p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在紫外线诱导表皮细胞凋亡中的作用

大量流行病学调查及分子生物学实验研究表明：紫外线可通过诱导活性氧及细胞因子产生DNA损伤和基因表达的改变导致细胞凋亡,这个过程非常复杂,有多个信号转导途径参与.由于细胞凋亡与皮肤癌的发生密切相关,近年来UVB诱导表皮细胞凋亡引起了人们广泛的关注.p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）是细胞内重要的信号传导系统之一,参与细胞生长、发育、分化和凋亡等一系列生理、病理过程.p38MAPK可被紫外线激活,并在紫外线诱发的细胞应答过程中发挥重要的作用.     

类叶升麻苷通过诱导血红素加氧酶-1的表达抑制MPP+诱导的PC12细胞损伤

目的 探讨类叶升麻苷(AS)是否在PC12细胞中诱导血红素加氧酶-1(HO-1)的表达进而抑制1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)诱导的神经毒性损伤.方法 类叶升麻苷(1、20和30 μmol/L)处理PC12细胞12 h,利用反转录PCR(RT-PCR)检测HO-1 mRNA表达、Western blot方法和免疫荧光方法检测HO-1蛋白的表达.1mmol/L MPP+单独或与AS处理细胞,或HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP)预处理细胞1h,MTT法检测细胞活力.结果 与正常对照组相比,AS可在PC12细胞中诱导HO-1 mRNA和蛋白的表达,AS诱导的HO-1表达主要集中在胞浆内.HO-1抑制剂ZnPP减弱AS对MPP+诱导损伤的抑制作用.结论 AS可在PC12细胞中诱导HO-1的表达,可能参与AS对MPP+诱导损伤的抑制作用.     

过表达VMAT2的CHO细胞可抵抗rotenone和MPP+的毒性作用

目的为研究毒物鱼藤酮(rotenone)和1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP )对野生型及过表达囊泡单胺转运蛋白(VMAT2)的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)的毒性作用。方法将不同浓度的MPP r、otenone与野生型(WT-CHO)和过表达VMAT2的CHO细胞(VMAT2-CHO)共培养,通过形态学改变和MTT比色法检测细胞活力来观察毒物的毒性作用。结果VMAT2-CHO细胞活力明显增强,第5~7天VMAT2-CHO数量约为WT-CHO的3倍。0.2~2.0 mmol/L的MPP (P<0.05)和0.05~1.0μmol/L rotenone(P<0.01)作用72 h,VMAT2-CHO的存活率高于WT-CHO,细胞中毒后的形态改变不如WT-CHO明显。结论过表达VMAT2的CHO细胞对MPP 和rotenone的毒性作用有抵抗。     

P38激酶介导胆红素诱导的SHSY5Y细胞凋亡

观察P38激酶在胆红素诱导神经细胞凋亡中的作用 ,探讨参与此过程的信号转导通路。将胆红素 (2× 1 0 -2g L)直接作用于体外培养的人神经母细胞瘤细胞系SHSY5Y ,利用Hochest332 58染色在荧光显微镜下观察细胞核的形态是否发生凋亡样改变 ;用P38激酶抑制剂SB2 0 3580预处理细胞后 ,在倒置光显微镜下观察胆红素作用不同时间细胞形态的变化及存活情况 ;利用流式细胞仪检测细胞凋亡率的改变。结果显示SHSY5Y细胞经胆红素作用后细胞核出现典型的凋亡样改变 ;细胞经SB2 0 3580预处理 1h ,胆红素作用 3h后凋亡率为 (1 2 1± 2 4) % ,对照组为(1 9 4± 2 7) % ;4h后凋亡率为 (39 3± 4 8) % ,对照组为 (66 2± 5 2 ) % ,差异有显著性意义 (P <0 0 1 )。提示P38激酶参与了胆红素诱导SHSY5Y细胞凋亡的信号转导过程     

凋亡抑制蛋白在细胞凋亡中的调节作用

凋亡抑制蛋白(IAP)家族是至今发现的惟一一种内源性Caspase蛋白酶抑制剂,在细胞凋亡中发挥重要的调节作用。本文结合近年来的研究进展,综述了Caspase在凋亡中的作用、IAP家族蛋白分子的结构特征、抗凋亡作用机制以及IAPs抗凋亡作用的负调控。进一步认识细胞凋亡中复杂的调控机制,为寻找与凋亡紊乱相关的疾病治疗提供了重要靶向。     

线粒体在细胞凋亡中的作用

线粒体在凋亡中的作用越来越受到重视,它在细胞凋亡中起中心作用,释放凋亡活性物质,介导凋亡的酶促反应,参与凋亡调控,决定细胞是凋亡还是坏死。     

花姜酮通过抑制氧化应激减轻MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞损伤

目的:探讨花姜酮(zerumbone,ZER)对1-甲基-4-苯基-吡啶鎓离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP~+)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的作用及其可能的分子机制。方法:采用CCK-8法检测MPP~+对SH-SY5Y细胞的毒性作用以及ZER的保护作用,采用流式细胞术检测活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量和细胞凋亡情况,采用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术抑制人帕金森病蛋白7(Parkinson disease protein 7,PARK7)基因的表达,采用Western blot法检测PARK7、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)和血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)的蛋白表达水平。结果:MPP~+可显著抑制SH-SY5Y细胞活力(P0.05),并呈剂量和时间依赖性;ZER可使经600μmol/L MPP~+处理24 h的SH-SY5Y细胞活力升高,PARK7和Nrf2蛋白表达水平显著升高(P0.05),ROS含量和细胞凋亡明显减少(P0.05),抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)具有相似的作用;沉默PARK7基因后,Nrf2和HO-1蛋白的表达水平明显下降(P0.05),ROS含量和细胞凋亡显著增加(P0.05)。结论:ZER可在体外剂量依赖性地减轻MPP~+对SH-SY5Y细胞的毒性作用,这可能与ZER激活PARK7/Nrf2/HO-1通路,继而抑制MPP~+诱导的ROS生成和细胞凋亡有关。     

稳定表达人JNK3的SHSY5Y细胞系的建立及鉴定

目的 构建人c-jun氨基末端激酶3(c-jun N-terminal kinase3,JNK3)真核表达载体,并在人神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)中稳定表达以探讨JNK3对细胞凋亡的影响.方法 以pDBleu-JNK3为模板,PCR扩增人JNK3基因全长,目的 片段亚克隆至真核表达载体pEGFP-C3,酶切及测序鉴定.LipofectamineTM 2000转染SHSY5Y细胞,并通过G418选择性培养建立稳定表达JNK3的SHSY5Y细胞系.荧光显微镜下观察细胞中JNK3表达,RT-PCR、Western印迹检测JNK3表达.结果 成功构建了pEGFP-C3-JNK3真核表达载体,并建立了稳定表达人JNK3的SHSY5Y细胞系,与对照组相比,其人JNK3基因表达明显升高.结论 稳定表达人JNK3的SHSY5Y细胞系的建立,为进一步研究人JNK3的功能及其与细胞凋亡的关系提供了重要的细胞模型和实验基础.     

短暂激活c-jun N-terminal激酶抑制胆红素诱导的SH-SY5Y细胞凋亡

探讨c junN terminal激酶 (JNK)在胆红素诱导人神经母细胞瘤SH SY5Y细胞凋亡信号转导中的作用。我们用 30 0 μmol LH2 O2 预处理SH SY5Y细胞 1h以激活JNK ,与经PBS预处理的对照组比较 ,流式细胞仪结果显示凋亡细胞百分比由 (37 4± 3 2 ) %降低到 (12 6± 2 6 ) %。为了进一步证实JNK的作用 ,在SH SY5Y细胞经H2 O2 预处理前 ,先经 2 0 μmol LJNK c jun AP1抑制剂curcumin作用 12h以抑制H2 O2 对JNK的激活 ,流式细胞仪结果显示凋亡细胞增高到 (42 8± 4 4 ) % ,curcumin完全抑制了短暂激活JNK所提供的保护作用。结果表明短暂激活JNK可能在胆红素诱导的SH SY5Y细胞凋亡中提供抗凋亡信号 ,提示激活JNK可保护神经细胞     

JNK信号转导通路在NGF抗6-OHDA诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的： 以6-羟基多巴胺(6-OHDA)作用于大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12 cells)以诱导其凋亡,然后在其中分别加入神经生长因子（NGF）及c-Jun氨基端激酶（JNK）阻断剂SP600125,研究在加入NGF后JNK的活性与凋亡的关系。方法: 实验分为对照组、6-OHDA组、NGF组、6-OHDA+NGF组、6-OHDA+JNK阻断剂SP600125组,以流式细胞分析法检测各组PC12细胞的凋亡率,以免疫印迹（Western blotting）法检测各组PC12细胞JNK的活化情况。结果: 6-OHDA导致PC12细胞凋亡,JNK1活性提高;预孵SP600125或NGF15min后再加入6-OHDA则PC12细胞凋亡率及JNK1活性均降低。结论: JNK1参与了6-OHDA致PC12细胞凋亡作用,NGF抗6-OHDA所诱导的PC12细胞凋亡作用与其抑制JNK的活化有关。     

整合素细胞信号转导通路与肝星状细胞行为

Integrins are the main mediators of the complicated interaction between hepatic stellate cells (HSCs) and extracellular matrix (ECM) components. Signal transduction by integrins is initiated by both occupancy and crosslinking of integrins by ECM components. Focal adhesion kinase (FAK) and mitogenactivated protein kinase (MAPK), which are the downstream molecules, involve in integrin - mediated cellular behaviors. In this review, we briefly summarize the integrin‘ s structure, intracellular signaling cascades and its role in HSC behaviors, such as activation, proliferation and aoontosis.     

Survivin在MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡过程中的作用

目的探讨存活素(Survivin)能否抑制(1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP~+)诱导的神经元(SH-SY5Y细胞)的凋亡过程。方法运用1 mmol/L MPP~+处理SH-SY5Y细胞,诱导其发生凋亡,建立帕金森病的细胞模型,采用不同浓度的Survivin进行预处理,使用倒置显微镜观察细胞形态,采用MTT法、Real-time PCR、Western blot检测相关指标,进而评价Survivin对SH-SY5Y凋亡的作用。结果 1 mmol/L MPP~+作用24 h可诱导SH-SY5Y的凋亡,显著降低细胞存活率(F=13.32,P=0.000)。MPP~+作用前,预先经Survivin处理2 h的SH-SY5Y细胞的存活率显著提高(F=13.32,P=0.000,P=0.000,P=0.000),并呈剂量依赖性关系。Real-time PCR结果显示Survivin能够显著抑制SH-SY5Y细胞中凋亡蛋白Caspase 3和Caspase 9的表达水平(F=61.57,P=0.000,P=0.000,P=0.000;F=54.26,P=0.001,P=0.000,P=0.000);Western blot结果亦显示Survivin能够显著抑制SH-SY5Y细胞中凋亡蛋白Caspase 3和Caspase 9的表达水平。结论 Survivin能够剂量依赖性地抑制MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其机制可能与阻断Caspase信号通路相关。     

p38MAPK参与千金藤素诱导的心肌细胞凋亡

目的: 探讨千金藤素(CEP)致Sprague-Dawley(SD)乳大鼠心肌细胞的凋亡作用及其信号途径。方法: 应用MTT法检测千金藤素对心肌细胞活性的抑制作用;利用Hoechst 33342染色及Western blotting方法检测凋亡相关信号分子caspase-3,观察CEP致心肌细胞凋亡的作用;采用Western blotting法观测 CEP对有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)家族3个主要信号分子c-Jun氨基端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)、p38 MAPK磷酸化水平的影响,并利用ERK和p38 MAPK的特异性抑制剂,分别验证两种分子所介导的信号通路在CEP致心肌细胞凋亡中的作用。结果: (1)CEP能够剂量依赖和时间依赖地抑制心肌细胞的活性。(2)CEP作用于心肌细胞,出现细胞核碎裂现象和caspase-3激活。(3)CEP作用下p38 MAPK和ERK磷酸化水平显著增强,JNK的磷酸化状态未发生显著改变。(4)p38 MAPK磷酸化抑制剂SB203580显著减轻CEP对心肌细胞活性的抑制作用;ERK磷酸化抑制剂PD98059不能影响CEP对心肌细胞活性的抑制作用。结论: p38 MAPK参与CEP致心肌细胞凋亡作用。     

Mitogen-activated protein kinases and apoptosis in PIN

 Mitogen-activated protein (MAP) kinases are key elements of the signalling systems needed to transduce different extracellular messages into cellular responses. At least three parallel MAP kinase pathways have been identified: one, stimulated by serum and growth factors to activate extracellular signal-regulated protein kinases (ERKs) by dual tyrosine and threonine phosphorylation, triggers cell proliferation or differentiation; the other two, induced by a variety of cellular stresses to activate c-jun N-terminal kinases (JNKs) and reactivating kinase (p38/RK), result in growth arrest and induction of apoptosis. Mitogen-activated protein kinase phosphatases (MKPs) inactivate MAP kinases through dephosphorylation and, thus, can modulate the MAP kinase pathways. Expression of JNK-1, ERK-1, p38/RK and MKP-1 proteins was investigated by immunohistochemistry and expression of MKP-1 mRNA by in situ hybridisation in 50 cases of high-grade prostatic intraepithelial neoplasia (PIN), thought to represent the precursor of prostate cancer. The frequency of apoptotic cells was also determined in these cases. Overexpression of the three MAP kinases and MKP-1 mRNA was found in all cases of high-grade PIN compared with normal prostate. Immunoreactivity for MKP-1 protein was found to be as intense as in normal glands in 30% and weaker in 56% of the PIN cases. Fourteen per cent of PIN cases did not stain with MKP-1 antibody. The proportion of apoptosis was significantly higher (P < 0.008) in PIN lesions that did not express MKP-1 protein than in those that did. These results are consistent with our previous demonstration of preferential inhibition of the apoptosis-related kinases by MKP-1 and further support the contention that MKP-1, even in PIN, may shift the balance existing between cell proliferation and death. When expressed, it may inhibiting those pathways that lead to apoptosis. Received: 27 August 1997 / Accepted: 29 December 1997     

Toll信号通路对急性心肌梗塞患者树突状细胞功能影响

目的探讨Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)介导丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号转导在体外对急性心肌梗塞(acute myocardial infarction,AMI)患者树突状细胞(dendritic cell,DC)的功能影响。方法将去年我院住院患者分3组:AMI组、稳定性心绞痛(stable pectoris,SP)组及正常对照组,各自从外周血中体外培养DC,各组DC分别应用流式细胞仪检测细胞表面TLR及CD80水平,RT-PCR检测TLR的mRNA水平,免疫印迹法检测MAPK家族中p38及JNK水平;HSP60刺激各组DC后分别应用ELISA法检测IL-6及TNF-α水平。结果 AMI组中DC表达TLR及MAPK家族水平、成熟标记物CD80水平、HSP60刺激后IL-6及TNF-α水平均明显升高(P<0.01)。结论 TLR介导MAPK信号转导参与AMI患者DC的活化过程。     

阻断ERK途径对地塞米松诱导胸腺细胞凋亡中线粒体膜电势的影响

目的： 研究阻断ERK途径对地塞米松（DEX）诱导的胸腺细胞凋亡中线粒体膜电势的影响。 方法： 利用PD098059（PD）阻断小鼠胸腺细胞ERK途径，分别设对照组（control）、单纯PD组（PD only）、DEX组和PD＋DEX组；在3 h、5 h和7 h时点，利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡；在3 h、7 h和11 h，利用JC-1染色流式细胞术检测线粒体膜电势（△ψm）变化。 结果： 在1 μmol·L-1 DEX刺激下，小鼠胸腺细胞在3 h、5 h和7 h凋亡率分别为(19.63±0.35)%、(41.84±1.67)%和(67.00±2.43)%，对照组分别为(4.98±0.39)%、(6.08±0.33)%和(9.31±0.34)%，差异显著（P<0.01）；相同时点下，PD only组细胞凋亡率分别为(7.95±0.60)%、(10.69±0.48)%和(22.20±1.24)%，显著高于对照组（P<0.01）；PD＋DEX组在3 h和5 h时点细胞凋亡率显著高于DEX组（P<0.01），而在7 h时点，两组差异不显著（P>0.05）。在3 h、7 h和11 h，DEX组△ψm降低的细胞比率分别为(21.23±1.43)%、(55.34±1.78)%和(70.88±2.87)%，对照组分别为(5.25±1.22)%、(8.01±0.97)%和(12.88±1.10)%，差异显著（P<0.01）；相同时点下，PD only组△ψm降低的细胞比率分别为(11.09±2.00)%、(16.21±2.25)%和(21.15±3.70)%，显著高于对照组（P<0.01）；PD＋DEX组在3 h和5 h时点细胞凋亡率显著高于DEX组，分别为(30.55±2.99)%和(65.22±4.32)%（P<0.01），11 h时点两组差异不显著（P>0.05）。 结论： DEX诱导小鼠胸腺细胞凋亡至少部分通过ERK途径，阻断ERK途径在该凋亡过程中具有重要生物学意义。     

异氟醚和七氟醚对新生大鼠皮质凋亡以及JNK和p38表达的不同影响

目的: 研究同等剂量的异氟醚和七氟醚对新生大鼠皮质神经元凋亡的影响以及对JNK和p38蛋白表达的不同影响。方法: 55只出生后7 d(P7)的新生大鼠(共5窝,每窝取11只),随机均分为异氟醚组(Ⅰ组)、七氟醚组(S组)和对照组(C组),各组分别吸入1.1%异氟醚、1.8%七氟醚和空气4 h。在麻醉结束后2 h每窝每组各取1只幼鼠灌注取脑,免疫组织化学法检测皮质压部后区caspase-3表达(n=5);另外,每窝C组在麻醉处理0 h,Ⅰ组和S组分别在麻醉2 h、4 h取新鲜脑皮质,Western blotting检测磷酸化SAPK/JNK、磷酸化p38,以及SAPK/JNK、p38表达的变化(n=5)。结果: Ⅰ组和S组caspase-3表达分别较对照组增加441%(P<0.01)和151%(P<0.01),Ⅰ组比S组增加115%(P<0.05);Ⅰ组磷酸化SAPK/JNK表达在麻醉2 h和4 h较对照组分别增加219%(P<0.05)和181%(P<0.05),S组在2 h和4 h均与对照组无显著差异;Ⅰ组磷酸化p38表达在麻醉2 h和4 h较对照组分别增加38.9%(P<0.05)和36.9%(P<0.05),S组在2 h和4 h较对照组分别增加32.6%(P<0.05)和128.0%(P<0.01)。结论: 0.5最低肺泡有效浓度(MAC)异氟醚比七氟醚诱导更多新生大鼠大脑皮质神经元凋亡,异氟醚诱导凋亡可能与激活SAPK/JNK磷酸化有关,而七氟醚诱导凋亡可能与激活p38磷酸化有关。     

阿魏酸钠抑制Aβ25-35诱导的小鼠腹腔巨噬细胞p38MAPK活化

目的：探讨阿魏酸钠对β淀粉样肽（Aβ_25-35）介导的p38信号转导的影响。方法：培养小鼠腹腔巨噬细胞，采用Western 印迹分析p38 MAPK蛋白激酶水平。用ELISA法、免疫组化法、Griess反应，分别检测TNF-α生成量、iNOS表达和NO含量。结果： Aβ_25-35能诱导p38 MAPK的活化，显著增加腹腔巨噬细胞TNF-α、iNOS和NO水平，阿魏酸钠能显著降低Aβ_25-35诱导的腹腔巨噬细胞核蛋白p38 MAPK的含量及细胞的TNF-α、iNOS、NO水平。结论： 阿魏酸钠可抑制Aβ_25-35介导的p38 MAPK活性，使TNF-α、iNOS、NO水平降低。