姜黄素下调mTOR诱导人肺癌A549细胞自噬的研究

[目的]研究姜黄素诱导人肺癌A549细胞自噬现象及与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的关系。[方法]采用CCK-8法检测姜黄素对A549细胞增殖的抑制作用;采用吖啶橙染色（AO）及转染GFP-LC3质粒荧光显微镜下观察姜黄素处理后A549细胞的自噬现象;采用Western blot法检测微管相关蛋白轻链Ⅱ（LC3Ⅱ）、微管相关蛋白轻链Ⅰ（LC3Ⅰ）、mTOR表达的变化。[结果]姜黄素对人肺癌A549细胞增殖有明显抑制作用,且成明显的剂量—时间依赖关系。AO染色结果显示,与对照组相比,姜黄素40μmol/L组及Rapa组细胞内酸性滤泡染成亮红色荧光比例增多;与姜黄素40μmol/L组相比,姜黄素40μmol/L＋自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）组及3-MA组亮红色荧光比例下降。细胞转染GFP-LC3后姜黄素40μmol/L组和Rapa组胞浆内点状的绿色荧光斑点明显;与姜黄素40μmol/L组相比,姜黄素40μmol/L＋3-MA组及3-MA组胞浆内点状的绿色荧光斑点明显比例有所下降。Western blot法检测结果显示,与对照组相比,姜黄素40μmol/L组作用24h后,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达显著升高（P〈0.05）,姜黄素40μmol/L＋3-MA组LC3Ⅱ/LC3-Ⅰ表达低于姜黄素40μmol/L组（P〈0.05）。姜黄素40μmol/L组mTOR表达显著下降（P〈0.01）,姜黄素40μmol/L＋3-MA组mTOR表达高于姜黄素40μmol/L组（P〈0.05）。[结论]姜黄素能够明显抑制A549细胞增殖并诱导A549细胞发生自噬,同时还能够明显抑制mTOR蛋白的表达水平,其机理可能与mTOR的信号通路有关。     

自噬在眼镜蛇神经毒素诱导A549细胞死亡中的作用

背景与目的已有的研究表明眼镜蛇神经毒素具有抗肿瘤作用,而其在肺癌中的作用罕有研究。本研究观察cobrotoxin对人肺A549腺癌细胞株的抗肿瘤作用,探讨自噬和P38-MAPK通路在这过程中的作用。方法应用MTT法观察cobrotoxin对A549细胞和HFL1人肺成纤维细胞的生长抑制作用以及用3-MA抑制自噬、SB203580抑制P38-MAPK通路后cobrotoxin对A549细胞的生长抑制作用;应用细胞集落平板克隆实验检测cobrotoxin对A549细胞的集落形成的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定单独cobrotoxin作用、cobrotoxin分别联合3-MA抑制自噬和SB203580抑制P38-MAPK通路活性后A549细胞内beclin-1、LC3、P62、P38及pP38等蛋白表达水平。结果不同浓度cobrotoxin对A549细胞的生长有明显抑制作用,对HFL1人肺成纤维细胞无明显抑制作用,3-MA、SB203580作用后cobrotoxin对A549细胞的抑制作用降低;不同浓度cobrotoxin可明显抑制A549细胞的集落形成;cobrotoxin作用后beclin-1、pP38蛋白表达水平明显提高,P62表达明显降低,II型/I型LC3比值增大,并有浓度依赖性,3-MA抑制自噬后beclin-1蛋白表达水平降低,P62表达增高、II型/I型LC3比值减小,SB203580抑制P38-MAPK通路后beclin-1、pP38蛋白表达水平降低,II型/I型LC3比值减小。结论 cobrotoxin对人肺A549腺癌细胞体外生长有抑制作用,可能通过活化P38-MAPK通路激活自噬参与抗肿瘤过程。     

自噬在长春瑞滨诱导的肺癌细胞A549死亡中的作用

背景与目的已有的研究表明,很多药物可以诱导肿瘤细胞发生自噬。本研究旨在明确自噬在肺癌A549细胞长春瑞滨处理过程中的存在,研究自噬在长春瑞滨诱导的A549细胞死亡中的作用。方法MTT法检测细胞生存率;激光共聚焦显微镜和流式细胞仪分别定性及定量检测自噬特异性蛋白LC3的表达;AnnexinV-FITC流式细胞术检测细胞凋亡;自噬特异性阻断剂3-甲基腺嘌呤和长春瑞滨共同作用细胞后用MTT法和流式细胞术检测细胞死亡率和凋亡率的变化。结果长春瑞滨处理肺腺癌细胞早期(24h内)可出现明显的自噬性变化,自噬高峰期出现在长春瑞滨诱导(6-12)h,在长春瑞滨给药前阻断自噬,长春瑞滨对A549细胞的毒性作用增强,而在其给药后阻断自噬则长春瑞滨对A549细胞的细胞毒性作用有所减弱。结论长春瑞滨可以诱导肺癌A549细胞自噬,在长春瑞滨给药前期,自噬对细胞有保护作用,可以延迟凋亡的发生;而在长春瑞滨给药后期,自噬则作为一种细胞的的死亡程序,与凋亡一起促进细胞死亡。     

突变型K-ras siRNA抑制肺癌A549细胞的增殖和迁移并诱导细胞凋亡

目的:构建靶向Kras的siRNA,研究Kras siRNA对Kras基因突变型肺癌细胞A549及Kras野生型小细胞肺癌细胞NCIH446生长和迁移的抑制作用。方法:设计并人工合成4条Kras siRNA（针对野生型Kras基因的Kras siRNA1~ Kras siRNA3;针对突变型Kras 基因的Kras siRNA4）,并分别转入A549和NCIH446细胞。RTPCR和Western blotting检测不同Kras siRNA对Kras mRNA和蛋白表达的影响,MTT法检测不同Kras siRNA对A549和NCIH446细胞增殖的抑制作用,Transwell实验和Hoechst 33258染色检测Kras siRNA对细胞迁移和凋亡的影响。结果:靶向突变型Kras的Kras siRNA4能特异性抑制A549细胞中Kras的表达,但对Nras和Hras的表达没有影响。Kras siRNA4抑制A549细胞的增殖,但不影响含野生型Kras基因的NCIH446细胞的增殖。Kras siRNA4还能诱导A549细胞凋亡、抑制A549细胞迁移。结论: 针对突变型Kras基因的siRNA可特异性抑制Kras突变型肺癌细胞的增殖和迁移,并诱导该细胞凋亡,Kras siRNA可望用于Kras突变型肿瘤特别是肺癌的个体化治疗。     

苦参碱可能通过自噬抑制肺癌A549细胞的增殖

目的:探究苦参碱对肺癌A549细胞的增殖抑制作用及其对自噬的影响。方法:体外培养肺癌A549细胞,分别用不同浓度的苦参碱处理后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率;倒置显微镜下观察不同浓度苦参碱时A549细胞的形态变化;采用细胞克隆实验检测不同浓度的苦参碱对A549细胞的增殖抑制程度;Western blot 检测自噬相关蛋白Beclin1、p62及LC3A/B的表达水平;透射电镜下观察经苦参碱处理后A549细胞内自噬泡的变化。结果:苦参碱对肺癌A549细胞有明显的抑制作用,并且呈剂量依赖性;倒置显微镜下发现经苦参碱处理后肺癌A549细胞皱缩、变小、胞内可见大小不一的颗粒状物质;随着苦参碱浓度的增加,肺癌A549细胞形成的克隆集落逐渐变小、变少;Western blot 检测自噬相关蛋白Beclin1、p62及LC3A/B的水平均随着苦参碱浓度的增加而增加,并呈剂量依赖性;透射电镜下观察到苦参碱处理的肺癌A549细胞内自噬空泡明显增加,并且可观察到吞噬线粒体的自噬泡。结论:苦参碱可抑制肺癌A549细胞的增殖,并能诱导细胞内自噬的发生及损伤自噬降解通路,因此我们推测苦参碱可能通过自噬造成细胞内物质和能量的循环紊乱从而抑制肺癌A549细胞的增殖。     

姜黄素逆转电离辐射诱导的非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化

目的 探讨姜黄素对电离辐射诱导的非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化的影响。方法 用电离辐射诱导A549细胞发生上皮间质转化,将其命名为A549R。CCK8法检测细胞增殖;Western blot检测姜黄素对A549R上皮/间质标志物表达的影响;划痕实验及Transwell实验检测姜黄素对A549R细胞迁移能力的影响。结果 A549R细胞经姜黄素处理后,细胞形态由纺锤形转变为椭圆形上皮形态;E-cadherin表达下调,pan-Keratin表达上调,Vimentin、Twist表达显著下调,N-cadherin表达水平无明显变化;划痕愈合面积随姜黄素浓度的升高而显著下降;A549R细胞迁移能力随姜黄素浓度的升高而显著下降。结论 姜黄素通过下调E-cadherin、Vimentin、Twist的表达,并上调Keratin的表达,从而逆转电离辐射诱导A549细胞发生上皮间质转化。     

Layilin的RNAi对透明质酸诱导人肺腺癌A549细胞体外增殖的影响

目的：研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制透明质酸受体layilin表达,对透明质酸(hyaluronan,HA)诱导人肺腺癌A549细胞体外增殖的影响。方法：构建能表达针对layilin的短发夹RNA(shRNA)的阳性RNA干扰(posi- tive RNAi,Pi)质粒和表达不针对任何已知mRNA的shRNA的阴性RNAi(negative RNAi,Ni)质粒,分别转染至A549细胞,以RT-PCR和Western blot检测A549细胞转染前后layilin表达,并用新霉素抗性筛选得到layilin表达受抑制的阳性RNAi(Pi)细胞和layilin表达未受影响的阴性RNAi(Ni)细胞。分别在存在或不存在外源性透明质酸的培养条件下,以MTT实验和软琼脂细胞集落形成实验比较正常(control,C)、Pi、Ni组细胞体外增殖能力。结果：在不存在外源性透明质酸的培养条件下,C、Pi、Ni组A549细胞体外增殖能力无显著差异(P＞0．05),在存在外源性透明质酸的培养条件下,Pi和C组相比,体外增殖能力显著降低(P＜0．01),Ni和C组相比,体外增殖能力无显著差异(P＞0．05)。结论：抑制layilin表达能抑制透明质酸诱导人肺腺癌A549细胞体外增殖。     

Survivin-siRNA抑制肺癌A549细胞的增殖并增强其对顺铂的敏感性

目的：构建靶向存活素（survivin）的干扰RNA（siRNA）质粒,观察其对A549细胞增殖、凋亡以及顺铂敏感性的影响。方法：应用pSilencerU6质粒构建survivinsiRNA干扰质粒,RTPCR和Western blotting检测survivin mRNA和蛋白的表达,DAPI染色法检测细胞的凋亡,MTT法检测细胞的增殖。结果：成功构建了survivinsiRNA干扰质粒。SurvivinsiRNA质粒转染可明显下调A549细胞中survivin mRNA和蛋白的表达、抑制A549细胞的增殖、促进细胞的凋亡、增强A549细胞对顺铂的敏感性。结论：SurvivinsiRNA沉默survivin在肺癌细胞中的表达能够抑制肿瘤细胞的增殖、促进细胞凋亡,并能增强肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性,survivin 可作为肺癌治疗的潜在靶点。     

自噬对人肺腺癌A549细胞放疗敏感性的影响

背景与目的放射治疗是肺癌最重要的治疗手段之一,然而却因放疗抵抗极易导致肿瘤的复发和转移。放疗可诱导肿瘤细胞自噬发生,最新研究也报道,自噬可能与DNA损伤修复过程相关。本研究旨在探讨通过雷帕霉素上调A549细胞自噬,能否增加细胞放疗敏感性,其过程是否与DNA损伤修复过程相关。方法以人肺腺癌A549细胞作为实验对象,实验设对照组（N）、单纯放疗组（IR）、雷帕霉素联合放疗组（R+ARPA）。采用Western blot检测γ-H2AX蛋白质、Rad51蛋白质、Ku70/80蛋白质、p62蛋白质、LC3蛋白质表达;电镜检测自噬体形成;细胞克隆形成实验检测细胞存活分数（survival fraction, SF）值。结果与单纯放疗组相比,放疗联合雷帕霉素组自噬活性增加,且Rad51、Ku80蛋白质表达减少,细胞增殖能力下降。结论通过雷帕霉素上调自噬可增加肺癌细胞放疗敏感性,其机制可能与抑制DNA损伤修复过程相关。     

Hsa-miR202通过下调IL-10的表达抑制肺癌A549细胞的增殖

  目的  探讨Hsa-miR202(人微小非编码RNA-202)对肺癌A549细胞增殖的影响及分子机制。  方法  将Hsa-miR-202序列与ppG/miR/eGFP/Blasitidin质粒定向连接, 构建靶向Hsa-miR-202基因的真核表达载体pmiR-202, 运用脂质体将pmiR-202转染至A549细胞, WST-8法检测细胞增殖率, RT-PCR检测IL-10、miR-202的相对表达水平, Western blot与ELISA检测IL-10蛋白的表达水平, 构建荧光素酶报告基因载体验证miR-202与IL-10的相互结合作用。  结果  经DNA测序证实与设计完全一致, 测序结果显示成功构建了miR-202的真核表达载体(pmiR-202), pmiR-202对A549细胞的增殖抑制率(24、48、72 h)分别为12%、38%、52%, 并具有时间效应关系, 较空白对照组及阴性对照组比较, 差异有统计学意义(P < 0.05);RT-PCR结果显示, 转染pmiR-202后, miR-202的表达水平增加; 过表达miR-202能下调IL-10基因及蛋白的相对表达水平, 其相对水平分别为25%、0.75, IL-10活性的相对表达量为3.26±0.43 pg/mL, 较空白对照组及阴性对照组比较, 差异有统计学意义(P < 0.05):荧光素酶活性结果显示, 克隆IL-10-3'UTR的质粒与miR-202 mimics共转染293T细胞, 引起荧光素活性的减低。  结论  pmiR-202有效抑制A549细胞的增殖, 并具有时间-效应关系, 其机制可能是miR-202通过靶向结合IL-10的3'UTR从而下调其在A549细胞的表达有关。      

多烯紫杉醇和姜黄素联用对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的研究姜黄素和多烯紫杉醇对肺腺癌A549细胞增殖及调亡的影响,并探讨两种药物的合用是否可增强抗癌作用及降低不良反应。方法体外培养肺腺癌细胞系A549细胞,采用 MTT 法计算细胞抑制率;Giemsa 染色法观察细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞的凋亡率。结果经MTT法检测显示,姜黄素能明显抑制A549细胞的生长,多烯紫杉醇50 μg/ml与姜黄素5、10、20 μmol/L联用对A549细胞的抑制作用明显大于两药单用时的抑制作用（P<0.01）;Giemsa染色显示多烯紫杉醇与姜黄素联用后诱导细胞凋亡的作用增强,可见典型的凋亡小体;流式细胞仪结果表明姜黄素能增加多烯紫杉醇的细胞凋亡率,其作用呈剂量依赖性。结论姜黄素与多烯紫杉醇可协同抑制人肺腺癌A549细胞的增殖;二者联合化疗有增效减毒作用。     

乙酰胆碱联合长春新碱对人类肺腺癌细胞株A549生长及凋亡的影响

 目的　探讨乙酰胆碱联合长春新碱（VCR）对肺腺癌细胞生长及化疗的影响,检测其是否通过影响bcl-2及p53发挥作用。方法　将乙酰胆碱单独或与VCR（浓度为IC50）联合作用于肺腺癌细胞株A549,测定其对A549细胞的抑制率。用免疫组织化学法及Western blot法测定乙酰胆碱联合VCR对bcl-2及p53蛋白表达的影响。结果　0.1、1、10 μmol／L的乙酰胆碱对A549细胞的抑制率分别为（0.050±0.032） %、（0.101±0.021） %、（0.169±0.015） %;0.1、1、10 μmol／L的乙酰胆碱分别与0.2 μg／ml VCR联合,对肿瘤细胞的抑制率分别为（0.529±0.023） %、（0.545±0.011） %、（0.589±0.015） %,与VCR组比较差异均有统计学意义（q'值分别为1.09、1.37、1.83,均P＜0.05）,0.1～10 μmol／L的乙酰胆碱单独作用于A549细胞表现出浓度依赖性的抑制作用,与VCR联合后显著提高A549对VCR的敏感性（P＜0.05）; 此外,联合用药后各组bcl-2及p53蛋白表达均降低（P＜0.05）。结论　乙酰胆碱单独及联合VCR均能抑制A549细胞的生长,其机制可能是乙酰胆碱与VCR协同或相加作用影响了bcl-2及p53蛋白的表达。     

Gax基因转染对A549细胞增殖及原癌基因表达的影响

背景与目的在中国肺癌居各种恶性肿瘤之首位,寻求肺癌的基因疗法已成为人们努力的方向。本研究拟探讨生长终止特异性同源盒基因(growtharrest-specifichomeobox,Gax)对A549细胞系增殖及其原癌基因c-fos、c-junmRNA表达的影响。方法以腺病毒介导Gax基因(adenoviraltransductionoftheGaxgene,Ad-Gax)转染A549细胞,RT-PCR和免疫细胞化学法测定转染前后细胞中GaxmRNA和蛋白表达;RT-PCR测定转染前后细胞中c-fos、c-junmRNA表达变化;MTT法检测Gax基因转染对A549细胞生长的抑制作用,计算24、48、72h细胞抑制率。结果RT-PCR和免疫细胞化学证实Gax基因转染A549细胞后Gax能稳定表达,未转染组未发现Gax表达;RT-PCR证实转染组A549细胞中c-fos、c-junmRNA比未转染组显著降低(t=7.755,P<0.01;t=5.938,P<0.01);MTT法检测显示转染组A549细胞在24、48、72h的抑制率分别是(47.35±5.36)%、(54.96±1.78)%、(65.39±5.11)%,随时间逐渐升高与未转染组同时间比较有显著性差异(χ2=7.152、9.431、12.847,P<0.01)。结论Gax基因转染能抑制A549细胞的增殖,其分子机制可能与Gax下调c-fos、c-jun的表达有关。     

Inhibitory Effect of Cantharidin on Proliferation of A549 Cells

Objective:To study the inhibition of Cantharidin against the proliferation of human lung cancer A549 cells and its mechanism.Methods:MTT assay was employed to determine the inhibition of Cantharidin against proliferation of A549 cells and flow Cytometry was applied to analyze A549 cell cycle and the effect of Cantharidin on cell cycle.Results:Cantharidin showed inhibition against the proliferation of A549 cells,and the inhibition was mediated by blocking A549 cell cycle at G2/M phase significantly.Conclusion:Cantharidin exhibits inhibition against the proliferation of human lung cancer A549 cells.     

TSA对肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的影响

目的：探讨组蛋白脱乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（trichostatin A，TSA）对A549肺腺癌细胞凋亡的影响。方法：Annexin V和Hoechst染色法检测细胞凋亡；流式细胞仪分析细胞周期；Western blot检测凋亡信号通路中caspas-8、caspase-9活化及多聚ADP核糖聚合酶（PARP）裂解情况。结果：TSA可诱导细胞凋亡，主要使细胞积聚在G2／M期，且呈浓度依赖性。Western blot检测表明TSA诱导了A549肺腺癌细胞caspase-8、caspase-9裂解活化及PARP裂解，且随TSA作用时间延长而逐步升高。结论：TSA诱导A549细胞凋亡中caspase-8、caspase-9介导caspas-3的活化，TSA通过caspase级联反应诱导A549细胞凋亡。     

不同浓度哇巴因对A549细胞增殖及死亡的影响

目的:评价特异性钠泵抑制剂哇巴因在体外对非小细胞肺癌A549细胞增殖与死亡的影响。方法:利用细胞培养技术,采用MTT法、流式细胞技术、TUNEL法及电镜技术分别评价不同浓度哇巴因对A549增殖与死亡的影响。结果:当哇巴因浓度<1.8nmol/L时,可通过干扰细胞周期,显示出促进肿瘤细胞增殖作用。哇巴因浓度≥1.8nmol/L时,肿瘤细胞增殖受抑。哇巴因对A549细胞增殖的抑制作用呈明显的剂量依赖性和时间依赖性。高浓度哇巴因(≥100nmol/L)所致的A549细胞死亡以非凋亡性死亡为主。结论:哇巴因在适当浓度具有抗肺肿瘤活性,可能成为潜在的抗肺肿瘤药物。     

单唾液酸神经节苷脂3对人肺腺癌细胞增殖凋亡及血管内皮生长因子表达的影响

目的 研究外源性单唾液酸神经节苷脂3(GM3)对人肺腺癌细胞增殖、凋亡和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨GM3的抗肿瘤作用.方法 以不同浓度外源性GM3干预人肺腺癌A549细胞48 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖变化,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞学技术检测细胞凋亡变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞VEGF mRNA的表达水平,激光共聚焦显微镜观察细胞VEGF蛋白的表达变化.结果 2.5、10、40、160和640 μmol/L GM3干预A549细胞48 h,增殖抑制率分别为4.1%、8.9%、29.9%、34.2%和52.6%,GM3作用于A549细胞48 h的半数抑制浓度(IC50)为412 μmol/L.与对照组相比,当GM3＞10 μmol/L时,对细胞增殖抑制作用明显(P＜0.05),且具有浓度依赖性.10、40和160μmol/L GM3干预A549细胞48 h,A549细胞的凋亡率分别为(1.3±0.6)%、(4.8±0.4)%、(14.2±1.0)%.与对照组相比,当GM3＞40 μmol/L时,其促进细胞凋亡作用明显(P＜0.05).与对照组相比,经浓度＞40 μmol/L的GM3干预后,A549细胞的VEGF mRNA表达水平显著下降(P＜0.05).随着GM3浓度增高,A549细胞的VEGF荧光强度明显减弱.结论 GM3能呈浓度依赖性抑制人肺腺癌细胞株A549增殖,促进A549细胞凋亡,下调A549细胞VEGF mRNA和蛋白水平的表达,提示GM3可能通过调节肿瘤细胞凋亡和肿瘤血管生成而发挥双重抗肿瘤作用.

Abstract：

Objective To determine the effect of exogenous GM3 on proliferation, apoptosis and VEGF expression in human lung adenocarcinoma cell line A549 cells.Methods A549 cells were treated with GM3 at different concentrations for 48 hours.MTT assay was used to detect the cell proliferation and flow cytometry was applied to analyze cell apoptosis.RT-PCR was used to detect the expression level of VEGF mRNA and confocal laser scanning microscopy was applied to observe the localization and fluorescence intensity of VEGF.Results Comparing with the control, being treated with higher than 10μmol/L GM3 significantly inhibited A549 cell proliferation ( P ＜ 0.05 ), and the suppressive effect could be enhanced following increasing doses.The IC50 was 412 μ mol/L.Comparing with the control, being treated with higher than 40 μmol/L GM3 significantly promoted the apoptotic rate of A549 cells ( P ＜ 0.05 ).Comparing with the control, being treated with higher than 40 μ mol/L GM3 significantly decreased the VEGF mRNA level of A549 cells (P＜0.05), and the fluorescence intensity of VEGF distinctly weakened.Conclusions Exogenous ganglioside GM3 can inhibit the proliferation, promote apoptosis, and down-regulate the VEGF expression level in A549 cells.This may be considered as two mechanisms of GM3 for its anti-tumor effect by modulating cell apoptosis and angiogenesis.     

m白术内酯Ⅰ通过TLR4/MyD88通路调控肺癌A549细胞增殖侵袭的研究

目的 探究白术内酯Ⅰ在肺癌进程中的作用及分子机制。方法 用qRT-PCR和免疫组化实验检测肺癌组织和癌旁组织中TLR4及MyD88的mRNA和蛋白的表达;Transwell侵袭实验及MTT实验检测白术内酯Ⅰ(100 μM/L)对A549细胞侵袭、增殖能力的影响;Western blot检测白术内酯Ⅰ对TLR4及MyD88蛋白表达的作用。结果 qRT-PCR及免疫组化结果显示,相对于癌旁组织,TLR4及MyD88的mRNA和蛋白在肺癌组织中高表达(P＜0.05);与对照组相比,白术内酯Ⅰ处理组A549细胞侵袭能力显著下降,增殖活力显著抑制(P＜0.05);Western blot结果显示,白术内酯Ⅰ抑制TLR4及MyD88蛋白表达水平(P＜0.05)。结论 白术内酯Ⅰ通过抑制TLR4/MyD88通路抑制肺癌A549细胞侵袭转移。     

美加明对人肺腺癌A549细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨烟碱型胆碱能受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)拮抗剂美加明对人肺腺癌A549细胞增殖和迁移的影响。方法:应用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法和FCM法检测美加明对人肺腺癌A549细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响;划痕实验检测美加明对细胞迁移能力的影响;激光共聚焦显微镜下观察美加明对A549细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)表达的影响。结果:美加明可抑制A549细胞的增殖,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),并且其抑制作用随着药物浓度的增加而增强。FCM检测结果显示,美加明作用后,G0/G1期细胞比率增多,S期和G2/M期细胞比率下降,而细胞凋亡未发生明显变化。划痕实验结果显示,美加明可降低A549细胞的迁移能力。激光共聚焦显微镜下观察发现,美加明可上调A549细胞E-cad的表达。结论:美加明可能通过阻滞细胞周期于G0/G1期而抑制A549细胞增殖,并通过上调E-cad的表达而降低细胞迁移。