microRNA-34a体外调控鼻咽癌鳞状肿瘤干细胞表型

目的探讨microRNA-34a(mi R-34a)对鼻咽癌鳞状肿瘤干细胞表型的体外调控作用。方法利用原代培养的人类鼻咽癌细胞,采用流式分选法定量并收集ALDH(aldehyde dehydrogenase)+肿瘤干细胞。通过RT-qPCR分析mi R-34与肿瘤干细胞相关因子(Sox2、Nanog、Oct3/4)在ALDH~+和ALDH~-细胞中的表达情况。进一步用miR-34a拟态转染评估其对鼻咽癌肿瘤干细胞标记物以及相关因子的表达调控能力。结果原代鼻咽癌细胞中表达ALDH的细胞约占15.43%左右。与ALDH~-细胞相比,miR-34a表达水平在大多数ALDH~+细胞中显著下调(-13.2 vs-4.1倍),3种肿瘤干细胞相关因子表达显著增加(最高36.8倍)。ALDH~+细胞转染miR-34a拟态24 h、48 h、72 h后miR-34a mRNA水平显著增加,48 h时达峰值水平(4.49倍,P0.01),而3种肿瘤干细胞相关因子表达水平显著降低。结论恢复miR-34a表达显著抑制人类原代鼻咽癌干细胞表型的形成。调控鼻咽癌和肿瘤干细胞中miR-34a的表达可能降低肿瘤治疗后的转移和复发率。     

miR-133在鼻咽癌细胞的迁移和侵袭过程中的作用

目的:探究miR-133对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:实验细胞分为转染miR-133模拟物(miR-133 mimics)组及其阴性对照物(miR-NC)组、转染miR-133抑制剂(miR-133 inhibitors)组及其阴性对照(Inhibitors-NC)组。qPCR检测miR-133在鼻咽癌组织和正常组织中的表达差异;划痕愈合实验检测miR-133对鼻咽癌细胞SUNE1迁移能力的影响;Transwell实验检测miR-133对鼻咽癌细胞SUNE1侵袭能力的影响;双荧光素酶实验验证miR-133和FOXC1的关系;Western Blot验证miR-133对FOXC1蛋白表达的影响。结果:miR-133在鼻咽癌组织中的表达显著低于正常组织,而且在高级别的癌组织中的表达也低于低级别者;miR-133组和miR-NC组相比,SUNE1细胞在12 h和24 h的迁移速度[(245. 8±19. 3) vs (131. 7±8. 4)μm,P<0. 05;(362. 5±23. 0) vs(189. 2±20. 6)μm,P<0. 05]显著减缓;miR-133组较miR-NC组穿过Matrigel胶的细胞数量显著减少[(198. 0±18. 6) vs (142. 6±15. 1),P<0. 05],而miR-133 inhibitor组较Inhibitor-NC组穿过Matrigel胶的细胞数量显著增多[(202. 9±25. 7) vs (367. 1±35. 2),P<0. 05];转染miR-133 mimics后可以明显抑制野生型FOXC1的荧光素酶活性,同时miR-133能使FOXC1的蛋白表达显著降低。结论:miR-133能靶向FOXC1调控鼻咽癌细胞的迁移和侵袭。     

miR-19a在结肠癌中高表达以及通过靶定DLC1促进结肠癌细胞增殖

目的:探讨miR-19a在结肠癌组织中的表达对结肠癌细胞系SW620和SW480增殖的影响,以及其靶基因的确定和功能性研究.方法:实时荧光定量PCR检测miR-19a的表达.噻唑蓝(MTT)比色实验和克隆形成实验检测SW620和SW480细胞的增殖活性.生物信息学预测、荧光报告载体实验以及实时荧光定量PCR和western blot验证miR-19a下游靶基因.结果:miR-19a在结肠癌组织中表达增强(P＜0.01).miR-19a可以增强结肠癌细胞系SW620和SW480增殖能力.DLC1是miR-19a的候选靶基因,过表达miR-19a可以同时在mRNA和蛋白水平上抑制DLC1基因的表达(P＜0.01),反之抑制miR-19a的表达后DLC1的表达则升高(P＜0.01).过表达DLC1后,SW620和SW480细胞的活性和克隆形成能力减弱(P＜0.01).结论:DLC1是miR-19a的直接靶基因,miR-19a通过抑制DLC1的表达而促进结肠癌细胞的增殖.     

鼻咽癌组织中miR-634水平及其对鼻咽癌细胞生长的影响及机制研究

目的 研究鼻咽癌组织中miR-634水平及其对鼻咽癌细胞生长及MEK/ERK信号通路的影响,探讨miR-634在鼻咽癌中的作用机制。 方法 收集鼻咽癌组织标本60例和鼻咽部非癌组织标本60例。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞中miR-634水平。将人鼻咽癌CNE-1细胞分为空白对照组、阴性对照组和过表达miR-634组。采用MTT测定细胞增殖,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,采用Western blotting测定鼻咽癌细胞细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、丝裂原活化蛋白激酶(MEK)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-MEK)蛋白水平。 结果 鼻咽癌组织中miR-634水平低于癌旁组织(P<0.05)。鼻咽癌细胞中miR-634水平低于正常鼻咽部上皮细胞(P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组比较,过表达miR-634组鼻咽癌细胞中miR-634水平和细胞凋亡率升高(P<0.05);p-ERK、p-MEK蛋白水平降低(P<0.05)。转染3 d和5 d,3组细胞OD值比较差异有统计学意义(P<0.05),与空白对照组和阴性对照组比较,过表达miR-634组细胞OD值降低(P<0.05)。 结论 鼻咽癌组织中miR-634水平降低,过表达miR-634可抑制鼻咽癌增殖、促进细胞凋亡,其机制可能与MEK/ERK信号通路有关。      

miR-34a抑制人鼻咽癌细胞生长与侵袭

目的探讨miR-34a在人鼻咽癌CNE2细胞中的生物学功能。方法采用MTT、Transwell侵袭实验、细胞划痕实验分别检测过表达miR-34a对人鼻咽癌CNE2细胞的生长与侵袭作用。结果 MTT检测发现,过表达miR-34a可抑制人鼻咽癌CNE2细胞的生长增殖;细胞划痕和Transwell侵袭实验显示,在鼻咽癌CNE2细胞中过表达miR-34a 48 h后划痕愈合率为40.3%±9.0%,与对照组（76.3%±6.8%）比较,能明显减缓CNE2细胞划痕的愈合,转染miR-34a mimics 48 h后穿过基底膜的细胞数为71±10,与对照组（147±5）比较,能明显减缓CNE2细胞侵袭能力（P〈0.01）。结论 miR-34a可抑制鼻咽癌CNE2细胞生长与侵袭。     

miR-34a对鼻咽癌细胞增殖的负性调控作用

目的:研究miR-34a对鼻咽癌细胞的增殖能力的影响。方法:使用PCR检测正常鼻咽上皮细胞及鼻咽癌细胞中miR-34a的表达水平,瞬时转染后通过MTT、克隆形成实验及凋亡实验探讨miR-34a对鼻咽癌细胞生物学行为的影响。结果:miR-34a在鼻咽癌细胞中表达量低于正常细胞,miR-34a抑制鼻咽癌细胞增殖及克隆形成能力,诱导凋亡。     

miR-138在鼻咽癌患者中的预后价值及其对细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨miR-138在鼻咽癌中的临床意义以及对癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法 采用实时荧光定量PCR检测鼻咽癌组织和癌细胞CNE1中miR-138的表达量。采用Kaplan-Meier生存分析和Cox回归分析评估miR-138的预后价值。构建体外调控miR-138表达量的鼻咽癌细胞体系,采用MTT法和Transwell实验法分析miR-138对癌细胞CNE1生命活动的影响。 结果 miR-138在鼻咽癌组织和细胞中的表达量均显著下调(P<0.001),且与癌症患者的淋巴结转移(P=0.007)及TNM分期(P=0.003)密切相关。生存曲线表明,低表达miR-138的鼻咽癌患者较高表达患者具有较差的总生存率(P=0.002),且可以作为一个独立的预后因子(HR=2.603,95%CI=1.245～5.441,P=0.011)应用在鼻咽癌的治疗中。体外细胞实验证明,高表达miR-138具有抑制鼻咽癌细胞CNE1增殖、迁移和侵袭的能力(P<0.05),而抑制miR-138的表达则显著促进癌细胞的各种生命活动(P<0.05)。 结论 miR-138与鼻咽癌的预后密切相关,且可以明显抑制鼻咽癌细胞CNE1的增殖、迁移和侵袭能力。     

慢病毒介导的microRNA-19b表达对鼻咽癌细胞凋亡及Wnt/β-catenin信号的影响

目的 研究慢病毒介导的microRNA-19b（miR-19b）表达对鼻咽癌细胞凋亡及Wnt/β-catenin信号的影响。方法 实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测鼻咽癌组织及人永生化鼻咽上皮细胞系NP69和鼻咽癌细胞系HONE1、5-8F和CNE1中miR-19b表达。构建miR-19b抑制表达（miR-19b inhibitor）、miR-19b过表达和无意义序列（Scrambled）的慢病毒载体（miR-19b mimics）,并设定空白组,转染鼻咽癌细胞系HONE1,qRT-PCR检测慢病毒转染细胞后细胞中miR-19b的表达;MTT法检测慢病毒转染细胞24、48和72?h后的细胞活力;流式细胞仪检测慢病毒转染细胞48?h的细胞凋亡率;Western blotting检测 ki-67、p53、β-连环蛋白（β-catenin）,Cyclin D1和C-myc的蛋白表达。结果 miR-19b在鼻咽癌组织及细胞中表达升高（P?<0.05）。Scrambled组与空白组比较,差异无统计学意义（P?>0.05）,与空白组比较,miR-19b inhibitor组miR-19b的表达降低,miR-19b mimics组miR-19b的表达升高（P?<0.05）;与空白组比较,miR-19b inhibitor组在48和72 h的细胞活力降低,而miR-19b mimics组在48和72?h的细胞活力升高（P?<0.05）;与空白组比较,miR-19b inhibitor组细胞凋亡率及p53的表达升高,ki-67、β-catenin、Cyclin D1和C-myc的表达降低,miR-19b mimics组细胞凋亡率及p53的表达降低,ki-67、β-catenin、Cyclin D1和C-myc的表达升高（P?< 0.05）。结论 抑制miR-19b表达可降低鼻咽癌细胞活力,诱导细胞凋亡及下调Wnt/β-catenin信号通路,而过表达miR-19b则反之。     

鼻咽癌外泌体miR-20a通过靶向BCL2L11基因抑制肿瘤相关巨噬细胞凋亡

目的 探索鼻咽癌外泌体microRNA是否通过靶向凋亡基因而抑制肿瘤相关巨噬细胞(TAM)凋亡.方法 通过生物信息学方法确定目标microRNA及其靶基因,检测鼻咽癌患者血清及鼻咽癌细胞培养基中的外泌体内miR-20a的表达量.应用miR-20a的拟似物及抑制物转染巨噬细胞;并检测干预后的凋亡指数及凋亡通路相关蛋白.结果 miR-20a在鼻咽癌外泌体中表达显著上调.miR-20a的靶基因为BCL2 L11,过表达miR-20a可以抑制巨噬细胞凋亡,且凋亡通路相关蛋白Bim、caspase-9和caspase-3均显著减少(P＜0.05).结论 miR-20a通过抑制Bim-caspase-9-caspase-3凋亡途径的活化从而抑制鼻咽癌中TAM凋亡.     

miR-19a在食管鳞癌组织及细胞中的功能机制研究

目的 探讨miR-19a在食管鳞癌组织及细胞中的功能机制。方法 收集30对新鲜食管鳞癌患者癌组织及其癌旁正常组织,根据病理分化程度及是否有淋巴结转移分别分为高-中分化组和中-低分化组,淋巴结转移组和未转移组,实时荧光定量(qRT-PCR)检测miR-19a的表达。在细胞水平上,干扰和过表达miR-19a后,通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)、细胞划痕、transwell试验检测miR-19a对食管鳞癌细胞系Eca109的增殖、迁移和侵袭的影响;流式细胞术检测转染miR-19a后对食管鳞癌细胞系Eca109周期和凋亡的影响。结果 组织水平上,miR-19a在食管鳞癌组织中表达量(11.07±12.08),明显高于与其对应的癌旁组织(1.36±1.03),差异具有统计学意义。miR-19a在中-低分化组(6.92±3.61)和转移组(6.50±4.21)中的表达量也明显高于与其对应的高-中分化组(2.92±2.84)和未转移组(2.55±2.06),差异具有统计学意义。细胞水平上,在食管鳞癌Eca109细胞中,转染miR-19a Mimics促进了食管鳞癌细胞系Eca109的增...     

miR-211对卵巢癌SKOV-3细胞上皮-间质转化功能的影响及机制

目的 研究microRNA-211(miR-211)对卵巢癌SKOV-3细胞上皮-间质转化(EMT)功能的影响及其相关机制.方法 SKOV-3卵巢癌细胞株分别转染miR-211模拟物(211M组)及其阴性对照模拟物(NCM组),并设立未转染对照组,采用RT-PCR法检测各组细胞miR-211含量;Transwell实验检测3组细胞迁移能力和侵袭能力;Western blot法检测3组细胞Snail、α-连环蛋白(α-Catenin)和与性别决定相关的高迁移率基因群4(SOX4)表达水平;采用Western blot法检测SOX4过表达对miR-211抑制EMT的拮抗作用;双荧光素酶实验检测miR-211与SOX4的关系.结果 211M组miR-211的表达水平明显上调,表达水平为未转染对照组的(706.67±30.95)倍(P<0.05).211M组迁移细胞数量为(12.32±0.77)个/视野,明显低于未转染对照组的(82.25±1.05)个/视野(P<0.05).211M组侵袭细胞数量为(9.22±0.32)个/视野,明显低于未转染对照组的(62.10±1.77)个/视野(P<0.05).211M组细胞Snail蛋白表达量明显降低,α-Catenin蛋白表达量明显升高,SOX4蛋白表达量明显降低.SOX4+211M组卵巢癌细胞中Snail蛋白表达量明显升高, α-Catenin蛋白表达量明显降低.双荧光素酶检验结果显示SOX4为miR-211的下游靶基因.结论 miR-211可能通过降低下游靶基因SOX4水平影响EMT相关蛋白表达,抑制卵巢癌SKOV-3细胞的EMT功能.     

miR-27a对胃癌细胞凋亡影响的体外研究

目的:探讨miR-27a对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:分别构建miR-27a过表达和敲除FOXO1的SGC-7901细胞株,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞凋亡和自噬相关蛋白p53、BCL-2、LC3I、LC3II水平,同时检测上调及下调miRNA-27a的胃癌细胞FOXO1的表达水平。双荧光素酶报告基因分析法验证miR-27a的靶基因。实时聚合酶链式反应（Realtime PCR） 检测miR-27a高表达质粒、miR-27a低表达质粒的转染效率,并检测过表达/敲低miRNA-27a的胃癌细胞中FOXO1 mRNA的水平。结果:（1）上调miR-27a的细胞凋亡率较对照组明显下降,且凋亡相关蛋白BCL-2表达上调,p53水平下降,自噬相关蛋白LC3I、LC3II的表达较对照组下调（P<0.05）。而敲低胃癌细胞中FOXO1后得到了与上调miR-27a相似的实验结果。（2）双荧光素酶报告基因验证结果显示miR-27a与FOXO1存在靶点关系。miR-27a高表达质粒、miR-27a低表达质粒分别成功转染至胃癌细胞中。上调或下调胃癌细胞中miR-27a后,SGC-7901细胞中FOXO1 mRNA水平无明显变化（P>0.05）,FOXO1基因表达在蛋白水平相应下调或上调。结论:体外实验中,miR-27a可通过靶向抑制FOXO1的表达抑制胃癌细胞凋亡,miR-27a/ FOXO1轴可以为胃癌治疗提供新的策略。     

MiR-26b靶向hENT1通过RhoA/ROCK-1通路调控肺癌细胞的 侵袭和迁移

目的：探讨miR-26b在肺癌组织中的表达及miR-26b在肺癌细胞侵袭和迁移过程中的作用及其机制。方法： qPCR检测肺癌和正常肺组织中miR-26b的表达情况;荧光素酶报告基因检测miR-26b与人平衡核苷转运蛋白1(human equilibrative nucleoside transporter 1,hENT1)的相互作用;Transwell侵袭试验检测miR-26b的表达对肺癌细胞侵袭能力的 影响;划痕试验检测miR-26b的表达对肺癌细胞迁移能力的影响;Western印迹检测hENT1,ROCK-1,RhoA蛋白的表 达情况;鬼笔环肽染色观察miR-26b-mimic处理后细胞骨架的变化情况;裸鼠皮下成瘤试验检测miR-26b-mimic对肺癌 成瘤大小及体积的影响。结果：与正常肺组织相比,肺癌组织中miR-26b表达明显降低;且晚期、低分化和有淋巴结 转移的肺癌组织miR-26b表达明显较早期、高分化和无淋巴结转移的肺癌组织低; miR-26b能与hENT1的3'-UTR特异 性结合;miR-26b可以调控肺癌A549细胞的侵袭迁移能力;过表达miR-26b可以抑制hENT1,ROCK-1,RhoA的表达; miR-26b-mimic处理后,F-actin染色明显减少,细胞膜皱褶形成明显减少,伪足形成明显减少;裸鼠皮下成瘤试验显 示：miR-26b-mimic处理后肿瘤体积和质量明显减小。结论：MiR-26b在肺癌中表达明显降低,且跟肺癌分期、分级及 淋巴结转移与否密切相关,同时靶向hENT1通过RhoA/ROCK-1信号通路调控肺癌细胞的侵袭和迁移。     

装载微RNA-132的间充质干细胞来源外泌体在缺氧条件下对人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的 探讨装载miRNA-132的间充质干细胞外泌体在缺氧环境中对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用及其机制.方法 通过电转法分别将miRNA-132阴性对照(NC)和miRNA-132 mimics转入间充质干细胞来源的外泌体中,即为对照外泌体(Exo)和装载miRNA-132的外泌体(miRNA-132 Ex...     

MicroRNA-134通过下调叉头框蛋白M1/人基质金属蛋白酶2表达抑制乳腺癌细胞迁移及侵袭

目的  探讨microRNA-134（miR-134）在乳腺癌中的表达及其影响乳腺癌迁移、侵袭能力的分子机制。方法  选取2013年1月-2015年2月于本院乳腺病科行手术切除并经病理检查证实的乳腺导管内原位癌组织30例、乳腺浸润性导管癌组织35例及正常乳腺组织15例。通过实时定量聚合酶链式反应法分别检测miR-134在肿瘤和正常乳腺组织中的表达,统计分析miR-134表达与患者临床特征间的相关性;通过miR-134模拟物转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用细胞划痕愈合试验评价过表达miR-134对细胞迁移能力的影响,采用Transwell侵袭小室试验评价过表达miR-134后MDA-MB-231细胞侵袭能力的变化。通过免疫组织化学染色检测miR-134与下游潜在靶点叉头框蛋白M1蛋白表达关系,实时定量聚合酶链式反应、蛋白免疫印迹检测转染miR-134模拟物后其下游潜在靶点叉头框蛋白M1及下游效应分子人基质金属蛋白酶2的表达变化。结果  miR-134在正常乳腺组织、乳腺导管内原位癌组织及乳腺浸润性导管癌组织中的表达量依次降低（P <0.05）。乳腺癌组织中低水平的miR-134与肿瘤淋巴结转移及高TNM分期显著相关（P <0.05）;在体外试验中,过表达miR-134能够显著降低MDA-MB-231细胞的迁移及侵袭能力（P <0.05）;免疫组织化学染色结果证实miR-134与叉头框蛋白M1蛋白的表达呈负相关关系（P <0.05）;实时定量聚合酶链式反应及蛋白免疫印记结果显示,过表达miR-134后可显著抑制乳腺癌细胞中叉头框蛋白M1及人基质金属蛋白酶2的表达水平（P <0.05）。结论  miR-134在乳腺癌组织中表达下调,miR-134可能通过下调叉头框蛋白M1/人基质金属蛋白酶2的表达来抑制乳腺癌细胞的迁移及侵袭。

     

miR-4306通过下调SATB2表达抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移与侵袭

目的: 研究miR-4306在骨肉瘤细胞中的表达及其对骨肉瘤细胞生物学行为的影响。方法: 选取人成骨细胞hFOB 1.19和骨肉瘤细胞Saos-2、MNNG/HOS CI #5,采用qRT-PCR检测miR-4306表达水平。将miR-4306 mimics和阴性对照分别转染至骨肉瘤细胞Saos-2和MNNG/HOS CI #5,采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移及侵袭,蛋白质免疫印迹检测细胞内上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition, EMT）标志蛋白表达水平。通过在线靶基因预测网站Targetscan、Starbase预测miR-4306靶基因可能为富含AT序列特异性结合蛋白2（special AT rich sequence binding protein 2, SATB2）,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将miR 4306 mimics、LV SATB2共转染至骨肉瘤细胞中,检测细胞增殖、迁移、侵袭以及EMT标志蛋白表达水平变化。结果: 与人成骨细胞hFOB 1.19比较,骨肉瘤细胞Saos 2、MNNG/HOS CI #5中miR-4306表达明显降低（P均＜0.01）。转染miR-4306 mimics后,骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力下降,N-钙黏蛋白、血管内皮生长因子表达水平显著降低,E 钙黏蛋白表达水平显著升高（P＜0.05或＜0.01）。SATB2是miR-4306下游的直接靶标;与miR-4306 mimics+LV-NC组比较,miR-4306 mimics+LV-SATB2组部分逆转miR-4306对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移和EMT的影响。结论: miR-4306在骨肉瘤细胞中呈低表达,其可通过下调SATB2表达抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。     

MiR-150在大鼠垂体瘤细胞中的表达及其对细胞增殖的影响

目的 探讨微小核糖核酸-150(miR-150)在大鼠垂体瘤细胞中的表达及其对垂体细胞增殖的影响.方法 选用5周龄Fischer344雌性大鼠20只,按实验要求分为对照组(n=10)与观察组(垂体瘤组,n=10).观察组大鼠皮下埋置10 mg雌激素缓释泵诱导垂体瘤模型,对照组小鼠皮下埋置生理盐水缓释泵作为对照.造模成功后,观察组及对照组分别取垂体瘤组织及正常垂体组织,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-150的表达.培养正常的大鼠垂体细胞,用miR-150 mimics和miR-150 mimics control分别转染正常的垂体细胞,并观察其对细胞增殖功能的影响.结果 结果显示观察组组织中miR-150的表达量为(0.39±0.10),明显低于对照组的(1.47±0.37),差异有统计学意义(P<0.05);转染miR-150 mimics的正常垂体细胞增殖(1.16±0.11),相对于转染miR-150 mimics control的(1.82±0.13)显著减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论 miR-150在垂体瘤中表达下调,其可能调控垂体细胞的增殖从而抑制垂体瘤的发生.     

miR-205靶定YES1对肺癌细胞A549的增殖抑制作用

目的：利用实时定量RT-PCR技术和双荧光蛋白报告基因分析系统检测miR-205在肺癌组织及A549细胞系中的表达水平以及其直接靶基因YES1,探讨miR-205抑制肺癌细胞A549增殖的可能机制。方法: 实时定量RT-PCR技术检测10例肺癌组织和10例癌旁正常肺组织中miR-205的表达水平;miR-205 mimics和control mimics分别转染A549细胞,利用细胞计数和集落形成实验检测转染后A549细胞的增殖情况。选取表达绿色荧光蛋白的质粒 pcDNA3/EGFP,将YES1 3′UTR的一段特异性序列、YES1 3′UTR（miR-205互补位点）点突变后的序列分别插入该质粒中,构建YES1-3′UTR和mut-YES1-3′UTR的绿色荧光表达质粒。实验分为YES1-3′UTR、YES1-3′UTR与miR-205 mimics、YES1-3′UTR与control mimics、mut-YES1-3′UTR、mut-YES1-3′UTR与miR-205 mimics和mut-YES1-3′UTR与control mimics共6组,均与表达红色荧光蛋白pDsRed2-N1共同转染肺癌细胞系A549,荧光分光光度计进行蛋白定性和定量检测。结果：与癌旁正常肺组织比较,miR-205在肺癌组织及A549细胞中表达水平降低(P<0.05);miR-205mimics 转染组A549细胞增殖率明显低于转染control mimics对照组（P<0.05）;YES1-3′UTR与miR-205 mimics共转实验组荧光蛋白表达水平低于YES1-3′UTR与control mimics共转染组（P<0.01）;YES1蛋白高表达组A549细胞细胞克隆形成数高于细胞对照组（P<0.05）。结论： miR-205可能通过靶定靶基因YES1抑制了肺癌细胞A549的增殖,提示miR-205和YES1有可能成为肿瘤生物治疗的新靶点。     

miR-638对人肺腺癌细胞凋亡的影响

目的:探讨miR-638在肺腺癌中的表达及其与肺腺癌细胞凋亡的关系?方法:应用real-time RT-PCR的方法检测了miR-638在肺腺癌细胞株SPC-A1中的表达情况,并采用脂质体法将miR-638 模拟物瞬时转染入SPC-A1?实验设置空白对照组?无关miRNA阴性对照组和miR-638转染组,转染后在荧光显微镜下观察转染效率,实时荧光定量RT-PCR检测miR-638的表达,流式细胞术检测各组细胞凋亡率?结果:与正常细胞相比,miR-638在肺腺癌细胞中低表达?SPC-A1细胞转染miR-638模拟物后,细胞凋亡率相对于空白组和阴性对照组显著升高(P < 0.05)?结论:miR-638在肺腺癌中低表达,且能够促进肺腺癌细胞凋亡,可作为后续肺癌生物治疗的新分子靶标?     

miRNA-381 对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及机制

目的 观察miRNA-381 对胃癌细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胃癌细胞系AGS、MGC-803、Hs746T 及BSG823 和正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1 中miRNA-381 的表达;将AGS 细胞系分成两组,阴性对照组和miRNA-381 模拟物组,采用Lipofectamine TM 2000 分别转染miRNA-381 scramble 及mimics,采用CCK-8、Transwell 实验测定两组细胞增殖和侵袭的影响,Western blot 检测两组细胞肝受体类似物1（LRH-1）和扭曲相关蛋白1（Twist1）表达水平。结果 胃癌细胞系AGS、MGC-803、Hs746T 及BSG823 中miRNA-381 相对表达量较正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1 为低。miRNA-381 模拟物组在转染后72 和96 h OD 450 nm 值低于阴性对照组（P <0.05）;阴性对照组侵袭细胞数为（79.6±7.2）个,miRNA-381 模拟物组侵袭细胞数为（31.70±4.2）个,miRNA-381 模拟物组侵袭细胞数少于阴性对照组（P <0.01）;miRNA-381 模拟物组LRH-1 蛋白相对表达量为（0.39±0.04）,阴性对照组为1.0,miRNA-381 模拟物组LRH-1 蛋白相对表达量低于阴性对照组（P <0.01）;miRNA-381 模拟物组Twist1蛋白相对表达量为（0.51±0.05）,阴性对照组为1.0,miRNA-381 模拟物组Twist 1 蛋白相对表达量低于阴性对照组（P <0.01）。结论 miRNA-381 低表达于胃癌细胞系,miRNA-381 过表达可抑制胃癌细胞增殖和侵袭能力,其机制可能与下调LRH-1 和Twist1 的表达有关。