非小细胞肺癌组织中PD-1/PD-L1的表达与EGFR突变的关系及其对预后的影响

目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)中程序性死亡受体1(programmed death receptor-1,PD-1)及程序性死亡受体配体1(programmed death receptor ligand-1,PD-L1)的表达和EGFR突变及其与预后的关系。方法:收集2013年01月至2015年12月由我院病理科经组织学诊断为非小细胞肺癌,并完成EGFR突变检测的150例患者的临床资料,应用免疫组织化学方法检测NSCLC组织中PD-1/PD-L1和CD8蛋白表达情况,分析其与临床病理参数及与EGFR突变的相关性,并对影响患者预后的多个临床病理因素进行分析。结果:非小细胞肺癌组织中PD-1/PD-L1和CD8的阳性表达率分别为34.7%(52/150)、50.4%(57/113)和59.2%(84/142)。其中PD-L1的表达与PD-1的表达(P=0.025,r_s=0.211)有关;PD-1的表达与术后病理分期(P=0.031,r_s=-0.177)及EGFR突变(P=0.001,...     

非小细胞肺癌EGFR启动子区甲基化和mRNA表达临床意义的探讨

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)的表达与非小细胞肺癌(NSCLC)组织学类型和淋巴结转移的关系,分析EGFR启动子区甲基化与其mRNA表达的关系.方法:应用免疫组织化学法检测60例非小细胞肺癌组织中EGFR的表达,统计EGFR与病理类型及淋巴结转移的关系.用实时定量PCR方法检测其中30例非小细胞肺癌组织和对应的癌旁组织中EGFR mRNA的表达,用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测EGFR启动子区的甲基化状态.结果:鳞癌中EGFR阳性率为38.5％(10/26),明显低于腺癌中EGFR阳性率76.5％ (26/34),差异有统计学意义,x2=8.87,P=0.002 9;且有淋巴结转移的NSCLC中EGFR的阳性率为73.7％(28/38),而无淋巴结转移的NSCLC中EGFR的阳性率为45.5％(10/22),差异有统计学意义,x2=4.78,P=0.028.30例有癌旁组织的标本中,11例患者肿瘤组织EGFR的表达高于其癌旁组织;12例标本中存在肿瘤组织EGFR基因启动子区甲基化水平与EGFR mRNA表达呈负调节关系.结论:EGFR的表达与NSCLC的病理类型及淋巴结转移相关,部分NSCLC患者中存在EGFR基因启动子区甲基化水平与EGFR基因mRNA表达呈负调节关系.     

Beclin1在非小细胞肺癌的表达及其与EGFR突变的关系

目的:观察Beclin1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达情况,探讨其与EGFR突变的相关性.方法:分别采用DNA直接测序法、免疫组化法检测42例NSCLC患者EGFR突变情况及Beclin1表达情况,分析二者之间关系及临床意义.结果:与癌旁组织比较,NSCLC组织中Beclin1高表达(71.4％ vs 30.9％,P＜0.01),Beclin1的表达与吸烟史、病理类型有关(P =0.005,P=0.025).EGFR突变14例,其中高表达Beclin1 11例,低表达Beclin1 2例,突变率为57.9％(11/19) vs 16.7％(2/12),Beclin1的表达与EGFR突变具有显著正相关性(r=0.416,P=0.009).结论:NSCLC患者EGFR突变与Beclin1的表达具有正相关性,Beclin1表达情况在一定程度上有助于判断NSCLC的EGFR突变状况,可能为判断EGFR突变提供有意义的线索.     

NSCLC EGFR突变与吸烟的交互作用及其与miR-221表达的相关性

目的:分析NSCLC EGFR突变与吸烟等因素的交互作用,及其与miR-221表达的相关性,为肺癌分子机制研究提供线索和依据。方法:采用高分辨熔解曲线法（high resolution melting,HRM）进行EGFR突变检测,以EGFR突变阳性为病例组,野生型为对照组,logistic回归分析EGFR突变与吸烟等因素在肺癌中的交互作用,Spearman分析EGFR突变与miR-221表达的相关性。结果:吸烟者相对于不吸烟者,EGFR突变差异具有统计学意义（P=0.034）,不吸烟者EGFR突变率较高。性别、年龄、饮酒、组织学类型、肿瘤直径、TNM分期、分化程度、肿瘤家族史以及心脑血管疾病史与EGFR突变无统计学关系（P＞0.05）;NSCLC EGFR突变与吸烟、饮酒、肿瘤家族史以及心脑血管疾病史对肺癌的发生不存在相乘交互作用;miR-221表达在NSCLC组织明显高于非癌肺组织,差异有统计学意义（P=0.017）;EGFR突变与miR-221表达无相关性（r=-0.034,P=0.858）。结论:NSCLC EGFR突变与吸烟、饮酒、肿瘤家族史及心脑血管疾病史均不存在相乘交互作用,miR-221表达在NSCLC组织中高于非癌病人肺组织,与EGFR突变无相关性。     

表皮生长因子受体及β-连环素在非小细胞肺癌组织中的表达及相关性研究

目的　探讨表皮生长因子受体(EGFR )和β-连环素(βcatenin)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其相关性。方法　应用SABC免疫组化技术检测了5 3例NSCLC中EGFR和βcatenin的表达情况。结果　在5 3例非小细胞肺癌病理组织中,EGFR和βcatenin阳性表达率分别为67.9% (3 6/5 3 )和5 4.7% (2 9/5 3 )。在不同临床分期,有无淋巴结转移的NSCLC比较中EGFR表达有显著差异(P <0 .0 5 ) ;在不同分化程度、有无淋巴结转移的NSCLC中βcatenin表达有显著差异(P <0 .0 5 ) ,EGFR和βcatenin表达呈负相关(γ=-0 .843 6,P =0 .0 0 1)。结论　在NSCLC中,EGFR及βcatenin的表达与淋巴结转移密切相关,两者表达呈负相关,βcatenin低表达提示预后不良。     

PI3K/AKT信号通路与PTEN在非小细胞肺癌表达中的相关性

目的研究表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、磷酸化AKT蛋白(phophorylatedAKT,p-AKT)及PTEN基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome,PTEN)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及意义。方法 采用免疫组织化学Maxvision法检测EGFR、p-AKT及原位杂交法检测PTEN在66例NSCLC和10例正常肺组织中的表达,并分析两者的相关性及其与临床病理特征的关系。结果 EGFR、p-AKT和PTEN在NSCLC中的阳性率分别为69.7%、75.8%、33.3%,在NSCLC中,EGFR的高表达与分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P<0.05);p-AKT的高表达与分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P<0.05)。PTEN在NSCLC中的阳性表达率明显下调,其失表达与分化程度、淋巴结转移、TNM分期和病理类型密切相关(P<0.05)。EGFR与p-AKT表达呈正相关(P<0.05),EGFR与PTEN表达呈负相关(P<0.05),p-AKT与PTEN表达呈负相关(P<0.05)。结论 EGFR和p-AKT在NSCLC的高表达和PTEN基因失表达,可能促进了NSCLC的发生、发展及侵袭转移。可为NSCLC基因靶向治疗提供理论依据。     

非小细胞肺癌中HPV感染与EGFR、VEGF表达的相关性研究

目的:研究非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的关系,探讨它们在肺癌发病中的作用。方法:采用PCR方法检测89例NSCLC和20例肺良性病变中HPV感染的情况;免疫组化SP法检测NSCLC的HPV( )组和HPV(-)组中VEGF、EGFR分别表达的情况。结果:NSCLC组中HPV感染率(35/89)明显高于肺良性病变组(1/20)(P=0.007)。HPV( )组VEGF和EGFR的表达均明显高于HPV(-)组,P值均<0.01。HPV( )、EGFR( )组和HPV( )、EGFR(-)组中VEGF的表达无明显差异。HPV感染与肺癌组织的分化程度、淋巴结转移明显相关,而与组织学类型、吸烟、性别和年龄无关;VEGF的表达与肺癌的淋巴结转移明显相关,而与其他临床病理特征无明显相关性;EGFR的表达与各临床病理特征均无明显相关性。结论:HPV的感染与NSCLC的发生存在一定的相关性,HPV的感染可能通过促进VEGF、EGFR的表达,使肺癌易发生淋巴管生成,导致肺癌易通过淋巴结转移,预防HPV的感染对降低肺癌的发生及减少肺癌的早期转移可能有着重要的意义。     

表皮生长因子受体突变细胞系H1650耐药机制探讨

背景与目的 表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)高表达和突变与40％左右的肺癌有关,已成为靶向治疗药物研究热点;随着Gefitinib和Erlotinib作为EGFR酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)代表药物应用于临床,继而产生的耐药现象亦成为临床一大难题,部分耐药机制仍不清楚.本研究探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞系H1650耐药机制.方法 选用real-time RT-PCR检测EGFR野生型NSCLC细胞系中EGFR mRNA表达水平;MTT检测癌细胞对Erlotinib的药物敏感性;Western blot检测EGFR突变NSCLC细胞系突变情况和Erlotinib及PI3K抑制剂(LY294002)对EGFR突变型NSCLC细胞下游信号蛋白磷酸化水平的影响.结果 EGFR野生型细胞系中,EGFR mRNA表达水平高低不一,但均对Erlotinib耐药;EGFR突变型细胞系中,HCC827和H1650为同种突变类型,HCC827对Erlotinib敏感,H1650则相对耐药;检测显示,H1650细胞中PTEN表达缺失,给予Erlotinib和LY294002处理后,HCC827中P-AKT明显被抑制,但H1650中p-AKT下调不明显.结论 在NSCLC细胞系中,Erlotinib药物敏感性与EGFR的mRNA表达高低无关,但与EGFR的突变类型有关;H1650对Erlotinib相对耐药可能与PTEN缺失导致的P-AKT持续活化有关.     

ER与EGFR在非小细胞肺癌组织中的表达及其意义

[目的]分析雌激素受体α、β（ERα、ERβ）和表皮生长因子受体（EGFR）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其临床意义。[方法]采用MaxVision免疫组织化学技术检测59例NSCLC石蜡包埋组织中ERα、ERβ和EGFR的表达。[结果]（1）ERα在肺癌组织及癌旁组织中均未见表达。ERβ在NSCLC中的阳性表达率为45.8%（27/59）,EGFR在NSCLC中的阳性表达率为64.4%（38/59）,而在癌旁组织中未见ERβ和EGFR的表达。（2）ERβ阳性表达与NSCLC组织学类型有关,在腺癌组织中的表达明显高于鳞癌,与性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、TNM分期、淋巴结转移及吸烟状况无关;EGFR阳性表达与肿瘤组织的TNM分期及淋巴结转移相关,与性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型、分化程度及吸烟状况无关。（3）腺癌中EGFR阳性表达并ERβ阳性表达与鳞癌相比有显著性差异。[结论]ERβ和EGFR可能在肺癌,尤其是腺癌的发生发展中发挥协同作用,由此可以通过同时靶向两个信号通路来治疗NSCLC。     

Fn14与JAK／STAT在非小细胞肺癌EGFR外显子19缺失突变组织中的表达

目的 探讨成纤维细胞生长因子诱导14（Fn14）和Janus激酶／信号转导子和转录激活子（JAK／STAT）信号分子在非小细胞肺癌（NSCLC）EGFR外显子19缺失突变（EGFR 19-Del）组织样本中的表达情况。方法 经突变扩增阻滞系统法筛选出125例EGFR 19 Del的NSCLC组织并收集30例配对癌旁组织，应用免疫组织化学法检测该组织样本中Fn14、p-JAK1和p-STAT1的表达，统计分析3种蛋白表达与临床病理特征的关系及三者之间的相关性。结果 Fn14阳性表达主要定位于细胞膜和胞质，p-JAK1、p-STAT1阳性表达主要定位于细胞质和胞核。EGFR 19-Del的NSCLC组织中Fn14、p-JAK1、p-STAT1的阳性表达率分别为100.0％（125／125）、83.2％（104／125）和100.0％（125／125），均高于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。三者在性别、年龄、吸烟史、病理类型方面的表达差异均无统计学差意义（P＞0.05），在组织学分级、pTNM分期、淋巴结转移方面的表达差异均有统计学意义（P＜0.05）。Fn14与p-JAK1、p-STAT1在病理类型、组织学分级及pTNM分期方面表达均有很好的相关性（P＜0.05，r＞0.3）。结论 Fn14、p-JAK1、p-STAT1在EGFR 19-Del的NSCLC组织中呈高表达，表明Fn14、p-JAK1、p-STAT1很可能与EGFR 19-Del 的NSCLC发生、发展有关；且Fn14可能促进p-JAK1、p-STAT1的表达，为进一步研究Fn14在EGFR 19-Del的NSCLC中的作用机制提供重要依据。     

Mig-6通过负向调控EGFR通路抑制肺癌细胞增殖

目的：观察Mig-6在非小细胞肺癌组织中的表达及其与EGFR表达的关系。在肺癌细胞系中探讨上、下调Mig-6表达后细胞增殖能力及 EGFR通路的变化。方法：用免疫组化,蛋白免疫印迹及实时定量PCR的方法检测肺癌及癌旁组织中Mig-6及EGFR的表达。在肺癌细胞系中通过使用Mig-6质粒和小干扰RNA分别上调和下调Mig-6,CCK-8法检测两株细胞系增殖能力,蛋白免疫印迹检测细胞中p-EG-FR、p-EGFR及p-AKT表达水平。结果：Mig-6在非小细胞肺癌组织中低表达（51.6%）,并与EGFR表达呈负相关（ P=0.003）。在肺癌细胞系中,上调Mig-6表达可以抑制细胞增殖并抑制EGFR、ERK及AKT的磷酸化,下调Mig-6表达则能促进细胞增殖并促进EGFR、ERK及AKT的磷酸化。结论：Mig-6表达在肺癌中与EGFR呈负相关,在肺癌细胞系中Mig-6通过负向调控EGFR下游通路而抑制细胞增殖。     

非小细胞肺癌EGFR、KRAS基因突变与RRM1、TUBB3 mRNA表达水平的相关性

目的:探讨非小细胞肺癌（NSCLC）EGFR、KRAS基因突变与核苷酸还原酶亚基M1（RRM1）、Ⅲ型β微管蛋白（TUBB3）mRNA表达水平的相关性及其临床意义。方法:69例NSCLC组织标本来自解放军空军总医院胸外科2010年6月至2014年10月手术中从肿瘤中心切取。使用xTAG-液相芯片法检测EGFR、KRAS基因突变,分支DNA-液相芯片法检测RRM1、TUBB3 mRNA表达水平。结果:在69例NSCLC组织样本中,28例为EGFR基因突变（40.6%,28/69）,13例为KRAS基因突变（18.8%,13/69）,EGFR基因突变与性别（P=0.005）、病理类型（P=0.036）、吸烟史（P=0.029）相关。KRAS基因突变与性别相关（P=0.007）。TUBB3 mRNA的表达水平与病理类型相关（P=0.008）,RRM1 mRNA的表达水平与患者各临床病理特征无关（P＞0.05）。EGFR基因突变与RRM1、TUBB3 mRNA表达水平无关（P＞0.05）,KRAS基因突变与RRM1 mRNA表达水平无关（P＞0.05）,KRAS突变型患者TUBB3 mRNA表达水平比KRAS野生型患者高（P＜0.05）。结论:在NSCLC患者中,EGFR及KRAS基因的突变状态对评估患者使用吉西他滨及抗微管类药物的疗效有重要意义,尤其在KRAS突变型NSCLC患者中,抗微管类化疗药物的疗效可能不佳,这有利于指导化疗药物方案的制定,促进NSCLC的个体化治疗。     

A small molecule pan-Bcl-2 family inhibitor, GX15-070, induces apoptosis and enhances cisplatin-induced apoptosis in non-small cell lung cancer cells

Purpose Overexpression of Bcl-2 family members as well as deregulated apoptosis pathways are known hallmarks of lung cancer. Non-small cell lung cancer (NSCLC) cells are typically resistant to cytotoxic chemotherapy and approaches that alter the balance between pro-survival and pro-death Bcl-2 family members have shown promise in preclinical models of NSCLC. Methods Here we evaluated the effects of a novel pan-Bcl-2 inhibitor GX15-070 on NSCLC survival and when combined with epidermal growth factor receptor (EGFR) tyrosine kinase inhibitors as well as traditional cytotoxic agents. GX15-070 is a small molecule agent that binds anti-apoptotic Bcl-2 proteins and interferes with their ability to interact with pro-apoptotic proteins. We evaluated the effect of GX15-070 and correlated the effect on EGFR status as well as Bcl-2 family protein expression. Results We show that GX15-070 can disrupt Mcl-1:Bak interactions in lung cancer cells. We identified differential sensitivity of a panel of lung cancer cells to GX15-070 and no clear relationship existed between EGFR status or Bcl-2 family protein expression and sensitivity to GX15-070. GX15-070 could induce apoptosis in a subset of lung cancer cell lines and this correlated with the effects on cell viability. GX15-070 combined with gefitinib was synergistic in a cell line dependent on EGFR for survival but GX15-070 could not reverse resistance to gefitinib in cell lines not dependent on EGFR for survival. Finally, we observed synergy between GX15-070 and cisplatin in NSCLC cells. Conclusions Based on these results, GX15-070 can trigger apoptosis in NSCLC cells and can enhance chemotherapy-induced death. These data suggest that clinical trials with GX15-070 in combination with cytotoxic chemotherapy are indicated.     

表皮生长因子受体和血管内皮生长因子在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的　观察非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）组织中表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）和血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）的表达情况以及与临床病理参数的关系。方法　免疫组织化学法检测７６例ＮＳＣＬＣ组织和１４例非恶性肺组织ＥＧＦＲ和ＶＥＧＦ的表达。结果　ＥＧＦＲ和ＶＥＧＦ在７６例ＮＳＣＬＣ组织中的阳性表达率分别为４７.４％（３６／７６）和５１.３％（３９／７６）,在１４例非恶性肺组织表达率分别为７１４％（１／１４）和７.１４％（１／１４）,两组ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ表达差异显著（Ｐ＜０.０５）。Ⅲ期ＮＳＣＬＣ组织的ＥＧＦＲ表达率为５６.８％（２５／１９）,高于Ⅰ ～Ⅱ期患者的３１.３％（１０／３２）,两者差异显著（Ｐ＜０.０５）,ＥＧＦＲ表达与其他临床病理参数均无关;淋巴结阳性的ＮＳＣＬＣ组织ＶＥＧＦ表达率为７７.８％（２８／３４）,明显高于淋巴结阴性的２７.５％（１１／４２）,两者差异显著（Ｐ＝０.０００）,ＶＥＧＦ表达与肿瘤分期、性别、年龄、肿瘤细胞分化等临床病理参数亦无关。ＥＧＦＲ和ＶＥＧＦ在ＮＳＣＬＣ组织中表达无相关性（Ｐ＞０.０５）。结论　ＮＳＣＬＣ组织中ＥＧＦＲ和ＶＥＧＦ常常为高表达,ＥＧＦＲ表达与肿瘤的ＴＮＭ分期有关,ＶＥＧＦ与淋巴结转移有关;但是ＥＧＦＲ和ＶＥＧＦ的表达之间无相关性。     

Aberrant epidermal growth factor receptor signaling and enhanced sensitivity to EGFR inhibitors in lung cancer

Epidermal growth factor receptor (EGFR) is occasionally amplified and/or mutated in non-small cell lung cancer (NSCLC) and can be coexpressed with other members of the HER receptor family to form functional heterodimers. We therefore investigated lung cancer cell lines for alterations in EGFR gene copy number, enhanced expression of EGFR and other HER family members, and EGFR coding sequence mutations and correlated these findings with response to treatment with the EGFR inhibitors and the kinetics of ligand-induced signaling. We show here that somatic deletions in the tyrosine kinase domain of EGFR were associated with increased EGFR gene copy number in NSCLC. Treatment with the specific EGFR tyrosine kinase inhibitors (TKI) gefitinib or erlotinib or the EGFR inhibitory antibody cetuximab induced apoptosis of HCC827, a NSCLC cell line with EGFR gene amplification and an exon 19 deletion. H1819, a NSCLC cell line that expresses high levels of EGFR, ErbB2, and ErbB3 but has wild-type EGFR, showed intermediate sensitivity to TKIs. In both cell lines, ligand-induced receptor tyrosine phosphorylation was delayed and prolonged and AKT was constitutively phosphorylated (but remained inhibitable by EGFR TKI). Thus, in addition to EGFR mutations, other factors in NSCLC cells, such as high expression of ErbB family members, may constitutively activate AKT and sensitize cells to EGFR inhibitors.     

缺氧诱导因子-2α在非小细胞肺癌中的表达及与血管内皮生长因子的关系

目的：探讨非小细胞肺癌中缺氧诱导因子-2α（hypoxia—inducible factor 2 alpha,HIF-2α）的表达及其与血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的关系。方法：采用免疫组织化学方法检测非小细胞肺癌组织中HIF-2α和VEGF的表达。结果：45例非小细胞肺癌组织中HIF-2α和VEGF表达阳性率分别为77．78％（35／45）和75．56％（34／45）,10例正常肺组织中HIF-2α不表达,VEGF阳性仅1例。HIF-2α和VEGF的表达结果显示：与肿瘤大小、分化程度无显著性相关（P〉0．05）;与淋巴结转移、病理类型、临床分期有显著性相关（P〈0．05）;HIF-2α和VEGF的表达呈正相关（P〈0．01）。结论：HIF-2α和VEGF联合检测对于肺癌的预后及治疗有一定的指导作用。     

ERCC1 expression by immunohistochemistry and EGFR mutations in resected non-small cell lung cancer

Expression of excision repair cross-complementation group 1 (ERCC1) is important for resistance to platinum agents. Mutations of epidermal growth factor receptor (EGFR) are related to the responsiveness to tyrosine kinase inhibitors in non-small cell lung cancer (NSCLC). This study was performed to determine if ERCC1 expression and EGFR are related to the prognosis of resected NSCLC, and to determine if ERCC1 expression and EGFR mutations are related. We used immunohistochemistry (IHC) to evaluate ERCC1 expression in tumors from 130 patients with curatively resected NSCLC. The median H-score was used as a cut-off for ERCC1 IHC. EGFR mutations were analyzed in exons 18, 19 and 21. ERCC1 expression was detected in tumors from 80 patients (61.5%). ERCC1 was expressed more frequently in smokers and in squamous cell carcinomas. Patients with a positive ERCC1 expression survived longer than ERCC1-negative patients (median overall survival 7.6 years for ERCC1-positive vs. 4.0 years for ERCC1-negative, P=0.046). Subsequent multivariate analysis suggested that ERCC1 expression is an independent prognostic marker of longer survival (hazard ratio: 0.598, 95% confidence interval: 0.357-1.001). EGFR mutations were found in 25 patients (19.2%) but did not affect overall survival. Interestingly, EGFR mutations were more frequent in ERCC1-negative tumors (12.5% in ERCC1-positive vs. 30% in ERCC1-negative tumors, P=0.014). In conclusion, ERCC1 expression was identified as a positive prognostic marker in resected NSCLC. In addition, EGFR mutations were more frequently found in ERCC1-negative tumors.