热休克蛋白70在大鼠肝移植急性排斥反应中的表达及意义

目的 探讨热休克蛋白70(HSP70)在大鼠肝移植术后的表达规律及对急性排斥反应的早期诊断意义.方法 采用改良"二袖套法"建立大鼠原位肝移植模型.随机将大鼠分为3组,每组供、受者各15只.对照组:供、受者均采用Wistar大鼠;未治疗组:供者为SD大鼠,受者为Wistar大鼠,肝移植后不用任何免疫抑制剂;治疗组:供者为SD大鼠,受者为Wistar大鼠,肝移植术后肌肉注射他克莫司(FK506)2 mg·kg-1·d-1.每组分别于术后第3、5、7天随机各处死5只受者,取移植肝脏观察组织病理学变化,免疫组织化学及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测移植肝HSP70的表达,并分析其与急性排斥反应的相互关系.结果 对照组术后无排斥反应发生;未治疗组术后第3天出现典型的排斥反应病理变化,随术后时间推移,排斥反应活动度积分(RAI)逐渐升高(P<0.05);治疗组表现为无排斥反应或交界性排斥反应.对照组移植肝HSP70的表达在术后出现短暂升高后迅速降低(P<0.05),未治疗组移植肝HSP70的表达水平较对照组高,并随术后时间的推移而逐渐升高(P<0.01),与移植肝RAI之间存在着明显的正相关(P<0.01);治疗组移植肝组织HSP70在术后各时间段均呈低表达.结论 移植肝组织中HSP70的表达与急性排斥反应的发生和发展密切相关;HSP70表达升高对早期诊断急性排斥反应有一定的意义.     

腺泡细胞凋亡在大鼠胰腺移植急性排斥反应中的意义

目的：观察移植胰腺的腺泡细胞凋亡及其与急性排斥反应的关系。方法：选用SD和Wistar大鼠进行全胰十二指移植。实验分为同基因移植组（Wistar→Wistar）和异基因移植组（SD→Wistar）两组。于术后第3d、5d和7d分批处死受体，取移植胰腺标本用HE染色和原位末端标记（TUNEL）技术检测移植胰腺切片，进行排斥反应的病理学评分和计数凋亡指数（AI）。结果：发生凋亡的细胞主要是腺泡细胞，同基因移植组胰腺有散在的腺泡细胞凋亡，AI在术后无明显变化。异基因移植组胰腺腺泡细胞凋亡在术后第3d、5d和7d逐渐升高，AI与急性排斥反应的病理学评分成正相关。结论：细胞凋亡与移植胰腺急性排斥反应的严重程度显著相关，凋亡指数可作为判断移植物损伤程度的指标，对急性排斥反应的诊断有一定的参考价值。     

热休克蛋白与移植物排斥反应

热休克反应(HSR)是机体在不利环境之下的一个共同反应,其产生热休克蛋白(HSPs).热休克蛋白是一组进化上高度保守的蛋白质,其编码基因也具有高度保守性.热休克蛋白的表达既参与细胞的正常生理过程,又是细胞对外环境变化或刺激所作出的应答或防御反应.可以减轻离体器官的缺血再灌注损伤,HSPs在移植免疫中起重要作用.     

胰腺移植后的慢性排斥反应

由于外科技术的不断提高和新型免疫抑制剂的应用，胰腺移植的短期效果显著提高，移植胰腺的1年存活率在80％左右。随着移植物存活时间的延长，慢性排斥反应将成为移植物功能丧失的一个重要原因。据2004年美国器官共享网络（UNOS）与国际胰腺移植登记处（IPTR）的统计，术后1年导致移植胰腺功能丧失的原因，     

热休克蛋白在移植免疫中的研究进展

在移植围手术期,热休克蛋白合成的增加对移植物有很强的保护作用。但术后移植物细胞表面表达及损伤细胞释放到外周血中的热休克蛋白对受体免疫系统的作用还未清楚:如对受体非特异性免疫细胞、抑制性T细胞及热休克蛋白反应T细胞等的具体作用,以及热休克蛋白是引起或是抑制排斥反应等。在移植围手术期,热休克蛋白合成的增加对移植物有很强的保护作用。但术后移植物细胞表面表达及损伤细胞释放到外周血中的热休克蛋白对受体免疫系统的作用还未清楚:如对受体非特异性免疫细胞、抑制性T细胞及热休克蛋白反应T细胞等的具体作用,以及热休克蛋白是引起或是抑制排斥反应等。     

异基因大鼠全胰十二指肠移植急性排斥反应的病理变化

目的 观察异基因大鼠间行全胰十二指肠移植后急性排斥反应的病理变化特点。方法 实验分两组，Ⅰ组为同基因移植组，Ⅱ组为异基因移植组，术后第3，5，7，10d取移植胰腺及十二指肠行病理检查。结果 Ⅰ组移植胰腺及十二指肠后未见明显病理学改变，Ⅱ组移植胰腺术后第3d出现轻度排斥反应，第5d出现中度排斥反应，第7d发生重度排斥反应，第10d胰腺几乎完全被纤维结缔组织取代，胰腺急排斥反应首先损伤腺泡，以后累及胰腺导管，最后累及胰岛和血管，胰腺和十二指肠急性排斥反应大多同时存在，间质性排斥反应评分相同者占45%，评分不同者均以胰腺评分较高。结论 胰腺急性排斥反应首先累及外分泌组织，最后累及内分泌组织，十二指肠黏膜活检有助于确定有无胰腺急性排斥反应发生。     

细胞凋亡在大鼠胰腺移植急性排斥反应中的作用

目的探讨细胞凋亡和相关因子Fas、FasL、bcl-2和bax在大鼠胰腺移植急性排斥反应中的作用,评价十二指肠黏膜活检在胰腺移植中诊断排斥反应的价值。方法选SD和Wistar大鼠行全胰十二指肠移植,实验分同基因胰腺移植组和异基因胰腺移植组。于移植术后第3、5及7d分批处死受体,取移植胰腺和十二指肠标本用HE染色和原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记技术(TUNEL)检测移植物。免疫组化法检测移植后胰腺和十二指肠Fas、FasL、bcl-2和bax的表达。结果异基因胰腺移植组胰腺和十二指肠病理评分相同者占61.1%(11/18);评分不同者占38.9%(7/18),其中胰腺评分较高者6例,十二指肠黏膜评分较高者仅1例。异基因胰腺移植组胰腺和十二指肠病理学评分和细胞凋亡指数均明显高于同基因胰腺移植组(P<0.05,P<0.01)。胰腺和十二指肠细胞凋亡指数与急性排斥反应的病理学评分成正相关(r=0.965,P<0.01;r=0.942,P<0.01)。随着术后时间延长,排斥反应分级上升,细胞凋亡增加,FasL表达升高,在异基因移植组bcl-2表达下降,而Fas和bax表达无明显变化。结论细胞凋亡与移植胰腺急性排斥反应的严重程度呈正相关,细胞凋亡指数可作为判断移植物损伤程度的指标。FasL和bcl-2与胰腺移植急性排斥及组织损伤密切相关。十二指肠黏膜活检有助于判断有无胰腺急性排斥反应发生。     

胰腺移植急性排斥反应中的细胞凋亡

目的　观察胰腺移植急性排斥反应中的细胞凋亡变化。方法　对封闭群大鼠作单纯胰腺移植 (A组 )和胰脾联合移植 (B组 ) ,手术后第 3、7、12、2 0天每组各处死 5只 ,切取移植胰 ,石蜡包埋切片 ,原位DNA缺口末端标记 (TUNEL)法测定胰腺组织细胞凋亡。结果　A组术后第 3、7、12、2 0天胰腺细胞凋亡数分别为 (15 2 .5 5± 2 7.2 4)、(5 0 8.19± 117.83)、(70 1.33± 130 .17)和 (10 10 .5 6±114.6 9)个 /高倍视野 ;B组分别为 (12 4.87± 19.11)、(198.6 8± 31.99)、(492 .2 5± 93.0 1)和(6 49.80± 140 .91)个 /高倍视野。 2组各时点均显著高于正常胰腺。第 7、12、2 0天A组也显著高于B组。结论　胰腺移植急性排斥时细胞凋亡活性明显增高。     

创伤性休克患者血浆热休克蛋白70表达及其意义

目的　　检测创　伤性休克患者外周血中热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）的表达水平并探讨其与创伤性休克发生发展　的关系。方法　　采用Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ法分别测定３６例创伤性休克患者　（观察组）及３０例正常人（对照组）血浆ＨＳＰ７０表达水平。结果　　ＨＳ　Ｐ７０在创伤性休克组为（４　３０１．３±１　１５５．３），与正常对照组（６　０９２．３±１　２３３．５）比较，差异　有高度显著性（Ｐ＜０．０１）；２２例休克得到控制者ＨＳＰ７０为（６　１０２．２±１　２９１．６）较入院时　（４　２７３．６±１　０９９．３）明显升高，差异有极显著意义（Ｐ＜０．０１）。结论　　创伤性休克患者血浆ＨＳＰ７０表达水平明显下降，可能是创伤后休克发生发展的一个　重要因素，而且与预后有密切关系。     

热休克蛋白70与大鼠肝移植术后早期急性排斥反应的相关性研究

目的对热休克蛋白70（heat shock protein70,HSP70）与大鼠肝移植术后早期急性排斥反应进行相关性研究．探讨其中的免疫学机制。方法建立改良“二袖套法”大鼠原位肝移植模型,将大鼠分为A组（冷保存1h同基因组）,B组（冷保存18h同基因组）,C组（冷保存1h异基因组）,D组（冷保存18h异基因组）,术后收集大鼠肝脏组织和血清．用免疫组织化学及Western blotting方法检测HSP70在移植肝脏中的表达,观察其与病理学检查的相关性结果冷保存时间的延长可以诱导移植肝组织HSP70的高表达,移植肝HSP70表达水平的升高与大鼠原位肝移植术后早期急性排斥病理学评分之间存在着明显的正相关性（P〈0．05,r=0.928）．结论HSP70的升高可能与大鼠原位肝移植术后急性排斥的早期发生以及大鼠移植术后2周存活率密切相关．     

肝移植术后耐激素冲击治疗的急性排斥反应的诊治

目的 探讨肝移植术后耐激素治疗的急性排斥反应(steroid-resistant acute rejection,SRAR)的诊疗方法.方法 中山大学附属第一医院自2004年1月至2007年12月实施596例成人肝移植中,共有96例患者发生113次急性排斥反应(acute rejection,AR),其中11例患者出现SRAR,回顾性分析以上11例患者的临床资料.结果 本组患者肝移植术后AR的发生率为16.1%(96/596),发生时间3～410 d,中位时间为17 d.11例发生SRAR的时间6～72 d,中位时间为19 d,3例患者接受OKT3治疗,8例患者接受IL-2单克隆抗体联合霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)治疗,7例患者治疗后排斥反应逆转.2例患者接受再次肝移植,与SRAR相关的死亡率为36.4%(4/11),其中1例死于急性肝功能衰竭,1例死于慢性肝功能衰竭,1例再次肝移植术后肾功能衰竭死亡,1例OKT3治疗后严重感染死亡.结论 肝移植术后SRAR虽然发生率低,但预后差,IL-2单克隆抗体和OKT3对部分患者有效.     

猪全胰十二指肠移植排斥反应的早期诊断

目的 探讨移植胰腺分泌的胰液中肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）水平、淀粉酶流量和受者的血糖水平在排斥反应早期诊断中的意义。方法 采用全胰切除的猪行全胰十二指肠移植，第１组受者不用免疫抑制剂；第２组受者应用甲泼尼龙＋雷公藤多甙片；第３组受者应用环孢素Ａ＋雷公藤多甙＋甲泼尼龙。观察受者的空腹血糖、胰液淀粉酶流量和ＮＴＦ－α水平。结果 第１组受者移植后第４ｄ胰液和淀粉酶流量下降，第８ｄ停止；第２组受者的胰液和     

心肌内心电图Tslew诊断大鼠急性排斥反应的可靠性

目的 评估心肌内心电图(IMEG)心室起搏(VER)的T波后支斜率(Tslew)用于诊断大鼠异体心脏移植术后急性排斥反应的可靠性.方法 建立改良Ono大鼠腹部异位心脏移植动物模型,对照组(同基因移植)10只,实验组(异基因移植)30只.在供心右室流出道、左室游离壁和左室心尖部的心肌处分别埋置心表起搏电极,用两根导线作为起搏电极,描记VER,测Tslew.对照组术后第7天、实验组分别在术后3、5、7天处死,移植心脏作病理活检.结果 术后3、5、7天各时点,对照组Tslew差异无统计学意义,实验组呈进行性下降,术后3～5天、3～7天之间两两差异有统计学意义(P＜0.05);两组间比较第5、7天差异有统计学意义(P＜0.05),实验组Tslew变化与病理相关(P＜0.05);Tslew的ROC曲线下面积为0.9474,95%可信区间(0.8753～1. 0000);在最佳分割点(≤90%)灵敏度94.74%,特异度81.82%,阳性预测值和阴性预测值、符合率90%.Tslew≤92%为阳性分割点,灵敏度100%,特异度63.64%;≤85%作为阳性分割点,特异度90.91%,灵敏度78.95%.结论 Tslew是诊断大鼠心脏移植术后急性排斥反应的可靠指标;在最佳分割点,Tslew具有良好的诊断价值,缺乏心内膜活检条件时可以作为替代或补充;在适当分割点,Tslew可以作为急性排斥反应筛选的敏感指标.

Abstract：

Objective This study aimed to evaluate the reliability of Tslew in survelliance of allograft rejection after heart transplantations in rats. Methods Forty rats underwent modified Ono's heterotopic heart transplantation. The autonomous IMEG and VER were recorded with epicardiac pacing leads fixed at right ventricular outflow tracts, left ventricular apex and free wall. Tslews were detected daily in these 10 syngeneic and 30 allogeneic transplants. Syngeneic transplants were sacrificed on 7th postoperative day and allogeneic transplants were sacrificed on 3rd, 5th and 7th postoperative days, respectively.Histopathologic studies were performed at the same time. Results On the 3rd ,5th and 7th postoperative days Tslews depressed gradually in the allogeneic group. The depressions between 3rd and 5th, 3rd and 7th were obvious( P ＜0.05 ). No significant differences were observed in the syngeneic group. Tslews differed between the two groups at 5th and 7th postoperative days ( P ＜0.05 ). The Depression correlated with histopathologic results. Area under ROC( receiver operating characteristic) curve (AUC) of Tslew was 0.9474 and the 95% confidence interval(CI) was (0. 8753 -1. 0000 ). At the cutoff point of 92% ( ≤92% considered positive), Tslew had a sensitivity (Se) 100%, specificity (Sp) 63.64%, positive predictive value (PV + )82.61%, negative predictive value (PV-) 100%, respectively. At the cutoff point 85%, Sp 90.91%, Se 78.95%, PV +93.75 %, PV- 71. 43%. At the best cutoff point 90%, Tslew had a Se 94.74%, Sp 81. 82%, PV + 82.61%, PV- 90%.Whereas QRS had a Se 68.42%, Sp 90.91%, PV + 92.86%, PV- 62.50% at the best cutoff point of 72.3%. Conclusion Tslew of VER are reliable indexs to monitor acute allograft rejection after heart transplantations in rats. Having great diagnostic value, Tslew may be used as a replacement for EMB at the best cutoff point when EMB can' t be performed. At cutoff point of 92%, Tslew may be used as a screening index.     

心脏移植急性排斥反应和红细胞流变学特性的关系

目的 探讨心脏移植急性排斥反应和红细胞流变学特性改变的关系。方法随机选取6只SD大鼠作为正常对照组，采集正常红细胞变形指数。手术创伤组（A组），SD大鼠24只；同系移植组（B组），供受体均为SD大鼠，共钙只；同种移植组（C组），供体为Wistar大鼠，受体为SD大鼠，各24只。B组、C组应用大鼠腹腔异位心脏移植模型。观察术后1、3、5、7d移植心的病理改变，同时采用黏性测量法测定红细胞聚集指数，激光衍射法测定红细胞变形指数，并测定红细胞电泳时间。结果 C组自术后第1d起受体红细胞聚集性明显升高，红细胞变形性则显著降低（与对照组相比均为P〈0．001），并在第3～5d达到变化的高峰，红细胞电泳时间则与各对照组无显著差异。其中，红细胞聚集指数和变形指数与排斥反应分级存在显著的相关性（P=0．000）。结论 同种心脏移植术后红细胞聚集性和变形性的改变与心脏移植急性排斥反应显著相关，可能是参与及促进急性排斥反应发生、发展的重要因素之一。     

胰肾联合移植术后排斥反应分析

目的 探讨预防和逆转胰肾联合移植术后排斥反应的方法。方法 回顾性分析1999年9月～2003年9月17例同种异体胰肾联合移植手术患者的临床资料。全部病例采用口服免疫抑制剂：环孢素A、霉酚酸酯或硫唑嘌呤、激素三联用药。其中2例术前及术后第5天应用抗IL-2R单克隆抗体,3例应用OKT3进行免疫诱导。结果 17例患者中1例发生移植胰腺、肾脏加速性排斥反应．经保守治疗无效,切除移植物;8例发生急性排斥反应,其中单纯肾脏排斥反应6例,同时累及胰腺、肾脏的排斥反应2例,经甲泼尼龙或OKT3治疗后均逆转。结论 胰肾联合移植术后合理应用免疫抑制剂。术前采用综合措施降低高危受者的致敏性,是预防和治疗排斥反应的有效方法。     

白介素10在心脏移植排斥反应中的表达及机制

目的　研究白介素10(IL-10)在大白鼠心脏移植排斥反应中心脏局部的表达变化情况，并探讨其参与排斥反应的可能机制。方法　实验动物分5组，A组(对照组)、B组(供体特异性全血输注组)、C组(Anti-IL-2Mab组)、D组(Anti-IL-4Mab组)、E组(Anti-IL-2Mab+环孢霉素A组)，处理受体。将大鼠移植心移植到受体的颈部，观察移植心存活时间、动态病理变化。并于移植术后第1、3、5、7、9、11、14d分别取移植心置于液氮中待测。应用半定量的RT-PCR法动态检测移植心IL-10的表达情况。结果　各组移植心存活时间分别为(8.3±1.7)d、(29.2±7.1)d、(26.4±5.7)d、(10.2±1.9)d、(55.0±10.6)d。其中B组、C组与A组比较差异有显著意义，E组与A组及C组比较分别有极显著意义和显著意义。IL-10在B组、C组及E组均有较强的表达，在A组及D组表达微弱，并与移植物的存活时间密切相关。结论　IL-10参与调节移植排斥反应，其机制可能为Th类细胞因子的免疫偏离。应用Th1类细胞因子单克隆抗体并联用免疫抑制剂可以有效的抑制移植排斥反应，从而延长移植物的存活期。     

肝移植术后迟发型急性排斥反应的发生和治疗

目的探讨肝移植术后迟发型急性排斥反应（lateacuterejection，LAR）的发生率、处理和预后。方法回顾性分析我科2004年8月至2006年8月收治的15例迟发型急性排斥反应（肝移植术6个月后发生的急性排斥反应）患者的临床资料。结果15例LAR发生在术后6．6—27个月，平均（14．7±7．5）个月。其中男14例，女1例。年龄32～66岁，平均年龄（49．5±12．7）岁。原发疾病为重症肝炎或肝功能衰竭者8例，占53．3％（8／15）；发生于血型不合移植者2例，免疫抑制治疗方案为单一普乐可复（FK506）治疗8例，单一环孢素A（CsA）治疗3例，已经停用激素13例，占86．7％。属于免疫抑制剂量不足者共10例，占66．7％。免疫抑制剂浓度正常范围者5例。按Banff分级标准排斥反应的程度为轻度者9例，中度6例，无重度排斥反应发生。治疗方法均首先加强或调整免疫抑制治疗，包括提高药物浓度、FK506／CsA转换、联合其他免疫抑制剂和激素冲击治疗，3例患者需长期口服激素。总的治愈率为80％，3例患者逐渐出现缺血型胆道病变，其中1例行再移植后死亡。结论迟发型急性排斥反应是肝移植术后常见但预后较好的并发症之一，免疫抑制不足是其发生的主要原因，及时地加强免疫抑制治疗可逆转排斥反应。     

供肝不同程度的缺血再灌注损伤对大鼠肝移植后急性排斥反应的影响

目的 探讨大鼠供肝不同程度的缺血再灌注损伤(IRI)对肝移植后急性排斥反应(AR)的影响.方法 用随机数字表法将大鼠分为6组,每组供、受者各12只,同系移植组供肝热冷缺血时间分别为0～2和80 min,同种移植1～4组供肝热冷缺血时间分别为0～2和80 min、0～2 min和10 h、15和80 min及15 min和10 h,假手术组仅开腹游离肝脏后关腹,不行肝移植.肝移植采用改良的Kamada二袖套法.术后1、3、5、7 d,分别处死每组3只受者,取移植肝组织,行病理学检杏观察病理改变和IRI程度,按照Banff系统分级标准对AR进行评分,采用免疫组织化学法和实时聚合酶链反应法检测移植肝组织Fas、穿孔素及颗粒酶B的蛋白和mRNA表达,采用原位末端标记法检测移植肝细胞的凋亡情况.结果 假手术组、同系移植组及同种移植1～4组移植肝组织病理学改变及IRI损伤程度依次加重.术后1、3、5、7 d,假手术组、同系移植组及同种移植4组未发现AR,同种移植1～3组AR明显;随着术后时间延长,同种移植1～3组AR评分均逐渐升高,各组内不同时间点的差异均有统计学意义(P<0.05);术后相同时间点,同种移植1～3组AR评分依次升高,组间差异均有统计学意义(P<0.05).术后各时间点,假手术组、同系移植组移植肝组织中Fas、穿孔素和颗粒酶B的蛋白及mRNA均无表达,F组仅有少量表达,同种移植1～3组较其他组的表达明显升高(P<0.05);术后相同时间点,同种移植1～3组的表达量依次升高,两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 肝移植后AR的程度与一定程度内的IRI呈正相关,但如IRI造成移植肝严重损伤,则AR的发生明显降低,Fas/FasL和穿孔素/颗粒酶B细胞凋亡途径在其中发挥重要作用.