瑞舒伐他汀后处理联合缺血后处理减轻2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的 探讨瑞舒伐他汀后处理联合缺血后处理对2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 取健康、雄性、清洁级Wistar大鼠80只,体重180～220 g.链脲佐菌素联合尼克酰胺建立2型糖尿病大鼠模型,选取成模大鼠随机分成6组(各组10只),分别为:假手术组、对照组、瑞舒伐他汀后处理组(RSV组)、缺血后处理组(Post组)、瑞舒伐他汀后处理+缺血后处理组(RSV+Post组)、瑞舒伐他汀后处理+缺血后处理+LY294002组[RSV+Post+LY294002组,于再灌注前15 min经颈外静脉给予磷酸肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002],均予心肌缺血30 min,再灌注120min处理.TTC染色测定心肌梗死面积、电镜观察心肌细胞超微结构变化、Western blot测定心肌组织磷酸化内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白(p-eNOS)及总eNOS蛋白(t-eNOS)的表达.结果 RSV+Post组eNOS磷酸化水平显著高于对照组(0.332±0.013比0.079±0.004,P<0.01),心肌线粒体超微结构损伤显著轻于对照组(1.15±0.32比3.51±0.32,P<0.01),心肌梗死面积显著小于对照组[(33±2)%比(75±2)%,P<0.01].结论 瑞舒伐他汀后处理联合缺血后处理可能通过激活PI3K/AKT/eNOS信号通路,减轻2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤.     

阿托伐他汀后处理对GK大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨不同剂量阿托伐他汀后处理对GK大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及其机制。方法将70只GK大鼠随机分为7组(n=10只):假手术组、缺血再灌注组(I/R组)、不同剂量(0.1、0.5、1及2 mg/kg)阿托伐他汀后处理组及阿托伐他汀后处理+LY294002组。TTC染色测定心肌梗死面积,电镜观察心肌细胞超微结构变化及Western blot测定心肌组织磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、总Akt(t-Akt)的蛋白表达。结果阿托伐他汀后处理组心肌梗死面积低于I/R组,心肌线粒体超微结构损伤轻于I/R组,Akt磷酸化水平高于I/R组,其中1 mg/kg和2 mg/kg阿托伐他汀后处理组较显著。PI3K特异性抑制剂LY294002可消除这种作用。结论阿托伐他汀后处理对GK大鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作用,这可能与PI3K/Akt通路的激活有关。     

缺血后处理对心肌的保护作用及其机制探讨

目的:探讨缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的预防作用。方法:将32只雄性SD大鼠随机均分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后处理组(IPO组)和环孢素A(CsA)组,采用结扎冠状动脉左前降支制备大鼠心肌缺血-再灌注模型。测定各组心肌组织中肌酸激酶(CK)和丙二醛(MDA)浓度,电镜观察心肌细胞线粒体形态和超微结构改变,并采用免疫组织化学方法测定凋亡相关指标细胞色素C(CytC)的表达。结果:①与IR组相比,IPO组CK活性和MDA含量显著降低(均P<0.01),心肌细胞线粒体超微结构的损伤减少,CytC的胞质表达水平亦降低;②IPO组和CsA组在CK活性与MDA含量上差异无统计学意义,心肌线粒体超微结构损伤程度和CytC的胞质表达水平近似。结论:缺血后处理与CsA有类似的减轻心肌再灌注损伤的作用。     

三磷酸腺苷后处理通过RISK信号通路和mKATP减轻兔心肌缺血再灌注损伤

目的 探讨再灌注损伤挽救激酶(RISK)信号通路和线粒体ATP敏感性钾通道(mKATP)在三磷酸腺苷(ATP)后处理减轻兔心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 选择60只雄性大耳白兔随机为缺血再灌注损伤组(IRI组)、ATP后处理组、PI3K抑制剂Wortmannin+ATP后处理组(Wortmannin+ATP组)、ERKl/2抑制剂PD98059+ATrP后处理组(PD98059+ ATP组)、选择性mKATP抑制剂5-HD+ ATP后处理组(5-HD+ ATP组),每组12只,建立心肌缺血再灌注模型.采用依文思蓝和四氮唑蓝双重染色测定心肌梗死面积,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Western blot检测心肌Akt、p-Akt、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白的表达.结果 ATP后处理组心肌梗死面积、心肌细胞凋亡指数明显低于IRI组(P＜0.01).Wortmannin+ ATP组、PD98059+ArP组和5-HD+ ATP后处理组心肌梗死面积、心肌细胞凋亡指数与IRI组比较差异无统计学意义.Westem blot检测显示,ATP后处理组p-Akt、p-ERK1/2表达水平明显高于IRI组(P＜0.05).结论 ATP后处理可通过缩小心肌梗死面积和减少心肌细胞凋亡发挥对缺血再灌注心肌的保护作用,其机制可能与RISK信号通路及mKATP有关.     

远端缺血后处理对兔心脏缺血/再灌注损伤的保护作用及其机制研究

目的:观察远端肢体缺血后处理对兔心脏缺血/再灌注损伤的作用,并探讨其可能机制。方法:36只健康新西兰大白兔随机分为6组(每组6只):假手术组、缺血对照组、缺血后处理组(MPostC组)、远端肢体缺血后处理组(RPostC组)、缺血后处理+5-羟葵酸组(MPostC+5-HD组)、远端肢体缺血后处理+5-羟葵酸组(RPostC+5-HD)。结扎左冠状动脉左室支45 min,再灌注120 min造模,结扎双侧髂外动脉5 min骨骼肌短暂缺血。于缺血前、后及再灌注1 h、2 h观察心功能指标和肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)活力及心肌梗死范围。结果(:1)再灌注1 h、2 h后,MPostC组、RPostC组心功能指标较缺血对照组明显改善(P0.05)。MPostC+5-HD组、RPostC+5-HD组分别较MPostC组、RPostC组改善不明显(P0.05)(;2)再灌注2 h时,MPostC组、RPostC组的CK、LDH活力均显著低于缺血对照组(P均0.05),MPostC+5-HD组、RPostC+5-HD组的CK、LDH活力分别较MPostC组、RPostC组明显增高(P均0.05)(;3)缺血对照组的缺血范围[缺血区重量/左心室重量(AAR/LVg),缺血区面积/左心室面积(AAR/LVs)]与其他5组比较差异均无统计学意义(P0.05);MPostC组、RPostC组梗死范围[梗死区重量/缺血区重量(AN/AARg)、梗死区面积/缺血区面积(AN/AARs)]均较缺血对照组明显降低(P均0.05),MPostC+5-HD组、RPostC+5-HD组分别与MPostC组、RPostC组比,梗死范围均增加(P均0.05)。MPostC+5-HD组、RPostC+5-HD组、缺血对照组的梗死范围组间差异无统计学意义(P0.05)。结论:经典的缺血后处理和远端肢体缺血后处理对心脏缺血/再灌注损伤均有明显的保护作用,其共同的机制可能为线粒体ATP敏感钾通道(MitoKATP)的激活。     

心肌缺血预处理联合后处理在大鼠心肌缺血-再灌注损伤过程中的保护作用

目的 探讨心肌缺血预处理和缺血后处理联合作用对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法 选择Wistar大鼠48只,建立大鼠心肌缺血再灌注模型,随机分为4组(每组12只):对照组(I/R)、缺血预处理组(IPC)、缺血后处理组(IPO)、缺血预处理后处理联合作用组(IPC+IPO).肢体Ⅱ导联心电图记录再灌注时的心律失常情况;测定再灌注末血清丙二醛(MDA)的含量;电镜观察心肌超微结构的变化;心肌含水量的测定.结果 IPC+IPO能明显减少再灌注时大鼠心律失常发生率,减轻再灌注损伤,降低MDA的含量,减少心肌含水量.结论 IPC+IPO对大鼠MIRI有明显的保护作用.     

庚醇预处理对兔缺血再灌注心肌凋亡和线粒体结构与功能的影响

目的探讨庚醇预处理对兔心肌缺血再灌注心肌凋亡和线粒体结构与功能的影响及可能机制。方法大白兔80只,随机分为假手术组、心肌缺血再灌注组(IR组)、缺血预处理组(IP组)、庚醇预处理组(HT组)以及庚醇预处理加5-HD干预组(5-HD组)。采用TUNEL法检测各组缺血心肌细胞凋亡,用透射电镜观察心肌细胞的超微结构改变,同时检测线粒体膜电位、Ca~(2+)、MDA、超氧化物歧化酶(SOD)浓度。结果假手术组心肌线粒体结构正常。与IR组和5-HD组比较,HT组和IP组心肌凋亡指数明显减少,心肌线粒体形态结构改变明显减轻(P0.05);线粒体膜电位明显升高、Ca~(2+)浓度明显下降(P0.05,P0.01)。与IR组比较,IP组SOD浓度明显升高、MDA浓度明显下降(P0.05)。结论庚醇可改善心肌凋亡以及保护心肌线粒体结构,其机制可能与线粒体ATP敏感性钾通道有关。     

吡格列酮保护缺氧复氧诱导乳鼠心肌细胞凋亡的离子通道机制

目的观察吡格列酮对缺氧复氧大鼠心肌细胞凋亡的保护作用,并探讨保护作用与ATP敏感性钾通道开放的关系。方法原代培养的SD乳鼠心肌细胞,分为8组:溶媒组、缺氧复氧组、0.1μmol/L吡格列酮组、1 μmol/L吡格列酮组、2μmol/L吡格列酮组、2μmol/L吡格列酮+30μmol/L HMR-1098组、2μmol/L吡格列酮+0.5mmol/L 5-羟基葵酸盐(5-HD)组、2μmol/L吡格列酮+30μmol/L HMR-1098+0.5 mmol/L 5-HD组。利用膜联蛋白-V与碘化丙啶双染法及Hoechst 33258染色法检测心肌细胞凋亡。结果缺氧复氧组乳鼠心肌细胞发生明显凋亡,经吡格列酮预处理后减少心肌细胞凋亡(P<0.05);与0.1μmol/L、1μmol/L及2μmol/L吡格列酮组比较,5-HD削弱吡格列酮抑制心肌细胞凋亡的作用(P<0.05),HMR-1098无作用(P>0.05)。结论吡格列酮对缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡具有保护作用,线粒体ATP敏感性钾通道的开放可能介导了吡格列酮的保护作用。     

原花青素联合缺血后处理对H9C2心肌细胞的保护作用

目的观察原花青素(procyanidine,PC)与缺血后处理(ischemic postconditioning,IPO)联合干预H9C2心肌细胞,对其凋亡率及磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(P-p38MAPK)的作用。方法将培养的H9C2心肌细胞分为正常对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血后处理组(IPO组)、原花青素+缺血后处理组(PC+IPO组)。利用AO-EB染色法检测H9C2心肌细胞的凋亡率;利用Western blotting方法检测H9C2心肌细胞P-p38MAPK蛋白表达情况。结果对细胞凋亡率的影响:IPO单独和联合PC干预H9C2心肌细胞0、12h、24h后,各时间点IPO组和PC+IPO组细胞凋亡率均低于I/R组(P<0.01)。12h时,PC+IPO组细胞凋亡率低于IPO组(P<0.05)。对P-p38MAPK表达的影响:12h时,I/R组表达高于C组(P<0.01);PC+IPO组和IPO组表达低于I/R组(P<0.01),同时PC+IPO组低于IPO组(P<0.05)。结论 IPO单独和联合PC干预均可通过减少心肌细胞凋亡起到心肌保护作用,并且PC联合IPO更有效。该保护作用机制可能与抑制p38MAPK有关。     

线粒体连接蛋白43参与缺血后处理对兔急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨线粒体连接蛋白43(connexin43,Cx43)和线粒体ATP敏感性钾通道(mitoK_(ATP)~+)在缺血后处理保护兔心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 新西兰大白兔64只,建立心肌缺血再灌注模型,给予冠状动脉左前降支30 min缺血,240 min再灌注.随机分为4组,每组16只:假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组和5-羟葵酸加缺血后处理组.测定血浆磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB),肌钙蛋白I(cTnI)含量以及心肌梗死面积,采用电子显微镜观测心肌线粒体结构变化,Western blot检测线粒体Cx43蛋白表达.结果 缺血后处理组心肌梗死面积为(19.1±3.9)%,明显低于缺血再灌注组(35.7±5.8)%,P＜0.01.再灌注4 h末血浆CK-MB与cTnI活性,缺血后处理组明显低于缺血再灌注组和5-羟葵酸加缺血后处理组(P＜0.01).与假手术组比较,其他各组线粒体均损伤明显(P均＜0.01);缺血后处理组线粒体损伤程度轻于缺血再灌注组(P＜0.01);缺血后处理组线粒体损伤程度明显轻于5-羟葵酸加缺血后处理组(P＜0.01).缺血再灌注组和5-羟葵酸加缺血后处理组线粒体Cx43蛋白表达均显著低于假手术组(P均＜0.05);缺血后处理组心肌线粒体Cx43蛋白表达明显高于缺血再灌注组(P＜0.05);缺血后处理组心肌线粒体Cx43蛋白表达明显高于5-羟葵酸加缺血后处理组(P＜0.05).结论 线粒体Cx43可能参与了缺血后处理的心肌保护作用,其机制可能与mitoK_(ATP)~+有关.     

后适应在兔心肌缺血再灌注损伤中的实验研究

目的：观察缺血后适应对兔心肌缺血再灌注损伤（IRI）的保护作用。方法将30只新西兰大白兔随机分为缺血-再灌注组（IR组）,缺血后适应组,后适应加5-羟基癸酸盐（5-HD）组,延迟后适应组及假手术组5组,每组6只。采用硫代巴比妥酸比色法检测5组大白兔心肌组织丙二醛含量,依文思兰加氯化四氮唑兰双重染色法及称重法测定心肌梗死范围大小。结果丙二醛含量缺血后适应组显著低于IR组和延迟后适应组（均P＜0.01）,与后适应加5-HD组相近,但显著高于假手术组（P＜0.05）。心肌梗死面积在IR组、后适应加5-HD组、延迟后适应组之差异无统计学意义（P＞0.05）,但大于缺血后适应组,差异均有显著统计学意义（均P＜0.01）。结论缺血后适应在兔心肌IRI模型中有明显的心肌保护作用;特异性线粒体ATP敏感钾通道抑制剂5-HD可完全取消后适应的心肌保护作用;延迟5min后实行后适应操作其保护作用完全消失。     

缺血后处理对心肌缺血再灌注损伤过程中内质网应激的影响研究

目的 探讨缺血后处理(IPostC)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中细胞凋亡的影响,以及特异性内质网应激(ERS)损伤相关蛋白Grp78(葡萄糖调节蛋白78)和Caspase 12(半胱氨酸蛋白酶12)的蛋白表达水平的变化和意义。方法 Wistar 大鼠24只随机分为假手术组、I/R组(缺血再灌注组)、IPostC组(缺血后处理组)3组,每组8只。分别测定各组心肌缺血和梗死面积、细胞凋亡指数和Caspase12、 Grp78蛋白表达检测。结果 假手术组未见梗死心肌和缺血心肌,IPostC组心肌缺血区面积(46.46±2.13)%和梗死区面积(41.02±2.93)%均明显小于I/R组(53.31±3.87, 52.19±3.44)%,P值均<0.01。假手术组心肌细胞凋亡指数(6.70±2.25)%明显低于I/R组(26.92±1.91)% 、IPostC组(20.54±3.05)%,P值均<0.001。心肌组织Caspase12蛋白表达水平在假手术组(0.11±0.01)明显低于I/R组(0.41±0.06)和IPostC组(0.35±0.06),并且IPostC组低于I/R组,P值均<0.01;心肌组织Grp78蛋白水平在假手术组(0.13±0.03)亦明显低于I/R组(1.04±0.16)和IPostC组(1.17±0.14),并且IPostC组高于I/R组,P值均<0.01。结论 本研究从动物实验证实IPostC能减轻心肌细胞凋亡,而ERS激活参与了大鼠MIRI过程,推测IPostC在大鼠MIRI过程中可能通过调节ERS途径抑制细胞凋亡,改善MIRI。     

腺苷介导大鼠心脏缺血后适应的保护效应

目的观察大鼠心肌缺血再灌注时NFκ-B mRNA表达和炎性细胞因子的变化及腺苷后适应对其影响,初步探讨腺苷后适应对缺血再灌注损伤心肌的保护机制。方法健康雄性SD大鼠48只随机分为4组:假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组及腺苷后适应组,每组12只,建立大鼠心肌缺血再灌注模型。光镜下观察心肌组织形态学改变;TTC染色计算各组大鼠心肌梗死面积;RT-PCR检测心肌NF-κB mRNA表达水平,ELISA测定组织中TNF-α及白细胞介素6(IL-6)含量。结果假手术组心肌组织无改变,缺血再灌注组心肌损伤较重,腺苷后适应组及缺血后处理组心肌组织病理学改变明显减轻。与缺血再灌注组比较,腺苷后适应组NF-κB mRNA的表达水平、心肌梗死面积及TNF-α与IL-6的含量明显降低(P<0.01);与缺血后处理组比较,腺苷后适应组NFκ-B mRNA表达及TNF-α、IL-6的分泌均下降(P<0.05)。NFκ-B mRNA的表达与心肌中TNF-α、IL-6浓度呈正相关(P<0.01)。结论腺苷后适应可抑制再灌注后心肌NF-κB的表达活化,从而通过促使炎性细胞因子TNFα-、IL-6分泌减少来减轻缺血再灌注损伤。     

Persistent beneficial effect of postconditioning against infarct size: role of mitochondrial K<Subscript>ATP</Subscript> channels during reperfusion

This study tested the hypothesis that inhibition of myocardial injury and modulation of mitochondrial dysfunction by postconditioning (Postcon) after 24 h of reperfusion is associated with activation of K(ATP) channels. Thirty dogs undergoing 60 min of ischemia and 24 h of reperfusion (R) were randomly divided into four groups: Control: no intervention at R; Postcon: three cycles of 30 s R alternating with 30 s re-occlusion were applied at R; 5-hydroxydecanoate (5-HD): the mitochondrial K(ATP) channel blocker was infused 5 min before Postcon; HMR1098: the sarcolemmal K(ATP) channel blocker was administered 5 min before Postcon. After 24 h of R, infarct size was smaller in Postcon relative to Control (27 +/- 4%* Vs. 39 +/- 2% of area at risk), consistent with a reduction in CK activity (66 +/- 7* Vs. 105 +/- 7 IU/g). The infarct-sparing effect of Postcon was blocked by 5-HD (48 +/- 5%(dagger)), but was not altered by HMR1098 (29 +/- 3%*), consistent with the change in CK activity (102 +/- 8(dagger) in 5-HD and 71 +/- 6* IU/g in HMR1098). In H9c2 cells exposed to 8 h hypoxia and 3 h of reoxygenation, Postcon up-regulated expression of mito-K(ATP) channel Kir6.1 protein, maintained mitochondrial membrane potential and inhibited mitochondrial permeability transition pore (mPTP) opening evidenced by preserved fluorescent TMRE and calcein staining. The protective effects were blocked by 5-HD, but not by HMR1098. These data suggest that in a clinically relevant model of ischemia-reperfusion (1) Postcon reduces infarct size and decreases CK activity after prolonged reperfusion; (2) protection by Postcon is achieved by opening mitochondrial K(ATP) channels and inhibiting mPTP opening. *P < 0.05 Vs. Control; (dagger) P < 0.05 Vs. Postcon.     

缺血后处理和三磷酸腺苷后处理对心肌缺血再灌注损伤的影响

目的观察缺血后处理(IPO)、ATP和腺苷受体激动剂CGS-21680后处理对心肌缺血再灌注损伤的影响。方法健康新西兰大白兔48只,随机分为对照组、IPO组、ATP组、CGS-21680组,每组12只。测定肌酸激酶同工酶(CK-MB)、丙二醛水平及超氧化物歧化酶(SOD)活力;计算各组兔心肌梗死面积;HE染色观察心肌组织病理形态变化;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;实时荧光定量RT-PCR检测心肌组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)mR NA和Bcl-2 mRNA的表达。结果与对照组比较,IPO组、ATP组和CGS21680组血清丙二醛、CK-MB水平及心肌梗死面积明显降低,SOD活力明显升高。IPO组、ATP组和CGS-21680组心肌细胞凋亡指数较对照组明显降低,心肌组织损伤明显减轻。IPO组、ATP组和CGS-21680组较对照组caspase-3 mRNA表达明显下调,Bcl-2 mRNA表达明显上调。结论 IPO与ATP后处理可通过激活腺苷A2a受体,减轻心肌缺血再灌注损伤,其机制可能与上调Bcl-2和下调caspase-3的表达,抑制氧自由基氧化应激损伤,减少细胞凋亡有关。     

Cytochrome P450 omega-hydroxylase inhibition reduces infarct size during reperfusion via the sarcolemmal KATP channel

Inhibition of 20-hydroxyeicosatrienoic acid (20-HETE), by pretreatment with pharmacological inhibitors of cytochrome P450 (CYP) omega-hydroxylase, has been shown to reduce infarct size in canines when administered prior to ischemia. However, it is unknown whether these agents reduce infarct size when administered just prior to reperfusion and if the sarcolemmal and/or mitochondrial K(ATP) channels (sK(ATP) and mK(ATP)) contribute to cardioprotection. Therefore, we determined whether specific CYP inhibitors for epoxygenases and omega-hydroxylases are cardioprotective when given either prior to ischemia or prior to reperfusion and furthermore, if selective inhibition of the sK(ATP) by HMR-1098 or mK(ATP) by 5-hydroxydecanoic acid (5-HD) could abrogate this effect. Male Sprague-Dawley rats underwent 30 minutes of ischemia followed by 2 hours of reperfusion. Groups received either miconazole (MIC, non-selective CYP inhibitor, 3 mg/kg), 17-octadecynoic acid (17-ODYA, CYP omega-hydroxylase inhibitor, 0,3 or 3 mg/kg), N-methylsulfonyl-12, 12-dibromododec-11-enamide (DDMS, CYP omega-hydroxylase inhibitor, 0,4 or 4 mg/kg), N-methanesulfonyl-6-(2-propargyloxyphenyl)hexanamide (MS-PPOH, CYP epoxygenase inhibitor, 3 mg/kg), or vehicle either 10 minutes prior to ischemia or 5 minutes prior to reperfusion. Rats also received either HMR-1098 (6 mg/kg) or 5-HD (10 mg/kg) 10 minutes prior to reperfusion, with subsets of rats also receiving either MIC or 17-ODYA 5 minutes prior to reperfusion. DDMS and 17-ODYA dose dependently reduced infarct size. Rats treated with MIC, 17-ODYA and DDMS, but not MS-PPOH, produced comparable reductions in infarct size when administered prior to ischemia or reperfusion compared to vehicle. HMR-1098, but not 5-HD, also blocked the infarct size reduction afforded by MIC and 17-ODYA. These data suggest a novel cardioprotective pathway involving CYP omega-hydroxylase inhibition and subsequent activation of the sK(ATP) channel during reperfusion.