54例白血病和骨髓异常增生症CFU-Mix生成的研究

作者采用极限稀释培养法进行人类多向造血祖细胞(CFU-Mix)培养,对54例白血病和骨髓异常增生症(MDS)进行了CFU-Mix生成的研究。结果:大多数急性粒细胞白血病与慢性粒细胞白血病和MDS一样,为多能造血干细胞阶段发病。光镜、扫描与透射电镜均证实白血病培养所形成的集落大多数由白血病细胞组成。~3H-TdR和~(35 59)Fe同位素显示,白血病细胞集落增殖方式和正常人明显不同。~3H-TdR掺入试     

白血病粒单祖细胞的极限稀释微孔培养

本文将极限稀释微孔培养CFU-GM技术初步用于急性非淋巴细胞白血病(ANLL)和慢性粒细胞白血病(CML)研究中,对两者的CFU-GM进行了细胞形态学、细胞化学染色及生化标记、扫描电镜、~3H-TdR掺入和细胞遗传学等方面的研究,证实极限稀释微孔培养较琼脂半固体培养更有利于白血病克隆祖细胞的生长。     

计算机在细胞生长曲线测定中的应用

用BASIC语言编写了适应于各种生物细胞体外培养指数增殖时生长曲线和倍增时间测定的应用程序,并用于人类慢性粒细胞白血病细胞系KCL—22体外培养时的测定,效果良好。     

当归多糖促进慢性粒细胞白血病细胞性树突状细胞的诱导生成

目的 探讨当归多糖(APS)对慢性粒细胞白血病细胞诱导生成树突状细胞(DCs)的影响。方法 取慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓单个核细胞，分别予粒-巨噬集落刺激因子(GM—CSF)／白介素-4(IL-4)培养或GM-CSF／IL-4联合各浓度APS(50，100，200mg／L)培养，普通光镜和电镜观察细胞形态，台盼蓝拒染法检测细胞成活率，流式细胞仪检测DCs的免疫表型(CD80，CD86，CD83)，自体或异体混合淋巴细胞反应检测DCs刺激T淋巴细胞的增殖能力。结果GM-GSF/TL-4或GM-CSF，IL-4／APS诱导培养的慢性粒细胞白血病骨髓单个核细胞均表现出典型的树突状形态而且表达高水平的免疫表型。GM-CSF／IL-4／APS培养的DCs的细胞成活率和增殖能力显著提高，CD83，CD80，CD86表达显著升高，APS组慢性粒细胞白血病细胞诱导的树突状细胞(CML-DCs)刺激T淋巴细胞的增殖能力更强。结论 GM-CSF/IL-4/APS培养的DCs的CD83，CD80、CD86表达率明显高于GM-CSF／IL-4组。GM-CSF／IL-4／APS诱生的CML-DCs刺激T淋巴细胞增殖能力强于GM-CSF／IL-4组。APS能促进IL-4和GM-CSF对CML-DCs的诱生与成熟。     

重组人造血生长因子对急性髓细胞性白血病细胞体外增殖的影响

为观察4种重组人类集落刺激因子(rh-CSF)即白细胞介素3(IL-3)、粒巨噬细胞CSF(GM-CSF)、粒细胞CSF(G-CSF)和巨噬细胞CSF(M-CSF)和两种联合时对急性髓细胞性白血病(AML)患者细胞体外增殖的影响,为临床应用提供理论依据,作者对21例AML患者的白血病细胞在体外增殖能力及4种造血生长因子刺激反应进行了研究。结果麦明,4种CSF能诱导或促进2/3患者的AML细胞的增殖,以IL-3刺激作用最强(53％),G-CSF     

肝细胞生长因子对体外培养的人子宫内膜细胞增殖的影响

目的观察肝细胞生长因子对体外培养的人子宫内膜腺上皮细胞的影响及其最佳剂量,并检测该因子对子宫内膜细胞白血病抑制因子、整合素αVβ3表达的影响。方法用MTT法检测肝细胞生长因子对腺上皮细胞的增殖影响,并用免疫组化方法检测白血病抑制因子,整合素αVβ3的表达。结果肝细胞生长因子能促进体外培养的腺上皮细胞增殖,在浓度为20 ng/mL时为峰值。且加药组白血病抑制因子,整合素αVβ3的表达为强阳性。结论 10 ng/mL的HBF即能促进腺上皮细胞的增殖,20 ng/mL时增殖水平较对照组上调3.1倍,用免疫组化检测加药组白血病抑制因子,整合素αVβ3的表达呈强阳性。     

当归多糖对人粒单系祖细胞和粒系白血病细胞株增殖分化的实验研究

目的：研究当归多糖(APS)对人粒单系造血祖细胞(CFU—GM)和急性早幼粒白血病细胞株(HL-60)增殖分化的影响。方法：采用造血细胞体外培养，形态学观察，流式细胞术和免疫细胞化学等实验血液学技术。结果：APS对正常CFU-GM的体外增殖有显著刺激作用；而对HL-60细胞的增殖却有明显的抑制作用；APS可能通过阻止HL-60细胞从静止期进入增殖周期，抑制DNA的合成等途径来抑制细胞增殖；APS可能诱导HL-60细胞发生凋亡。结论：APS有可能成为既能促进正常造血，又能抑制白血病等肿瘤细胞增殖，并诱导其凋亡或分化的天然诱导剂。     

细胞因子联合亚硒酸钠对白血病细胞凋亡的影响

目的 探讨rhGM—CSF／IL—3联合Na2SeO3对白血病细胞诱导凋亡的作用。方法 采用白血病骨髓细胞，应用MTT法检测rhGM—CSF／IL—3联合Na2SeO3对白血病细胞生长和增殖的作用；用形态学、DNA琼脂糖电泳、流式细胞术研究细胞因子与化疗药物对白血病细胞诱导凋亡的作用。结果 细胞因子、药物对白血病细胞的生长、增殖有抑制作用；而rhGM—CSF／IL—3联合Na2SeO3对白血病细胞增殖有明显的抑制作用和诱导细胞凋亡的作用。结论 细胞因子联合化疗药物对白血病细胞具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的协同作用。     

Giemsa复染过氧化物酶染色对骨髓细胞形态学的影响

过氧化物酶染色是鉴别急性粒细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性淋巴细胞白血病类型的重要细胞化学方法。其染色方法有 Washburn法、改良 Pereira法等。我科采用碘化钾 -亚甲蓝 -过氧化物酶染色方法 ,在此基础上我们对 1 0 3例白血病患者涂片进行了 Giemsa复染 ,并对是否用     

抑癌基因p14~（ARF）对慢性粒细胞白血病细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响机制研究

目的探讨抑癌基因p14ARF对慢性粒细胞白血病细胞的增殖、细胞周期及凋亡的的影响机制研究。方法应用慢病毒载体系统,将抑癌基因p14ARF导入慢性粒细胞白血病细胞系及患者来源的慢性粒细胞白血病细胞中,应用WST-8法检测细胞生长存活率,应用流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。结果应用表达p14ARF的VSV-G假构型慢病毒载体可明显抑制慢性粒细胞白血病细胞增殖,诱导细胞凋亡,但对细胞周期没有明显的影响。结论利用p14ARF基因治疗可明显抑制慢性粒细胞白血病细胞的增殖。     

IL—6介导儿童急性髓细胞性白血病细胞对地塞米松耐药的实验研究

目的：检测ＩＬ－６对原代白血病细胞的影响,并探讨ＩＬ－６是否与白血病细胞对塞米松产生耐药有关。方法：有ＲＰＭＩ１６４０培养基在不同条件下对原代白血病细胞进行体外培养,用ＭＴＴ法检测细胞增殖指数以了解细胞增殖情况,结果：①ＩＬ－６可促进ＡＭＬ原代细胞增殖（Ｐ〈０．０５）,而对ＡＬＬ原代细胞则无明显作用（Ｐ〉０．０５）;②地塞米松能抑制ＡＭＬ原代细胞增殖（Ｐ〈０．０５）;③地塞米松抑制ＡＭＬ原代细胞增     

白细胞介素-3对小鼠淋巴瘤细胞生长的影响

用小鼠IL-3分泌细胞株WEHI-3和IL-3依赖细胞株32-D,获取了IL-3并对其活性进行了鉴定。在此基础上,选用国内实验性T-S-Z白血病系统中的一株小鼠淋巴瘤细胞克隆SAC-ⅡB_2,观察了IL-3对其增殖和分化的影响。结果表明,IL-3对SAC-ⅡB_2细胞有一短暂的刺激增殖作用;IL-3作用的SAC-ⅡB_2细胞未见成熟形态迹象出现,未见成熟T或B细胞表面标志Thy-1、Smlg的表达,也未显示成熟T、B细胞的功能。     

单细胞克隆小鼠胚胎干细胞系的建立

目的:建立胚胎干细胞的培养系统及培养方法.方法:用免疫溶解法(immunosurgery)分离3.5 d的129SvJ系小鼠囊胚内细胞团,在γ射线照射的胎鼠成纤维细胞饲养层上培养,胰酶消化传代.用组织化学法、免疫组织化学方法识别细胞表面标志,常规G带法行染色体核型分析,在体、离体分别观察细胞的多向分化能力.结果:得到一个单细胞克隆129系小鼠胚胎干细胞系G11能长期稳定增殖不分化,具有正常40XY核型,碱性磷酸酶阳性、SSEA-1阳性,在体和离体条件下可分化为多种细胞.结论:以小鼠为模型成功建立了哺乳动物胚胎干细胞的培养方法和培养系统.     

鼻咽癌可溶性抗原负载DC诱导CTL杀伤鼻咽癌细胞的体外研究

目的：用负载鼻咽癌细胞(CNE)可溶性抗原的树突状细胞(dendritic cells，DC)诱导自身淋巴细胞，使之活化为鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)特异性细胞毒性T细胞(cvtotoxic T lymphocyte，CTL)，观察其对鼻咽癌细胞的体外特异性杀伤作用。方法：用GM-CSF、IL-4和TNF-α体外诱导健康成人外周血单核细胞，使其分化为高纯度DC。用鼻咽癌细胞(CNE)可溶性抗原负载成熟DC，流式细胞仪检测负载前后DC的表型特征，MLR检测负载前后DC对同种异体T淋巴细胞增殖的能力。在白细胞介素-2(IL-2)的作用下，用负载鼻咽癌细胞可溶性抗原的DC诱导自身淋巴细胞成NPC特异性CTL，通过杀伤活性实验观察它对鼻咽癌细胞(CNE)的特异性杀伤效应。结果：人外周血单核细胞体外在GM-CSF、IL-4、TNF-α诱导下获得具典型表型特征的成熟DC。负载CNE可溶性抗原对成熟DC表面共刺激分子及特异性表面标志无影响，仍有较强的刺激同种异体淋巴细胞增殖能力，所诱导的CTL对鼻咽癌细胞(CNE)有明显的特异性杀伤作用。结论：负载鼻咽癌细胞(CNE)可溶性抗原的DC所诱导的CTL在体外对鼻咽癌细胞有特异性杀伤作用，对NPC的临床治疗有潜在的应用价值。     

新型砷剂与5-Fu对HL-60细胞增殖抑制作用的比较

目的 探讨新型砷剂(AsI_3Cys)对HL-60细胞增殖的抑制作用。方法 通过细胞增殖、活力检测、形态学观察、蛋白定量及碱性磷酸酶(AKP)活性测定,观察新型砷剂与5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-Fu)对HL-60细胞增殖的影响。结果 AsI_3Cys对HL-60细胞的抑制作用与5-Fu比较有明显抑制作用;AsI_3-Cys与5-Fu联合使用能增强单药对HL-60细胞的杀伤作用。结论 AsI_3Cys可作为治疗急性髓系白血病的药物选择,AsI_3-Cys与5-Fu联合应用比单用AsI_3-Cys具有更好的治疗效果。     

细胞因子及胸腺微环境影响Treg细胞增殖机制研究

目的通过体外培养体系添加细胞因子和在体细胞因子胸腺注射的方法,探索扩增低比例低增殖活性的Treg细胞的有效体内外方法.方法采用不同浓度细胞因子IL-10和TGF-β1作为诱导剂,分析二因子体外诱导Treg细胞增殖的有效性及最适浓度,同时以二因子胸腺注射的方法,分析在成年鼠体内诱导Treg细胞增殖的可能性.结果 150 ng/ml IL-10浓度能够明显诱导Treg细胞增殖,经48、96、144 h诱导后,其增殖比例分别达到10%、18%和20%,而TGF-β1的使用浓度需达到300 ng/ml;IL-10胸腺注射后同样可提高Treg细胞的比例[第7天(5.50±1.38)%,P<0.05;第10天(6.65±2.54)%,P<0.01];TGF-β1诱导后第5天的比例为(5.19±1.69)%,较对照组也有明显升高(P<0.05).结论体外培养体系添加诱导因子增殖的方法是扩增低比例低增殖活性Treg细胞的首选方法,IL-10体内外诱导Treg细胞增殖的效能均强于TGF-β1.     

表没食子儿茶素没食子酸脂对前列腺癌PC-3细胞体外生长的抑制作用

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸脂(EGCG)对人前列腺癌细胞体外生长的抑制作用,以及其对细胞增殖周期的影响。方法:用不同浓度的EGCG处理体外生长的前列腺癌PC-3细胞,通过对细胞形态的对比观察和MTT法检测EGCG对PC-3细胞的抑制作用,通过流式细胞术检测其对细胞周期的影响。结果:与对照组相比,EGCG处理组可使细胞明显变圆,体积增大,细胞内颗粒及脱壁细胞增多;MTT法显示,EGCG能明显抑制前列腺癌PC-3细胞生长,并呈时间、剂量依赖性(P<0.05);流式细胞术显示,EGCG处理的PC-3细胞被阻止在G0/G1期,并有凋亡峰出现。结论:EGCG通过阻滞细胞的增殖周期对前列腺癌PC-3细胞体外生长有明显的抑制作用。     

不同大肠癌细胞裂解物负载健康人外周血DC瘤苗的体外试验研究

目的探讨3种大肠癌肿瘤细胞裂解物负栽的健康人外周血树突状细胞（DC）刺激同体和异体T淋巴细胞增殖活化的作用。方法对血站来源的健康人外周血采用密度梯度离心法,分离获得DC前体细胞,用临床应用药物GM—CSF、TNF—a和试验用试剂rhlL-4联合诱导培养扩增Dc,制备3种大肠癌细胞裂解物,体外致敏DC,显微镜观察Dc形态演化过程,电镜拍摄微观形态特征,流式细胞仪鉴定DC表型,ELlSA法检测肿瘤抗原致敏DC分泌IL-12水平,检测致敏DC刺激T淋巴细胞分泌的IL—lO和IF阿7水平,3H—TdR法检测成熟DC（mDC）诱导同体和异体T淋巴细胞增殖能力。结果DC形态学呈现典型树突状分化特征,mDC表达特征性免疫表型CDla、CD83,共刺激分子CD86、HLA—DR,分泌高水平IL—12,mDC与同体和异体T淋巴细胞共培养均能有效刺激T淋巴细胞增殖活化,T淋巴细胞不分泌IL-10,分泌较高水平IFN-了,3W480细胞株在各项指标上都具优势,3H—TdR法检测提示mDC不仅可以刺激同体淋巴细胞增殖,同样有效激活异体T淋巴细胞。结论来源于血站的健康人外周血是-种方便的DC前体细胞原料。联合细胞因子的培养方法可以成功诱导出成熟的DCl型细胞,引起Thl型细胞免疫反应;3种大肠癌肿瘤细胞裂解物,尤其是Sw480细胞株裂解物抗原性质稳定,能够有效促进DC分化,提高DC成熟度;负载裂解物的DC不仅刺激同体T淋巴细胞增殖,也可有效激活异体T淋巴细胞增殖,因此应用健康人异体来源的DC瘤苗刺激患者T淋巴细胞增殖,从而产生抗肿瘤免疫反应的设想是可行的。     

人IL-12在昆虫细胞中的表达及其体外生物活性的检测

目的：建立表达具有生物活性的人IL-12 的杆状病毒/昆虫细胞表达系统。方法：将p40和p35 cDNA一起构建入杆状病毒转移载体pAcUW42,然后与杆状病毒AcUW1.lacZ DNA共同转染昆虫细胞Sf9,使两者产生同源重组;随后利用病毒空斑实验筛选重组的杆状病毒,再由ELISA筛选及鉴定表达IL-12的重组病毒,并进行Western Blotting和体外生物活性的检测。结果：经病毒空斑试验、ELISA和Western Blotting逐步阳性选择的IL-12重组杆状病毒,其感染Sf9细胞的上清与IL-12标准品一样具备刺激正常人外周血T淋巴细胞增生的生物活性。结论：本研究建立了能表达具有体外生物活性的人重组IL-12的杆状病毒/昆虫表达系统。