C反应蛋白对U937细胞表达基质金属蛋白酶2的影响

目的　观察C反应蛋白对U937细胞表达基质金属蛋白酶 2的影响 ,探讨C反应蛋白导致动脉粥样硬化斑块不稳定甚至破裂的可能机制。方法　体外培养U937细胞 ,予不同浓度C反应蛋白及普伐他汀干预 ,分为空白对照组、C反应蛋白 5mg/L、2 0mg/L、10 0mg/L及C反应蛋白 2 0mg/L +普伐他汀 10 3 mol/L组 ,用蛋白免疫印迹分析及逆转录聚合酶链反应观察各组细胞表达基质金属蛋白酶 2的差异。结果　蛋白免疫印迹分析显示 ,C反应蛋白 5mg/L、2 0mg/L和 10 0mg/L组基质金属蛋白酶 2的蛋白条带灰度相对值逐渐增高 ,呈浓度依赖性 ,均高于空白对照组 ,其中C反应蛋白 2 0mg/L和 10 0mg/L组与空白对照组差别显著 (P <0 .0 5 ) ;而普伐他汀干预组的灰度相对值亦明显低于C反应蛋白 10 0mg/L组 (P <0 .0 5 )。逆转录聚合酶链反应结果显示 ,随着C反应蛋白浓度增加 ,细胞内基质金属蛋白酶 2mRNA表达量也相应增加 ,呈浓度依赖性 ,而普伐他汀可以减轻这种作用。结论　C反应蛋白干预体外培养的U937细胞后 ,可上调基质金属蛋白酶 2的表达 ,进而可能导致其它一系列炎症反应 ,因此C反应蛋白在导致斑块不稳定方面有直接致炎症作用及炎症放大作用 ,值得进一步研究     

重组C反应蛋白促进脐静脉内皮细胞表达基质金属蛋白酶2

目的 观察重组C反应蛋白(CRP)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响.方法 采用逆转录聚合酶链反应及蛋白质免疫印迹分析检测MMP-2 mRNA转录和蛋白水平表达,观察不同浓度CRP及不同孵育时间对HUVEC MMP-2表达的影响.结果 CRP呈浓度和时间依赖性增加培养HUVEC的MMP-2 mRNA转录和蛋白水平的表达.结论 CRP可上调HUVEC MMP-2表达.     

重组C反应蛋白促进脐静脉内皮细胞表达基质金属蛋白酶2

目的观察重组C反应蛋白(CRP)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应及蛋白质免疫印迹分析检测MMP-2mRNA转录和蛋白水平表达,观察不同浓度CRP及不同孵育时间对HUVEC MMP-2表达的影响。结果CRP呈浓度和时间依赖性增加培养HUVEC的MMP-2mRNA转录和蛋白水平的表达。结论CRP可上调HUVEC MMP-2表达。     

基质金属蛋白酶-9和C反应蛋白与冠心病的相关性研究

目的:探讨联合检测血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、C反应蛋白(CRP)可否作为一种预测急性心血管事件发生的临床指标.方法:采用免疫散射比浊法检测CRP;酶联免疫吸附法检测MMP-9,并同时检测LDL-C水平.所有患者均行冠状动脉造影,计算冠状动脉病变积分并与CRP、MMP-9水平进行相关分析.结果:①急性冠状动脉综合征(ACS)组CRP及MMP-9水平显著高于稳定型心绞痛(SAP)组和正常组(均P＜0.05),而后2组间差异无统计学意义(P＞0.05);②ACS组冠状动脉狭窄病变形态积分明显高于SAP组和正常组(P＜0.05),后2组间病变积分差异无统计学意义(P＞0.05);③3组间LDL-C水平差异无统计学意义(P＞0.05);④ACS组CRP及MMP-9水平均与冠状动脉造影狭窄病变形态积分有明显相关性(P＜0.05).⑤ACS组CRP与MMP-9间水平无明显相关性(P＞0.05).结论:冠心病患者CRP、MMP-9水平升高可能提示斑块不稳定;联合检测血清CRP、MMP-9水平,可以更有效地预测急性冠状动脉事件的发生.     

C-反应蛋白抑制活化的巨噬细胞分泌基质金属蛋白酶

目的研究C-反应蛋白(CRP)对巨噬细胞分泌基质金属蛋白酶(MMPs)的影响。方法以不同浓度的CRP和/或50μg/ml氧化的低密度脂蛋白(ox-LDL)处理THP-1巨噬细胞,应用明胶酶谱法测定细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9、MMP-1的活性。结果THP-1巨噬细胞在基础状态下分泌MMP-2、MMP-9、MMP-1,CRP抑制其分泌,以MMP-2为例,CRP抑制MMP-2的酶原(0.82±0.051,与空白对照组比较P<0.01)和其活性形式(0.61±0.030,与空白对照组比较P<0.01)。ox-LDL诱导MMPs的分泌,但这种作用被同时存在的CRP所抑制(0.56±0.098,与ox-LDL组比较P<0.01)。结论CRP抑制活化的巨噬细胞分泌MMPs,并抑制ox-LDL对MMPs的诱导作用。     

基质金属蛋白酶-3、C反应蛋白与颈动脉硬化的相关性研究

目的研究颈动脉粥样硬化患者血清基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、高敏C反应蛋白(hsCRP)的变化,探讨两者之间的关系,阿托伐他丁的干预作用。方法对77例来院就诊病人行颈动脉超声检查,根据颈动脉内中膜厚度(IMT)、有无动脉斑块及斑块的性质,分为三组:颈动脉软斑组(N=36),颈动脉硬斑组(N=18),对照组(N=23);检测血清MMP-3及hsCRP水平,分析MMP-3及hsCRP的水平与颈动脉硬化、斑块性质的关系,并对其中18例颈动脉软斑患者用阿托伐他丁治疗12周,观察斑块及MMP-3及hsCRP的水平的变化。结果(1)MMP-3水平:颈动脉软斑组、颈动脉硬斑组、对照组分别为8.27±5.12ng/ml、6.15±2.20ng/ml、3.87±2.31ng/ml,三组间差异有统计学意义;CRP水平则分别为4.82±2.02mg/L、1.54±1.01mg/L、1.45±1.01mg/L,颈动脉软斑组高于颈动脉硬斑组及对照组(P<0.001),颈动脉硬斑组与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05);(2)颈动脉软斑病人阿托伐丁治疗12周后血MMP-3的水平明显下降,复查颈动脉彩超,斑块明显好转,hsCRP的水平变化不明显(P>0.05)。结论血清MMP-3水平与颈动脉硬化及斑块性质有密切关系,阿托伐他丁有改善颈动脉硬化,降低血清MMP-3水平作用。     

乳鼠心肌细胞中C反应蛋白对基质金属蛋白酶-10表达调控的研究

目的:研究在乳鼠心肌细胞中C反应蛋白诱导基质金属蛋白酶-10(MMP-10)表达的作用及其分子机制。方法:培养乳鼠心肌细胞,以炎性因子C反应蛋白诱导MMP-10的表达。分别应用酶谱法和实时定量反转录—聚合酶链反应检测培养上清中MMP-10的活性和细胞中MMP-10信使核糖核酸(mRNA)表达水平的变化,应用蛋白免疫印迹杂交技术观察胞外调节激酶(ERK)通路以及转录因子活化蛋白-1的蛋白水平的变化。实验分为4组:对照组,C反应蛋白组,C反应蛋白+抑制剂组和抑制剂组。结果:心肌细胞给予C反应蛋白(5μg/ml)刺激后24 h,细胞培养上清中MMP-10活性较对照组升高了9.23倍(P0.01);细胞MMP-10 mRNA水平与0 h相比,6 h增加了0.83倍(P0.05),12 h达最高,增加了2.67倍(P0.05),24 h略有下降,增加了1.92倍(P0.05),差异均有统计学意义。C反应蛋白可激活心肌细胞p-ERK1和p-ERK2,从15 min开始,可持续到240 min;C反应蛋白刺激细胞4 h,活化蛋白-1的蛋白水平与0 h相比,增加了3.66倍(P0.01),差异有统计学意义;ERK抑制剂PD98059预处理心肌细胞,可阻断C反应蛋白引起的活化蛋白-1的蛋白水平的上调作用以及MMP-10活性的增加及MMP-10 mRNA的表达。结论:C反应蛋白通过ERK通路,上调转录因子活化蛋白-1的蛋白水平,从而对心肌细胞中MMP-10基因的转录和表达进行调节。     

冠心病患者动脉弹性与血清高敏C反应蛋白和基质金属蛋白酶9的相关性

目的 探讨冠心病患者动脉弹性与高敏C反应蛋白和基质金属蛋白酶9的关系.方法 运用动脉弹性功能测定仪检测大动脉弹性指数(C1)和小动脉弹性指数(C2);采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测血清高敏C反应蛋白及基质金属蛋白酶9.结果 C1、C2、基质金属蛋白酶9及高敏C反应蛋白在冠心病组与对照组之间存在差异,且有统计学意义.Logistic逐步回归分析显示:男性、吸烟、低密度脂蛋白、C2、高血压史、高敏C反应蛋白是冠心病的独立危险因素.冠心病患者C1与高敏C反应蛋白及基质金属蛋白酶9相关系数分别为-0.51(P＜0.01)和-0.49(P ＜0.01);C2与高敏C反应蛋白及基质金属蛋白酶9相关系数分别为-0.69(P ＜0.01)和-0.55(P＜0.01).冠心病患者动脉弹性影响因素多元逐步回归分析显示,C1独立影响因素为年龄、脉压、收缩压、高敏C反应蛋白、低密度脂蛋白、、基质金属蛋白酶9,C2独立影响因素为年龄、脉压、空腹血糖、高敏C反应蛋白、低密度脂蛋白.结论 冠心病患者动脉弹性与血清炎症因子高敏C反应蛋白及基质金属蛋白酶9均呈明显负相关,炎症反应可能是冠心病患者动脉弹性的重要影响因素之一.     

C反应蛋白对人脐静脉内皮细胞表达基质金属蛋白酶2的影响

目的通过观察C反应蛋白对人脐静脉内皮细胞表达基质金属蛋白酶2的影响,探讨C反应蛋白导致动脉粥样硬化斑块不稳定的可能机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,给予不同浓度的人重组C反应蛋白及普伐他汀干预,分为空白对照组、C反应蛋白5mg/L组、C反应蛋白20mg/L组、C反应蛋白100mg/L组及C反应蛋白20mg/L 普伐他汀组,培养24h后采用Westernblot及逆转录聚合酶链反应法在蛋白及mRNA水平观察各组细胞表达基质金属蛋白酶2的差异。结果C反应蛋白5mg/L组、20mg/L组及100mg/L组基质金属蛋白酶2蛋白条带的相对灰度值逐渐增高,呈浓度依赖性;而普伐他汀干预组相对灰度值明显低于C反应蛋白20mg/L组(P<0.05)。随着C反应蛋白干预浓度的增加,基质金属蛋白酶2mRNA的表达量也相应增加,呈浓度依赖性,普伐他汀可以减轻这种作用。结论C反应蛋白干预体外培养的人脐静脉内皮细胞后,可上调基质金属蛋白酶2的表达,因此C反应蛋白在导致动脉粥样硬化斑块不稳定方面有直接致炎症作用及炎症放大作用。     

不同类型冠心病患者血浆脑钠肽、基质金属蛋白酶及其抑制物、超敏C反应蛋白水平的变化

目的:观察不同类型冠心病患者的血浆脑钠肽(BNP)和基质金属蛋白酶9 (MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)及超敏C反应蛋白(hsCRP)水平的变化,探讨其临床意义.方法:113例均经冠状动脉造影确诊的冠心病(CHD)患者,按临床类型分为:急性心肌梗死(AMI)组36例,不稳定型心绞痛(UAP)组46例,稳定型心绞痛(SAP)组31例;另选30例非CHD者作对照组.分别采用化学发光法、ELISA及透射比浊法检测入院次日血浆BNP、MMP-9、TIMP-1及hsCRP的水平.结果:AMI组、UAP组、SAP组和对照组血浆BNP水平分别为(656.80±351.49)、(216.23±144.42)、(57.17±36.77)、(39.57±30.21)ng/L;MMP-9水平分别为(242.57±69.62)、(166.29±58.47)、(69.31±18.39)、(64.56±16.49)μg/L;TIMP-1水平分别为(196.83±56.57)、(159.23±45.41)、(83.69±14.31)、(81.95±13.28)μg/L;MMP-9/TIMP-1比值水平分别为1.30±0.39、1.06±0.32、0.82±0.14、0.80±0.22;hsCRP水平分别为(23.08±5.19)、(13.80±2.51)、(4.92±2.98)、(3.94±2.33)mg/L.AMI组血浆BNP、MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1及hsCRP水平明显高于UAP组(P<0.05),UAP组各项指标明显高于SAP组和对照组(P<0.05),SAP组与对照组各项指标水平比较差异无统计学意义(P>0.05).BNP与hsCRP、MMP-9水平变化呈正相关,与左室射血分数呈负相关.结论:不同临床类型CHD患者的血浆BNP、MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1及hsCRP水平不同,提示上述指标对CHD患者进行危险分层及分析预后有一定临床价值.     

氟伐他汀对内脏脂肪素诱导的内皮细胞MMP-1、TIMP-1和ICAM-1表达的影响

目的观察氟伐他汀对内脏脂肪素诱导的人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶1、组织型金属蛋白酶抑制剂1、细胞间黏附分子1表达的影响,探讨他汀类药物降脂外抗动脉粥样硬化的作用机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,以不同浓度氟伐他汀和内脏脂肪素共同孵育24 h,用逆转录聚合酶链反应法检测基质金属蛋白酶1、组织型金属蛋白酶抑制剂1和细胞间黏附分子1的表达。结果与正常对照组比较,内脏脂肪素组基质金属蛋白酶1和细胞间黏附分子1的表达显著升高,组织型金属蛋白酶抑制剂1的表达量下降。氟伐他汀干预后,基质金属蛋白酶1和细胞间黏附分子1的表达较内脏脂肪素组显著降低,组织型金属蛋白酶抑制剂1的表达增加。结论氟伐他汀可能通过抑制内脏脂肪素的活性,影响血管内皮细胞基质金属蛋白酶1、组织型金属蛋白酶抑制剂1和细胞间黏附分子1的表达,由此稳定血管内皮环境,抑制内皮细胞炎症反应,起到抗动脉粥样硬化的作用。     

大鼠实验性脑出血后基质金属蛋白酶2和9的表达

目的探讨大鼠脑出血后基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9的表达及其意义。方法采用未抗凝新鲜自体股动脉血注入大鼠尾状核建立脑出血动物模型。用酶谱分析法测定脑出血后6h、12h、24h、3天、6天、10天和15天时基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9的表达。结果基质金属蛋白酶2在脑出血后24h开始表达(P<0.05),第6天时达高峰(P<0.01),到第10天仍维持高水平表达(P<0.05);而基质金属蛋白酶9在脑出血后6h开始表达(P<0.05),24h~3天最明显(P<0.01),此后活性逐渐降低,第10天时的活性仍高于对照组(P>0.05),15天时不再表达。结论脑出血后6h~3天出血灶周围脑组织中基质金属蛋白酶9的活性增高,可能与急性期脑水肿的形成有关,而基质金属蛋白酶2的迟发表达可能参与了脑组织的修复过程。     

原发性高血压患者血清基质金属蛋白酶9及其抑制因子水平

目的　研究原发性高血压患者血清中基质金属蛋白酶 9(MMP— 9)及其抑制剂 ,金属蛋白酶组织抑制因子 1(TIMP— 1)水平的变化和左室肥厚的关系。方法　用酶联免疫吸附法对 4 0例经治疗或未治疗的原发性高血压患者进行血清MMP— 9和TIMP— 1水平测定 ,与 2 8例健康对照组进行比较。并对高血压患者进行心脏彩色多谱勒检查 ,计算左室重量指数。结果　 1、高血压组血清MMP - 9较正常对照组明显降低(2 96 38± 15 9 2 3ng ml-1、4 99 6 2± 334 80ng ml-1,P <0 0 0 1)而TIMP - 1水平较正常对照组明显升高 (35 5 99± 114 95ng ml-1、2 0 5 4 5± 38 77ng ml-1,P <0 0 0 1) ;2、高血压心肌肥厚组与无肥厚组MMP - 9无显著性差异(332 71± 186 70ng ml-1、2 82 5 9± 14 9 10ng ml-1,P >0 0 5 ) ,但TIMP - 1水平心肌肥厚组明显升高 (491 2 7±75 0 3ng ml-1,2 98 4 7± 4 2 98ng ml-1P <0 0 0 1)。结论　原发性高血压患者存在基质金属蛋白酶 - 9及其抑制剂 - 1代谢异常 ,血清TIMP - 1水平可能成为反映高血压左室肥厚的指标。     

冠心病患者外周血单个核细胞基质金属蛋白酶9/组织型金属蛋白酶抑制剂1及磷酸化c-Jun蛋白表达改变与冠状动脉病变特征的相关性

目的 结合冠状动脉造影结果 ,探讨冠心病患者外周血单个核细胞基质金属蛋白酶9、组织型金属蛋白酶抑制剂1和磷酸化c-Jun蛋白表达水平改变与冠状动脉病变特征的关系.方法 40例经冠状动脉造影确诊的冠心病患者分为急性冠状动脉综合征组(n=24)和稳定型心绞痛组(n=16).另选取同期经冠状动脉造影证实无冠状动脉病变患者15例为对照组.采用免疫印迹法分别检测外周血单个核细胞基质金属蛋白酶9、组织型金属蛋白酶抑制剂1和磷酸化c-Jun蛋白表达水平,计算基质金属蛋白酶9/组织型金属蛋白酶抑制剂1比值,并结合Gensini冠状动脉病变积分标准评价其与冠状动脉管腔病变程度的线性关系及其在反映冠状动脉粥样硬化斑块稳定性中的作用.结果 ①急性冠状动脉综合征组基质金属蛋白酶9、组织型金属蛋白酶抑制剂1、磷酸化c-Jun蛋白表达水平及基质金属蛋白酶9/组织型金属蛋白酶抑制剂1比值较稳定型心绞痛组和对照组明显增高(均P<0.001).②基质金属蛋白酶9、磷酸化c-Jun及基质金属蛋白酶9/组织型金属蛋白酶抑制剂1比值与Gensini冠状动脉病变积分呈正相关(r分别为0.433、0.476和0.457,均P<0.01);组织型金属蛋白酶抑制剂1蛋白表达水平与Gensini冠状动脉病变积分无相关性.③磷酸化c-Jun与基质金属蛋白酶9蛋白表达水平呈显著正相关(r=0.839,P<0.001).结论 ①急性冠状动脉综合征患者基质金属蛋白酶9、组织型金属蛋白酶抑制剂1蛋白表达水平较稳定型心绞痛患者明显增高,其比例严重失调,反映了急性冠状动脉综合征患者冠状动脉管腔病变程度更为复杂且血管壁具有更多易损斑块;②核转录因子c-Jun活化可能参与了动脉粥样硬化中基质金属蛋白酶9表达的调控.     

活血化瘀类中药对实验性血吸虫肝纤维化兔肝组织金属蛋白酶—1及其抑制因子—1mRNA表达的影响

目的观察活血化瘀类中药对肝组织金属蛋白酶-1(MMP-1)及其抑制因子-1(TIMP-1)mRNA表达的影响,以及对金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白质表达的影响,从胶原降解的角度探讨中药抗纤维化的机理.方法用血吸虫尾蚴120±1条经皮感染新西兰白兔,3个月后经病理证实已形成典型血吸虫肝纤维化,实验动物分4组,每组8只,一组灌服中药,一组灌服秋水仙碱,病理对照组和正常对照组灌服生理盐水.3个月后处死动物,取肝组织切片,采取原位杂交法检测MMP-1和TIMP-1mRNA的表达,用免疫组化法检测MMP-2蛋白的表达,并作Ⅰ、Ⅳ型胶原的免疫组化以及天狼红胶原染色.结果与病理对照组相比,活血化瘀类中药和秋水仙碱治疗组,肝组织胶原蛋白总合量,Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白含量均显著减少.活血化瘀类中药组,MMP-1mRNA表达明显增加,TIMP-1mRNA的表达明显减少,MMP-2蛋白表达无显著差异.秋水仙碱组,TIMP-1mRNA的表达明显减少,MMP-1、MMP-2的表达无明显差异.结论活血化瘀类中药抗纤维化的作用机理除了减少胶原蛋白的合成外,还与其降低MMP组织抑制因子的表达,增加金属蛋白酶的活性,促进问质胶原蛋白的分解有关.     

脂蛋白(a)免疫复合物对U937细胞基质金属蛋白酶1及其抑制物的作用

目的探讨脂蛋白(a)免疫复合物对U937细胞基质金属蛋白酶1及其抑制物组织金属蛋白酶抑制剂1mRNA表达的影响。方法分别采用不同浓度的天然脂蛋白(a)、氧化型脂蛋白(a)及其免疫复合物作用U937细胞,通过半定量RT-PCR分析U937细胞中基质金属蛋白酶1和组织金属蛋白酶抑制剂1基因表达的变化。结果正常U937细胞低表达基质金属蛋白酶1(0.076±0.012),而高表达组织金属蛋白酶抑制剂1(0.973±0.031)。等量的天然脂蛋白(a)、氧化型脂蛋白(a),及其免疫复合物作用后,基质金属蛋白酶1mRNA表达量分别为0.361±0.016,0.330±0.019,0.106±0.006和0.089±0.008;组织金属蛋白酶抑制剂1表达量分别为0.229±0.017,0.360±0.018,0.157±0.025和0.967±0.031。天然脂蛋白(a)对细胞基质金属蛋白酶1和组织金属蛋白酶抑制剂1mR-NA表达没有影响。氧化型脂蛋白(a)引起基质金属蛋白酶1轻度表达,但显著地下调组织金属蛋白酶抑制剂1的表达;而天然、氧化型脂蛋白(a)免疫复合物均非常显著地增加基质金属蛋白酶1和降低组织金属蛋白酶抑制剂1的mRNA表达(P<0.001),且较氧化型脂蛋白(a)对基质金属蛋白酶1的作用更为显著(P<0.001),并呈剂量效应关系。结论脂蛋白(a)免疫复合物增强U937细胞基质金属蛋白酶1mRNA表达,下调其抑制物组织金属蛋白酶抑制剂1的表达。     

辛伐他汀、丙丁酚和卡托普利在动脉粥样硬化斑块消退中的作用及与金属蛋白酶1和组织抑制物1基因表达的关系

观察药物消退和稳定动脉粥样硬化的作用并探讨基质金属蛋白酶1及基质金属蛋白酶组织抑制物1的表达。对实验性动脉粥样硬化兔,分别给予辛伐他汀、丙丁酚和卡托普利治疗12周。结果发现,3种药物均可显著降低血脂．以丙丁酚和辛伐他汀效果较强;在停止喂胆固醇后,自然消退组内中膜进一步增厚,3种药物均可显著消退动脉粥样硬化;药物治疗组的胶原I、基质金属蛋白酶1及基质金属蛋白酶组织抑制物1的mRNA表达水平均下降,其中丙丁酚组金属蛋白酶1的表达下降有统计学意义。3种药物均有消退动脉粥样硬化的作用,以辛伐他汀最佳;而药物通过减少基质金属蛋白酶1表达,相对减少基质金属蛋白酶1／基质金属蛋白酶组织抑制物1的表达比例,起到稳定斑块的作用。