诱导的THP-1分泌TNF-α的影响;采用RT-PCR方法检测硼酸对LPS激活的THP-1表达TNF-α mRNA的影响.结果 LPS(1 μg/mL)处理THP-1细胞3 h后,THP-1细胞TNF-α mRNA表达升高,培养液中TNF-α的水平也升高,硼酸预处理24h后再给予LPS,则TNF-α的分泌和mRNA表达都呈剂量依赖关系的下降,25 μmol/L硼酸组与LPS组相比有显著性差异(P<0.05).结论 硼酸能抑制LPS诱导的THP-1细胞,INF-α mRNA的表达和分泌,提示硼酸可能通过对炎症因子TNF-α的负性调控而发挥其抗炎作用.     

CCK-8抑制LPS诱导大鼠肺间质巨噬细胞TNF-α转录及NF-κB活性

目的:观察硫酸化八肽胆囊收缩素(CCK-8)对体外脂多糖(LPS)诱导大鼠肺间质巨噬细胞(PIMs)TNF-α基因表达的影响,探讨核因子κB(NF-κB)是否参与这一过程,以揭示CCK-8抗炎作用的信号转导机制。方法:分离大鼠肺PIMs,经LPS、CCK-8、CCK受体拮抗剂丙谷胺及溶剂单独或联合应用孵育3h,用RT-PCR技术检测细胞TNF-αmRNA的表达,孵育1h,用电泳迁移率改变分析方法检测NF-κB活性,孵育30min,用Westernblot技术检测胞浆IκBα蛋白表达情况。结果:CCK-8(10^-8-10^-6mol·L^-1)明显降低了LPS诱导的TNF-αmRNA表达及NF-κB活性,增加了胞浆中IκBα蛋白水平,呈剂量依赖性,并可被丙谷胺所拮抗。结论:对LPS激活的肺PIMs,CCK-8通过抑制NF-κB活性而抑制其TNF-αmRNA表达,该作用由CCK受体介导,并与CCK-8减少IκBα蛋白降解有关,此为CCK-8抗炎作用的机制之一。     

脂多糖活化的大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α产生的新机制

目的：探讨脂多糖（LPS）活化的肺泡巨噬细胞中低氧诱导因子－1α（HIF-1α）的表达及其在肺泡巨噬细胞产生肿瘤坏死因子α（TNF-α）中的作用。 方法： 应用HIF-1α 诱骗法（HIF-1α decoy）抑制其作用，并用Western blotting、半定量RT-PCR、酶联免疫吸附法（ELISA）分别检测HIF-1α蛋白、mRNA的表达和TNF-α的产生。 结果： HIF-1α蛋白含量在LPS组（1.95±0.57）和HIF-1α decoy组（1.89±0.59）均明显高于对照组（0.41±0.14，P＜0.05）；HIF-1α mRNA的表达在对照组（0.7838±0.3183）、LPS组（0.7622±0.3387）和HIF-1α decoy组（0.8155±0.3594）之间无显著差异（P>0.05）；LPS刺激24 h后，大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α的产生明显高于对照组（61 ng/L vs 156 ng/L, P<0.05），抑制HIF-1α后TNF-α的产生明显低于LPS刺激组（90 ng/L vs 156 ng/L, P<0.05），但 HIF-1α decoy组TNF-α的产生仍然高于对照组（61 ng/L vs 94 ng/L, P<0.05）。 结论： 大鼠肺泡巨噬细胞在LPS的刺激下HIF-1α蛋白的稳定性增强使其表达明显上调，并且促进TNF-α的产生，提示HIF-1α在肺部慢性炎症性疾病如COPD的发病机制中可能有重要作用。     

CCK-8对内毒素休克大鼠肺泡巨噬细胞吞噬及p38MAPK表达的影响

目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对脂多糖(LPS)引起的内毒素休克(ES)大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能、支气管肺泡灌洗液(BALF)中MDA含量变化以及大鼠肺泡巨噬细胞p38MAPK表达的改变.方法使用生理多道记录仪,观察尾静脉注入LPS(8mg/kgiv)复制的大鼠ES模型、LPS注入前10min尾静脉注入CCK-8(40μg/kgiv)、单独注入CCK-8(40μg/kgiv)或生理盐水(对照)的四组大鼠血压的改变,于LPS注入2h进行支气管肺泡灌洗,获BALF,从中分离肺泡巨噬细胞,检测吞噬白色念珠菌能力的改变,以吞噬率和吞噬指数表示;分离正常大鼠肺泡巨噬细胞,体外刺激30min后,免疫组化观察p38MAPK表达的变化.结果[HTSS〗CCK-8可逆转LPS引起的大鼠平均动脉血压的下降.LPS注入2h肺泡巨噬细胞吞噬能力显著增强,吞噬指数由对照组的2.43±0.41增加到3.80±0.60(P＜0.05),CCK-8抑制LPS诱导的肺泡巨噬细胞吞噬能力增强,但与对照组相比,CCK-8可增强吞噬能力.LPS组BALF中MDA含量显著增加(P＜0.05),CCK-8±LPS组MDA含量明显低于LPS组.免疫组化显示LPS可激活p38MAPK,CCK-8可增强p38MAPK的表达.讨论和结论LPS致BALF中MDA含量增高,提示LPS刺激下肺泡巨噬细胞激活,吞噬功能增强,引起一系列过强的炎症反应.CCK-8可明显减少BALF中MDA含量,抑制LPS引起的巨噬细胞吞噬功能的增强,但本身可增强巨噬细胞吞噬功能,其机制可能与p38MAPK途径有关.p38MAPK为多种信号传导途径的交汇点.CCK-8可能通过激活p38MAPK途径调节ES大鼠的免疫功能,二者可能存在微妙的平衡.     

八肽胆囊收缩素抑制脂多糖诱导的大鼠肺间质巨噬细胞CD14的表达

目的:初步探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对体外脂多糖(LPS)激活大鼠肺间质巨噬细胞(IM)的调节作用。方法:分离大鼠肺IM,经LPS、CCK-8、CCK受体拮抗剂丙谷胺及溶剂单独或共同孵育后,测定细胞CD14的表达及上清中TNF-α含量。 结果:LPS(1 mg/L)孵育12 h,肺IM mCD14表达上调,上清中sCD14及TNF-α含量均明显增加;CCK-8(10^-7-10^-6 mol/L)抑制了LPS的上述效应,且可被丙谷胺所拮抗。结论:CCK-8对LPS激活的肺IM的部分功能具有抑制性调节作用,该作用是由其受体介导的,可能是CCK-8减轻内毒素血症时肺组织炎性变化的重要机制之一。     

CCK-8通过调节κB活性促进大鼠滑膜细胞株RSC-364 IL-6转录

目的观察硫酸化八肽胆囊收缩素(sCCK-8)对TNF-α诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364 IL-6基因表达的影响及核因子NF-κB活性,以探讨CCK-8对类风湿性关节炎(RA)的调控机制。方法大鼠滑膜细胞株RSC-364经TNF-α、sC-CK-8、CCK受体拮抗剂丙谷胺及溶剂单独或联合应用孵育3 h,用RT-PCR检测细胞IL-6 mRNA的表达,孵育1 h,用电泳迁移率检测NF-κB活性,孵育30 min,用Western blot检测胞浆I-κB蛋白表达。结果sCCK-8(10-8~10-6mol/L)明显增加TNF-α诱导的IL-6 mRNA表达及NF-κB活性,呈剂量依赖性,降低胞浆中I-κB蛋白水平,并可被丙谷胺所拮抗。结论sCCK-8在类风湿性关节炎(RA)发病过程中可能具有调控作用。     

重组大鼠CC16蛋白质对LPS诱导大鼠气道上皮细胞表达TNF-α、IL-6和IL-8的影响

目的:观察重组大鼠CC16蛋白质(r CC16)对脂多糖(LPS)诱导大鼠气道上皮(RTE)细胞肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-8表达的影响及其可能机制。方法:体外培养RTE细胞,以不同剂量(0.5、1.0和2.0 mg/L)的r CC16预处理RTE细胞2 h,接着加入0.1 mg/L的LPS继续培养24 h。采用RT-q PCR测定各组细胞TNF-α、IL-6和IL-8的mRNA表达;采用ELISA测定细胞上清中TNF-α、IL-6和IL-8的含量;采用Western blot法分析核因子(NF)-κB p65在细胞核中的分布。结果:LPS刺激RTE细胞可以显著上调TNF-α、IL-6和IL-8的mRNA及蛋白水平的表达,给予不同剂量rCC16干预后,LPS诱导的上述炎症介质的表达被抑制,且rCC16对IL-6和IL-8的抑制作用呈剂量依赖性,随着rCC16剂量的增加,抑制作用增强;而对TNF-α的抑制则没有剂量依赖关系。Western blot实验结果显示,rCC16可以抑制LPS诱导的NF-κB p65的核转移,且有剂量依赖性。结论:rCC16可能通过NF-κB信号通路抑制LPS诱导的RTE细胞TNF-α、IL-6和IL-8 mRNA及蛋白的表达。     

CD14抑制肽对内毒素诱导U937细胞表达TNF-α的影响

目的 观察CD14抑制肽(CD14 inhibitory peptide,CD14-IP)对内毒素诱导的U937细胞表达TNF-α的影响.方法 U937细胞用佛波脂(PMA)诱导成熟后分5组:正常对照组、LPS组、高剂量抑制肽组、中剂量抑制肽组和低剂量抑制肽组.LPS组给予终浓度为100 ng/mL的LPS和100 ng/mL的LBP,高、中和低剂量抑制肽组除给予LPS和LBP外,分别给予终浓度为10 μg/mL、1.0 μg/mL和0.1 μg/mL的CD14-IP.ELISA测定细胞培养上清NNF-α的浓度.进一步观察不同时间应用CD14-IP(1.0 μg/mL)对LPS诱导U937细胞TNF-α和NTF-α mRNA表达的影响.用RT-PCR测定细胞TNF-α mRNA的表达.结果 LPS组和抑制肽各组TNF-α浓度较正常组明显增高(P<0.05),高、中剂量抑制肽组TNF-α水平比LPS组明显降低(P<0.05),高、中剂量抑制肽组之间TNF-α浓度无明显差别(P>0.05),低剂量抑制肽组TNF-α浓度与LPS组无统计学差异(P>0.05).不同时间应用CD14-IP时,CD14-IP早期应用对TNF-α和TNF-α mRNA的表达抑制作用显著.结论 CD14-IP能显著减少LPS诱导的U937细胞TNF-α和TNF-α mRNA的表达,早期应用效果较好,可能对LPS所致急性肺损伤有保护作用.     

八肽胆囊收缩素对大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌IL-6的影响

探讨八肽胆囊收缩素（CCK-8）对大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌IL-6的调控作用。应用ELISA法观察不同浓度梯度的CCK-8对在TNF-α或IL-1β诱导下的RSC-364分泌IL-6水平的影响。结果显示：10^-6mol/L,10^-8mol/L浓度的CCK-8可分别促进TNF-α或IL-1β诱导24h后RSC-364细胞株分泌IL-6，而应用CCK受体拮抗剂丙谷胺则可明显抑制这种刺激效应，提示CCK-8可调节滑膜细胞分泌IL-6，在类风湿性关节炎的发病机制中可能起潜在的调控作用。