阿霉素联合雌二醇诱导慢性肾脏病肾阳虚证大鼠模型的建立与评价及真武汤干预作用研究＊

目的 探索慢性肾脏病肾阳虚证动物模型的建立与评价标准及真武汤干预作用的研究。方法 49只雄性SD大鼠，进行适应性喂养，为期2周。随机分为正常组10只和模型组39只。模型组大鼠分别于第3周、第4周尾静脉注射阿霉素3 mg·kg^-1、4 mg·kg^-1，建立慢性肾脏病动物模型。将成模大鼠随机分为阿霉素组13只、雌二醇组13只、真武汤组13只，第13周起，雌二醇组、真武汤组腹腔注射雌二醇玉米油稀释液（4 mg·kg^-1）构建慢性肾脏病肾阳虚证病证结合动物模型，真武汤组同时按照5.39 g·kg^-1·d^-1进行灌胃给药。观察大鼠一般情况；每周称取大鼠体质量，每4周检测大鼠24h尿蛋白定量；使用红外测温枪检测大鼠体温变化，采用游泳耐力实验检测大鼠游泳时间；第24周，股动脉取血并处死大鼠，将大鼠肾脏、脾脏、睾丸称重并计算脏器指数；采用HE和Masson染色观察大鼠肾组织的病理变化情况；分离血清后用比色法检测Scr、UA、BUN、TP、ALB、TC、TG、SOD，用酶联免疫法检测CORT、FSH、LH、T、E2、T3、T4、TSH。结果 与正常组比较，雌二醇组大鼠出现毛发无光泽、弓背蜷缩、消瘦、活动减少、精神萎靡，真武汤组大鼠肾阳虚症状好转。真武汤较雌二醇组体重、睾丸指数明显升高（P < 0.05，P < 0.01），肾脏指数显著下降（P < 0.01）。真武汤组较雌二醇组大鼠的24 h尿蛋白定量明显下降（P < 0.05，P < 0.01）。真武汤较雌二醇组体温、游泳时间明显升高（P < 0.05，P < 0.01）。肾组织HE、Masson染色结果显示，阿霉素组、雌二醇组大鼠肾小球系膜区增宽，系膜细胞增生，肾小管上皮细胞空泡样变，肾间质有炎性细胞浸润，系膜区有大量胶原纤维沉积；真武汤组病理损伤情况有所改善。血清指标显示：真武汤较雌二醇组Scr、BUN、TC明显下降（P < 0.05，P < 0.01）。从性腺轴指标来看，真武汤组较雌二醇FSH、LH、E2有降低趋势，T有升高趋势。从肾上腺轴指标来看，真武汤组较雌二醇组CORT差异不明显。从甲状腺轴指标来看，真武汤组较雌二醇组T4显著降低（P < 0.01）。真武汤组较雌二醇组SOD有升高趋势。结论 阿霉素联合腹腔注射雌二醇能够成功制备慢性肾脏病肾阳虚证动物模型。该大鼠模型主要模拟了慢性肾脏病下丘脑-垂体-性腺轴功能低下的肾阳虚证动物模型。真武汤可改善模型组大鼠的肾阳虚症状与性腺轴的抑制状态。     

慢性肾脏病肾阳虚证“病证结合”大鼠模型的对比研究＊

目的 通过动物实验，在诱导大鼠慢性肾脏病基础上分别施加不同复合因素，比较研究不同“病证结合”模型特点及筛选构建与评价最优慢性肾脏病肾阳虚证“病证结合”大鼠模型。方法 将106只SPF级雄性SD大鼠适应性喂养2周，随机分为正常组10只、模型组96只，模型组大鼠分别于第3周、第4周尾静脉注射阿霉素3 mg·kg^-1、4 mg·kg^-1，建立慢性肾脏病动物模型，将成模大鼠随机分为阿霉素组、羟基脲组（300 mg·kg^-1灌胃）、氢化可的松组（10 mg·kg^-1肌肉注射）、雌二醇组（4 mg·kg^-1腹腔注射）、甲硫咪唑组（2 mL·kg^-1灌胃）、氨鲁米特组（20 g·L^-1灌胃），每组各16只，再施加复合因素，建立慢性肾脏病肾阳虚证“病证结合”动物模型。记录大鼠一般状态、体质量、体温和游泳耐力；检测大鼠24 h尿蛋白；造模24周后，股动脉取血并处死大鼠，测量大鼠肾脏、脾脏、睾丸、肾上腺和甲状腺的脏器指数；采用HE和Masson染色法，观察大鼠肾脏病理变化；用比色法检测大鼠Scr、UA、BUN、TP、ALB、TC、TG的含量，用酶联免疫法检测大鼠FSH、LH、T、E2、T3、T4、TSH、SOD、CORT的含量。结果 与正常组比较，慢性肾脏病肾阳虚证各模型组大鼠一般情况均较差，出现不同程度的毛发干枯、弓背蜷缩、消瘦、精神萎靡等，其中氢化可的松组大鼠症状最为严重；各模型组游泳耐力减弱，尾根部温降低，24 h尿蛋白明显增加，部分大鼠出现腹水症状，其中，甲硫咪唑组大鼠体温最低，氢化可的松组大鼠游泳耐力最低；各模型组大鼠的甲状腺、睾丸和肾上腺指数降低，而肾脏指数不同程度的升高（P < 0.01），其中氢化可的松组大鼠脾脏指数明显上升（P < 0.01）；HE、Masson染色结果显示，各模型组大鼠出现肾小管上皮细胞疏松变、空泡变，肾小管扩张，肾小球纤维化、球囊壁增厚，肾间质出现淋巴细胞浸润。与正常组相比，各模型大鼠出现不同程度的Scr、UA、BUN、TC、TG的升高，而TP和ALB不同程度降低，其中，氢化可的松组大鼠TP和ALB明显降低（P < 0.05，P < 0.01）；各模型组的CORT均明显升高，内源性T3、T4、FSH、LH、T、E2和SOD不同程度的降低（P < 0.05，P < 0.01）；而TSH不同程度的升高（P < 0.01），其中，雌二醇组大鼠T最低，甲硫咪唑组大鼠SOD最低。结论 本实验中5种慢性肾脏病肾阳虚证大鼠均出现下丘脑-垂体-靶腺轴的紊乱，但在“性腺轴”“甲状腺轴”“肾上腺轴”上各有特点，其中氢化可的松组大鼠模型符合人类慢性肾脏病肾阳虚证证候特点和“肾阳虚三轴”改变，是理想的慢性肾脏病肾阳虚证“病证结合”模型，是中西医结合范式研究的有益尝试。     

阿霉素联合他巴唑诱导慢性肾脏病肾阳虚证大鼠模型的建立与评价及真武汤干预作用的研究＊

目的 探讨阿霉素联合他巴唑诱导慢性肾脏病肾阳虚证大鼠模型的建立方法与评价及真武汤干预作用的研究。方法 SPF级体质量200-220 g的SD雄性大鼠52只，适应性喂养2周，随机分为正常组10只、模型组42只，模型组大鼠第3周、第4周分别按照3 mg·kg^-1、4mg·kg^-1体重尾静脉注射阿霉素进行慢性肾脏病大鼠模型造模。模型成功大鼠按体质量与尿蛋白进行分层随机，分为阿霉素组14只、他巴唑组14只、真武汤组14只，第13周起真武汤组按照5.39 g/kg/天进行干预。观察大鼠一般情况，每周称取大鼠体质量，每4周检测大鼠24 h尿蛋白定量、采用红外测温枪检测大鼠体温，采用大鼠游泳实验检测游泳时间。24周后股动脉取血并处死大鼠，称取大鼠肾脏、脾脏、睾丸重量并计算脏器指数，采用HE染色、Masson染色观察各组大鼠肾组织病理情况。采用比色法检测血清Scr、BUN、UA、TC、TG、TP、ALB、SOD的水平；采用酶联免疫吸附法检测血清T3、T4、TSH、FSH、LH、T、E2、CORT的水平。结果 与正常组比较，他巴唑组大鼠出现毛发枯槁、弓背、懒动、蜷缩、喜扎堆、肛周污秽、体型较为瘦弱、行动迟缓等典型肾阳虚体征，真武汤组较他巴唑组一般情况有所好转，肾阳虚体征减轻，体重显著升高（P < 0.01），肾脏指数、24 h尿蛋白定量明显下降（P < 0.01），体温、游泳时间增加；肾脏组织HE、Masson染色结果显示，阿霉素组、他巴唑组肾小球系膜区增宽，系膜细胞增生，系膜区有大量胶原纤维沉积，肾小管扩张或萎缩，存在蛋白管型，肾间质有大量炎性细胞浸润，阿霉素组球囊壁粘连明显，真武汤组病理变化有所改善；血清指标显示，与他巴唑组相比，真武汤组Scr、UA、BUN、TC、TG有降低趋势，ALB含量升高（P < 0.05）；甲状腺轴指标T3有升高趋势，T4显著升高（P < 0.01），TSH显著降低（P < 0.01）；真武汤组性腺轴指标FSH、LH、E2显著升高（P < 0.01），T无差异；肾上腺轴指标CORT各组之间无统计学差异；真武汤组SOD显著升高（P < 0.01）。结论 阿霉素联合他巴唑可以成功建立慢性肾脏病肾阳虚证动物模型，真武汤干预作用也证明了该病证结合模型的成功建立，该模型主要模拟了慢性肾脏病下丘脑-垂体-甲状腺轴功能低下的肾阳虚证动物模型。     

冠心病急性心肌梗死气阴两虚证动物模型的构建与评价

目的 探索睡眠剥夺（SD）复合异丙肾上腺素（ISO）建立冠心病急性心肌梗死气阴两虚证大鼠模型的构建和评价方法。方法 将40只SD大鼠分为正常组、SD组、ISO组、SD+ISO组。正常组不予处理，SD组使用改良多平台水环境法连续睡眠剥夺96 h，ISO组皮下注射ISO 100 mg·kg^-1，隔日1次，共2次。SD+ISO组在连续睡眠剥夺72、96 h时注射ISO 100 mg·kg^-1。采用小动物超声心动图检测大鼠心功能；生化分析法检测血清肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）、心肌肌钙蛋白T（cTnT）水平；苏木素-伊红（HE）染色观察心肌组织病理变化；通过一般状态及体质量、抓力、体温、旷场实验、血清环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）及cAMP/cGMP、舌象红（R）、绿（G）、蓝（B）值及脉搏幅度观察气阴两虚证的证候指标变化；酶联免疫吸附测定法（EILSA）检测大鼠血清白细胞介素-18（IL-18）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、氧化应激超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）、促肾上腺皮质激素（ACTH）、三碘甲状腺原氨酸（T3）、四碘甲状腺原氨酸（T4）及白细胞分化抗原4（CD4）、白细胞分化抗原8（CD8）水平。结果 疾病指标方面，与正常组比较，ISO组和SD+ISO组心功能降低（P<0.01），各模型组心肌酶升高（P<0.01），ISO组和SD+ISO组心肌组织病理损伤明显。证候指标方面，与正常组比较，SD组和SD+ISO组的各时间点体质量下降（P<0.01）、ISO组48、72 h体质量下降（P<0.05，P<0.01），各模型组抓力减弱，舌面R、G、B值降低（P<0.01），SD组爪温、肛温升高（P<0.01），各模型组不动时间延长（P<0.01），总路程和进入中心区次数下降（P<0.01），平均速度减缓（P<0.05，P<0.01）；cAMP、cGMP升高（P<0.05，P<0.01），SD+ISO组cAMP/cGMP增加（P<0.01），SD组和SD+ISO组脉搏幅度降低（P<0.01）。血清学指标方面，与正常组比较，ISO组和SD+ISO组IL-18、TNF-α、SOD、MDA升高（P<0.01）；各模型组的CRF、ACTH、CORT、T3、T4、CD4、CD8升高（P<0.05，P<0.01）。结论 连续睡眠剥夺96 h复合大剂量ISO能够成功建立冠心病急性心肌梗死气阴两虚证大鼠模型，以西医疾病指标、组织病理形态学、中医宏观指标及血清学指标为模型评价体系。     

益肾生精方治疗少弱精子症的药效评价及作用机制

目的 采用环磷酰胺致大鼠少弱精子症模型，研究益肾生精方对少弱精子症的治疗作用及作用机制。方法 随机选取8只SD雄性大鼠为正常组，其余大鼠连续5 d腹腔注射环磷酰胺（35 mg·kg^-1·d^-1）制备大鼠少弱精子症模型，而后随机分为模型组、益肾生精方低、中、高剂量组（2.91、5.83、11.66 g·kg^-1），五子衍宗丸组（1.03 g·kg^-1），左卡尼汀组（0.17 g·kg^-1），每组8只。药物干预28 d后，记录大鼠体质量、睾丸质量和指数；采用计算机辅助精子分析（CASA）系统检测附睾中精子质量；苏木素-伊红（HE）染色观察睾丸组织形态；比色法检测睾丸组织中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、睾酮（T）的水平；原位末端标志法（TUNEL）检测睾丸组织中细胞的凋亡情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测睾丸组织中B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活化的胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠体质量、睾丸质量和指数、精子浓度和活力显著降低（P<0.01），睾丸病理评分显著升高（P<0.01）；与模型组比较，益肾生精方中、高剂量组、五子衍宗丸组和左卡尼汀组可提高体质量、睾丸质量和指数，并提高精子浓度和活力；降低睾丸病理评分。氧化应激水平检测结果显示，与正常组比较，模型组大鼠睾丸组织中SOD水平显著降低（P<0.01），MDA水平显著升高（P<0.01）；与模型组比较，益肾生精方高剂量组、五子衍宗丸组和左卡尼汀组可以明显提高SOD活性，降低MDA水平（P<0.05，P<0.01）。血清激素水平检测结果显示，与正常组比较，模型组T水平显著降低（P<0.01），FSH和LH水平显著升高（P<0.01）；与模型组比较，益肾生精方组、五子衍宗丸组和左卡尼汀组可以显著提高T水平（P<0.01），降低LH水平（P<0.05，P<0.01）。TUNEL结果显示，与正常组比较，模型组生精细胞凋亡率显著增加（P<0.01）；与模型组比较，益肾生精方中剂量组、五子衍宗丸组和左卡尼汀组可显著降低凋亡率（P<0.01）。Western blot结果显示，与正常组比较，模型组Bcl-2蛋白水平明显降低（P<0.05）、Bax和cleaved Caspase-3蛋白水平明显升高（P<0.05，P<0.01）；益肾生精方高剂量组、五子衍宗丸组和左卡尼汀组可以明显升高Bcl-2蛋白水平，降低cleaved Caspase-3蛋白水平（P<0.05，P<0.01）。结论 益肾生精方可改善少弱精子症模型大鼠的精子质量，其机制可能与抗氧化、调节性激素水平以及抑制生精细胞凋亡等多个途径有关。     

四逆散对抑郁大鼠BDNF/TrkB，5-HT/5-HT1AR及HPA轴的影响

目的 观察四逆散对抑郁大鼠脑神经营养因子（BDNF）/酪氨酸激酶受体B（TrkB），5-羟色胺（5-HT）/5-HT1A受体（5-HT1AR）及下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴的影响，探讨四逆散基于BDNF/TrKB，5-HT/5-HT1AR及HPA轴的抗抑郁作用机制。方法 120只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、四逆散低、中、高剂量组和氟西汀组，每组20只。除正常组外，其余5组连续21 d采用孤养结合慢性温和不可预知性刺激法（CUMS）制备抑郁大鼠模型。四逆散低、中、高剂量组分别灌胃（ig）四逆散（1.25，2.5，5）g·kg^-1，氟西汀组ig盐酸氟西汀0.01 g·kg^-1，正常组和模型组ig等体积生理盐水，每日1次，持续干预21 d。干预期间，各造模组大鼠均继续给予刺激。通过糖水偏好和旷场实验评估CUMS模型大鼠抑郁状态；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血浆促肾上腺皮质激素释放激素（CRH），促肾上腺皮质激素（ACTH），皮质酮（CORT）及海马匀浆中BDNF，5-HT水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测海马TrKB，5-HT1AR，糖皮质激素受体（GR）和盐皮质激素受体（MR）mRNA表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马TrKB，5-HT1AR，GR，MR蛋白表达水平；苏木素-伊红（HE）染色观察海马组织形态学变化。结果 与正常组比较，模型组大鼠糖水偏好率显著下降（P<0.01），旷场实验中水平得分和垂直得分显著降低（P<0.01），血浆CRH，ACTH，CORT含量显著升高（P<0.01），海马BDNF，5-HT含量显著降低（P<0.01），海马TrKB，5-HT1AR和GR mRNA及蛋白表达水平显著降低（P<0.01），MR mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.01），HE染色结果显示海马神经元结构损伤。与模型组比较，四逆散低、中、高剂量组和氟西汀组糖水偏好率显著升高（P<0.01），旷场实验中水平得分和垂直得分明显升高（P<0.05，P<0.01），血浆CRH，ACTH，CORT含量明显降低（P<0.05，P<0.01），海马BDNF，5-HT含量明显升高（P<0.05，P<0.01），海马TrKB，5-HT1AR和GR mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.05，P<0.01），MR mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01），HE染色结果显示海马神经元结构明显复原。结论 四逆散具有显著的抗抑郁作用，其机制可能与升高大鼠海马BDNF，5-HT含量，上调TrKB，5-HT1AR和GR mRNA及蛋白表达水平，下调MR mRNA及蛋白表达水平，抑制HPA轴亢进，增强海马组织神经元的再生和修复相关。     

基于IL-6/MMP-9/COL-Ⅳ信号通路探讨加味真武汤对慢性肾功能衰竭大鼠肾间质纤维化的影响

目的 观察加味真武汤对慢性肾衰竭（CRF）大鼠白细胞介素-6（IL-6）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、Ⅳ型胶原蛋白（COL-Ⅳ）的调控作用,探究其治疗CRF的潜在机制。方法 将50只雄性SD大鼠随机分为造模组40只和正常组10只,造模组大鼠连续腺嘌呤灌胃12周制备CRF模型。造模成功后将造模组按随机数字表法分为模型组、加味真武汤低剂量（7.2 g·kg^-1·d^-1）组、加味真武汤中剂量（14.4 g·kg^-1·d^-1）组、加味真武汤高剂量（28.8 g·kg^-1·d^-1）组、盐酸贝那普利（10 mg·kg^-1·d^-1）组进行灌胃,正常组、模型组予等体积蒸馏水灌胃,持续干预4周。给药期间,定期检测各组大鼠体质量;给药结束后,检测大鼠血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、24 h尿蛋白定量（24 h-UTP）水平;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清IL-6水平;分别采用苏木素-伊红（HE）、马松（Masson）染色观察肾组织病理形态学变化;免疫组化法（IHC）检测大鼠肾脏细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、IL-6、MMP-9、COL-Ⅳ蛋白表达结果;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠肾组织ICAM-1 mRNA、IL-6 mRNA、MMP-9 mRNA、COL-Ⅳ mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肾组织ICAM-1、IL-6、MMP-9、COL-Ⅳ蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠SCr、BUN、24 h-UTP水平显著升高（P<0.01）;血清IL-6含量显著上升（P<0.01）;大鼠肾小管管腔扩张伴萎缩,小管上皮细胞坏死、肿胀、空泡变性,间质内大量炎症细胞浸润,胶原纤维沉积;肾小管间质内IL-6、ICAM-1、COL-Ⅳ呈强阳性表达,MMP-9表达减弱;模型组大鼠ICAM-1 mRNA、IL-6 mRNA、COL-Ⅳ mRNA水平显著升高（P<0.01）,MMP-9 mRNA水平显著降低（P<0.05）;肾组织ICAM-1、IL-6、COL-Ⅳ蛋白表达显著升高（P<0.01）,MMP-9蛋白表达显著降低（P<0.01）。与模型组比较,经加味真武汤治疗后,大鼠24 h-UTP、SCr、BUN水平均有大幅降低（P<0.01）;血清IL-6含量显著下降（P<0.01）;大鼠肾脏病损明显改善,胶原纤维沉积减少;IL-6、ICAM-1、COL-Ⅳ在肾小管、间质内表达减弱,MMP-9在肾小管间质内表达增强;大鼠ICAM-1 mRNA、IL-6 mRNA、COL-Ⅳ mRNA水平显著降低（P<0.01）,MMP-9 mRNA水平明显升高（P<0.05）;肾脏内ICAM-1、IL-6、COL-Ⅳ蛋白表达显著下降（P<0.01）,MMP-9蛋白表达显著上升（P<0.01）。结论 加味真武汤可能通过调控IL-6/MMP-9/COL-Ⅳ信号通路,进而减轻蛋白尿,改善肾功能,减轻肾脏病理损害,延缓CRF肾间质纤维化进展。     

基于VIP/cAMP/PKA/AQPs信号通路研究肺肠合治法减轻肺水肿治疗急性肺损伤的作用机制

目的 探究肺肠合治法（麻黄汤+大承气汤）减轻脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）大鼠肺水肿的作用和机制。方法 Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、肺肠合治低、中、高剂量组、地塞米松组。采用LPS（10 mg·kg^-1）腹腔注射复制ALI大鼠模型，造模后开始灌胃给药，正常组给予生理盐水（25 mL·kg^-1），肺肠合治低（5 g·kg^-1）、中（7.5 g·kg^-1）、高（10 g·kg^-1）剂量组分别给予（麻黄汤+大承气汤）灌胃，阳性药组给予地塞米松（5 mg·kg^-1），分别于LPS注射后0、8、16 h给药，共3次。给药结束后取肺组织及血清，肺组织苏木素-伊红（HE）染色，进行肺水肿评分；计算各组大鼠肺组织干/湿（D/W）质量比；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清血管活性肠肽（VIP）含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠肺组织水通道蛋白1（AQP1）、水通道蛋白5（AQP5）、VIP、环磷酸腺苷（cAMP）、磷酸化蛋白激酶A（p-PKA）、蛋白激酶A（PKA）蛋白的表达量；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组大鼠肺组织中VIP mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠肺损伤明显，水肿评分升高，肺组织D/W降低（P<0.01），肺组织AQP1、AQP5、cAMP、p-PKA/PKA明显降低（P<0.05，P<0.01），VIP含量显著升高（P<0.01），肺组织VIP蛋白和mRNA表达明显升高（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，肺肠合治组大鼠肺损伤减轻，肺组织D/W显著升高（P<0.01），肺组织AQP1、AQP5、VIP、cAMP、p-PKA/PKA升高（P<0.05，P<0.01），肺组织VIP表达升高（P<0.05，P<0.01）。结论 肺肠合治法能减轻急性肺损伤造成的肺组织水肿，其机制可能通过激活VIP/cAMP/PKA信号通路，进而促进水通道蛋白AQP1、AQP5的表达，增强肺组织的水液代谢有关。     

牡丹花总黄酮对高尿酸血症大鼠降尿酸作用

目的 探究牡丹花总黄酮对高尿酸血症大鼠的药效学作用，为高尿酸血症治疗药物的研究开发提供科研数据支撑。方法 使用腺嘌呤合并乙胺丁醇复制大鼠高尿酸血症模型，大鼠随机分为正常组、模型组、别嘌醇组（42 mg·kg^-1）、痛风舒片组（600 mg·kg^-1）、牡丹花总黄酮高、中、低剂量组（TFPF 260、130、65 mg·kg^-1）。记录观察大鼠状态，每5 d记录一次大鼠体质量；测定末次给药24 h大鼠尿量、饮水量、尿液中尿酸（UA）、尿蛋白水平；计算大鼠肾脏指数；苏木素-伊红（HE）染色法观察大鼠胸腺、脾脏组织；测定大鼠血清中尿酸（UA）、肌酐（Cr）、血尿素氮（BUN）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）活力、总抗氧化能力（T-AOC）活力；测定大鼠肝脏中黄嘌呤氧化酶（XOD）、腺苷脱氨酶（ADA）活性；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠肾脏中尿酸转运体1（URAT1）、阴离子转运蛋白1（OAT1）、葡萄糖转运蛋白9（GLUT9）含量。结果 与模型组比较，牡丹花总黄酮可改善大鼠精神状态，增加大鼠体质量（P<0.01）、促进大鼠尿液尿酸排泄（P<0.01），降低尿蛋白量（P<0.05）；降低大鼠24 h尿量、饮水量、肾脏脏器指数（P<0.05）、血清中UA、Cr、BUN、MDA含量（P<0.05，P<0.01）；抑制肝脏中XOD（P<0.05）、ADA活性（P<0.05，P<0.01）；减少肾匀浆GLUT9表达量（P<0.05）；提高血清SOD和T-AOC活性及肾脏中OAT1表达量（P<0.01）；改善大鼠胸腺和脾脏病理变化。结论 牡丹花总黄酮对高尿酸血症大鼠肾脏具有一定的保护作用，其作用与促进尿酸排泄，抑制氧化反应，抑制尿酸合成关键酶活性，调节尿酸转运蛋白表达有关。     

基于内质网应激探讨扶正解毒方联合5-Fu对胃癌荷瘤小鼠术后复发及转移的影响

目的 研究扶正解毒方联合5-氟尿嘧啶（5-Fu）对胃癌荷瘤小鼠术后复发转移的抑制作用，并通过肿瘤微环境中CD4⁺ T细胞，CD8⁺ T细胞，调节性T（Treg）细胞含量的改变，内质网应激途径及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路，探讨其可能的分子机制。方法 40只615小鼠随机分为模型组，扶正解毒方（25 g·kg^-1）组，5-Fu（25 mg·kg^-1）组，联合组（扶正解毒方25 g·kg^-1+5-Fu 25 mg·kg^-1），每组各10只，将小鼠前胃癌细胞（MFC细胞）接种于左后肢内侧爪垫下，通过手术切除移植瘤建立术后复发模型。苏木素-伊红（HE）染色法观察术后复发胃癌荷瘤小鼠肺转移病理形态的改变；流式细胞术检测复发瘤中CD4⁺/CD8⁺ T值及脾脏中Treg细胞［CD4⁺，CD25⁺，叉头框蛋白P3（FOXP3）⁺细胞］的含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）及免疫组化法（IHC）检测内质网应激相关蛋白［葡萄糖调节蛋白78（GRP78），肌醇需求酶1α（IRE1α），激活转录因子6（ATF6），蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）］含量，以及PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达。结果 与模型组比较，联合组复发抑制率明显升高（P<0.05）；各治疗组复发瘤重均明显降低（P<0.05）；各治疗组肺转移数均降低，转移率均有所降低，联合组肺转移总数最少，转移率最低，但差异无统计学意义；扶正解毒方组、联合组CD4⁺/CD8⁺ T值明显升高（P<0.05），Treg细胞含量明显降低（P<0.05）；5-Fu组Treg细胞含量明显升高（P<0.05）。IHC结果显示，与模型组比较，各治疗组ATF6蛋白表达明显下降（P<0.05，P<0.01），IRE1α表达明显下降（P<0.05），Akt表达显著下降（P<0.01）；5-Fu组及联合组mTOR表达明显下降（P<0.05）。Western blot结果显示，与模型组比较5-Fu组GRP78表达明显下降（P<0.05），5-Fu组及联合组PI3K，磷酸化Akt（p-Akt），mTOR表达明显下降（P<0.05）。结论 扶正解毒方联合5-Fu可以抑制荷瘤小鼠术后复发转移，机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR的信号通路，下调内质网应激，改善肿瘤免疫抑制微环境有关。     

胶艾汤与四物汤对血虚模型大鼠补血功效的比较研究

目的比较胶艾汤和四物汤对血虚模型大鼠外周血象、免疫器官指数和红细胞膜能量代谢酶活力的影响,探讨胶艾汤衍化为四物汤后补血功效变化的机制。方法每天于大鼠眼底静脉丛放血5 m L/kg,连续放血12 d,复制大鼠血虚模型;同时造模大鼠分别ig给予不同剂量的胶艾汤、四物汤、胶三汤及胶四汤,复方阿胶浆为阳性对照,各组均给药12 d;检测各组大鼠红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、血小板(PLT)、免疫器官指数、红细胞膜Ca2+,Mg2+-ATP和Na+,K+-ATP酶活力。结果与对照组比较,模型组大鼠RBC、HGB、HCT、PLT明显降低(P0.01),红细胞膜Ca2+,Mg2+-ATP酶和Na+,K+-ATP酶活力明显降低(P0.05、0.01),脾脏和胸腺指数明显降低(P0.05)。与模型组比较,胶艾汤高、中剂量组可明显升高大鼠RBC、PLT、HCT、HGB(P0.05、0.01),升高脾脏和胸腺指数(P0.05、0.01),增强Ca2+,Mg2+-ATP酶和Na+,K+-ATP酶活力(P0.05、0.01);四物汤组可明显升高大鼠RBC、HCT、PLT(P0.05),升高脾脏和胸腺指数(P0.05、0.01),增强Ca2+,Mg2+-ATP酶活力(P0.05)。四物汤组对RBC和Na+,K+-ATP酶活力改善作用明显弱于胶艾汤中剂量组。结论胶艾汤和四物汤均具有不同程度的补血作用,胶艾汤衍化为四物汤后补血作用具有减弱的趋势。     

“劳倦过度、房室不节”肾阳虚模型小鼠睾丸乳酸脱氢酶-X活性的测定

[目的]观察"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠睾丸乳酸脱氢酶(LDH)总活性及精子特异酶LDH-X活性的改变.[方法]睾丸匀浆用2,4-二硝基苯肼显色法测定丙酮酸的生成量[1],计算每克睾丸湿组织LDH总活性和LDH-X同工酶活性.[结果]"劳倦过度、房室不节"肾阳虚造型组LDH总活性显著低于正常对照组(P＜0.05.P＜0.01),金匮肾气丸治疗组较"劳倦过度、房室不节"肾阳虚造型组则显著升高(P＜0.05,P＜0.01);LDH-X活性造型组第2周较对照组有下降的趋势,但无统计学意义,第4、第6周下降显著(P＜0.01);治疗组较造型组第2周有升高趋势,但无统计学意义,第4、第6周则显著升高(P＜0.01).[结论]从精子特异酶LDH-X活性改变,证明了"肾主生殖"有现代科学依据,该模型系肾阳虚模型.     

覆盆子有效部位改善肾阳虚型痴呆大鼠 学习记忆作用机制研究

目的: 考察覆盆子有效部位对D-半乳糖联合氢化可的松造成肾阳虚型痴呆大鼠的影响,初步阐明覆盆子有效部位改善肾阳虚型痴呆大鼠学习记忆的作用机制。方法: 大鼠ip D-半乳糖125 mg·kg^-1,连续6周,后2周im 氢化可的松混悬液25 mg·kg^-1,造成肾阳虚痴呆模型,空白组和模型组灌胃生理盐水,其余各组每天均预防性灌胃覆盆子氯仿部位或乙酸乙酯部位高、低剂量(均按生药量计为24,12 g·kg^-1),连续4周。进行历时5 d的Morris水迷宫实验后,取大鼠皮层进行乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase, AchE)和胆碱乙酰化转移酶(choline acyltransferase, ChAT)活性检测、取海马CA1区进行HE染色和tau蛋白免疫组织化学检测。结果: 与空白组相比,模型组学习记忆能力下降,皮层AchE活性显著升高,ChAT活性显著降低,海马CA1区Pser404-tau阳性细胞明显增加;与模型组比较,覆盆子氯仿部位高、低剂量组、覆盆子乙酸乙酯部位高、低剂量组均能不同程度改善痴呆大鼠学习记忆能力,降低皮层AchE活性,升高ChAT活性;增加海马CA1区细胞总数,减少坏死细胞数,降低细胞坏死率;减少海马CA1区Pser404-tau阳性细胞数。结论: 覆盆子有效部位可能通过降低AchE活性,升高ChAT活性,保护海马CA1区神经元,减少tau蛋白表达而起到改善肾阳虚型痴呆大鼠学习记忆。     

毓宫胶囊对肾阳虚型子宫发育不良大鼠IL2-IFN-NKC免疫调节网影响的研究

【目的】观察毓官胶囊对肾阳虚型子宫发育不良大鼠IL2（自介素-2）-IFN（干扰素）-NKC（自然杀伤细胞）免疫调节网的影响，探讨其治疗子宫发育不良的机制。【方法】通过对幼龄SD雌鼠40只随机分为4组：正常对照组（A组）、模型组（B组）、右归丸组（C组）、毓宫胶囊组（D组），肌注地塞米松复合双侧卵巢切除建立肾阳虚型子宫发育不良模型，对模型动物用毓宫胶囊治疗，右归丸做对照，治疗18d后处死，取胸腺、脾脏、子宫称质量，并测定脾组织IL2、IFN、NKC活性。【结果】肾阳虚子宫发育不良大鼠胸腺、脾脏、子宫质量以及IL2、IFN、NKC活性均较正常组明显下降（P〈0．01），毓宫胶囊能提高胸腺、脾脏、子宫质量及IL2、IFN、NKC活性（P〈0．01）。【结论】肾阳虚型子宫发育不良大鼠的非特异性免疫力下降；毓宫胶囊在促进肾阳虚型子宫发育不良大鼠子宫发育的同时，提高IL2、IFN、NKC活性，正向调节其免疫功能。即毓宫胶囊有调节神经内分泌免疫网的作用。     

真武汤对肾阳虚水肿大鼠模型的保护作用及对IL-17表达的影响

目的探讨真武汤对肾阳虚水肿大鼠模型的保护作用及其机制。方法每日腹腔注射3.75 mg/kg氢化可的松溶液,同时于第1、8日通过尾静脉注射阿霉素溶液,注射剂量分别为3.5、3 mg/kg,连续14 d,将造模成功的24只大鼠随机分为模型组、真武汤组(1.9 g/mL)、阳性药组(盐酸贝那普利,1.2 mg/mL),另设正常组。各组分别给予相应药物,正常组给予等体积0.9%氯化钠注射液,连续21 d。于造模第14日和给药第21日,测量大鼠体质量、尿量、尿蛋白含量;末次给药后,检测大鼠血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)水平;酶联免疫法检测环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、醛固酮(ALD)、白细胞介素-17(IL-17)水平;免疫组化法测定肾脏组织中IL-17的表达。结果造模后,与正常组比较,各组大鼠尿蛋白及尿量均显著升高(P<0.05或P<0.01),体质量增长缓慢(P<0.05或P<0.01),提示造模成功。给药后,与模型组比较,真武汤组和阳性药组体质量显著增长(P<0.05或P<0.01);真武汤组和阳性药组尿蛋白及尿量均显著下降(P<0.05或P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠cAMP、cAMP/cGMP显著降低,cGMP显著升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,真武汤组cAMP、cAMP/cGMP显著升高,cGMP水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠Scr、BUN、ALD、IL-17含量均显著升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,真武汤组和阳性药组Scr、BUN、ALD、IL-17含量均显著下降(P<0.05或P<0.01);与正常组比较,模型组肾组织中IL-17在肾小管上表达显著,肾小球有少量表达,呈深棕色;与模型组比较,真武汤组和阳性药组肾组织中IL-17表达明显降低,弱阳性表达。结论真武汤对肾阳虚水肿有治疗功效且能明显改善肾功能,其机制可能与抑制IL-17介导的足细胞凋亡有关。     

加味济生肾气汤对STZ诱导的糖尿病肾病大鼠足细胞及其自噬的影响＊

目的 探究加味济生肾气汤对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞和自噬作用的影响，为糖尿病肾病的中药治疗奠定一定基础。方法 将66只SD大鼠按照随机数字表法分成对照组，模型组，羟苯磺酸钙组，加味济生肾气汤低、中、高剂量组。造模后，各组分别以生理盐水，羟苯磺酸钙，1 mL/kg/d、4 mL/kg/d、10 mL/kg/d药物浓度的加味济生肾气汤处理。6周后，取大鼠肾脏，电镜观察肾脏足细胞形态；免疫组化检测Nephrin的表达；Western blot检测LC3II/I和P62的表达。结果 模型组大鼠肾小球基底膜可见显著增厚，足细胞排列较紊乱，数目减少，足突融合，在加味济生肾气汤中剂量组和高剂量组中上述症状得以缓解；与对照组比较，模型组大鼠肾组织中的Nephrin水平均明显降低，LC3II/I比值显著下降，P62水平显著升高。与模型组比较，加味济生肾气汤高剂量组大鼠肾组织中的Nephrin水平均明显升高，LC3II/I比值均显著升高，P62水平显著降低（P < 0.05）。结论 加味济生肾气汤通过提高自噬水平，减少足突发生融合，提高肾脏的过滤功能。     

脾阳虚、肾阳虚亚健康状态人群的面诊图像特征分析研究＊

目的 研究脾阳虚、肾阳虚亚健康状态人群的面象特征，探讨面象特征在中医亚健康状态辨识中的诊断价值。方法 使用便携式中医智能镜采集体检人群面象样本，最终纳入脾阳虚亚健康者1450例、肾阳虚亚健康者1666例、健康者1844例，采用图像分析技术分析比较3组人群的面色、唇色等面象特征参数之间的差异。结果 肾阳虚人群的面色L值 > 脾阳虚人群（P < 0.05），肾阳虚人群的面色a、b值 < 脾阳虚人群（P < 0.05）；肾阳虚人群的唇色L值 > 脾阳虚人群 > 健康人群（P < 0.05），肾阳虚人群的唇色a、b值与脾阳虚人群无明显差异；脾阳虚、肾阳虚亚健康状态人群面部光泽度较健康人群均降低（P < 0.05）。结论 面诊图像特征可作为脾阳虚、肾阳虚亚健康人群的判别标准之一，为中医体质辨识提供了重要的面诊参数量化指标，为不同体质人群的健康状态评价及疾病的预防提供有效依据。