阿霉素联合氢化可的松诱导慢性肾脏病肾阳虚证大鼠模型的建立与评价及真武汤干预机制研究＊

目的 探索应用阿霉素联合氢化可的松诱导建立慢性肾脏病肾阳虚证大鼠模型的方法与评价及真武汤干预的机制。方法 采用阿霉素联合氢化可的松注射诱导建立慢性肾脏病肾阳虚证大鼠模型。52只SPF级雄性6-8周龄SD大鼠，随机分为正常组10只，模型组42只。大鼠适应性饲养2周，模型组大鼠阿霉素3 mg·kg^-1尾静脉注射，第4周4 mg·kg^-1剂量第2次注射，模型成功后随机分为阿霉素组，氢化可的松组与真武汤组。第12周，氢化可的松组与真武汤组进行氢化可的松10 mg·kg^-1肌肉注射，真武汤组按照每日5.39 g/kg进行真武汤干预。在实验中记录一般情况，称取体质量，采取BCA法检测24 h尿蛋白定量，采取红外体温计测量体温，采取游泳耐力法检测体力耐力。实验第24周取材，摘取肾脏，脾脏，睾丸称量并计算脏器指数；大鼠肾组织HE、Masson染色分析病理形态学变化；大鼠血清采用比色法检测Scr、BUN、UA、TC、TG、TP、ALB、SOD；采用酶联免疫吸附法检测CORT、T3、T4、TSH、FSH、LH、T、E2水平。结果 与正常组比较，氢化可的松组大鼠一般情况出现弓背、戗毛、蜷缩、喜卧懒动，精神不振等肾阳虚表现；24 h尿蛋白大量增加（P < 0.01）；与氢化可的松模型相比，真武汤组肾阳虚表现出现好转，24 h尿蛋白降低（P < 0.05），体温升高（P < 0.05）；HE结果显示氢化可的松组肾小球发生球囊壁粘连，系膜区增宽，肾小管扩张或萎缩，大量蛋白管型，肾间质炎性细胞浸润；Masson结果显示氢化可的松组肾小球节段性硬化，肾小管与肾间质发生纤维化；真武汤组HE结果显示蛋白管型减少，球囊壁粘连减轻，肾间质炎性细胞浸润减少，Masson结果显示肾小球纤维化减轻，肾小管与肾间质纤维化减轻；与正常组相比，氢化可的松肾功能异常，血脂升高，蛋白显著降低；CORT降低，T3、T4降低（P < 0.05，P < 0.01），TSH明显升高（P < 0.01）；SOD明显降低（P < 0.01）；T明显降低，FSH、LH、E2显著降低（P < 0.05，P < 0.01）；与氢化可的松组相比，真武汤组血肌酐与尿酸下降，血清蛋白上升（P < 0.05）；CORT上升，T3明显升高（P < 0.05）、T4升高、TSH下降，SOD显著升高（P < 0.01）、T、E2、FSH、LH出现升高。结论 阿霉素联合氢化可的松可以成功建立慢性肾脏病肾阳虚证动物模型。真武汤可能通过改善肾功能、作用于下丘脑肾上腺轴、甲状腺轴和性腺轴对慢性肾脏病肾阳虚证起到很好的干预作用。     

阿霉素联合雌二醇诱导慢性肾脏病肾阳虚证大鼠模型的建立与评价及真武汤干预作用研究＊

目的 探索慢性肾脏病肾阳虚证动物模型的建立与评价标准及真武汤干预作用的研究。方法 49只雄性SD大鼠，进行适应性喂养，为期2周。随机分为正常组10只和模型组39只。模型组大鼠分别于第3周、第4周尾静脉注射阿霉素3 mg·kg^-1、4 mg·kg^-1，建立慢性肾脏病动物模型。将成模大鼠随机分为阿霉素组13只、雌二醇组13只、真武汤组13只，第13周起，雌二醇组、真武汤组腹腔注射雌二醇玉米油稀释液（4 mg·kg^-1）构建慢性肾脏病肾阳虚证病证结合动物模型，真武汤组同时按照5.39 g·kg^-1·d^-1进行灌胃给药。观察大鼠一般情况；每周称取大鼠体质量，每4周检测大鼠24h尿蛋白定量；使用红外测温枪检测大鼠体温变化，采用游泳耐力实验检测大鼠游泳时间；第24周，股动脉取血并处死大鼠，将大鼠肾脏、脾脏、睾丸称重并计算脏器指数；采用HE和Masson染色观察大鼠肾组织的病理变化情况；分离血清后用比色法检测Scr、UA、BUN、TP、ALB、TC、TG、SOD，用酶联免疫法检测CORT、FSH、LH、T、E2、T3、T4、TSH。结果 与正常组比较，雌二醇组大鼠出现毛发无光泽、弓背蜷缩、消瘦、活动减少、精神萎靡，真武汤组大鼠肾阳虚症状好转。真武汤较雌二醇组体重、睾丸指数明显升高（P < 0.05，P < 0.01），肾脏指数显著下降（P < 0.01）。真武汤组较雌二醇组大鼠的24 h尿蛋白定量明显下降（P < 0.05，P < 0.01）。真武汤较雌二醇组体温、游泳时间明显升高（P < 0.05，P < 0.01）。肾组织HE、Masson染色结果显示，阿霉素组、雌二醇组大鼠肾小球系膜区增宽，系膜细胞增生，肾小管上皮细胞空泡样变，肾间质有炎性细胞浸润，系膜区有大量胶原纤维沉积；真武汤组病理损伤情况有所改善。血清指标显示：真武汤较雌二醇组Scr、BUN、TC明显下降（P < 0.05，P < 0.01）。从性腺轴指标来看，真武汤组较雌二醇FSH、LH、E2有降低趋势，T有升高趋势。从肾上腺轴指标来看，真武汤组较雌二醇组CORT差异不明显。从甲状腺轴指标来看，真武汤组较雌二醇组T4显著降低（P < 0.01）。真武汤组较雌二醇组SOD有升高趋势。结论 阿霉素联合腹腔注射雌二醇能够成功制备慢性肾脏病肾阳虚证动物模型。该大鼠模型主要模拟了慢性肾脏病下丘脑-垂体-性腺轴功能低下的肾阳虚证动物模型。真武汤可改善模型组大鼠的肾阳虚症状与性腺轴的抑制状态。     

阿霉素联合他巴唑诱导慢性肾脏病肾阳虚证大鼠模型的建立与评价及真武汤干预作用的研究＊

目的 探讨阿霉素联合他巴唑诱导慢性肾脏病肾阳虚证大鼠模型的建立方法与评价及真武汤干预作用的研究。方法 SPF级体质量200-220 g的SD雄性大鼠52只，适应性喂养2周，随机分为正常组10只、模型组42只，模型组大鼠第3周、第4周分别按照3 mg·kg^-1、4mg·kg^-1体重尾静脉注射阿霉素进行慢性肾脏病大鼠模型造模。模型成功大鼠按体质量与尿蛋白进行分层随机，分为阿霉素组14只、他巴唑组14只、真武汤组14只，第13周起真武汤组按照5.39 g/kg/天进行干预。观察大鼠一般情况，每周称取大鼠体质量，每4周检测大鼠24 h尿蛋白定量、采用红外测温枪检测大鼠体温，采用大鼠游泳实验检测游泳时间。24周后股动脉取血并处死大鼠，称取大鼠肾脏、脾脏、睾丸重量并计算脏器指数，采用HE染色、Masson染色观察各组大鼠肾组织病理情况。采用比色法检测血清Scr、BUN、UA、TC、TG、TP、ALB、SOD的水平；采用酶联免疫吸附法检测血清T3、T4、TSH、FSH、LH、T、E2、CORT的水平。结果 与正常组比较，他巴唑组大鼠出现毛发枯槁、弓背、懒动、蜷缩、喜扎堆、肛周污秽、体型较为瘦弱、行动迟缓等典型肾阳虚体征，真武汤组较他巴唑组一般情况有所好转，肾阳虚体征减轻，体重显著升高（P < 0.01），肾脏指数、24 h尿蛋白定量明显下降（P < 0.01），体温、游泳时间增加；肾脏组织HE、Masson染色结果显示，阿霉素组、他巴唑组肾小球系膜区增宽，系膜细胞增生，系膜区有大量胶原纤维沉积，肾小管扩张或萎缩，存在蛋白管型，肾间质有大量炎性细胞浸润，阿霉素组球囊壁粘连明显，真武汤组病理变化有所改善；血清指标显示，与他巴唑组相比，真武汤组Scr、UA、BUN、TC、TG有降低趋势，ALB含量升高（P < 0.05）；甲状腺轴指标T3有升高趋势，T4显著升高（P < 0.01），TSH显著降低（P < 0.01）；真武汤组性腺轴指标FSH、LH、E2显著升高（P < 0.01），T无差异；肾上腺轴指标CORT各组之间无统计学差异；真武汤组SOD显著升高（P < 0.01）。结论 阿霉素联合他巴唑可以成功建立慢性肾脏病肾阳虚证动物模型，真武汤干预作用也证明了该病证结合模型的成功建立，该模型主要模拟了慢性肾脏病下丘脑-垂体-甲状腺轴功能低下的肾阳虚证动物模型。     

牡丹花总黄酮对高尿酸血症大鼠降尿酸作用

目的 探究牡丹花总黄酮对高尿酸血症大鼠的药效学作用，为高尿酸血症治疗药物的研究开发提供科研数据支撑。方法 使用腺嘌呤合并乙胺丁醇复制大鼠高尿酸血症模型，大鼠随机分为正常组、模型组、别嘌醇组（42 mg·kg^-1）、痛风舒片组（600 mg·kg^-1）、牡丹花总黄酮高、中、低剂量组（TFPF 260、130、65 mg·kg^-1）。记录观察大鼠状态，每5 d记录一次大鼠体质量；测定末次给药24 h大鼠尿量、饮水量、尿液中尿酸（UA）、尿蛋白水平；计算大鼠肾脏指数；苏木素-伊红（HE）染色法观察大鼠胸腺、脾脏组织；测定大鼠血清中尿酸（UA）、肌酐（Cr）、血尿素氮（BUN）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）活力、总抗氧化能力（T-AOC）活力；测定大鼠肝脏中黄嘌呤氧化酶（XOD）、腺苷脱氨酶（ADA）活性；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠肾脏中尿酸转运体1（URAT1）、阴离子转运蛋白1（OAT1）、葡萄糖转运蛋白9（GLUT9）含量。结果 与模型组比较，牡丹花总黄酮可改善大鼠精神状态，增加大鼠体质量（P<0.01）、促进大鼠尿液尿酸排泄（P<0.01），降低尿蛋白量（P<0.05）；降低大鼠24 h尿量、饮水量、肾脏脏器指数（P<0.05）、血清中UA、Cr、BUN、MDA含量（P<0.05，P<0.01）；抑制肝脏中XOD（P<0.05）、ADA活性（P<0.05，P<0.01）；减少肾匀浆GLUT9表达量（P<0.05）；提高血清SOD和T-AOC活性及肾脏中OAT1表达量（P<0.01）；改善大鼠胸腺和脾脏病理变化。结论 牡丹花总黄酮对高尿酸血症大鼠肾脏具有一定的保护作用，其作用与促进尿酸排泄，抑制氧化反应，抑制尿酸合成关键酶活性，调节尿酸转运蛋白表达有关。     

基于网络药理学、分子对接和实验验证探讨加味真武汤延缓慢性肾功能衰竭进展的作用机制

目的 通过观察腺嘌呤灌胃不同时间对模型大鼠一般生命体征、生化指标、心肾组织结构及功能的影响，探讨腺嘌呤诱导慢性肾功能衰竭（CRF）并发心血管病变大鼠模型的制备方法。方法 模型组大鼠腺嘌呤150 mg·kg^-1·d^-1灌胃16周，正常组大鼠给予等体积0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃。于第5、13、17周检测模型组及正常组大鼠24 h尿蛋白定量（24 h-UTP）、生化指标、心脏超声，心肾组织结构及功能变化；于第5周、13周检测模型组及正常组大鼠血压；每周记录大鼠体质量变化；每日观察大鼠一般情况。结果 ①与正常组大鼠比较，模型组大鼠体质量明显减少（P<0.05）；②与正常组大鼠比较，模型组大鼠尿量明显增多，13周时出现蛋白尿；③与正常组大鼠比较，模型组大鼠第5周开始甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、血钾、血磷差异具有统计学意义（P<0.05），第17周时尿酸明显升高（P<0.05）；血钙降低（P<0.01）；④与正常组大鼠比较，模型组大鼠第5周出现血压明显升高（P<0.05），并逐渐加重；⑤与正常组大鼠比较，模型组大鼠第5周左心室室壁厚度差异无统计学意义，第13周差异有统计学意义（P<0.05）；⑥与正常组大鼠比较，模型组大鼠第5周肾脏出现纤维化，纤维化程度不断加重，第13周心血管周围出现明显纤维化；⑦与正常组大鼠比较，模型组大鼠近端小管上皮细胞内可见高密度菱形针状结晶不断增多，细胞膜完整性受损，细胞间距不断增加，溶酶体不断增多，线粒体增生、线粒体嵴和线粒体外膜致密变不断加重；⑧与正常组大鼠比较，模型组大鼠精神萎靡，活动量明显减少并蜷缩弓背，毛发枯燥，耳部及脚趾苍白，面颊肿胀，夜尿多，血液暗红且浓稠。结论 腺嘌呤150 mg·kg^-1·d^-1灌胃12周可制备大鼠CRF伴有心血管病变等并发症模型，可用于CRF及其心血管病变等并发症的防治研究；腺嘌呤诱导CRF大鼠模型证属脾肾阳虚、浊瘀阻滞，可用于温补脾肾，化瘀泄浊的中药组方防治CRF进展机制的研究。     

基于“方证对应”理论探讨主动脉弓缩窄致心力衰竭大鼠模型的中医证型与代谢标志物

目的 观察3种中药注射液对主动脉弓缩窄（TAC）致心力衰竭大鼠模型的疗效差异，基于“方证对应”理论探讨模型的中医证型，从代谢角度揭示方证的生物学基础。方法 对大鼠进行TAC术，造模成功将其后分为模型组、丹红注射液组（6.0 mL·kg^-1）、参麦注射液组（6.0 mL·kg^-1）、参附注射液组（6.0 mL·kg^-1）和曲美他嗪组（10 mg·kg^-1），另设立假手术组作对照。药物干预15 d后，对各组进行超声心动图、血清氨基末端脑钠肽前体（NT-proBNP）与心肌组织病理染色检测，对比疗效以遴选有效注射液；运用比色法检测有效注射液干预后的血清糖脂代谢指标，利用超高效液相色谱-质谱法观察心肌组织代谢产物与关联代谢通路。结果 与假手术组比较，模型组左室射血分数（LVEF）和左室短轴缩短率（FS）显著下降（P<0.01），左室舒张末期内径（LVIDd）、左室收缩末期内径（LVIDs）和NT-proBNP水平显著上升（P<0.01）。与模型组比较，丹红注射液组LVEF和FS显著上升（P<0.01），LVIDd、LVIDs、NT-proBNP水平明显下降（P<0.05，P<0.01）；参附注射液组的NT-proBNP水平明显下降（P<0.05）；参麦注射液组的LVIDd明显上升（P<0.05），NT-proBNP水平显著上升（P<0.01）；曲美他嗪组LVEF和FS显著上升（P<0.01），LVIDs和NT-proBNP水平明显下降（P<0.05，P<0.01）。丹红注射液组与曲美他嗪组的血清葡萄糖、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇水平明显回调（P<0.05，P<0.01）；丹红注射液组的9种心肌产物回调，涉及甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢，乙醛酸和二羧酸酯代谢，甘油磷脂代谢；曲美他嗪组的10种心肌产物回调，涉及甘油磷脂代谢。结论 丹红注射液对TAC致心力衰竭模型的疗效显著且优于参附注射液与参麦注射液，推测该模型与心血瘀阻证密切关联；丹红注射液干预模型的生物学机制涉及调节糖脂代谢、氨基酸代谢、丁酸代谢紊乱。     

基于VIP/cAMP/PKA/AQPs信号通路研究肺肠合治法减轻肺水肿治疗急性肺损伤的作用机制

目的 探究肺肠合治法（麻黄汤+大承气汤）减轻脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）大鼠肺水肿的作用和机制。方法 Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、肺肠合治低、中、高剂量组、地塞米松组。采用LPS（10 mg·kg^-1）腹腔注射复制ALI大鼠模型，造模后开始灌胃给药，正常组给予生理盐水（25 mL·kg^-1），肺肠合治低（5 g·kg^-1）、中（7.5 g·kg^-1）、高（10 g·kg^-1）剂量组分别给予（麻黄汤+大承气汤）灌胃，阳性药组给予地塞米松（5 mg·kg^-1），分别于LPS注射后0、8、16 h给药，共3次。给药结束后取肺组织及血清，肺组织苏木素-伊红（HE）染色，进行肺水肿评分；计算各组大鼠肺组织干/湿（D/W）质量比；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清血管活性肠肽（VIP）含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠肺组织水通道蛋白1（AQP1）、水通道蛋白5（AQP5）、VIP、环磷酸腺苷（cAMP）、磷酸化蛋白激酶A（p-PKA）、蛋白激酶A（PKA）蛋白的表达量；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组大鼠肺组织中VIP mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠肺损伤明显，水肿评分升高，肺组织D/W降低（P<0.01），肺组织AQP1、AQP5、cAMP、p-PKA/PKA明显降低（P<0.05，P<0.01），VIP含量显著升高（P<0.01），肺组织VIP蛋白和mRNA表达明显升高（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，肺肠合治组大鼠肺损伤减轻，肺组织D/W显著升高（P<0.01），肺组织AQP1、AQP5、VIP、cAMP、p-PKA/PKA升高（P<0.05，P<0.01），肺组织VIP表达升高（P<0.05，P<0.01）。结论 肺肠合治法能减轻急性肺损伤造成的肺组织水肿，其机制可能通过激活VIP/cAMP/PKA信号通路，进而促进水通道蛋白AQP1、AQP5的表达，增强肺组织的水液代谢有关。     

温阳活血化痰方对蒽环类药物心脏损伤的保护机制

目的 研究温阳活血化痰方对阿霉素心脏损伤的保护作用。方法 将SD大鼠随机分为6组,空白组,模型组,温阳活血化痰方低、中、高剂量组,奥诺先组。除空白组外,其余大鼠每周给予2.5 mg·kg^-1阿霉素腹腔注射6周,累计剂量为15 mg·kg^-1。温阳活血化痰方低、中、高剂量组每日分别予4.86,9.72,19.44 g·kg^-1灌胃。空白组、模型组、奥诺先组每日予生理盐水10 mL·kg^-1灌胃。奥诺先组每周于阿霉素前30 min腹腔注射奥诺先25 mg·kg^-1,干预6周。观察大鼠一般状况并监测体质量;高分辨率小动物超声影像系统检测大鼠心功能;苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠心肌组织病理形态学改变;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠心肌组织中微管相关蛋白I轻链3（LC3）Ⅱ,自噬关键分子酵母Atg6同系物（Beclin-1）,p62蛋白的表达变化。结果 与空白组比较,模型组大鼠皮毛无光泽,进食量及活动量减少,部分便溏,精神不振,反应迟钝;体质量显著降低（P<0.01）;左心室射血分数（LVEF）和左心室缩短率（LVFS）均显著降低（P<0.01）;心肌细胞变性、水肿、断裂、溶解;心肌间质间隙扩大;心肌纤维染色不均;可见炎性细胞浸润;大鼠心肌组织中Beclin-1,LC3Ⅱ表达显著增加（P<0.01）,p62显著降低（P<0.01）。与模型组比较,温阳活血化痰方高、中剂量组体质量,LVEF,LVFS均显著增加（P<0.01）;心肌组织病理损伤不同程度减轻;LC3Ⅱ,Beclin-1蛋白表达下降（P<0.05,P<0.01）,p62表达增加（P<0.05,P<0.01）。结论 温阳活血化痰方能有效地防治阿霉素心脏损伤,其作用可能与抑制心肌细胞自噬机制相关,以高剂量效果更佳。     

温经汤加味对EM肾虚血瘀证大鼠局部微环境MMP-9、TNF-α、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ的影响及其意义＊

目的 探讨子宫内膜异位症（Endometosis，EM）肾虚血瘀证大鼠异位病灶局部MMP-9，TNF-α，CollagenⅠ、Collagen Ⅲ表达水平，以及温经汤加味对其干预作用及机制。方法 SPF级雌性未孕健康SD大鼠设为空白组；构建肾虚血瘀证大鼠模型，造模成功后，设为假手术组（仅开腹）；其余大鼠以自体内膜移植法构建EM肾虚血瘀证模型，造模成功后的大鼠分为模型组（不用药物干预）、阳性药（达那唑）组、温经汤加味组（低、中、高3种剂量）。阳性药对照组给予达那唑63 mg·kg^-1连续4周灌胃，中药低、中、高剂量组分别以5 g·kg^-1、10 g·kg^-1、20 g·kg^-1连续4周灌胃。取各组大鼠子宫内膜组织观察组织病理变化；免疫组化法（IHC）检测各组大鼠子宫内膜组织MMP-9，TNF-α的蛋白表达；蛋白免疫印迹法（WB）、实时荧光聚合酶链式反应法（RT-PCR）检测各组大鼠子宫内膜组织MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、Collagen Ⅲ基因表达。结果 与空白组、假手术组比较，EM肾虚血瘀证模型组大鼠在位、异位内膜组织中MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、Collagen Ⅲ蛋白及其基因表达在模型组子宫内膜组织升高（P < 0.01）；与模型组比较，阳性药对照组、温经汤加味治疗组大鼠MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、Collagen Ⅲ蛋白及其基因表达水平均降低（P < 0.01或P < 0.05）。结论 局部微环境免疫抑制微血管新生导致异位内膜侵袭是EM发生、发展过程中的重要病理表现，MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、Collagen Ⅲ过度表达可能促进了这一过程的发生、发展；温经汤加味通过“逆转”MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、Collagen Ⅲ等细胞因子异常升高，起到了解除局部微环境免疫抑制、阻断微血管新生的作用，在治疗EM肾虚血瘀证过程中表现出确切的疗效。     

探讨蛇床子催眠活性组分对PCPA失眠大鼠褪黑素合成限速酶AANAT的调控作用

目的 观察蛇床子催眠活性组分（CHC）对对氯苯丙氨酸（PCPA）失眠大鼠行为学、褪黑素（MT）合成限速酶芳基烷基胺N-乙酰基转移酶（AANAT）的影响，探讨其对松果体的保护机制。方法 60只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常、模型，MT阳性药，CHC高、中、低剂量6组，每组10只。除正常组其余各组腹腔注射4.5%PCPA混悬液，10 mL·kg^-1，连续2 d，建立大鼠PCPA失眠模型。造模后正常及模型组灌胃等体积2%聚山梨酯-80，MT组（10 mg·kg^-1），CHC高、中、低（60，30，15 mg·kg^-1）给予10 mL·kg^-1给药体积的药物，每日1次，连续7 d。给药4 d后分别进行旷场活动、高架十字迷宫、戊巴比妥钠协同睡眠试验，采用酶联免疫吸附法检测血清MT；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）测定松果体MT合成关键酶AANAT mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测松果体AANAT蛋白表达变化。结果 与正常组比较，模型组大鼠旷场活动总距离、站立次数、中心区持续时间明显增加（P<0.05，P<0.01），高架开臂次数及时间比例下降（P<0.05），入睡潜伏期显著延长（P<0.01）；与模型组比较，低剂量组无明显差异，其余各组大鼠活动总距离均减少（P<0.05，P<0.01），高架开臂次数百分比升高（P<0.05），入睡潜伏期缩短、睡眠时间明显延长（P<0.05，P<0.01）。与正常组比较，模型组MT含量显著下降（P<0.01）；与模型组比较，低剂量组差异无明显统计学意义，其余各组血清MT不同程度的升高（P<0.05）。与正常组比较，模型组AANAT mRNA表达量，AANAT蛋白表达量下降（P<0.01）；与模型组比较，MT组，CHC高剂量组表达量明显增加（P<0.05）。结论 CHC改善PCPA失眠行为学指标、增加松果体细胞合成分泌MT，提高血清MT水平，与上调松果体AANAT mRNA及其蛋白的表达有关。     

覆盆子有效部位改善肾阳虚型痴呆大鼠 学习记忆作用机制研究

目的: 考察覆盆子有效部位对D-半乳糖联合氢化可的松造成肾阳虚型痴呆大鼠的影响,初步阐明覆盆子有效部位改善肾阳虚型痴呆大鼠学习记忆的作用机制。方法: 大鼠ip D-半乳糖125 mg·kg^-1,连续6周,后2周im 氢化可的松混悬液25 mg·kg^-1,造成肾阳虚痴呆模型,空白组和模型组灌胃生理盐水,其余各组每天均预防性灌胃覆盆子氯仿部位或乙酸乙酯部位高、低剂量(均按生药量计为24,12 g·kg^-1),连续4周。进行历时5 d的Morris水迷宫实验后,取大鼠皮层进行乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase, AchE)和胆碱乙酰化转移酶(choline acyltransferase, ChAT)活性检测、取海马CA1区进行HE染色和tau蛋白免疫组织化学检测。结果: 与空白组相比,模型组学习记忆能力下降,皮层AchE活性显著升高,ChAT活性显著降低,海马CA1区Pser404-tau阳性细胞明显增加;与模型组比较,覆盆子氯仿部位高、低剂量组、覆盆子乙酸乙酯部位高、低剂量组均能不同程度改善痴呆大鼠学习记忆能力,降低皮层AchE活性,升高ChAT活性;增加海马CA1区细胞总数,减少坏死细胞数,降低细胞坏死率;减少海马CA1区Pser404-tau阳性细胞数。结论: 覆盆子有效部位可能通过降低AchE活性,升高ChAT活性,保护海马CA1区神经元,减少tau蛋白表达而起到改善肾阳虚型痴呆大鼠学习记忆。     

基于16S rDNA测序探讨地黄饮子对帕金森病肾虚证大鼠肠道菌群的影响＊

目的 探讨地黄饮子对D-半乳糖所致肾虚证及鱼藤酮诱导帕金森病（Parkinson''s disease，PD）大鼠的疗效及其对肠道菌群（Gut Microbiota，GM）的影响。方法 选取90只6-8周龄雄性健康SD大鼠，随机分为6组：正常组、模型组、左旋多巴组、地黄饮子高、中、低剂量组。造模采用腹腔注射D-半乳糖（150 mg·kg^-1）6周及背部皮下注射鱼藤酮（0.5 mg·kg^-1）4周，联合诱导PD肾虚证病证结合模型，观察地黄饮子高、中、低剂量对PD肾虚模型大鼠的疗效评价。通过地黄饮子治疗，对大鼠粪便标本中的细菌16S rDNAV3-V4区域扩增子测序，比较PD肾虚模型大鼠GM特点及地黄饮子干预后GM变化。结果 本研究共得到448个OTU。PD肾虚模型大鼠存在GM失衡的情况，主要与厚壁菌门、拟杆菌门和放线菌门及其下属部分菌群丰度水平的变化相关。物种注释结果方面，相较于模型组，地黄饮子中、高剂量组厚壁菌门显著性升高（P<0.01）、拟杆菌门降低（P<0.05），而放线菌门地黄饮子低剂量组显著性升高（P<0.01），高剂量组则显著性降低（P<0.01）。相较于模型组，地黄饮子中剂量组ACE指数、Chao1指数、Simpson指数、Shannon指数等Alpha多样性指数均增加（P<0.05），可见地黄饮子干预后物种丰富度和多样性有显著改变。通过Beta多样性分析可见，地黄饮子中、高剂量组分别与空白组大鼠的GM存在关联。而地黄饮子低、中剂量组大鼠GM的LDA评分下多样性较为突出，且有相应关联菌群相富集。结论 本研究运用16S rDNA测序技术预测地黄饮子治疗PD肾虚证的作用机制，初步揭示了地黄饮子通过保护PD大鼠肠道黏膜屏障，改善肠道屏障通透性，调节厚壁菌门、拟杆菌门和放线菌门及其下属部分菌群丰度水平的变化等作用，改善PD大鼠运动障碍，而发挥防治PD的作用。研究结果预测了地黄饮子治疗PD的作用机制可能与调节GM动态的相对平衡有关，可为从肠道微环境角度揭示补肾法改善PD作用机制的研究提供参考。     

养阴益肾颗粒对糖皮质激素致肾阴虚证大鼠HPA轴的影响

目的:观察养阴益肾颗粒(YYP)对糖皮质激素(GC)致肾阴虚证大鼠下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴(HPA轴)的影响。方法:将60只Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,YYP高、中、低剂量组(6.48,3.24,1.62 g·kg~(-1)·d~(-1))和六味地黄丸组(0.39 g·kg~(-1)·d~(-1)),每组10只。除正常组外,其他各组大鼠予氢化可的松50 mg·kg-1ip 7 d建立肾阴虚证模型。正常组和模型组大鼠予蒸馏水(10 m L·kg-1·d-1)ig,YYP高、中、低剂量组和六味地黄丸组大鼠予相应药物ig,共7 d。观察大鼠活动度、体毛、尾色、摄食量、大便、体重等一般情况的变化,摘取两侧肾上腺,称肾上腺质量及计算肾上腺脏器指数,ELISA法检测血浆促肾上腺皮质激素释放激素(CRH),促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质醇(CORT)浓度,RT-PCR检测下丘脑CRH,垂体ACTH,肾上腺CORT mRNA的表达,并行肾上腺组织形态学检查。结果:与正常组比较,模型组大鼠一般情况较差,体重明显减轻(P0.01),肾上腺质量,肾上腺脏器指数,CRH,ACTH,CORT均明显降低(P0.01),CRH,ACTH,CORT mRNA表达明显下调(P0.01),肾上腺病变重;与模型组比较,YYP高、中、低剂量组和六味地黄丸组大鼠一般情况得到改善,给药后体重增加(P0.01),肾上腺质量,肾上腺脏器指数,CRH,ACTH,CORT升高(P0.05,P0.01),CRH,ACTH,CORT mRNA表达明显上调(P0.01),肾上腺病变程度减轻。结论:养阴益肾颗粒对GC所致肾阴虚证大鼠HPA轴的抑制状态具有拮抗作用。     

四神丸对腹泻型肠易激综合征模型大鼠及离体结肠的实验研究＊

目的探讨四神丸(SSW)对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠腹泻和内脏敏感性及离体分为对照组、模型组、SSW高剂量组(7.2 g·kg^-1灌胃)、SSW中剂量组(3.6 g·kg^-1灌胃),SSW低剂量组(1.8 g·kg^-1灌胃),匹维溴铵组(15 mg/kg灌胃),灌胃每天1次,共4周。用腹壁逃避反射(AWR)评估结肠高敏感性变化,用粪便粒数和腹泻指数评估大鼠腹泻状况,同时观察不同浓度SSW混悬液对大鼠离体结肠自发收缩、乙酰胆碱(Ach)和高钾引发的痉挛性收缩的作用。结果与对照组比较,模型组AWR评分、痛觉压力阈值、维溴铵组痛觉压力阈值均明显升高(P<0.01);SSW低、中、高剂量组和匹维溴铵组粪便粒数及腹泻指数均明显下降(P<0.05或0.01);SSW(0.75,1.5,3,6 g·L^-1)对Ach及高钾促发的张力性收缩均有浓度依赖的舒张作用(P<0.01)。结论四神丸能够改善IBS-D模型的排便功能和痛觉过敏,其作用机制可能是通过钙通道竞争拮抗作用抑制结肠运动亢进和肠痉挛。     

七味温阳软胶囊补肾温阳作用的实验研究

目的: 研究观察七味温阳软胶囊对肾阳虚模型动物垂体-肾上腺皮质系统、垂体-性腺系统功能及应激反应的影 响。方法: 将60只Wistar种大鼠、78只昆明种小鼠,分别按性别体重均衡随机分为正常对照组,模型对照组,阳性药对照组,七味温阳软胶囊高、中、低剂量组。大鼠从给药第1天起,除正常对照组外,各组均ig氢化可的松5×10^-5g·kg^-1 每天1次,连续9 d,制造肾阳虚模型,继续给药至第12天,各组动物股动脉取血,离心,取血清,检测促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(Cortisol)水平;小鼠连续给药14 d,于给药的第8至14天时,除正常对照组外,每只ig氢化可的松0.75 mg·kg^-1,每天1 次,连续7 d,末次给药后检测小鼠包皮腺、精液囊脏器指数及小鼠游泳和耐缺氧时间。结果: 七味温阳软胶囊0.96,0.48 g·kg^-1 2个剂量可明显升高肾阳虚模型大鼠血清ACTH,Cortisol水平(P<0.05);1.35, 0.68 g·kg^-12个剂量可明显增加肾阳虚小鼠包皮腺脏器指数(P<0.05);0.68,0.34 g·kg^-12个剂量可明显增加肾阳虚小鼠精液囊脏器指数(P<0.05,P<0.01);1.35,0.68,0.34 g·kg^-13个剂量均可明显延长小鼠游泳时间和常压耐缺氧时间(P<0.05)。结论: 七味温阳软胶囊对肾阳虚模型大鼠垂体-肾上腺系统功能和小鼠垂体-性腺系统功能具有一定的保护作用。     

N-乙酰半胱氨酸对顺铂诱导急性肾损伤后肾脏组织氧化应激水平的影响

目的:研究顺铂(cisplatin,CDDP)诱导大鼠急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)后肾脏组织氧化应激水平及N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)的干预作用.方法:静脉注射CDDP制备大鼠AKI模型.大鼠随机分为空白对照组、AKI模型对照组、NAC低、中、高剂量组(50,100,200 mg· kg-1)、维生素C(Vit C)对照组(100 mg· kg-1).大鼠预先连续给药3d后,给予CDDP,再继续给药5d.测定大鼠体质量、肾质量、肾脏指数、尿蛋白排泄率.试剂盒测定肾脏组织乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、15-F2t-异前列烷(15-F2t-Isop)水平.免疫组化法观察8-OHdG阳性细胞.Western blot测定Cu-Zn-SOD蛋白表达.结果:与空白对照组相比,CDDP诱导AKI模型组体质量、肾质量、肾脏指数下降,尿蛋白排泄率由(0.43±0.09)g显著增加为(2.24±0.41)g,LDH,MDA,15-F2t-Isop,8-OHdG阳性细胞显著增加,CAT,SOD,GSH,GSH-Px和Cu-Zn-SOD表达显著下降(P＜0.01).与AKI模型组相比,NAC组尿蛋白排泄率降低为(0.56±0.19)g,具有显著差异.同时,AKI模型组肾脏指数,LDH,MDA,SOD,CAT,15-F2t-Isop,GSH,GSH-Px水平和8-OHdG阳性细胞数分别为(2.71±0.55) ×10-2,(6.92±0.51)KU·mg-1,(68.6±9.2) nmol·mg-1,(61±15) U·mg-1,(5.12±1.04) U·mg-1,(63.2±9.62) ng·mg-1,(159±18) nmol·mg-1,(72±15) U·mg-1,(12.25±2.23)个,NAC组200 mg·kg-1组分别为(2.96±0.32) ×10-2,(4.62±0.26) KU·mg-1,(39.5±7.9) nmol·mg-1,(109±20) U·mg-1,(9.85±1.21) U·mg-1,(41.8±4.65)ng· mg-1,(225±16) nmol· mg-1,(128±22) U·mg-1,(3.26±0.96)个,两组相比较,具有非常显著差异(P＜0.01),Cu-Zn-SOD表达显著增加(P＜0.01).结论:NAC有效拮抗CDDP的肾损伤作用,可能与其增强肾脏组织抗氧化活性、降低CDDP诱导AKI时肾脏组织氧化应激水平有关.     

肾脾阳虚大鼠模型及桂附理中丸对大鼠海马衰老变化的影响

目的:本实验首次采用im氢化可的松和ig大黄水煎液复合方法复制肾脾阳虚模型,观察桂附理中丸对肾脾阳虚大鼠大脑海马组织的影响以及温补脾肾方药的调节作用.方法:8周龄SD大鼠40只,雄性,随机分为正常对照组、模型组、维生素E组和桂附理中丸组4组.正常对照组大鼠每天上午8:00 im生理盐水5 mL·kg-1,同时ig生理盐水10 mL·kg-1,下午14:00 ig生理盐水10 mL·kg-1;其余组大鼠上午8:00 im氢化可的松25 mg· kg-1,同时ig大黄水煎液4 g·kg-1,下午14:00模型组ig生理盐水10mL·kg-1,维生素E组ig维生素E混悬液18×10-3g·kg-1,桂附理中丸组ig桂附理中丸混悬液1.62 g·kg-1,共30 d.电镜下观察海马组织超微结构改变;流式细胞仪检测细胞周期.结果:肾脾阳虚模型可使大脑海马CA1区细胞器及神经元出现衰老表现,细胞老化率明显升高(P＜0.05),与模型组比较,维生素E组及桂附理中丸组大脑海马细胞器增多,脂褐素沉积减少,细胞老化率明显下降(P＜0.05),桂附理中丸组大鼠海马CA1区细胞轮廓清晰,无细胞器及神经元细胞衰老征象.结论:实验大鼠海马组织的衰老变化是肾脾阳虚模型的明显病理改变,桂附理中丸具有调节海马神经细胞、恢复细胞周期的功效.