急性白血病骨髓基质细胞生物学特点的观察

目的探讨白血病骨髓基质对白血病形成的作用机制.方法白血病患者和正常人的骨髓单个核细胞行基质细胞培养,动态观察贴壁时间、小丛形成时间、集落形成时间、融合形成时间等生长特性,计数CFU-F集落,检测基质细胞VCAM-1、Fn及培养上清液中的IL-6、TNF-α含量.结果急性白血病骨髓基质细胞生长延迟,贴壁形成时间、小丛形成时间、集落形成时间和融合形成时间均明显晚于正常骨髓基质组(P<0.05);CFU-F计数和VCAM-1表达水平均明显低于正常对照组(P<0.05),Fn与正常对照组无显著性差异(P>0.05);骨髓基质细胞培养上清液中IL-6、TNF-α含量明显高于正常对照组(P<0.05).结论急性白血病存在造血微环境异常.     

造血微环境异常与白血病研究进展

骨髓基质细胞对造血细胞的增殖和分化有重要的调节作用 ,白血病病人不仅有造血细胞的恶性克隆性增殖 ,而且骨髓基质细胞的结构功能都有一定的改变。骨髓基质细胞通过分泌细胞因子和直接粘附对白血病细胞恶性克隆的选择、增殖、分化、迁移、凋亡有重要作用 ,近年来主要进行了以下几方面的工作。1　白血病骨髓基质粘附功能异常应用组织化学、免疫组织化学染色等方法观察ＡＬ患者的骨髓活检标本中骨髓细胞外基质 (ＥＣＭ )成分变化及其与造血细胞增殖的关系 ,发现ＡＬ与正常人骨髓ＥＣＭ成分有显著性差异 :ＡＬ患者的网硬蛋白增加 ,Ｆｎ、酸性…     

“急淋”白血病细胞与高内皮小静脉及骨髓基质细胞粘附行为的…

采用改进的小鼠肠系膜淋巴结（ＭＬＮ）冰冻切片粘附结合实验法和ＭＴＴ法，观察白血病患者尤其是Ｂ细胞急性淋巴细胞性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）体外粘附小鼠ＭＬＮ高内皮小静脉（ＨＥＶ）的活性变化及患者骨髓血单个核细胞（ＢＭＭＣ）体外粘附患者骨髓基质细胞（ＳＣ）的活性变化，结果：１Ｂ－ＡＬＬ患者ＰＢＭＣ粘会ＨＥＶ的阳性率和强阳性率均低于正常组；２．经抗淋巴细胞功能相关抗原－１（ＬＦ     

白血病患者血清透明质酸与层粘连蛋白的变化及临床意义

透明质酸 (ＨＡ)和层粘蛋白 (ＬＮ )是细胞外间质(ＥＣＭ )的重要组成部分。本文观察了 1999年 4月～ 2 0 0年 7月我科收治的 4 9例成人白血病患者血清ＨＡ与ＬＮ水平 ,探讨其在白血病中的变化及临床意义。1　对象与方法1.1　对象所有病例均符合诊断标准。按ＦＡＢ分型标准 ,初治和未缓解的急性淋巴细胞性白血病 (ＡＬＬ) 9例 ,急性非淋巴细胞性白血病 (ＡＮＬＬ) 12例 ,慢性粒细胞白血病 (ＣＭＬ) 10例。男 2 0例 ,女 11例 ,年龄2 1～ 5 8岁 ,平均 31.6岁。其中有 13例急性白血病经诱导化疗后获完全缓解 ,5例ＣＭＬ发生急性变。健康志愿者 …     

急性白血病患者骨髓细胞体外培养及其临床意义

作者报告了４８例急性白血病患者的骨髓髓系白血病细胞集落（ＡＭＬＣＦＵ）和粒－单核细胞集落（ＧＭ－ＣＦＵ）体外培养的结果。结果表明，急非淋白血病治疗前ＡＭＬ－ＣＦＵ数比缓解组高，而ＧＭ－ＣＦＵ比缓解组低，差异显著。观察１４例急非淋白血病患者治疗前ＡＭＬ－ＣＦＵ数与预后的关系，发现ＡＭＬ－ＣＦＵ丛／集比值具有判断预后的价值，ＡＭＬ－ＣＦＵ数与此无关。本文还提出，ＡＭＬ－ＣＦＵ培养用于微小残余白血病的诊     

急性早幼粒细胞白血病患者巨核系祖细胞集落形成单位的抑制活性

确定急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）患者血清及全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）对正常骨髓巨核系祖细胞集落形成（ＣＦＵ－Ｍｅｇ）生长是否有抑制作用。方法用细胞培养方法，动态观察２２例ＡＰＬ患者用ＡＴＲＡ治疗时其血清及１０－６ｍｏｌ／ＬＡＴＲＡ对ＣＦＵ－Ｍｅｇ生长的影响，同时测定患者血清肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）活性和骨髓白血病细胞集落形成单位（ＣＦＵ－Ｌ）。结果治疗前，血清对ＣＦＵ－Ｍｅｇ生长呈抑制作用（２９．６％±２．４％），该活性随治疗而减轻，骨髓缓解时为刺激作用（－１８．７％±４．１％，Ｐ＜０．００１），与骨髓ＣＦＵ－Ｌ、血清ＴＮＦ活性呈正相关，与血小板计数、骨髓巨核细胞数呈负相关，ＡＴＲＡ促进ＣＦＵ－Ｍｅｇ的生长。结论ＡＰＬ患者血清对ＣＦＵ－Ｍｅｇ生长有抑制作用，该作用可监测疗效，Ａ－ＴＲＡ对ＣＦＵ－Ｍｅｇ生长有刺激作用。     

干细胞因子mRNA在原代白血病细胞的表达

目的　观察白血病原代细胞中干细胞因子（ＳＣＦ）ｍＲＮＡ的表达情况并探讨其与预后的关系。方法　以巢式逆转录 多聚酶链反应检测了４９例（两种类型）白血病患者骨髓原代白血病细胞中ＳＣＦ ｍＲＮＡ的表达情况。结果　在１９例急性 淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）中,ＳＣＦ ｍＲＮＡ ５例阳性、１４例阴性;３０例急性髓性白血病（ＡＭＬ）中,２４例Ｍ１～Ｍ４亚型者表达 ＳＣＦ ｍＲＮＡ,４例Ｍ５及２例Ｍ６为阴性。两组间有显著差异（Ｐ<0.05）。在２９例ＳＣＦ阳性者中,８例（２７．６％）属难治性白 血病;在２０例ＳＣＦ阴性者中,１２例（６０．０％）为难治性白血病（Ｐ<０．０５）。结论 ＡＭＬ组的ＳＣＦ表达率显著高于ＡＬＬ;ＳＣＦ 阴性提示患者预后较差,其确切机制有待进一步研究。     

急性白血病患者骨髓细胞体外培养及其临床意义

作者报告了４８例急性白血病患者的骨髓髓系白血病细胞集落（ＡＭＬ－ＣＦＵ）和粒－单核细胞集落（ＧＭ－ＣＦＵ）体外培养的结果。结果表明，急非淋白血病治疗前ＡＭＬ－ＣＦＵ数比缓解组高，而ＧＭ－ＣＦＵ比缓解组低，差异显著。观察１４例急非淋白血病患者治疗前ＡＭＬ－ＣＦＵ数与预后的关系，发现ＡＭＬ－ＣＦＵ丛／集比值具有判断预后的价值，ＡＭＬ－ＣＦＵ数与此无关。本文还提出，ＡＭＬ－ＣＦＵ培养用于微小残余白血病的诊断必须结合形态观察。     

双表型急性白血病的MIC分型研究

双表型急性白血病是急性混合性白血病(ＨＡＬ)的其中一类,指的是病人骨髓的同一白血病细胞同时表达淋巴系和髓系特征[1]。我院1997年诊断成人和儿童急性白血病52例,全部进行ＭＩＣ分型,其中15例为双表型急性白血病,占总数的28%。1　资料与方法11　研究对象　15例病例中,男性9例,女性6例,其中5例为儿童,年龄15～49岁12　形态学及细胞组织化学检测　治疗前骨髓按1986年全国会议制定的白血病ＦＡＢ分型标准。采用的组织化学染色主要有:碱性磷酸酶(ＡＬＰ),过氧化酶(ＰＯＸ),醋酸ＡＳ-Ｄ奈酚脂酶(ＮａｐｈｔｈｏｌＡＳ-ＤＣｈｉｏｒｏａｃｅｔａ…     

维拉帕米联用阿霉素,长春新碱,足叶己甙体外净化白血病细胞

采用体外克隆形成培养技术研究维拉帕米（ＶＰＬ）联用阿霉素（ＡＤＭ），长春新碱（ＶＣＲ）和足叶己甙（ＶＰ－１６）体外净化白血病细胞，结果显示，ＶＰＬ２．２μｍｏｌ／Ｌ能明显增加单一应用的不同浓度ＡＤＭ，ＶＣＲ或ＶＰ－１６对白血病细胞克隆形成单位（Ｌ－ＣＦＵ）的抑制作用，而不增加其对正常粒巨系克隆形成单位（ＧＭ－ＣＦＵ）的毒性，０．９２μｍｏｌ／ＬＡＤＭ，０．０２５０μｍｏｌ／ＬＶＣＲ及１．７０μｍｏ     

体外高热对急性非淋巴细胞白血病细胞的净化作用

本实验发现正常骨髓细胞经不同温度（３７℃～４３℃）、不同时间（３０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ和９０ｍｉｎ）其细胞形态和细胞化学染色均无明显变化。而急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）患者的骨髓白血病细胞随温度增高退化细胞和核溶解细胞增多。正常人骨髓粒单祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）生长仅在加热４３℃才明显减少，而白血病祖细胞（ＣＦＵ－Ｌ）的生长随温度升高呈指数性下降。证明ＣＰＵ－Ｌ对高热的敏感性高于ＣＰＵ－ＧＭ，高热能选择性杀伤白血病祖细胞。４２℃６０ｍｉｎ和４３℃３０ｍｉｎ能尽可能多杀伤ＣＦＵ－Ｌ，而保留较多ＣＦＵ－ＧＭ，不影响正常骨髓造血重建，是清除骨髓ＣＦＵ－Ｌ的最适合温度。但即使加热至４３℃９０ｍｉｎ仍有少量的白血病祖细胞存在，可造成复发，最好与其他方法联合净化骨髓ＣＦＵ－Ｌ，以利自体骨髓移植（ＡＢＭＴ）持久成功。     

人参皂苷Rg3抑制急性白血病骨髓基质细胞HIF-1α及VEGF的表达及其机制探讨

目的探讨人参皂苷Rg3对急性白血病骨髓基质细胞HIF-1α及VEGF表达的作用及其可能的机制。方法培养正常人及急性白血病患者的骨髓基质细胞,MTT法检测人参皂苷Rg3对正常及急性白血病骨髓基质细胞增殖的抑制作用;RT-PCR检测人参皂苷Rg3处理前后急性白血病骨髓基质细胞HIF-1α及VEGF mRNA表达的变化;Western blot、免疫荧光检测人参皂苷Rg3处理前后急性白血病骨髓基质细胞HIF-1α、VEGF、p-Akt、p-ERK蛋白表达的变化。结果人参皂苷Rg3对骨髓基质细胞增殖抑制的最适作用时间为24h,最适作用浓度为40μg/ml;处理24h后,急性白血病骨髓基质细胞HIF-1α、VEGF mRNA表达及蛋白表达均明显减少(P<0.05);p-Akt及p-ERK蛋白表达亦较处理前明显减少(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3可明显抑制急性白血病骨髓基质细胞HIF-1α、VEGF mRNA及蛋白水平的表达,同时可抑制与血管形成密切相关的MAPK、PI3K/Akt途径中Akt、ERK蛋白的磷酸化,提示人参皂苷Rg3可能通过阻断PI3K/Akt、MAPK信号途径抑制急性白血病骨髓的血管生成。     

白血病微小残留病

近 2 0年来白血病的治疗有了很大进展 ,长期生存病例越来越多 ,据统计在儿童急性白血病中 ,急性淋巴细胞性白血病(ＡＬＬ)的 5年无病生存率 (ＥＦＳ)已达 70 %～ 90 %,急性髓细胞性白血病 (ＡＭＬ)的 5年ＥＦＳ也达 40 %～ 6 0 %。包括移植治疗在内的分型、规律、序贯性化疗措施的开展 ,使急性白血病的治愈成为可能。现已知白血病治愈的关键是如何控制治疗后的复发问题 ,由于多数白血病治疗后的复发是由原来的白血病细胞克隆增殖的结果 ,因此检测微小残留病 (ｍｉｎｉｍａｌｒｅｓｉｄｕ ａｌｄｉｓｅａｓｅ ,ＭＲＤ)对疗效评价、预后判断和…     

白血病骨髓基质抑制化疗药物诱导的白血病细胞凋亡

目的探索骨髓基质细胞增强白血病细胞抗凋亡、抗药特性的可能机制.方法应用Percoll分离骨髓单个核细胞体外培养骨髓基质细胞模拟骨髓微环境功能,与白血病细胞株Jurkat细胞体外共培养.0.5μmol/L DNR处理Jurkat细胞诱导凋亡,应用Annexin V/PI双标法流式细胞仪检测白血病细胞凋亡率.PI染色流式细胞仪检测细胞周期分布.结果0.1～2.0μmol/L浓度范围DNR作用一定时间后,Jurkat细胞发生的凋亡率随药物浓度的增加与作用时间的延长而升高.共培养后骨髓基质细胞抑制药物诱导的白血病细胞凋亡,与单独悬浮培养组比较白血病细胞凋亡率有显著降低(8.39±4.08)%比(16.02±1.00)%,P＜0.05.白血病骨髓基质对白血病细胞的屏蔽效应强于正常骨髓基质细胞(白血病细胞凋亡率分别是(5.73±1.78)%比(8.39±4.08)%,P＜0.05.DNR处理共培养组Jurkat细胞G0/G1期比例高于悬浮培养DNR处理组,而正常与白血病骨髓基质细胞屏蔽的白血病细胞G0/G1期阻滞现象无显著性差异(47.96±5.88)%比(39.25±3.04)%,P＞0.05.结论一定浓度的DNR在体外可诱导Jurkat细胞凋亡.骨髓基质细胞抑制化疗药物诱导的白血病细胞凋亡,提示骨髓微环境在骨髓白血病细胞获得耐药、抗凋亡特性以及残留白血病形成过程中起着重要促进作用.细胞周期分布实验结果显示骨髓微环境对白血病细胞的保护作用可能部分通过阻滞白血病细胞于G0/G1期实现.实验结果提示,白血病骨髓基质细胞对白血病细胞的屏蔽效应可能存在较细胞周期阻滞更复杂的机制.     

VAMP方案治疗难治性急性淋巴细胞白血病近期疗效观察

对难治性急性淋巴细胞白血病 (ＲＡＬＬ) ,采用一般的化疗方案疗效差。我们应用Ｖ(长春新碱 )、Ａ(阿糖胞苷 )、Ｍ (米托蒽醌 )和Ｐ(强的松 )组成的联合化疗方案治疗难治性急性淋巴细胞白血病 10例 ,取得较好疗效。1　临床资料1 1　一般资料　 10例均为我院 1998年 9月～ 2 0 0 0年 9月住院病例。其中男 4例 ,女 6例。年龄 11～ 6 1岁 ,平均年龄 2 9 2岁。全部病例均经临床、骨髓涂片形态学、组织化学染色确诊。根据ＦＡＢ分型均为Ｌ2 型。并经用ＶＤＰ方案治疗 2个疗程未达缓解。从诊断至本方案治疗前病程 0 5～ 10 (月 ) ,中位数2 0 6 (…     

急性髓细胞白血病骨髓基质细胞对其白血病祖细胞体外生长 …

用ｃａｃｔｒｏｍａｌａｓｐｉｎａ法对１１例急性髓细胞白血病骨髓基质细胞进行体外培养，观察其对ＣＦＵ－Ｌ（液相－半固相集落培养法）体外生长的影响及疗效的关系。     

自体外周血干细胞移植治疗急性白血病4例

自体外周血干细胞移植 (ＡＰＢＳＣＴ)是治疗急性白血病的有效方法 ,其疗效优于化疗。我院 2 0 0 0年5月至 2 0 0 1年 4月采用ＡＰＢＳＣＴ结合定期维持化疗治疗急性白血病 4例 ,其中 2例化疗间歇加用白细胞介素 2 (ＩＬ - 2 )免疫治疗 ,现报告如下。1　资料和方法1 1　一般资料 :4例患者均按照ＦＡＢ的诊断标准作出诊断和分型。男 2例 ,女 2例 ,年龄 16岁～ 36岁 ,平均 2 5岁。急性髓细胞白血病 (ＡＭＬ Ｍ2ａ) 3例 ,急性早幼粒细胞白血病 (ＡＰＬ Ｍ3ｂ) 1例。移植前均为完全缓解 (ＣＲ1) ,ＣＲ至移植时间 38周～ 4 9周 ,平均4 4周。1 2…     

Neuropilin-1基因在急性非淋巴细胞白血病骨髓基质细胞中的表达

目的 :了解neruophlin 1(NP 1)基因在急性非淋巴细胞白血病 (ANLL)骨髓基质细胞中的表达情况。方法 :收集 12例ANLL和 2 0例正常对照骨髓标本 ,分离单个核细胞。进行体外长期培养 ,收集贴壁细胞 (骨髓基质细胞 )。利用逆转录 -聚合酶链反应扩增两组骨髓基质细胞中的cDNA ,了解NP 1基因表达情况。结果 :建立了ANLL和正常人骨髓基质细胞培养方法 ,NP 1基因在ANLL骨髓基质细胞中的表达率为 (4 7.1% ) ,明显低于正常对照 (85 % )P <0 .0 5。结论 :参与调控骨髓基质细胞的NP 1基因可表达于部分ANLL和大部分正常人的骨髓基质细胞中 ,NP 1在ANLL患者骨髓基质细胞中的低表达 ,可能与其调节造血功能异常有关。     

急性白血病骨髓基质细胞对HL-60细胞增殖、分化的影响

目的 为探讨急性白血病骨髓基质对HL-60细胞的影响。方法 骨髓基质与白血病细胞共培养，采用MTT检测基质对白血病细胞的粘附，流式细胞仪检测粘附的HL-60细胞周期，非特异性酯酶及过氧化物酶染色观察白血病细胞分化及绘制白血病细胞生长曲线。结果 白血病骨髓基质对HL-60细胞的粘附率及粘附的白血病细胞处于G0／G1期比例均明显高于正常骨髓基质；正常骨髓基质对HL-60细胞的生长抑制作用及诱导分化作用均明显强于白血病基质。结论 急性白血病骨髓基质对HL-60细胞的增殖、分化作用均存在异常。     

BCL—XL异质性表达与复发急性髓性白血病细胞体外生长类型的 …

选择１５例复发急性髓性白血病（ＡＭＬ）患者,研究ＢＣＬ－ＸＬ的异质性表达与复发ＡＭＬ细胞体外生长类型的关系。用白血病祖细胞培养（ＣＦＵ－Ｌ）判断生长类型,ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＢＣＬ－ＸＬ ｍＲＮＡ的表达丰度。结果：ＣＦＵ－Ｌ检测中,１０例为生长型,其ＢＣＬ－ＸＬ ｍＲＮＡ９例高表达,１例为低表达;ＣＦＵ－Ｌ检测５例为不生长型,ＢＣＬ－ＸＬ ｍＲＮＡ均为低表达（Ｐ〈０．０１）。在复发ＡＭＬ中,ＢＣＬ