3种镍化合物转化细胞中DNA损伤的研究

[目的]探讨3种不同的镍化合物转化细胞中是否存在DNA链断裂和DNA-蛋白质交联等DNA损伤,进一步揭示不同溶解度镍化合物的相对致癌性。[方法]以培养液为溶剂对照,B(a)P为阳性对照,3种镍化合物转化BALB/c-3T3细胞中的DNA链断裂研究采用单细胞凝胶电泳试验(彗星试验),DNA-蛋白质交联物的检测则应用125I-后标记技术。[结果]不溶性结晶型硫化镍(NiS)和2种水溶性镍化合物(NiCl2和NiSO4)在中等细胞毒性反应剂量水平上所诱导的BALB/c-3T3转化细胞中,与非转化对照细胞(DNA慧星尾长13.4±1.75 μm)比较,有明显的DNA链断裂和DNA-蛋白质交联形成,其中以NiS所致的遗传损害最为显著,表明DNA链断裂和DNA-蛋白质交联这两项遗传终点是有用的生物标志,并与镍的细胞转化及其相对致癌作用相关。[结论]除了不溶性NiS具有强致癌性外,部分水溶性镍化合物如NiCl2也具有较强的致癌作用,部分解释了不同种类镍化合物的细胞转化作用及其相对致癌性。     

双向电泳分析结晶型NiS诱发人支气管上皮细胞恶变后的蛋白表达差异

[目的]建立双向凝胶电泳分析方法，比较结晶型NiS诱发入支气管上皮细胞恶变后的蛋白表达差异。[方法]采用一步法分别提取人支气管上皮细胞系16HBE细胞和结晶型NiS诱发该细胞系的恶性转化细胞N-2细胞的可溶性总蛋白，经双向凝胶电泳分离、银染显色、用双向电泳凝胶图像分析软件ImageMaster2D3．10分析两者之间可溶性蛋白的差异表达。[结果]获得了分辨率和重复性较好的双向电泳银染图谱。图像分析显示在恶性转化细胞中检测到19个新的蛋白点，同时有47个蛋白点消失，有140个蛋白点在两种细胞中表达量有显著差异，其中89个蛋白点在N-2细胞中表达升高，51个蛋白点在N-2细胞中表达降低。[结论]双向电泳技术分析NiS诱发细胞恶性转化后蛋白质组发生了变化，这将为镍致癌相关的蛋白的研究和鉴定奠定基础。     

NiCl2诱导人支气管上皮细胞系恶性转化的研究

目的 建立NiCl2诱导永生化人支气管上皮细胞系(16HBE)恶性转化的模型，为下一步关于镍化合物致癌的分子机制的研究提供相应的恶性转化细胞。方法 通过克隆形成率实验确定NiCl2诱导16HBE细胞转化浓度后，对16HBE细胞进行分阶段多次染毒，每隔20d染毒1次，每次染毒24h。染毒12次后，通过软琼脂集落形成试验和裸鼠体内致瘤试验鉴定细胞恶性转化程度。结果 经NiCl2多次处理，16HBE细胞至75代时，细胞生长速度加快，排列紊乱，失去接触抑制，出现复层生长，并可在软琼脂上生长，且呈剂量一反应关系，但在第75代之前的细胞则不能在软琼脂上生长。转化细胞在裸鼠体内成瘤，病理组织学证实为低分化鳞状细胞癌。结论NiCl2具有使16HBE细胞发生恶性转化的能力。     

镍、铬等金属与非职业暴露人群肺癌的关系

目的　研究镍、铬等金属毒物在非职业暴露人群肺癌发生中的作用。方法　收集无金属类毒物职业接触史、经手术切除的肺癌组织 5 5例 ,肺良性病变或意外死亡者的正常肺组织 2 3例 ,用感耦等离子体 -原子发射光谱仪 (ICP -AES)检测肺组织中镉 (Cd)、铬 (Cr)、镍 (Ni)、铅 (Pb)、铍 (Be)、砷 (As)等金属和类金属毒物的含量 ,按吸烟史和细胞类型进行分层分析 ;并用硫化镍和苯并 (a)芘 -C ,8,二醇 - 90环氧化物 (BPDE)诱导正常人气管上皮细胞系发生恶性转化的癌变模型 ,检测转化细胞经裸鼠成瘤组织的金属类毒物的含量。结果　在肺组织中可检出多种金属类毒物 ,在肺癌组织中镍和铬的含量分别为 ( 10 5 172± 2 6 73 9)和 ( 7 6 90 6± 3 10 12 ) μg/ g干肺组织 ,显著高于正常肺组织的镍、铬含量 ( 4 12 18± 2 175 2 )和 ( 4 12 44± 2 75 38) μg/g干肺组织 ,t值分别为 10 14和 5 0 4,P <0 0 1。按吸烟和细胞类型分层 ,吸烟者肺组织中的镍、铬含量皆高于非吸烟者 ,P <0 0 5 ;肺鳞癌中镍的含量 ( 12 5 6 0 9± 2 345 5 )μg/ g干肺组织高于肺腺癌 ( 8 2 377± 2 782 8) μg/ g干肺组织 ,t=6 2 5 ,P <0 0 1。在用硫化镍和BPDE诱导正常人气管上皮细胞系发生恶性转化经裸鼠成瘤的癌组织中 ,硫化镍诱     

恶性转化人支气管上皮细胞基因组甲基化观察

目的对反式二氢二醇环氧苯并芘（anti-BPDE）和结晶型硫化镍（NiS）恶性转化人支气管上皮细胞（Hu-man bronchial epithelia,16HBE）基因组DNA甲基化状况进行研究,寻找DNA甲基化异常的基因片段,探讨反式-BPDE和NiS的表遗传致癌机制.方法采用限制性指纹识别技术（MSRF）,对反式-BPDE和NiS分别诱导转化及裸鼠成瘤的4种人支气管上皮细胞株基因组进行分析;对异常甲基化基因阳性片断采用TA克隆技术构建测序载体,对测序结果进行同源性分析比较.结果发现结晶型NiS恶性转化人支气管上皮细胞基因组存在高甲基化的DNA片段,其中一基因片段与编码鼻咽癌易感性蛋白ANKRD11基因序列99%同源.另一基因片段与HOXA3基因序列99%同源;未发现反式BPDE恶性转化人支气管上皮细胞基因组DNA异常甲基化基因片段.结论结晶型NiS恶性转化人支气管上皮细胞DNA的高度甲基化可能导致基因表达抑制.可能是结晶型NiS致癌的一种表遗传机制;反式BPDE致癌过程可能与基因组磷酸胞苷酰（CpG）岛甲基化异常关系不明确.     

硫酸镍对永生化人支气管上皮细胞系的恶性转化研究

目的 建立硫酸镍(NiSO4)对永生化人支气管上皮细胞系(16HBE)的恶性转化模型，为下一步关于镍化合物致癌的分子机制的研究提供相应的恶性转化细胞。方法 通过克隆形成率实验确定NiSO4对16HBE细胞转化浓度后，对16HBE细胞进行分阶段多次染毒：每隔20d染毒一次，每次染毒24h。染毒12次后，通过软琼脂集落形成实验和棵鼠体内致瘤实验鉴定细胞恶性转化程度。结果 经NiSO4多次处理16HBE细胞至75代时，细胞生长速度加快，排列紊乱，失去接触抑制，出现复层生长，并可在软琼脂上生长，且呈剂量反应关系，但在第75代之前的细胞则不能在软琼脂上生长。转化细胞在裸鼠体内形成瘤，病理组织学证实为低分化鳞状细胞瘤。结论 NiSO4具有使16HBE细胞发生恶性转化的能力。     

致癌物诱导恶变细胞中线粒体高变区序列分析

目的检测苯并（a）芘代谢产物反式二羟环氧苯并芘（反式-BPDE）及结晶型硫化镍（NiS）诱发永生化人支气管上皮细胞系（16HBE）恶性转化过程中线粒体DNA控制区序列变化。探讨线粒体DNA控制区在环境致癌物苯并（a）芘及硫化镍致癌作用中是否存在靶分子序列。方法 应用银染PCR-单链构向多态性（SSCP）方法及测序方法分析恶变细胞中线粒体DNA高变区的序列变化。结果 经反式-BPDE和NiS诱导恶变的人支气管上皮细胞系线粒体高变区均未发现异常改变。结论 线粒体基因控制区可能并非是化学致癌物诱发肺癌的靶序列。     

结晶型硫化镍诱发细胞恶性转化相关蛋白硫氧还原蛋白过氧化物酶2的鉴定

目的利用蛋白质组学技术识别结晶型硫化镍（NiS）诱发人支气管上皮细胞恶性转化相关蛋白的差异表达，探讨镍致癌的分子机制。方法应用二维凝胶电泳与相应软件分析结晶型NiS诱发细胞恶性转化后蛋白质组变化，基质辅助激光解吸电离-飞行时间-质谱（MALDI-TOF-MS）结合数据库检索鉴定恶性转化相关蛋白。结果获得分辨率和重复性较好的二维凝胶电泳图谱，在相对分子质量14400～94000、等电点3～10范围内分离出约700个不同蛋白质点，对差异表达明显的等电点约6，相对分子质量约25000的蛋白质点进行质谱分析，鉴定出等电点为5．66，相对分子质量为21890的蛋白／硫氧还原蛋白过氧化物酶2（Peroxiredoxin 2，PDX2），并发现该蛋白在恶性转化细胞中高表达。结论蛋白PDX2可能是参与结晶型NiS诱发人支气管上皮细胞恶性转化过程的重要蛋白分子，与细胞恶性转化有关。     

扶正解毒含药血清对硫化镍诱导人支气管上皮细胞转化的保护作用

目的探讨硫化镍诱导人支气管上皮(16HBE)细胞恶性转化作用以及扶正解毒汤(FJD)的保护作用,研究硫化镍致癌的分子机制以及扶正解毒汤对防癌治癌的作用。方法用不同浓度的硫化镍在体外多次处理16HBE细胞,利用刀豆凝集素A(ConA)凝集实验和软琼脂集落形成实验进行转化细胞的恶性鉴定;测定16HBE细胞内镍离子和自由基含量,同时加入扶正解毒含药血清,观察其保护作用。结果硫化镍可诱导16HBE细胞的恶性转化,转化细胞的生长速度加快、排列紊乱、失去接触抑制、呈交叉重叠生长、转化率呈剂量—效应关系。转化细胞可被低浓度ConA凝集并在软琼脂内生长。硫化镍暴露组细胞内镍离子和自由基含量明显增加。中、高剂量的扶正解毒含药血清可通过细胞内、外途径发挥抗氧化、清除自由基效应。结论硫化镍有较强的诱导16HBE细胞恶性转化的能力,具有致癌性。FJD血清对于硫化镍诱导的16HBE细胞恶性转化具有保护作用。     

镍化合物致氧化应激损伤机制的研究进展

镍化合物(nickel compounds)是广泛使用的工业原料或产品,工业生产中常见的镍化合物主要有氧化镍(Ni2O3)、一氧化镍(NiO)、硫酸镍(NiSO4·7 H2O)、氢氧化镍[Ni(OH)2]、氯化镍(NiCl2)、硝酸镍[Ni(NO3)2·6H2O]和羰基镍[Ni(CO)4]等,其中,氧化镍、羰基镍和硫酸镍等是一类多器官毒物。国内外有关报道显示,镍及     

某矿接镍作业的劳动卫生学调查研究

1984—1985年在某镍矿的采矿、选矿、冶炼及机修厂(对照)进行了劳动卫生条件和工人健康状况的调查。生产环境空气监测结果表明,空气中钴、砷、铬、锰浓度均很低,二氧化硫浓度仅偶有超标。空气中镍浓度,机修厂低于其余三个厂,采矿、选矿又显著低于冶炼,各主要生产岗位和工种的平均浓度均在1mg/m~3以下。工人健康检查结果(n=348)提示,症状和体征出现率与空气镍浓度之间未见到有规律性的联系;尿镍与空气镍浓度两者之间基本平行。认为车间空气镍低于1mg/m~3对作业工人健康状况无明显影响。     

指甲镍含量与接镍水平关系的研究

对某镍业公司不同生产车间空气中镍浓度和工人指甲镍含量进行了测定。共获得空气镍浓度数据５７６个，指甲镍含量数据２４０个。根据生产过程过程和卫生学特征。将所得结果按碎矿压球，电炉转炉、氧化镍焙烧、硫酸镍，汽车修配厂５个观察组进行了分析，看出指甲镍含量与空气镍浓度之间呈现一定的接触水平一反应关系。剔出硫酸镍组数据，仅对镍化合物存在形态相同的其余４个组的进行相关性分析，ｒ＝０．９７２，Ｐ＝０．０２８．本研     

某电冶厂镍冶炼劳动卫生条件与工人健康状况调查研究

1983～1986年对某厂镍冶炼作业劳动卫生条件和工人健康状况进行了调查。近年粉尘浓度在降低。作业地点空气镍平均浓度波动在0.0095mg/m~3～1.7331m g/m~3,82.56％的样品浓度低于0.5mg/m~3。熔化工序空气中Co、Cd、Cu、Zn、Pb及As浓度很低或低于MAC;但二氧化硫、氯化氢及硫酸雾浓度较高,有些样品浓度超过国家标准。对428名接镍工人和111名机械加工工人(对照)进行了健康检查。除尿镍增高外,检出的临床所见不能完全归因于接触镍。从现场资料分析,车间空气中镍及其无机化合物的最高容许浓度可考虑订为0.5mg/m~3。     

某镍矿作业工人接镍水平与健康状况的调查研究

1984—1985年在某镍矿对工人接镍水平和健康状况进行了调查研究。镍生产车间空气镍几何均值处在0.0083mg/m~3至0.3919mg/m~3之间.非职业性接触镍的汽修车间空气镍几何平均浓度为0.0046mg/m~3,居民区大气中为0.0056mg/m~3。用个体采样器测得结果,电炉工平均接镍水平为0.0875mg/m~3,转炉工为0.2294mg/m~3。与美国OSHA的PEL(1mg/m~3)相比,仅熔炼车间有18个样品的浓度超过了此接触限值。用分层抽样法对部分工人进行了健康检查(n=389).除生物材料中镍含量增高外,未检出可归因于接触镍的临床所见。各车间尿镍、发镍水平与空气镍浓度平行。以镍的近期效应为判断依据,当前的镍接触水平基本上是可以接受的,车间空气中难溶性镍化合物的最高容许浓度可考虑订为1.0～0.5mg/m~3。     

Nickel in the diet and its role in allergic dermatitis

There is general agreement amongst determatologists that flare of hand eczema can occur after oral exposure to nickel. Knowledge of the nickel content of foods is therefore necessary for dietitians who may counsel such patients. This review discusses the following topics: (i) current evidence for the importance of nickel sensitivity; (ii) the quantity of nickel required to provoke a reaction; (iii) the nickel content of foods and the role of low nickel diets.     

二乙基二硫代氨基甲酸钠驱镍作用的实验研究

本文用大鼠研究了带-SH基的二乙基二硫代氨基甲酸钠(Dithiocarb,简称Na-DDC或称铜试剂)和不带-SH基的新螯合剂(H-73-10)的驱镍作用。结果表明,Na-DDC对羰基镍(Ni(CO)_4〕的驱镍作用明显优于H-73-10;与此相反,H-73-10对硝酸镍〔Ni(NO_3)_2〕染毒大鼠的驱镍作用却明显优于Na-DDC。     

微量元素镍及镍超氧化物歧化酶的模拟化学

概述了微量元素镍的生物学效能,介绍了镍超氧化物歧化酶的性质和结构的最新信息,对镍超氧化物歧化酶活性中心结构及其歧化超氧离子.O2-的催化机理进行了探讨,对镍超氧化物歧化酶模型配合物的研究进展进行了综述。     

镍矿接镍作业生物学监测指标的探讨

本文目的乃在于探讨尿镍或发镍作为生物学监测指标哪个更合适。随机选取某镍矿冶炼车间工人25名为对象,用个体采样器采样测定其接触空气镍的水平,并测定尿镍与发镍含量,调查其接镍作业时间和吸烟与否。用Z-80微机进行了5个变量间的偏相关分析和逐步回归分析。结果表明,尿镍浓度与空气镍接触水平有相关趋势,发镍与目前空气镍接触水平关系不大,尿镍、发镍含量均与接镍作业时间、是否吸烟无明显关系。     

哈尔滨市健康成人指甲镍含量

对哈尔滨市７９名大学生指甲镍含量进行了测定，用对数正态分布法求出指甲镍正常上限值为３．９１μｇ／ｇ．对本建议值的科学性和适用性进行了讨论。     

镍矿工人粉尘接触量与尘肺发病关系的研究

本文用寿命表法对某镍矿的562名接尘工人,其中Ⅰ期尘肺患者7人,进行了接尘量与尘肺发病关系的研究。结果表明,如欲将尘肺患病率控制在1%以下,工作30年,作业环境平均浓度不应超过3.41mg/m~3。结果提示,从粉尘浓度、游离SiO_2含量、分散度等综合考虑,与其它金属矿山尘肺发病情况比较基本近似,未发现有何特殊性。认为其致病程度主要取决于粉尘浓度和游离SiO_2含量的高低。