脑缺血模型大鼠脑组织Slit2蛋白表达与血管新生的相关性

目的探讨大鼠脑缺血后Slit2同源物2(Slit2)蛋白与血管新生的相关性。方法将36只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型1 d组和模型3 d组,每组12只。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型,并于第1、3天分别进行行为学评分。取脑组织,采用Western印迹方法检测缺血脑组织中Slit2及其受体Robo1蛋白以及血管内皮生长因子(VEGF)的表达。利用CD50标记大鼠新生血管内皮细胞,计数新生血管密度(MVD)。结果模型组大鼠缺血脑组织中Slit2蛋白、VEGF的表达以及MVD均明显高于假手术组(P0.01),且在模型1 d组和模型3 d组中Slit2蛋白、VEGF的表达和MVD均明显升高;而与假手术组相比,Robo1的表达也在造模第1天显著升高(P0.01),但第3天其表达却出现下降,但仍明显高于假手术组(P0.01)。Pearson相关性分析发现,模型组大鼠脑组织中Slit2蛋白的表达与VEGF及MVD呈正相关(r=0.981、0.944,P0.01)。结论在脑缺血模型大鼠脑组织中Slit2蛋白的表达升高,推测Slit2蛋白可能与大鼠脑缺血后血管的新生密切相关。     

黄芪注射液对梗死灶周脑组织HIF-1α和VEGF的影响

目的:观察黄芪注射液对缺血性脑损伤大鼠脑组织低氧诱导因子(HIF-1α)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)影响,探索黄芪注射液对缺血脑组织血管生成的调节作用。方法:30只SD大鼠随机分为假手术组,模型组和黄芪注射液组。采用大脑中动脉局灶性栓塞模型,RT-PCR法检测缺血脑组织中HIF-1α和VEGF改变。结果:与模型组相比,黄芪注射液可显著升高缺血脑组织HIF-1α和VEGF表达(P<0.01)。结论:黄芪注射液可以通过上调缺血脑组织HIF-1α和VEGF的表达起到脑保护作用。     

3种中药复方对脑缺血再灌注大鼠脑组织细胞间黏附分子-1和血管内皮生子因子表达的影响

目的比较3种不同中药复方对大鼠脑缺血再灌注大鼠脑组织细胞间黏附分子(ICAM)-1和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的动态影响。方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组、模型组、益气活血方组、镇肝息风汤组和星蒌承气汤组,分别给予相应药物灌胃;采用免疫组化SABC染色法分别检测缺血半暗带ICAM-1和VEGF蛋白表达。结果模型组再灌注各时间点缺血半暗带ICAM-1和VEGF蛋白表达显著升高;各治疗组再灌注各时间点缺血半暗带ICAM-1显著降低和VEGF蛋白表达显著升高,24 h在降低ICAM-1和在升高VEGF方面均以镇肝熄风汤为优;48 h在降低ICAM-1方面以星蒌承气汤组为优,在升高VEGF方面以潜阳熄风组为优;72 h在升高VEGF方面以星蒌承气汤为优。结论 3种中药复方可通过抑制ICAM-1蛋白表达,升高VEGF蛋白表达保护血管内皮对抗脑缺血损伤。     

二氢丹参酮Ⅰ灌胃对急性缺血性脑卒中大鼠神经功能改善作用及其机制

目的 探讨二氢丹参酮Ⅰ（DT）灌胃对急性缺血性脑卒中大鼠神经功能的改善作用及其机制。方法 将50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组以及DT低、中、高剂量组。采用线栓法制备大鼠MCAO模型，假手术组仅分离血管，不进行插栓处理。造模后24 h,DT低、中、高剂量组分别给予1.67、5、15 mg/kg DT溶液灌胃，假手术组和模型组给予等量含2%DMSO的生理盐水灌胃，每天1次，连续7 d。造模24 h后和给药7 d后，采用Zea-Longa五分制评分法对大鼠进行神经行为学评分；采用TTC染色测算脑梗死体积；造模后和给药7 d后使用激光散斑血流仪检测大鼠缺血侧局部脑血流灌注量；HE染色观察缺血侧脑组织海马区的病理形态；Western blotting法检测缺血侧脑组织血管新生相关蛋白血管内皮生成因子（VEGF）、CD31、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达。结果 模型组大鼠神经行为学评分及脑梗死体积大于假手术组（P均<0.01），缺血侧脑血流灌注量变化率低于假手术组（P<0.01）；与模型组比较，DT中、高剂量给药组神经行为学评分降低，脑梗死体积减小，缺血侧脑血流灌注量增加（...     

水蛭素对缺血性脑卒中大鼠微血管新生及HIF-VEGF-Notch通路的影响

目的 探讨水蛭素对缺血性脑卒中大鼠脑组织微血管新生及缺氧诱导因子(HIF)-血管内皮生长因子(VEGF)-Notch通路的影响。方法 将120只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、阳性对照组、水蛭素低剂量组(0.5 mg/kg)和水蛭素高剂量组(1.0 mg/kg),每组20只。采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO),以尼莫地平为阳性对照药物(1 mg/kg),阳性对照组及水蛭素各剂量组连续腹腔注射7 d,应用Longa法对各组大鼠进行神经功能学评分,干/湿重法测定脑组织含水量,2,3,5-氯化三苯基四氯唑(TTC)染色观察脑组织梗死体积,免疫组化法测定梗死灶周围微血管密度(CD31)表达情况,免疫印迹法(Western Blot)检测脑组织HIF-VEGF-Notch通路相关蛋白的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠神经功能评分增高(P<0.01),脑组织含水量及脑梗死体积增大(P<0.01),脑组织中CD31阳性细胞表达及HIF-1α、VEGF、Notch1的蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01)。水蛭素低剂量组、水蛭素高剂量组神经功能评分...     

小牛血清去蛋白注射液对局灶性脑缺血大鼠脑血管储备能力的影响

目的探讨小牛血清去蛋白注射液对局灶性脑缺血大鼠脑血管储备能力的影响。方法将大鼠随机分为治疗组、缺血组和假手术组,治疗组于造模前3 d腹腔注射小牛血清去蛋白注射液2 m l/kg,1次/d,末次给药时间为术前5 h。缺血组和治疗组分别于造模成功后3、6、24、48、72 h处死,行血管内皮生长因子（VEGF）的免疫组化检测。结果治疗组于缺血3 h后开始出现阳性反应,与假手术组和缺血组比较,治疗组各时间点脑组织VEGF表达明显增多（P〈0.05）。结论小牛血清去蛋白注射液能够提高局灶性脑缺血大鼠脑血管储备能力,对缺血性脑损伤有保护作用。     

fibulin-5在缺血再灌注大鼠脑组织中的表达

目的 探讨缺血再灌注大鼠缺血脑组织fibulin-5的表达规律.方法 96只雄性SD大鼠分为正常组、假手术组、中脑动脉闭塞(MCAO)模型6、24、48和72 h组.线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,激光共聚焦定位fibulin-5在脑组织内的表达,Western印迹检测缺血后fibu-lin-5蛋白表达变化,实时定量PCR测定fibulin-5 mRNA表达规律.结果 ①fibulin-5主要在内皮细胞间表达,偶可在实质细胞或内皮细胞胞质内表达;②大鼠缺血侧脑组织fibulin-5蛋白表达从再灌注6h开始升高(1.26 ±0.46,P＜0.05),再灌注24 h达到高峰(1.78±0.48),72 h(0.89±0.27)时有所降低,但仍高于假手术组(0.30±0.14,P＜0.05),fibulin-5 mRNA表达规律与蛋白表达有同样的趋势.结论 缺血再灌注大鼠缺血脑组织内fibulin-5表达水平明显升高,有可能对脑损伤后血管稳定起到保护作用.     

Apelin受体在缺血性脑卒中大鼠皮质及海马的表达变化

目的 探讨Apelin受体(APJ)在缺血性脑卒中大鼠皮质及海马的表达变化。方法 选择雄性8周龄SD大鼠30只，随机分为假手术组和脑卒中组，每组15只。采用大脑中动脉闭塞法获得大鼠缺血性脑卒中模型，缺血2 h再灌注24 h后利用Zea Longa法和TTC染色法评价大鼠神经功能、测定脑梗死体积；利用苏木精-伊红染色检测大鼠大脑皮质及海马区存活神经元形态及数目；利用免疫组织化学法和Western blot技术检测大鼠大脑皮质及海马区B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)、Bax和APJ蛋白表达，利用RT-PCR检测APJ mRNA表达。结果 脑卒中组大鼠神经行为学评分明显高于假手术组[(2.58±0.51)分vs 0分，P<0.01]。TTC染色显示，脑卒中组大鼠脑梗死体积明显高于假手术组[(32±1)%vs 0,P<0.01]。苏木精-伊红染色显示，与假手术组比较，脑卒中组大鼠大脑皮质及海马神经元数目明显减少[(234.00±22.87)个vs(290.70±26.50)个，P<0.05;(79.33±3.79)个vs(99.67±6.43)个，P<0.01]。Wes...     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后转化生长因子β1表达的研究

目的　观察大鼠大脑中动脉阻塞再灌注 (MCAO R)后转化生长因子β1(TGF β1)表达的变化及其意义。方法　采用免疫组织化学方法检测TGF β1在缺血再灌注脑组织损伤中的变化情况。 结果　再灌注后 6h ,缺血再灌注组脑组织TGF β1阳性细胞数较相应的假手术组和正常对照组显著增加(P<0 .0 1) ;正常组、假手术组仅在少数血管中有微弱的TGF β1阳性表达 ,而缺血再灌注组脑梗死区神经元、胶质细胞和血管内皮细胞和平滑肌细胞中TGF β1均有显著增强的阳性表达 ,另外 ,在软脑膜血管内皮细胞和平滑肌细胞中也可见TGF β1阳性细胞表达。 结论　脑缺血再灌注损伤可诱导TGF β1表达持续增高     

基于PI3K/AKT/NF-κB信号通路探讨益母草碱对缺血性脑卒中大鼠脑组织病理变化的影响

目的基于PI3K/AKT/NF-κB信号通路探讨益母草碱对缺血性脑卒中大鼠脑组织病理变化的影响。方法建立缺血性脑卒中大鼠模型,给予益母草碱,连续给药7天后,观察各组大鼠神经功能损害评分;检测大鼠脑组织中氧化应激指标含量;TTC染色法检测大鼠脑梗死面积百分比;HE染色法观察大鼠脑组织皮质区和海马区病理学变化情况;采用实时荧光定量聚合酶链式反应测定大鼠脑组织内梗死侧皮层血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导因子1α(Hif-1α)mRNA的表达变化;Western blot检测脑组织中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)、核因子κB(NF-κB)蛋白表达。结果与空白对照组相比,模型对照组大鼠的神经功能损害评分、一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)含量、VEGF和Hif-1αmRNA表达、NF-κB蛋白表达明显升高,氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、超氧化物歧化酶(SOD)含量、AKT、PI3K蛋白表达明显下降,差异具有统计学意义(P0.01);与模型对照组相比,阳性对照组和益母草碱中、高剂量组大鼠的神经功能损害评分、NO、eNOS含量、VEGF和Hif-1αmRNA表达、NF-κB蛋白表达明显降低,ox-LDL、SOD含量、AKT、PI3K蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义(P0.01)。结论益母草碱对实验性脑损伤大鼠具有脑保护作用,可以改善脑梗死后的神经损伤,减少脑梗死体积,降低大鼠的氧化应激反应,这些效应可能是通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路实现的。     

山茱萸环烯醚萜苷对局灶性脑缺血大鼠血管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的研究山茱萸环烯醚萜苷（CIG）对局灶性脑缺血大鼠神经功能和血管内皮细胞生长因子（VEGF）及其受体FLK-1表达的影响。方法取成年雄性SD大鼠115只,随机分为假手术组、模型组及CIG治疗组。治疗组又分为20、60和180mg／kg剂量组,每组23只大鼠。采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血模型,造模后3h开始灌胃给药。造模后7、14和28d,采用改良神经功能缺损评分（mNSS）评价大鼠的神经功能,用免疫组化法和Western Blot法检测VEGF蛋白表达。用RT—PCR方法检测VEGF及其受体FLK-1的mRNA表达。结果①造模后7、14和28d,与模型组相比,CIG 60和180mg／kg组大鼠mNSS均显著降低（F=2．832,F=4．970,F=2．661,均P〈0．05）;②造模后7d,模型组大鼠大脑皮质VEGF蛋白与假手术组相比无明显变化,14和28d时,VEGF蛋白表达降低;与模型组相比,7、14和28d时,CIG 60和180mg／kg组VEGF蛋白表达显著增加（F=1．202,F=1．705,F=2．189,均P〈0．05）;③造模后28d,CIG 60和180mg／kg组大鼠VEGF阳性细胞染色面积显著增加（F=13．249,均P〈0．05）;④造模后7d,与模型组相比,CIG 60和180mg／kg组大鼠大脑皮质VEGF-mRNA表达亦显著增加（F=2．389,均P〈0．05）;CIG 60和180mg／kg组FLK-1 mRNA的表达也显著增加（F=3．657,均P〈0．05）。结论CIG能明显改善局灶性脑缺血大鼠的神经功能,其机制可能与CIG促进VEGF蛋白的表达有关。     

白蛋白治疗对大鼠脑缺血后海马血管内皮生长因子及其受体1的影响

目的探讨人血白蛋白治疗对大鼠脑缺血早期海马血管内皮生长因子(VEGF)及fam样酪氨酸激酶受体1(flt-1)表达的影响。方法雄性SD大鼠40只,采用大脑中动脉线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组10只、生理盐水组15只和白蛋白组15只。采用溴甲酚绿法测定血清白蛋白水平,RT-PCR检测脑缺血再灌注后6、24、48h大鼠海马VEGF和flt-1mRNA表达,免疫组织化学和Western blot法检测脑缺血再灌注24h海马VEGF蛋白表达。结果与生理盐水组比较,白蛋白组大鼠神经功能缺损评分于脑缺血再灌注后24、48h明显降低(P<0.05),海马VEGF mRNA和flt-1mRNA表达于脑缺血再灌注后6、24h明显降低(P<0.05,P<0.01),海马VEGF蛋白表达于脑缺血再灌注后24h明显降低(P<0.05)。结论白蛋白治疗可下调脑缺血早期海马VEGF和flt-1mRNA表达,降低海马VEGF蛋白表达水平,改善神经功能缺损。     

VEGF用于急性脑梗死神经元保护及再生的实验研究

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）在急性脑梗死中神经元保护及再生作用。方法48只SD大鼠，随机分为4组，利用MCAO模型。A组（12只），缺血1h后再灌注24h＋生理盐水，对照组；B组（12只），缺血1h后再灌注1h＋VEGF；C组（12只），缺血1h后再灌注12h＋VEGF；D组（12只），缺血1h后再灌注24h＋VEGF。模型成功后侧脑室注射rrVEGF164，VEGF注射后连续3d分别腹膜下注射BrdU6mg/100g。术后第7天，取脑切脑片。分别TTC染色，HE染色。免疫组化观察。结果VEGF，Tunnel染色凋亡细胞阳性数，BrdU阳性细胞数，在缺血再灌注12h，24h组与对照组相比，阳性细胞数有统计学差异。结论VEGF在急性脑梗死后有抗细胞凋亡及神经元保护作用，并有促进缺血后神经元再生作用。     

低氧诱导因子1α抑制大鼠缺血下肢血管生成及内皮祖细胞的动员

目的探讨低氧诱导因子1α(HIF-1α)在组织缺血时血管生成及内皮祖细胞(EPCs)动员中的作用。方法SD雌性大鼠36只,随机分为下肢缺血加HIF-1α反义寡核苷酸组(HIF-1α反义寡核苷酸组)、下肢缺血加HIF-1α错义寡核苷酸组(HIF-1α错义寡核苷酸组)和单纯下肢缺血组,每组12只,于股动脉结扎建立下肢缺血模型,缺血局部微注射脂质体转染的全硫代修饰HIF-1α寡核苷酸。测血浆血管内皮生长因子(VEGF);acLDL-DiI和FITC-UEA-I双染色鉴定EPCs后计数;下肢缺血区肌肉组织测HIF-1αmRNA和VEGF mRNA的表达和术后28天缺血区肌肉组织毛细血管密度。结果HIF-1α反义寡核苷酸组的HIF-1αmRNA和VEGF mRNA表达均较单纯下肢缺血组和HIF-1α错义寡核苷酸组明显减少;HIF-1α反义寡核苷酸组的循环EPCs、血浆VEGF及缺血区肌肉组织毛细血管密度均较单纯下肢缺血组和HIF-1α错义寡核苷酸组明显减少。结论全硫代修饰HIF-1α反义寡核苷酸可抑制大鼠缺血肢体血管生成和因缺血引起的EPCs的动员,其机制可能是通过VEGF起作用,HIF-1α是组织缺血时EPCs一个动员因子。     

地西泮联合亚低温对大鼠脑缺血损伤病理的影响

目的 探讨地西泮联合亚低温治疗对大鼠局灶脑缺血组织病理损伤的影响.方法 20只Wistar大鼠随机分为假手术组、脑缺血对照组、轻度高温地西泮组、常温地西泮组及亚低温地西泮组(每组4只).用线栓法制作大鼠脑缺血模型,地西泮组在缺血前30 min及缺血后2 h腹腔注射地西泮(10 mg/kg).诱导目标脑温,采用光镜、电镜观察各组病理特点.结果 轻度高温、常温、亚低温状态下地西泮治疗组随脑温降低,缺血脑组织病理损伤依次减轻,地西泮联合亚低温治疗明显改善缺血脑组织病理学特征.结论 地西泮联合亚低温治疗对脑缺血的保护作用增强.     

清脑益元汤对大鼠脑缺血损伤Nestin、NGF表达的影响

目的研究清脑益元汤对大鼠脑缺血损伤后巢蛋白(Nestin)、神经生长因子(NGF)表达的影响,探究清脑益元汤对缺血性脑损伤神经元保护作用的部分机制。方法将192只健康SD大鼠随机分为两大组,每大组再分为4个亚组:空白组(n=6)、假手术组(n=30)、模型组(n=30)、清脑益元汤组(n=30)。采用改良的Longa线栓法制备大鼠急性脑缺血损伤模型,除空白组外,假手术组、模型组及清脑益元组按缺血损伤后1 d、3 d、7 d、14 d、28 d 5个取材时间点分为5个亚组。造模成功后取大鼠缺血侧脑组织,采用免疫组化法检测大鼠缺血侧皮质区Nestin、NGF表达,采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)法检测大鼠缺血侧皮质区Nestin、NGF mRNA表达。结果(1)免疫组化法:与假手术组相比,模型组、清脑益元组在缺血侧Nestin、NGF阳性细胞明显增多(P<0.01,P<0.01);与模型组相比,清脑益元组Nestin、NGF阳性细胞表达明显增多(P<0.01,P<0.05);(2)Real-Time PCR法:与假手术组相比,模型组、清脑益元汤组大鼠脑组织缺血侧皮质区Nestin、NGF mRNA表达量增加(P<0.01,P<0.01);与模型组相比,清脑益元汤组大鼠脑组织缺血侧皮质区Nestin、NGF mRNA表达量升高(P<0.01,P<0.05)。结论清脑益元汤可能通过上调脑缺血损伤后Nestin、NGF蛋白及mRNA表达,促进脑组织损伤修复、保护神经元,进而发挥脑保护的作用。     

丁基苯酞对缺血性脑损伤模型大鼠血脑屏障的影响

目的观察大鼠全脑缺血后血脑屏障的改变以及丁基苯酞的干预作用,探讨其对缺血性脑损伤的防护作用机制。方法选择120只SD大鼠,随机分为假手术组24只、脑缺血组24只、丁基苯酞组72只。采用四血管结扎的全脑缺血模型,制模成功后丁基苯酞组大鼠按腹腔注射剂量又分为丁基苯酞0.3 mg/kg组24只、丁基苯酞1.0mg/kg组24只、丁基苯酞3.0 mg/kg组24只;检测脑组织依文思蓝(EB)含量、免疫组织化学法检测脑组织血管内皮生长因子(VEGF)表达、心脏取血计数循环内皮细胞数。结果与假手术组比较,脑缺血组大鼠脑组织EB含量、VEGF表达、循环内皮细胞数明显升高(P<0.05,P<0.01);与脑缺血组比较,丁基苯酞各剂量组大鼠脑组织EB含量、VEGF表达、循环内皮细胞数明显降低,以丁基苯酞3.0 mg/kg组最明显(P<0.05,P<0.01)。结论丁基苯酞通过降低大鼠全脑缺血后脑组织VEGF表达、降低循环内皮细胞数,从而降低血脑屏障的通透性,对缺血性脑损伤有保护作用。     

糖尿病大鼠脑缺血再灌注后细胞外信号调节激酶1/2表达与海马CA4区神经元凋亡

目的 探讨糖尿病大鼠脑缺血再灌注后神经元细胞外信号调节激酶(extracellularsignal-regulated kinase,ERK)1/2表达及其意义.方法 72只健康成年SD大鼠随机分假手术组、正常血糖脑缺血组和糖尿病腑缺血组,每组根据缺血再灌注不同时点分为缺血 15 min再灌注1 h、3 h,6 h亚组,每个亚组6只.采用链脲佐菌素诱导糖尿病,双血管闭塞联合放血法建立糖尿病大鼠全脑缺血模型.应用TUNEL和免疫组化方法观察海马CA4区神经元凋亡和磷酸化ERK1/2表达.结果 糖尿病脑缺血组在缺血 15 min、冉灌注1 h,3 h,6 h各时间点海马CA4区神经元凋亡发生率均明显高于正常血糖脑缺血组(P<0.05);糖尿病脑缺血组在各时间点磷酸化ERK1/2均有较高表达,在再灌注1 h和3 11时均明显高于正常血糖组(P<0.01).结论 ERK1/2可能参与了糖尿病加重脑缺血冉灌注后神经元损伤的机制.     

糖尿病大鼠脑缺血再灌注后细胞外信号调节激酶1/2表达与海马CA4区神经元凋亡

目的 探讨糖尿病大鼠脑缺血再灌注后神经元细胞外信号调节激酶(extracellularsignal-regulated kinase,ERK)1/2表达及其意义.方法 72只健康成年SD大鼠随机分假手术组、正常血糖脑缺血组和糖尿病腑缺血组,每组根据缺血再灌注不同时点分为缺血 15 min再灌注1 h、3 h,6 h亚组,每个亚组6只.采用链脲佐菌素诱导糖尿病,双血管闭塞联合放血法建立糖尿病大鼠全脑缺血模型.应用TUNEL和免疫组化方法观察海马CA4区神经元凋亡和磷酸化ERK1/2表达.结果 糖尿病脑缺血组在缺血 15 min、冉灌注1 h,3 h,6 h各时间点海马CA4区神经元凋亡发生率均明显高于正常血糖脑缺血组(P<0.05);糖尿病脑缺血组在各时间点磷酸化ERK1/2均有较高表达,在再灌注1 h和3 11时均明显高于正常血糖组(P<0.01).结论 ERK1/2可能参与了糖尿病加重脑缺血冉灌注后神经元损伤的机制.