槲皮素对白血病细胞杀伤作用的研究

目的:研究槲皮素对白血病细胞的杀伤作用以及诱导的凋亡研究。方法:CCK-8试剂盒检测不同浓度的槲皮素(0~100μM)对白血病K562和HL-60细胞活性的影响;Hoechst33342染色技术观察40u M槲皮素处理细胞24和48小时后细胞核形态的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;caspase8、9、3(半胱天冬酶)特异性抑制剂预处理K562细胞后,检测药物对细胞活性的影响;40u M槲皮素处理细胞24和48小时后,Western blot检测细胞中caspase家族蛋白8、9、3的表达情况。结果:0~100u M的槲皮素能够引起K562和HL-60细胞剂量依赖型的活性下降,40u M的槲皮素处理细胞24和48小时后,K562细胞核明显发生皱缩,引起凋亡,随着处理时间增长,凋亡率增加,处理24和48小时后细胞的凋亡率分别为(45.8±2.06)%和(83.6±1.89)%。caspase 9、3抑制剂预处理K562细胞后,槲皮素能够引起细胞活性的增加,而caspase 8抑制剂预处理后,槲皮素没有引起细胞活性的上升。Western blot检测结果表明40μM的槲皮素处理细胞后能够上调caspase 9、3蛋白的表达,而没有引起caspase 8蛋白表达量的上升,随着处理时间的增长,caspase 9、3的表达量更高。结论:槲皮素对白血病细胞具有很强的杀伤作用,并诱导细胞caspase 9、3蛋白参与的内源性通路介导的凋亡。     

越桔原花青素通过线粒体通路诱导胶质瘤细胞凋亡的机制研究

目的研究越桔原花青素诱导脑胶质瘤细胞凋亡的作用,探讨越桔原花青素诱导胶质瘤细胞凋亡的机制。方法培养人脑胶质瘤SHG-44细胞,四甲基偶氮唑蓝法检测越桔原花青素作用后SHG-44细胞的生长抑制率,倒置显微镜观察药物作用后细胞生长的变化;Annexin V/PI分析细胞凋亡率;细胞免疫组化法检测bax蛋白的表达;蛋白质印迹法检测bax、bcl-2和caspase 3蛋白的表达。结果 8、40和200μg·L-1越桔原花青素均明显抑制SHG-44细胞的生长,倒置显微镜下观察到细胞密度明显降低;各用药组的细胞凋亡率随着药物浓度升高而增高;各用药组细胞表达bax蛋白和caspase 3蛋白明显增加,表达bcl-2蛋白减少。结论越桔原花青素通过上调bax蛋白和下调bcl-2蛋白的表达,激活线粒体通路后促进肿瘤细胞凋亡并抑制肿瘤细胞生长。     

牛蒡子苷元对体外C6胶质瘤细胞的抑制效果和凋亡机制

目的:探讨牛蒡子苷元对体外C6胶质瘤细胞的抑制效果和凋亡机制。方法:将牛蒡子苷元作用于C6胶质瘤细胞,采用CCK-8法测定各组细胞的生长抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡情况;酶联免疫吸附试验检测TNF-α、IL-2的水平;Western blot检测Bax、Bcl-2、NF-кB蛋白表达水平。结果:与空白组比较,牛蒡子苷元组(2.5～40μmol/L)显著抑制C6胶质瘤细胞生长,诱导肿瘤细胞凋亡,其诱导效应具有浓度依赖性;牛蒡子苷元处理后,细胞中TNF-α、IL-2水平增加;牛蒡子苷元可以显著上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2、NF-кb蛋白表达。结论:牛蒡子苷元可以促进C6胶质瘤细胞凋亡,可能是通过增强TNF-α、IL-2水平及上调Bax蛋白、下调Bcl-2、NF-кB蛋白水平而诱导肿瘤细胞凋亡。     

浙江蝮蛇毒诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的体外实验研究

目的：研究浙江蝮蛇毒诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的作用及机理，方法：采用MTT法测定IC50值及生长曲线，流式细胞仪（FCM)Annexin Ⅴ FITC/PI法检测细胞凋亡发生率，PI染色法检测细胞周期，同时用流式细胞汁FCM及Western-blot检测Bcl-2蛋白表达。结果：浙江蝮蛇毒能抑制Jurkat细胞生长，且呈剂量依赖关系，并能诱导人白血病Jurkat细胞凋亡，48h时作用最强，此时Bcl-2蛋白表达下降，随后此作用减弱，低浓度作用下细胞逐渐恢复生长，结论：浙江蝮蛇毒能诱导人白血病Jurkat细胞凋亡，且呈剂量依赖关系，此作用与Bcl-2蛋白表达下调有关。     

秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡

目的探讨秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡的作用。方法 MTT法检测肺癌细胞A549的增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶caspase3、8、9的活性,免疫印迹法检测K-Ras、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达的变化。结果秦皮甲素可抑制人肺癌细胞A549的增殖,IC50值为0.4 mmol/L,并诱导凋亡;caspase3和caspase9表达增强,caspase8表达无明显改变。p-ERK1/2和K-Ras蛋白表达减弱,而ERK1/2蛋白表达无明显变化。结论秦皮甲素通过显著抑制K-Ras的表达和ERK1/2的磷酸化水平诱导人肺癌细胞A549凋亡。     

乳岩内消霜通过内源性caspase途径诱导乳腺癌前病变凋亡作用机制研究

目的: 研究乳岩内消霜诱导乳腺癌前病变细胞凋亡的作用,探寻乳岩内消霜治疗乳腺癌前病变的机制。方法: MTT法观察不同浓度乳岩内消霜透皮液对乳腺癌前MCF-10AT细胞的生长抑制作用;流式细胞术检测MCF-10AT细胞凋亡率;Western blotting检测MCF-10AT细胞中bcl-2和bax蛋白;60只雌性未孕SD大鼠,采用二甲基苯并蔥（DMBA）联合雌、孕激素诱导癌前病变模型,对乳房外用药物干预,第10周处死大鼠,进行组织病理学检测;Western blotting分别检测大鼠乳腺组织和MCF-10AT细胞cleaved caspase9、cleaved caspase3蛋白的表达。结果:MTT结果显示,乳岩内消霜对MCF-10AT细胞有生长抑制作用(P≤0.01);1%、2%和4%乳岩内消霜处理MCF-10AT细胞24h,细胞凋亡率分别为(20.8±4.1)%、(43.2±5.3)% 和(65.6±6.8)%;相对对照组,药物干预MCF-10AT细胞后bcl-2表达下降,bax表达上升（P<0.05）;大鼠乳腺组织和MCF-10AT细胞中药物干预组cleaved caspase9、cleaved caspase3表达均明显上升（P≤0.01）。结论: 乳岩内消霜有效抑制乳腺癌前病变发展,可能是通过内源性caspase途径诱导乳腺癌前病变凋亡实现的。     

七叶皂苷钠抑制人白血病Jurkat细胞增殖的机制研究

目的研究七叶皂苷钠抑制人白血病Jurkat细胞增殖的作用及其机制。方法 MTT法分析七叶皂苷钠对Jurkat细胞增殖的抑制作用,Hoechst 33258染色、FITC-Annexin V/PI双染、DNA Ladder、流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blotting法分析凋亡相关蛋白变化。结果七叶皂苷钠呈质量浓度和时间相关方式抑制Jurkat细胞增殖;经七叶皂苷钠处理后的Jurkat细胞出现凋亡的形态学特征、DNA条带,Annexin V+/PI细胞(早期凋亡细胞)显著增加;七叶皂苷钠可活化Jurkat细胞中Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3,引起PARP的切割,并减少Bcl-2蛋白的表达。结论七叶皂苷钠能有效地通过诱导细胞凋亡抑制Jurkat细胞增殖。     

从线粒体途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α致肝细胞凋亡的保护作用

目的:从线粒体途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α(TNF-α)和D-氨基半乳糖(D-GaIN)所致肝细胞凋亡的保护作用.方法:体外培养人正常肝L02细胞,用TNF-α(100 μg·L-1)和D-GaIN(44 mg·L-1)诱导肝细胞损伤模型,荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;采用细胞增殖实验(MTT)法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染色法结合高内涵细胞成像系统检测肝细胞凋亡;罗丹明123(Rh123)染色结合高内涵分析系统检测线粒体跨膜电位;Western-blot检测线粒体途径凋亡标志蛋白凋亡蛋白酶激活因子(Apaf-1)、细胞凋亡诱导因子(AIF)、胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9)表达水平的变化.结果:与正常对照组相比,TNF-α和D-GalN可明显抑制L02肝细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞线粒体跨膜电位明显下降,并使促凋亡蛋白Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达显著增加.不同浓度的凉血化瘀方作用后,与TNF-α/GalN损伤组相比,可显著减轻L02肝细胞的增殖抑制、减少细胞凋亡,抑制细胞线粒体跨膜电位的下降,并促使凋亡蛋白Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达量呈逐渐下降的趋势.结论:凉血化瘀方对TNF-α和D-GaIN所诱导的肝细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与稳定线粒体的膜电位和下调促凋亡基因Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达有关.     

冬虫夏草人工繁育品对人白血病K562细胞增殖和凋亡的影响

该文研究冬虫夏草人工繁育品对人白血病K562细胞增殖和凋亡的影响并探讨其作用机制。将K562细胞进行常规培养后,采用MTT法检测冬虫夏草人工繁育品对K562细胞存活率的影响;DAPI染核法观察冬虫夏草人工繁育品作用K562细胞后细胞核的形态变化;吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双染法观察其对K562细胞凋亡的影响;JC-1染色法检测K562细胞内线粒体膜电位的变化;流式细胞术检测K562细胞周期的变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测对K562细胞中Bax,Bcl-2,caspase 3,caspase 8,cyclin D1,CDK2和CDK4蛋白表达的影响。结果显示,冬虫夏草人工繁育品(0.345~5.524 g·L-1)能够剂量依赖性的抑制K562细胞的增殖(P0.05),显著诱导K562细胞凋亡,明显降低K562细胞的线粒体膜电位,选择性的将K562细胞阻滞在G1/S期,并且能够显著上调Bax的蛋白表达,同时明显下调Bcl-2,cyclin D1,CDK2,CDK4,caspase 3,caspase 8蛋白的表达。综上,冬虫夏草人工繁育品能够显著抑制人白血病K562细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与诱导细胞周期阻滞并调节Bcl-2/Bax的比值、激活线粒体凋亡通路相关。     

蟾酥对白血病多药耐药细胞CEM/VCR逆转作用的研究

目的研究蟾酥逆转白血病多药耐药细胞CEM/VCR的作用机制。方法光镜下观察不同浓度长春新碱(VCR)作用于CEM/VCR细胞和蟾酥处理的CEM/VCR细胞后细胞形态学变化;Western blot检测上述两组细胞P53、Bcl-XL、Bak蛋白的表达。结果光镜下见各实验组细胞体积缩小,细胞膜皱缩、破损,甚至出现细胞碎片,染色质凝聚成块,似凋亡小体等特征,细胞的这种变化蟾酥处理的实验组更为明显。Western blot结果显示,与对照组比较:各实验组能下调BclXL蛋白的表达,并随药物浓度的升高、作用时间的延长,Bcl-XL蛋白的表达呈下降趋势;各实验组能上调Bak、P53蛋白的表达,且与随药物浓度增加和作用时间的延长呈正比关系,与对照组比较有显著差异(P0.05或P0.01)。结论蟾酥逆转白血病CEM/VCR细胞多药耐药的作用机制可能与下调Bcl-XL蛋白和上调Bak蛋白的表达,使Bcl-XL/Bak的比值下降,以及上调P53蛋白的表达,促进CEM/VCR细胞凋亡有关。     

Corosolic Acid Triggers Mitochondria and Caspase‐dependent Apoptotic Cell Death in Osteosarcoma MG‐63 Cells

The response of osteosarcoma MG‐63 cells to corosolic acid treatment has been investigated. The results showed that corosolic acid significantly inhibited cell viability in both a dose and a time dependent manner. It was found that corosolic acid increased the Bax/Bcl‐2 ratio by up‐regulating Bax expression, disrupted mitochondrial membrane potential and triggered the release of cytochrome c from mitochondria into the cytoplasm. Corosolic acid treatment triggered the activation of caspase‐8, 9 and 3. The apoptosis was obviously inhibited by pretreatment with a general caspase inhibitor, z‐VAD‐FMK. Moreover, pretreatment of CsA, a cyclophilin D ligand that inhibits mitochondria potential uncoupling, prevented the activation of caspase‐9 and caspase‐3, but not caspase‐8, and the apoptosis of MG‐63 cells, triggered by corosolic acid. All these results indicated that corosolic acid‐induced apoptosis was associated with the activation of caspases via a mitochondrial pathway. Copyright © 2011 John Wiley & Sons, Ltd.     

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??OBJECTIVE To study the anti-leukemia activities and mechanisms of bergenin derivative D-23. METHODS CCK-8 method was applied to investigate anti-tumor activities of D-23. Flow cytometry and immunofluorescence assay were used to observe the effects of D-23 on the apoptosis and autophagy in K562 and Jurkat human leukemia cell lines. Western blot analysis was used to investigate the mechanisms that compound D-23 induced tumor cell apoptosis and autophagy. RESULTS Bergenin derivative D-23 could significantly inhibit the proliferation of K562 and Jurkat cells by inducing cell apoptosis and autophagy. The mitochondrial membrane potential was decreased,protein kinase B(Akt)and heat shock protein 70 (Hsp70) were inhibited,and the expressions of apoptotic related proteins caspase 3 and caspase 9 were activated. In addition, mammalian target of rapamycin (P-mTOR)(Ser 2448 and Ser 2481)protein was inhibited. CONCLUSION Bergenin derivative D-23 shows obvious anti-leukemia activities by inducing cell apoptosis and autophagy. The apoptosis may be associated with the reduction of mitochondrial membrane potential and activation of caspase pathway. The autophagy may be related to the inhibition of Akt/mTOR signaling pathway.     

马兜铃酸诱导TM3小鼠睾丸间质细胞凋亡机制

目的:探讨马兜铃酸(AAs)对TM3细胞凋亡的作用及分子机制。方法:用2.5、10、25、100、400、1000 μmol/L浓度的马兜铃酸分别对TM3细胞作用24、48、72 h后,CCK-8法测定细胞活力; 25、100、400 μmol/L的马兜铃酸对TM3细胞作用48 h后,TUNEL检测细胞凋亡率,实时荧光定量法检测Caspase通路相关基因Caspase-3、Caspase-9和Bax mRNA相对表达情况,并通过Western blot法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9和Bax蛋白表达水平变化。结果:不同浓度的马兜铃酸对小鼠睾丸间质细胞的活力有一定的抑制作用; 用25、100、400 μmol/L浓度的马兜铃酸处理TM3细胞48 h后,通过TUNEL染色发现,不同浓度的马兜铃酸能够促进细胞的凋亡,Caspase-3、Caspase-9、Bax mRNA和蛋白表达水平升高。结论:马兜铃酸通过Caspase途径促进TM3细胞的凋亡来影响生殖细胞的发育。     

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??OBJECTIVE To investigate the apoptosis of the auction and mechanism of the hepatoma BEL-7402 cells induced by the ginseng polysaccharides(GPS). METHODS The hematoma cells BEL-7402 were incubated with GPS, cell viability was measured by CCK8, cell cycle distribution was assessed by fluorescence-activated cell sorting(FACS), the cell morphological changes were traced with TUNEL and scanning electron microscope, TNFR1, BCL-2 and Bax protein expression and ERK phosphorylation are tested by Western blot. RESULTS CCK8 results showed that GPS inhibited cells growth of BEL-7402 in dose-dependent and time-dependent. Flow cytometry found that S phase arrest was increased upon GPS concentrations. Obviously apoptotic sub-g peak was also found. And the peak was gradually enhanced with the concentration increased. TUNEL staining and SEM results showed that GPS led to significant cell morphology changes in hepatoma cells BEL-7402.And the apoptosis effect was increased upon the GPS concentrations. Western blot showed that level of apoptosis related protein Bax was increased, the expression of apoptosis-antagonizing protein Bcl-2 was decreased and the expression of death receptor TNFR1 appeared with GPS concentrations increased gradually,raise ERK phosphorylation. CONCLUSION GPS can induce apoptosis of hepatoma cells BEL-7402 by the mitochondrial pathway and the death receptor dependent pathway and ERK pathway.     

灯盏细辛注射液对肿瘤坏死因子损伤大鼠心脏微血管内皮细胞炎性因子的影响

 目的 观察灯盏细辛注射液对损伤心脏微血管内皮细胞（ CMEC ）的保护作用及其对合成释放炎性介质的影响,寻找灯盏细辛注射液的作用靶点和机制,为临床应用提供实验依据。 方法 本实验采用大鼠乳鼠 CMEC 为研究对象,肿瘤坏死因子（ TNF-α ）为刺激剂,检测 CMEC 细胞活力（ MTT ）及乳酸脱氢酶（ LDH ）释放量;用双抗体夹心酶联免疫法（ ELISA ）检测损伤的 CMEC 释放白介素 6 （ IL-6 ）、单核细胞趋化蛋白 1 （ MCP-1 ）的含量;用实时定量 PCR 方法检测损伤 CMEC IL-6 、 MCP-1 mRNA 的表达。 结果 灯盏细辛注射液（ 12.5 , 25 , 50 和 100 mg × L^-1 ） 提高 TNF-α 损伤 CMEC 的细胞活力,降低 LDH 的释放,灯盏细辛注射液（ 50 和 100 mg × L^-1 ） 抑制 TNF-α 损伤 CMEC IL-6 和 MCP-1 的释放及 mRNA 的表达。 结论 灯盏细辛注射液能够抑制 TNF-α 诱导 CMEC 分泌 IL-6 、 MCP-1 的作用,降低其 mRNA 表达,减轻炎性因子对 CMEC 的损伤。灯盏细辛注射液减轻 TNF-α 对 CMEC 的损伤,抑制炎性因子的释放可能是其保护血管内皮细胞的作用机制之一。     

甘木通乙酸乙酯提取物对低糖缺氧诱导的神经细胞的保护作用

目的 研究甘木通乙酸乙酯提取物对低糖缺氧诱导神经细胞凋亡的保护作用.方法 PC12细胞结合物理缺氧方式建立缺血性中风的细胞模型,CCK-8检测细胞活性,测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出分析细胞膜完整性,流式细胞术和Hoechst 33258染色检测细胞凋亡,JC-1法测定细胞内线粒体膜电位,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达,检测SOD、MDA水平分析甘木通乙酸乙酯提取物的抗氧化能力.结果 与模型组比较,甘木通乙酸乙酯提取物可以有效提高缺氧PC12细胞的存活率(P<0.01),降低LDH漏出量(P<0.01),提高线粒体膜电位,增加细胞内SOD水平,降低MDA水平,增加Bcl-2蛋白表达,减少Bax,cleaved caspase-3蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),降低细胞凋亡率.结论 甘木通乙酸乙酯提取物可抑制低糖缺氧诱导PC12细胞凋亡,该神经保护作用可能与细胞的线粒体凋亡途径有关.     

去氢骆驼蓬碱诱导急性白血病Jurkat细胞凋亡及其机制

目的本研究旨在研究去氢骆驼蓬碱体外诱导Jurkat细胞凋亡及其可能机制。方法采用MTT法测定去氢骆驼蓬碱对Jurkat细胞的生长抑制作用;用光学显微镜检、琼脂糖凝胶电泳检测去氢骆驼蓬碱诱导Jurkat细胞凋亡;应用蛋白印迹法检测去氢骆驼蓬碱诱导Jurkat细胞凋亡过程中bcl-2与ICAD的表达变化情况。结果去氢骆驼蓬碱对Jurkat细胞有明显的生长抑制作用,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;bcl-2与ICAD在Jurkat细胞中均有表达,且随药物浓度的增高表达量逐渐降低。结论去氢骆驼蓬碱可诱导Jurkat细胞凋亡,bcl-2与ICAD在去氢骆驼蓬碱诱导Jurkat细胞凋亡的信号传导途径中可能是重要的调控因子。     

Liquiritigenin induces mitochondria‐mediated apoptosis via cytochrome c release and caspases activation in heLa Cells

It has been demonstrated that many flavonoids possess a potent and broad spectrum of antitumor activity. Liquiritigenin is a flavanone extracted from Glycyrrhizae. This study investigated the effects of liquiritigenin on cell viability and apoptosis induction in human cervical carcinoma (HeLa) cells. The results show that liquiritigenin significantly suppressed cell proliferation in a dose‐ and time‐dependent manner in HeLa cells. In addition, liquiritigenin promoted apoptosis in HeLa cells, evidenced by apoptotic morphological changes and Annexin‐V binding. The apoptosis induction with liquiritigenin is associated with the up‐regulation of p53 and Bax, along with down‐regulation of Bcl‐2 and survivin. Finally, examination of the mitochondrial pathway of apoptosis revealed that cytochrome c is released from mitochondria to cytosol, associated with the activation of caspase‐9 and ‐3, and the cleavage of poly (ADP‐ribose) polymerase (PARP). Overall, the results indicate that liquiritigenin induces apoptosis in part via the mitochondrial pathway, which is associated with p53 up‐regulation, release of cytochrome c and elevated activity of caspase‐9 and ‐3 in HeLa cells. Copyright © 2010 John Wiley & Sons, Ltd.     

油茶皂苷通过内质网应激途径诱导Jurkat细胞凋亡的研究

目的探讨油茶皂苷在体外诱导人白血病细胞Jurkat凋亡的作用及作用机制。方法将1～4μg/mL的油茶皂苷作用于人白血病Jurkat细胞,应用细胞计数考察油茶皂苷对细胞增殖的影响;用Western blot方法分析油茶皂苷对caspase-3、PARP、Bipc、hop、Perk、ATF6和IRE1蛋白表达的影响。结果油茶皂苷(1～4μg/mL)对Jurkat细胞的增殖产生明显的剂量依赖性抑制作用。免疫印迹结果显示,油茶皂苷可以使caspase-3激活,增加Cleaved PARP的表达量,而诱导Jurkat细胞发生凋亡;其作用机制是通过下调Bip和chop的表达,触发Perk、ATF6和IRE1 3个内质网应激跨膜蛋白而产生细胞凋亡的。结论 1～4μg/mL油茶皂苷具有抑制人白血病细胞增殖和诱导其凋亡的作用,其作用机制参与了细胞凋亡的内质网应激途径。