蜂毒素与基因变构IL-2嵌合蛋白对人卵巢癌细胞SKOV3的抑制作用及对NK细胞的杀伤活性的影响

目的研究蜂毒素与基因变构IL-2（melittin-^88ArgIL-2）嵌合蛋白，在体外对入卵巢癌细胞SKOV3的抑制作用及对NK细胞的杀伤活性的影响。方法用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法研究已经纯化制备的melittin-^88ArgIL-2嵌合蛋白，在体外对入卵巢癌细胞SKOV3生长抑制的作用，对NK细胞杀伤活性的影响。结果melittin-^88ArgIL-2嵌合蛋白在体外能抑制入卵巢癌细胞SKOV3的生长增殖，能增强NK细胞的杀伤活性。结论melittin-^88ArgIL-2嵌合蛋白在体外具有一定的增强免疫功能和抗肿瘤活性。为其在真核细胞系统的表达、纯化、体内的生物学活性研究以及大规模制备的中试放大研究和临床前期研究奠定了基础。     

肿瘤引起T细胞和NK细胞的ζ链水平下调或缺失

ξ（zeta）链是一种跨膜信号蛋白,以二聚体形式表达在T和NK细胞膜上,影响T和NK细胞的活化。在肿瘤患者的肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）和外周血淋巴细胞（PBL）中,T和NK细胞ξ链的水平往往比正常人低甚至缺失,从而导致T和NK细胞丧失免疫活性。ξ链水平低下的患者,其存活率常低于ξ链正常的患者而且预后不好。在免疫细胞内,肿瘤诱导活化的caspase能引起ξ链在蛋白水平的降解,而患进行体内的巨噬细胞通过产生H2O2也能降低ξ链的水平,但可被过氧化氢酶抑制。深入研究肿瘤患者ξ链下调机制,对肿瘤的诊断和治疗具有重要意义。     

鼻NK/T细胞淋巴瘤的免疫表型和细胞毒颗粒蛋白的表达及其意义

目的 观察鼻NK／T细胞淋巴瘤的免疫表型和细胞毒颗粒蛋白的表达及其意义：方法：采用DAKOEn Vision两步法在44例鼻NK／T细胞淋巴瘤病例中检测CD3、CD20、CD43、CD45、CD45RO、CD56、CD57和CD79α等8种常用淋巴细胞表面标记物和3种细胞毒颗粒蛋白TIA-1、Granzyme-B、perforjn的表达，观察和分析检测结果，并与发生在相同部位的其他常见恶性淋巴瘤的检测结果进行比较分析。结果：44例鼻NK／T细胞淋巴瘤均表达CD45；CD3阳性率为43％，阳性定位在细胞质；CD56、CD43和CD45RO的阳性率分别为52％、45％和52％，CD20、CD79α和CD57均为阴性。TIA-1、Granzyme-B和perfoljn的阳性率分别为100％、93％和95％，对照组的23例鼻腔和鼻咽T、B细胞淋巴瘤中均不表达。结论：鼻NK／T细胞淋巴瘤的免疫表型不一致，并非所有病例显示CD56阳性，石蜡切片中CD3的阳性定位与通常的外周T细胞淋巴瘤不同。细胞毒性颗粒蛋白在肿瘤细胞中的高表达，提示它们可能为NK细胞来源。细胞毒性颗粒蛋白是鼻NK／T细胞淋巴瘤诊断和鉴别诊断重要标志。     

T及NK细胞ζ链与恶性肿瘤的研究进展

ζ链是T和NK细胞膜上重要的信号转导分子，能影响T和NK细胞的活化。恶性肿瘤患者T及NK细胞中ζ链的表达水平往往比正常人低甚至缺失，从而导致T和NK细胞免疫功能的缺陷，且ζ链水平与患者肿瘤负荷和预后密切相关，现综述ζ链表达异常与恶性肿瘤发生、发展的相关性以及如何利用‘链对肿瘤患者进行治疗的研究现状。     

凝集素样受体KLRE1抑制NK细胞的细胞毒性

NK细胞识别、杀伤靶细胞有赖于活化或抑制性受体与多种配体间的相互作用.这些受体可分为两类不同的蛋白家族:KLRs和带有免疫球蛋白样结构域的受体,均有抑制性和活化性成员.抑制性受体胞浆尾部含有ITIMs;活化性受体缺乏ITIMs,但在跨膜区有一个正电氨基酸并与含有ITAM的接头分子相关联.SHP-1与磷酸化的ITIMs关联介导抑制NK细胞的细胞毒性.本研究报道了克隆的一个新的NK细胞受体KLRE1.初步的实验结果提示KLRE1能抑制NK细胞的细胞毒性.     

CD45分子在NK细胞激活中的作用及其分子机制研究

为研究NK细胞表面分子在NK细胞激活及释放细胞园子中的作用及其机制，作者用系列粘附分子单抗、配体及基困转染细胞刺激或共刺激NK细胞．定量检测IFN-γ的分泌。结果表明，CD45分子交联可独立擞话NK细胞，CD45分子的信号传递作用对CD16分子无依赖性。随着NK细胞的成熟与分化．其表面CD45分子的表达呈现RA向RO变化的特征．而RO的交联，对NK细胞的刺激显著强于RA的交联。CD22α和CD22β基因转染细胞能显著粘附NK细胞系NK3.3(RO’)，但并不能有效刺激其产生IFN-γ。作者推测．CD45分子．尤其是CD45RO．是NK细胞表面独特的信号传递分子，通过直接激活Src家横的PTK成员．开启独立的、非CDl6分子参与的NK细胞内信号传递途径。     

树突状细胞通过调节型免疫突触中的IL-15Rα介导NK细胞存活

免疫突触是免疫细胞之间进行信息交流的最有效方式之一。在病毒感染早期的天然免疫阶段，树突状细胞（DC）能够与自然杀伤（NK）细胞形成免疫突触，活化NK细胞，并通过分泌白细胞介素15（IL-15）促进NK细胞的存活。但目前对于病毒感染早期Dc和NK细胞所形成免疫突触的分子组成及其动力学特征了解甚少。本文作者提出了新的观点，     

TIM-3 配体galectin-9 诱导NK/T细胞淋巴瘤细胞的凋亡及其机制

目的：观察TIM-3 在NK/T细胞淋巴瘤（natural killer/T cell lymphoma, NK/TCL）细胞株中的表达及其配体galectin-9（GAL-9）诱导瘤细胞凋亡的作用及其部分机制。方法：Western blotting 测定NK/TCL细胞株SNK-1、SNK-6、SNT-8 和健康人外周血NK细胞中TIM-3 的表达;采用不同质量浓度重组人GAL-9（rhGAL-9）作用于NK/TCL细胞株24 h 后,通过CCK-8 法检测细胞增殖活性;流式细胞术Annexin-V/PI 双染法检测瘤细胞凋亡;Western blotting 检测caspase-3、PARP及其剪接体和MAPK信号通路蛋白磷酸化表达水平变化。结果：NK/TCL细胞株SNK-1、SNK-6 和SNT-8 的TIM-3 表达较健康人外周血NK细胞显著增高,其中SNK-1、SNK-6 细胞株与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）;CCK-8 检测结果显示,rhGAL-9 对NK/TCL细胞增殖活力具有明显抑制作用,并有浓度依赖性;流式细胞术检测显示,rhGAL-9 可诱导3 种NK/TCL细胞株凋亡;Western blotting 结果显示,cleaved-caspase-3、cleaved-PARP蛋白表达量增高,MAPK通路中JNK蛋白磷酸化水平升高。结论：TIM-3 在NK/TCL细胞株中异常高表达,其配体GAL-9可诱导细胞凋亡,其机制可能与JNK磷酸化水平升高相关。     

人类NK细胞亚群的分类及意义

NK细胞是功能异质性的群体，其亚群的分类方式至今无统一标准。根据NK细胞的表面标志、分泌细胞因子以及某些功能上的差异交其发为CD56^bright和CD56^dim，NK1和NK2，A－NK和NA－NK等不同的亚群，这些亚群之间明显存在着表型和功能的差异，对NK细胞的研究有重要参考意义。     

非何杰金氏淋巴瘤来源的NK92细胞杀伤异种细胞的细胞模型建立

目的 建立非何杰金氏淋巴瘤来源的NK92细胞杀伤异种细胞的细胞模型。方法常规培养NK92细胞和猪内皮细胞(PEC)，利用MTT法检测NK92细胞对PEC细胞的杀伤效应，通过β-hexosaminidase释放实验显示杀伤过程中，NK92细胞的胞吐量。结果效靶比为10：1时作用时间6h，NK92细胞的胞吐量最大，对PEC的杀伤率为100％。结论NK92细胞杀伤异种细胞的细胞模型建立成功。     

ULBP3基因转染提高人外周血NK细胞对人成骨肉瘤Saos-2细胞的杀伤活性

目的 观察ULBP3基因转染对人外周血NK细胞对Saos-2细胞杀伤活性的影响。方法 用RT-PCR方法从人成骨肉瘤组织中提取ULBP3基因，构建pcDNA3真核表达质粒，以Lipofectamine为载体转染人成骨肉瘤Saos-2细胞，用percoll密度梯度离心法分离人外周血NK细胞作为效应细胞，以Saos-2细胞和转染ULBP3基因的Saos-2细胞作为靶细胞，进行体外杀伤实验，比较两组的特异性杀伤率。结果 在效靶比为30:1时人外周血NK细胞对转染ULBP3基因的Saos-2细胞的特异性杀伤率明显高于对照组。结论 ULBP3基因转染能提高人外周血NK细胞对人成骨肉瘤Saos-2细胞的杀伤活性。     

肿瘤逃逸NK细胞攻击的分子机制及逆转作用

通过分析NK细胞活化性受体、抑制性受体以及它们相应的配体，概括了NK细胞的天然肿瘤免疫监视功能和肿瘤细胞逃逸NK细胞杀伤的分子机制，在此基础上提出阻断NK细胞的抑制性信号，激发活化性信号，可以提高NK细胞的杀瘤效应，为肿瘤生物治疗探索新路。     

NK细胞的发育,识别与免疫学调节功能

一、引言 NK细胞为“MHC非限制性”,“裸细胞”,“大颗粒淋巴细胞”.NK细胞的发育过程不甚明了.外周血及器官中的成熟NK功能主要根据对某些肿瘤细胞(如人的K562、小鼠YAC-1)的天然杀伤能力而定性定量.上述诸项NK的基本概念近几年均有惊人发展,其在抗癌免疫反应中可探索的空间均得以较大扩展.二、NK细胞的发育生物学1、NK和T、B细胞的共同前体细胞的发现 淋巴类细胞系决定着T、B和NK细胞的产生.人们一直尽力寻找这三类细胞的共同前体细胞.发现小鼠编码锌指纹蛋白(IKAROS)的基因发生突变或Knockout后,HSC向淋巴类细胞的分化被中止,其它造血细胞的分化不受影响,推测IKAROS基因的表达涉及HSC向淋巴类细胞的分化.2、NK细胞与T细胞分化发育的关系 联合重症免疫缺陷综合征(SCID)病人体内缺乏T细胞和NK细胞,但含有B细胞和其它髓样细胞,提示人类T细胞和NK细胞含有共同前体细胞;人类胚胎未成熟NK可表达CD3的所有四条链的基因.成熟NK受IL-2激活仍可表达CD3分子.NK细胞所承担的细胞毒效应与CTL有相近之处,NK细胞分泌细胞因子的种类及数量与Th细胞相近,故倾向认为NK细胞和T细胞为个体发育上关系十分接近的两类细胞.     

肾细胞癌和膀胱癌患者的T和NK细胞ζ链水平与临床意义

目的 研究肾细胞癌和膀胱癌患者外周血T和NK细胞ζ链水平与肿瘤发展进程的相关性及其临床意义。方法 采用3种荧光标记的抗CD3、CD56和ζ链单抗及流式细胞仪测定58例。肾细胞癌、22例膀胱癌患者及14名健康人外周血T和NK细胞ζ链蛋白的水平。结果 肾细胞癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者的ζ链水平在T细胞中分别下降到健康对照组的59．5%、37．6％和21．3％;在NK细胞中分别下降到对照组水平的62．2％、27．1％和18．8％。膀胱癌患者ζ链的水平在T细胞中分别下降到对照组的37．6％、29．5％和18．9％;在NK细胞中分别下降到对照组的35．4％、20．8％和5．8％。检测的标本中还有17．5％(14／80)的患者T和NK细胞ζ链水平在正常范围内。Ⅲ期患者外周血中T和NK细胞的比值与健康对照组相比显著下降。结论 肾细胞癌和膀胱癌患者体内T和NK细胞的ζ链水平总体上与肿瘤的发展进程一致。T和NK细胞比值显著下降可能预示患者病情严重,T和NK细胞ζ链水平正常的肿瘤患者可能是免疫治疗的适应证。     

蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1在T与NK细胞淋巴瘤中的表达

目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1在T与NK细胞淋巴瘤中的表达.方法:采用免疫组织化学LSAB(SP法)检测鼻NK/T细胞淋巴瘤30例,外周T细胞淋巴瘤20例,血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤10例,前体T细胞急性淋巴母细胞白血病10例共70例T与NK细胞淋巴瘤SHP-1蛋白的表达;同时检测淋巴结反应性增生10例,B小淋巴细胞性淋巴瘤10例以及浆细胞瘤10例共30例对照样本SHP-1蛋白的表达.结果:实验组70例T与NK细胞淋巴瘤均未检测出SHP-1蛋白,而对照组所有反应性增生淋巴结,5/10例B小淋巴细胞性淋巴瘤和5/10例浆细胞瘤检测出SHP-1蛋白的表达,实验组与对照组比较有统计学意义(X2检验,P＜0.01).结论:SHP-1在T与NK细胞淋巴瘤中缺乏表达,可能是一个潜在的抑癌基因.     

转录因子RORγt对肠道和皮肤中NKp46^＋CD3^-细胞发育和功能的影响

NK细胞存在不同的功能亚群虽然已知人和小鼠的肠道、皮肤中有NK细胞存在，但其具体的细胞亚群及相应功能特征尚未可知。为探讨这一问题，论文作者首先通过组织免疫荧光确认在人和小鼠的肠道固有层和皮肤的真皮层中存在NKp46^＋CD3^-细胞，通过表型分析证明该淋巴细胞不是T、B淋巴细胞，而是表达多种NK细胞表面受体的NK细胞群；进一步功能检测发现，真皮中的NKp46^＋CD3^-细胞与肠道中的该细胞群不同：真皮中NKp46^＋CD3^-细胞的表面分子表达与常规NK细胞类似，但是在功能方面具有未成熟NK细胞的特点，即较弱的分泌细胞因子和杀伤效应以及较强的增殖活性；     

自然杀伤细胞对多发性骨髓瘤细胞株KM-3影响的研究

 目的　研究自然杀伤（NK）细胞对多发性骨髓瘤细胞株KM-3杀伤及诱导凋亡的作用。方法　WST-1法观察不同效靶比的NK细胞对KM-3细胞的杀伤作用;流式细胞术检测Annexin-V+／PI-凋亡细胞、线粒体跨膜电位。结果　NK细胞作用于KM-3细胞后,能显著杀伤KM-3细胞,呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）;NK细胞作用于KM-3细胞48 h后,Annexin-V+／PI－细胞比例明显增加,呈剂量依赖性（P＜0.05）;NK细胞作用于KM-3细胞效靶比为10∶1时,Annexin-V+／PI－细胞比例明显增加,呈时间依赖性（P＜0.05）;NK细胞作用于KM-3细胞后,KM-3细胞线粒体跨膜电位明显降低,呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）。结论　NK细胞能明显杀伤KM-3细胞并诱导其凋亡,均呈剂量和时间依赖性。     

自然杀伤细胞恶性肿瘤的研究进展

自然杀伤(NK)细胞肿瘤起源于前体和成熟NK细胞,是临床少见但重要的一组肿瘤.大部分NK肿瘤具有侵袭性,死亡率高.新近研究发现,CD4+CD56+原始NK细胞淋巴瘤来源于浆样树突细胞,因而真正的前体NK细胞肿瘤主要起源于CD4-CD56+NK细胞亚群.髓细胞/前体NK细胞白血病来自前体NK细胞.成熟NK细胞肿瘤中,结外NK/T淋巴瘤相对常见.侵袭性NK细胞白血病罕见,预后差.慢性NK淋巴细胞增多症是外周血成熟NK细胞的长期扩增.本文介绍正常NK细胞的发育和各型NK细胞肿瘤的临床特点和治疗.     

Sp1在 NK／T 细胞淋巴瘤细胞株中的表达及其对细胞侵袭的影响

目的：观察转录因子 Sp1在 NK／T 细胞淋巴瘤（NK／TCL）细胞株中的表达及其对细胞侵袭的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）、免疫荧光和 Western blot 法测定 NK／TCL 细胞株 SNK-1、SNK-6和健康人 NK 细胞中 Sp1的表达;采用 Sp1抑制剂光神霉素 A（MIT）作用于 NK／TCL细胞株后,用实时荧光定量 PCR 和 Western blot 法检测 Sp1、胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）的表达;采用 Transwell 实验观察 MIT 对细胞侵袭力的影响。结果 NK／TCL 细胞株SNK-1、SNK-6中 Sp1基因和蛋白高表达。其中基因的表达水平分别是健康人 NK 细胞的（9.4±0.3）倍和（10.6±0.3）倍（P＝0.0052,P＝0.0037）,蛋白的表达水平分别是健康人 NK 细胞的（5.4±0.3）倍和（8.6±0.5）倍（P＝0.0083,P＝0.0069）。100 nmol／L MIT 抑制 Sp1后,与二甲基亚砜处理的对照组相比,细胞株中 IGF-1R 的基因表达量分别下降了（83.9±3.7）%和（65.8±4.2）%（P＝0.0082,P＝0.0097）,蛋白表达量分别下降了（51.5±7.1）%和（49.6±9.1）%（P＝0.0178,P＝0.0155）。100 nmol／L MIT 处理细胞后 SNK-1、SNK-6细胞的侵袭率分别下降了（29.6±6.4）%和（37.2±7.6）%（P＝0.0418,P＝0.0372）,MMP-2蛋白表达量分别是对照组蛋白表达量的（52.7±4.7）%、（29.7±5.6）%（P＝0.0286,P＝0.0202）。结论 NK／TCL细胞株高表达 Sp1,其可能通过正调控 IGF-1R 增强 MMP-2的表达,进而提高 NK／TCL 细胞的侵袭力。     

血小板对外周血纯化、扩增的NK细胞杀伤K562细胞的影响

目的探讨血小板对外周血纯化、扩增的NK细胞杀伤作用的影响.方法使血小板与K562细胞在体外共孵育,以显微镜和流氏细胞仪检测血小板与K562细胞的粘附.从外周血单个核细胞中分离纯化、扩增NK细胞,以MTT法研究血小板对纯化、扩增的NK细胞杀伤活性的影响.结果K562细胞体外能结合血小板,粘附率达到25%±4.3%.纯化NK细胞总计数为2.53×107个,比例为46.8%;经扩增后NK细胞总计1.34×108个,比例增加到62.2%,扩增倍数达5.32倍.血小板比肿瘤细胞为250:1时,能减少NK细胞43.15%的杀伤作用.血小板比肿瘤细胞为1000:1时,能减少NK细胞84.05%的杀伤作用.结论血小板能粘附肿瘤细胞、抑制外周血纯化、扩增的NK细胞对K562细胞的杀伤作用.