肾母细胞瘤血小板衍化内皮细胞生长因子mRNA的表达及其临床意义

目的探讨小儿肾母细胞瘤中血小板衍化内皮细胞生长因子（PD-ECGF）mRNA的表达及其临床意义。方法用逆转录多聚酶链反应（RTPCR）方法检测30例肾母细胞瘤组织、8例瘤旁、4例无瘤肾组织的PD-ECGF mRNA的表达情况，并分析PD-ECGF mRNA的表达与肾母细胞瘤的病理分型、临床分期、转移及预后之间的关系。结果所有标本均有不同程度的PD-ECGF mRNA的表达，表达程度呈肿瘤组织、瘤旁组织、无瘤组织依次降低。肿瘤组织是瘤旁组织的1．22倍（t=0．855，P〉0．05）；瘤旁组织是无瘤对照组的2．07倍（t=2．65，P〈0．05）；肿瘤组织是无瘤对照组的2．53倍（t=2．05，P〈0．05）。在肾母细胞瘤组织中PD-ECGF mRNA的表达与病理分型无关（F=0．691，P〉0．05），与临床分期也无关（F=0．05，P〉0．05），但有转移者的PD-ECGFmRNA的表达高于无转移者。全部病例获得随访，平均随访50,2个月（17～75个月），术中已发现转移和术后转移复发共18例，死亡7例。所有转移、复发患儿的PD-ECGF mRNA水平是无转移、复发患儿的1．72倍（t=2．2766，P〈0．05）；是无瘤对照组的2．9倍（t=2．608，P〈0．05）。用PD-ECGF mRNA的表达预测肾母细胞瘤转移、复发及死亡的敏感性为83．3％，特异性80．0％。结论PD-ECGF mRNA在肾母细胞瘤组织中呈高表达，与其预后密切相关。提示PD-ECGF mRNA的表达对判断肾母细胞瘤预后有一定的意义。     

ATRA耐药基因HA117相关蛋白在四种恶性肿瘤的表达及临床意义

目的探讨ATRA耐药基因HA117相关蛋白在肠腺癌、肺癌、乳腺癌及神经母细胞瘤组织中的表达特点及临床意义。方法以肠腺癌标本20例、肺癌标本23例、乳腺癌标本21例以及神经母细胞瘤标本20例手术切除组织为实验组;以巨结肠手术切除扩张段近切H缘的正常结肠组织10例、手术切除的肺癌癌旁组织9例、乳腺癌癌旁组织11例及神经母细胞瘤瘤旁组织14例为对照组;应用免疫组化S-P法检测HA117蛋白在上述组织切片中的表达,并结合临床资料进行回顾性分析。结果HA117在肠腺癌、肺癌、乳腺癌以及神经母细胞瘤组织中阳性表达明显高于非癌组织,差异具有统计学意义（P〈0．05）;HA117蛋白的阳性表达与肠腺癌、肺癌及乳腺癌患者的肿瘤分期、病理分型、淋巴结转移无明显相关性（P〉0．05）,与神经母细胞瘤的病理分型和淋巴结转移有显著相关性（P〈0．05）。结论HA117蛋白在肠腺癌、肺癌、乳腺癌以及神经母细胞瘤组织的高表达提示这四种恶性实体肿瘤对ATRA具有较强的耐药性。     

COX-2在肾母细胞瘤中的表达及意义

目的通过研究COX-2在肾母细胞瘤中的表达，探讨COX-2与肾母细胞瘤的关系。方法应用免疫组织化学SABC法柃测25例肾母细胞瘤患儿肿瘤组织标本及10例瘤旁肾组织标本（距肿瘤边缘2cm的肾组织标本）中COX-2的表达情况。结果COX-2在肾母细胞瘤中阳性表达率为84％，对照组阳性表达率为10％，两者比较，差异有统计学意义（χ^2=16．753，P〈0．001）。伴有淋巴结转移的肾母细胞瘤患儿淋巴结COX-2阳性表达率高于无淋巴结转移者（χ^2=9．000,P〈0．01）。COX-2的阳性表达率随临床分期的增加而增高。COX－2的阳性表达率与肾母细胞瘤的临床分期呈正相关（r=0．966，P〈0．05）。结论COX－2的阳性表达率有随肾母细胞瘤临床分期的升高而增高的趋势，提示COX-2可能参与了肾母细胞瘤的发生发展过程，可为肾母细胞瘤的治疗和预防开辟新的途径。     

缺氧诱导因子-1α在小儿肾母细胞瘤中的表达E

目的研究缺氧诱导因子-1α（hypoxia—induciblefactor-1α,HIF一1et）在小儿肾母细胞瘤（wilmstumor,wT）中的表达及其与临床病理学参数、微血管密度（microvesseldensity,MVD）和预后的关系。方法选取本院2008年1月至2012年1月经手术切除的WT肿瘤标本45例,分别根据年龄、性别、病理分型、临床分期、NWTS-5高低危因素进行分组,采用免疫组织化学方法测定WT组织和瘤旁组织中HIF-1α和CD34的表达,通过CD34标记血管内皮细胞并计算MVD,结合临床资料和随访结果对实验数据进行统计学分析。结果wT组H1F-1α的阳性率高于瘤旁组（95．6％傩40％,P〈0．05）,HIF-1α在WT中的表达与与临床分期相关,P〈0．05;WT组MVD高于瘤旁组（58．22±10．009绑（49．43±8．114）,P〈0．05,HIF-1α的表达与MVD的相关系数为r=0．402,P〈0．05;HIF-1α表达阳性程度高危组高于低危组,P〈0．05,HIF．1et低表达组术后累计生存率显著高于高表达组,P〈0．05。结论HIF-1α的高表达与WT的生长有关,可促进肿瘤新生血管的生成,并提示小儿WT的预后不良。     

The expression and clinical significance of PRL-3 in Wilms tumor in children

目的 探讨促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)在小儿肾母细胞瘤、瘤旁组织中的表达,及其与肾母细胞瘤临床分期、病理类型、复发及化疗的关系.方法 用逆转录聚合酶链反应法、免疫组化S-P法从基因和蛋白水平检测39例肾母细胞瘤及30例瘤旁组织中PRL-3的表达,并对其与临床分期、病理类型、复发及化疗等进行相关性分析.结果 本组共检测肾母细胞瘤39例,其中30例为新鲜标本,9例为病理科存档石蜡标本;新鲜瘤旁组织30例.肿瘤复发者再次切除获得新鲜复发瘤标本3例.检测结果:PRL-3 mRNA在肾母细胞瘤组织中的表达明显高于瘤旁组织(f=5.16,P＜0.05),且随临床分期的增高其表达逐渐上升,经Spearman相关分析PRL-3 mRNA表达与临床分期呈正相关(r's=0.857,P＜0.05);肿瘤组织恶性程度越高阳性表达率越高(P2tail=0.0049＜0.05);复发的肿瘤组织及其原发瘤均为阳性表达;术前经过化疗的组织表达明显低于未经化疗者( P2tail=0.0348＜0.05);在蛋白水平的检测也得到了与上述一致的结果.结论 PRL-3基因和蛋白在肾母细胞瘤中明显表达,且与肾母细胞瘤的临床分期、恶性程度及是否复发密切相关,提示PRL-3 mRNA和蛋白检测不但有助于对肾母细胞瘤临床分期、恶性程度的判断及复发可能性的预测,还可为术后治疗方案的制定提供有力的依据.     

凋亡抑制因子及血管内皮生长因子在儿童肾母细胞瘤中的表达及意义

目的研究凋亡抑制因子（survivin）及血管内皮生长因子（VEGF）在肾母细胞瘤中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学SABC法及RT-PCR方法研究Survivin及VEGF在52例肾母细胞瘤组织，47例瘤旁组织及8例肾组织在蛋白水平及mRNA水平的表达情况。结果52例肾母细胞瘤组织中Survivin免疫组织化学显示阳性表达率为61．5％（32／52），RT-PCR阳性率为67．3％（35／52）；47例瘤旁组织中免疫组织化学显示阳性表达率为4．3％（2／47），RT-PCR阳性率为6．4％（3／47）；肾组织中未见表达。52例肾母细胞瘤组织中VEGF免疫组织化学显示阳性表达率为75．0％（39／52），RT-PCR阳性率为71．2％（37／52）；47例瘤旁组织中免疫组织化学显示阳性表达率为19．1％（9／47），RT-PCR阳性率为23．4％（11／47）；肾组织中免疫组织化学显示阳性表达率为12．5％（1／8），RT-PCR阳性率为25．0％（2／8）。另外，Survivin及VEGF在不良组织型肾母细胞瘤组织及瘤旁组织中表达均明显增高。Survivin及VEGF阳性者2年存活率均低于其表达阴性者。结论Survivin，VEGF表达与肾母细胞瘤的临床病理学特点有关，其与肿瘤血管的生成，血管内皮细胞的凋亡，稳定性密切相关，进而影响肿瘤的侵袭力。其检测有利于肾母细胞瘤的诊断及其预后情况的评价。     

神经母细胞瘤组织及裸鼠荷瘤细胞RECK和MMP-14的表达及临床意义

目的检测RECK及膜型基质金属蛋白酶-14（MMP-14）在神经母细胞瘤患者蜡块标本中的表达,进一步检测将患者新鲜肿瘤标本原代培养建立的细胞系接种于裸鼠后自建的裸鼠原位荷瘤及转移瘤细胞系中二者的表达,比较裸鼠两种细胞中二者的表达差异及临床意义。方法首先采用PV-6000免疫组化方法检测临床及病理资料齐全的存档神经母细胞瘤蜡块标本36例及节细胞神经瘤蜡块标本10例中RECK及MMP-14蛋向的表达。其次应用RT-PCR法检测自建裸鼠原位荷瘤及转移瘤细胞中RECK及MMP-14mRNA的表达。结果RECK蛋白在神经母细胞瘤组织中低表达（16．7％）,并随肿瘤浸润深度的加深及远处转移的发生而降低（P=0．015）。MMP-14蛋白在神经母细胞瘤组织中高表达（58．3％）,并随肿瘤浸润深度的加深及远处转移的发生而增高（P=0．002）。裸鼠原位荷瘤细胞系中RECKmRNA的表达较裸鼠转移瘤细胞系中明碾增高（t=3．012,P〈0．05）,MMP-14mRNA表达则明显降低（t=2．802,P〈0．05）。结论本研究提示,RECK及MMP-14蛋白和基因可能与神经母细胞瘤的浸润、转移有关,RECK及MMP-14可能在小儿神经母细胞瘤的发生、发展中起重要作用。     

化疗及非化疗组神经母细胞瘤干细胞标志物的表达及意义

目的探讨干细胞标志物CD133、ABCG2、CD117及nestin在神经母细胞瘤化疗组及非化疗组患儿中的表达及意义。方法收集上海交通大学附属新华医院小儿外科保存完好的20例神经母细胞瘤肿瘤组织的石蜡标本,按术前是否经历化疗分为术前化疗组和未化疗组,每组各10例,采用免疫组化SupperVision法检测4种标记物在肿瘤组织中的表达。结果CD133、ABCG2、CD117及nestin干细胞标志物在未化疗神经母细胞瘤组织中的平均阳性细胞率低于化疗后残留神经母细胞瘤组织中阳性细胞率的平均值,差异无统计学意义（P〉0．05）。两组患儿年龄、性别、分期及组织分型比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论儿童神经母细胞瘤中可能存在肿瘤干细胞,肿瘤干细胞对常规化疗药物具有耐药性。     

基质细胞衍生因子-1、趋化因子受体4及血管内皮生长因子在小儿肾母细胞瘤中的表达

目的 探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、趋化因子受体4(CXCR4)和血管内皮生长因子(VEGF)在小儿肾母细胞瘤中的表达及其与临床特征的关系.方法 收集郑州大学第一、三附属医院2003年5月-2008年5月手术切除经病理证实为肾母细胞瘤的石蜡标本30例.男13例,女17例;年龄4个月～7岁.其中预后良好组织型22例;预后不良组织型8例,以细胞质染成棕黄色为阳性细胞,以染色强度和阳性瘤细胞百分比的乘积作为阳性和阴性判断标准.对照组12例取瘤旁正常肾组织标本.2组均行HE染色,采用SPSS 13.0软件进行统计学分析.结果 VEGF、CXCR4和 SDF-1在肾母细胞瘤中的阳性表达率分别为63.33%、70.0%、53.33%,而在瘤旁正常肾组织中的阳性表达率分别为25.0%、8.3%、16.7%.VEGF、CXCR4 和 SDF-1在肾母细胞瘤中的表达均明显高于瘤旁正常肾组织(Pa<0.05),3者在临床分期Ⅲ～Ⅳ期和预后不良组织型组及有淋巴转移组的肾母细胞瘤中的表达明显高于在临床分期Ⅰ～Ⅱ期和预后良好组织型及无淋巴结转移的肾母细胞瘤中的表达(Pa<0.05).相关分析显示CXCR4与VEGF、SDF-1的阳性表达均呈正相关,SDF-1与VEGF的阳性表达亦呈正相关.肾母细胞瘤中CXCR4、SDF-1和VEGF的表达与肿瘤的淋巴结转移、病理分型及临床分期有相关性,而与性别无相关性.结论 VEGF、SDF-1及 CXCR4与肾母细胞瘤的发展、预后有关,参与了肿瘤血管的生成及肿瘤的增殖侵袭,对于评估患儿预后及靶向治疗肾母细胞瘤具有一定意义.     

肾母细胞瘤VEGF及其受体Flk-1的表达及其临床意义

目的 探讨肾母细胞瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(Flk-1)的表达和肿瘤微血管密度(MVD)的临床意义.方法 应用免疫组织化学(SABC)法检测33例肾母细胞瘤、瘤旁组织和6例正常肾组织中VEGF、Flk-1表达和MVD计数.观察并分析三个指标之间的相关性,同时分析其临床意义.结果 33例肿瘤组织VEGF阳性表达率81.8%,Flk-1阳性表达率69.7%,瘤旁组织VEGF阳性表达率9.1%,Flk-1阳性表达率6.1%,6例正常肾组织VEGF及Flk-1均为阴性表达,三者之问差异具有统计学意义.肿瘤组织MVD值29.7±12.4,瘤旁组织MVD值10.3±9.6,正常肾组织MVD值9.8±2.3.肿瘤组织的血管密度与后二者比较差异具有统计学意义.VEGF表达与Flk-1、MVD计数正相关,Flk-1与MVD表达正相关,VEGF、Flk-1表达在不同临床分期,及转归之问均具有显著性差异.结论 肾母细胞瘤中VEGF及其受体Flk-1呈高表达,血管生成增多,VEGF、Flk-1表达与MVD密切相关,提示VEGF及其受体Flk-1参与肾母细胞瘤的血管形成过程,促进血管生成,与预后相关.     

肾母细胞瘤CD44V6表达及其意义

目的 探讨ＣＤ４４Ｖ６在不同病理类型肾母细胞瘤中表达的差异及其意义。方法 用免疫组化方法,研究１７例不同病理类型肾母细胞瘤和１３例正常肾组织中ＣＤ４４Ｖ６的表达。结果 肾母细胞瘤ＣＤ４４Ｖ６阳性率为４７．１％,明显高于正常肾组织（７．７％,１／１３）。其中,间变型肾母细胞瘤ＣＤ４４Ｖ６阳性率１００％（５／５）,非间变型阳性率２５．０％（３／１２）,两者差异有显著性意义（Ｐ＝０．００９〈０．０２５）     

血管内皮生长因子在新生大鼠高氧肺损伤模型中的表达及意义

目的探讨高浓度氧暴露致新生大鼠急性肺损伤时血管内皮生长因子（VEGF）的表达及其对肺发育的影响,为临床防治支气管肺发育不良提供理论依据。方法生后2—3日龄新生Sprague—Dawley（SD）大鼠48只随机分为空气组和高氧组各24只,分别置于空气及常压氧气（I〉95％）喂养,采用荧光定量PCR和Western Blot方法检测第1、3、7天时各组大鼠肺组织VEGF mRNA和蛋白表达水平,HE染色动态观察新生大鼠肺组织形态结构变化。结果两组大鼠肺组织第1、3、7天VEGF mRNA和蛋白表达水平均逐渐降低,高氧组明显低于空气组,第1天差异无统计学意义（P〉0．05）,第3、7天差异有统计学意义（P〈0．05）[VEGF mRNA：1天（0．86±0．35）比（1．00±0．28）,3天（0．54±0．26）比（0．92±0．34）,7天（0．32±0．20）比（0．61±0．12）;VEGF蛋白：1天（0．78±0．33）比（1．00±0．16）,3天（0．60±0．08）比（0．85±0．27）,7天（0．34±0．12）比（0．56±0．18）]。与空气组相比,高氧组肺组织显著发育不良,肺泡结构简单,肺泡数目减少,肺微血管发育受阻。结论VEGF对肺发育起重要作用,其确切作用机制有待进一步研究。     

肾母细胞瘤中CyclinD1蛋白的表达及其意义

目的探讨CyclinD1蛋白在肾母细胞瘤中表达及其意义。方法将28例肾母细胞瘤和19例瘤旁肾组织制作组织芯片,并用免疫组织化学方法检测其中CyclinD1蛋白及p53蛋白的表达。结果CyclinD1和p53蛋白在肾母细胞瘤和瘤旁肾组织标本中的阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05),在肾母细胞瘤不同分化程度组差异亦有统计学意义(P<0.05)。CyclinD1蛋白表达与p53蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论CyclinD1及p53可作为判断肾母细胞瘤分化程度的标志物,CyclinD1蛋白异常表达及p53突变可能在肾母细胞瘤发生中发挥重要作用。     

SOX10mRNA在先天性巨结肠肠壁中的表达

目的研究性别决定区Y基因相关高可变区基因10（SRY related high mobilitvgroup—BoX gene10，SOX10）在先天性巨结肠（Hirschsprung’s disease，HD）肠壁中的表达情况，以进一步了解HD在分子基础上的发病机制。方法分别取12例先天性巨结肠病例的手术标本狭窄段、移行段及扩张段，随机取12例非巨结肠手术病例（如结肠造瘘或关瘘手术）作为对照组，提取平滑肌组织总RNA，应用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）扩增目的基因和看家基因片段，观察病变段和正常段SOX10mRNA的表达，并与看家基因（B—actin）在病变段和正常段的表达比较，进行统计学分析。结果SOX10mRNA在HD患儿痉挛段呈低表达，在扩张段及正常对照组呈高表达。痉挛段SOX10mRNA的表达量与移行段、扩张段及正常对照组比较，差异均有统计学意义；而移行段、扩张段及对照组比较，差异无统计学意义。结论HD患儿结肠SOX10mRNA的异常分布显示SOXIO基因是出生后肠神经系统维持正常功能所必需的，SOX10mRNA表达减少可引起肠管痉挛，肠腔狭窄，造成肠功能障碍。     

Wnt-5a基因在神经母细胞瘤中的表达及意义

目的本研究旨在研究神经母细胞瘤Wnt-5a基因的表达,并探讨其与肿瘤的临床分期、病理分型及对化疗的反应等的关系。方法选择2003年至2008年住院治疗的77例神经母细胞瘤病例进行研究,其中恶性神经母细胞瘤病例（43例）和节细胞性神经母细胞瘤病例（19例）为实验组,良性神经节细胞瘤病例（15例）为对照组。采用蛋白质免疫印迹杂交（Western blotting）方法检测肿瘤组织中Wnt-5a基因的表达。结果与对照组[光密度值（4．79±0．75）×10^5]相比,Wnt～5a基因在实验组中的表达[1、2、3、4和4s期的光密度值分别为（2．87±0．43）×10^5、（2．13±0．35）×10^5、（2．07±0．44）×10^5、（1．73±0．11）×10^5]明显下调（P〈0．01）。在实验组中,Wnt-5a基因在3、4和4S期的表达[光密度值分别为（2．13±0．35）×10^5、（2．07±0．44）×10^5、（1．73±0．11）×10^5]显著低于1、2期[光密度值为（2．87±0．43）×10^5,P〈0．01）];4期病例中,Wnt－5a基因在神经母细胞瘤中的表达低于节细胞性神经母细胞瘤（P〈0．05）。术前化疗的3、4期病例Wnt－5a基因的表达[光密度值分别为（2．13±0．35）×10^5、（2．07±0．44）×10^5]显著低于良性对照组[光密度值为（4．79±0．75）×10^5,P〈0．01）],也低于未予化疗的1、2期病例[光密度值为（2．87±0．44）×10^5,P〈0．01）]。结论Wnt-5a基因的表达与肿瘤的临床分期和恶性侵袭程度呈负相关。     

儿童原发性肾病综合征肾组织CD2AP表达与足细胞损伤相关性的初步探讨

目的观察原发性肾病综合征(PNS)患儿肾组织CD2AP蛋白和mRNA的表达,探讨其与足细胞损伤的关系。方法以2012年1月至2013年6月上海市儿童医院收治的PNS且行肾活检的病例为PNS组,以同期我院行泌尿系统肿瘤切除患儿为对照组,取远离肿瘤并病理确认为正常肾组织。PNS组和对照组均行常规切片染色,光镜观察肾脏组织病理改变,电镜观察足细胞的结构变化,分别采用q PCR和免疫组化测定肾组织CD2AP mRNA和蛋白的表达。PNS组CD2AP mRNA表达与血清白蛋白(ALB)、SCr、三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)、补体C3、24 h尿蛋白定量和肾小球滤过率(e GFR)行相关性分析。结果 PNS组18例、对照组11例进入分析,两组性别和年龄差异无统计学意义。1PNS组肾组织CD2AP蛋白的表达较对照组降低,(1.302±0.885)vs(2.24±1.18),P0.05,且病理表现为局灶节段性硬化(FSGS)的PNS患儿CD2AP蛋白表达最低。2PNS组肾组织CD2AP mRNA的表达较对照组下调,(0.008 58±0.006 12)vs(0.019±0.012),P0.05。3PNS组肾组织CD2AP mRNA表达与血清TG(r=-0.527,P0.05)、24 h尿蛋白定量(r=-0.602,P0.01)呈负相关,与肾组织CD2AP的蛋白表达呈正相关(r=0.788,P0.01),而与血清Alb、TC、补体C3、GFR和SCr无显著相关性。结论 PNS患儿肾小球足细胞中CD2AP的蛋白和mRNA表达降低,特别是病理表现为FSGS的患儿,可能对足细胞病变的诊断有一定帮助。CD2AP的表达量可能与PNS临床指标相关。