脑淀粉样血管病并脑出血4例

例1 女性,67 岁,突发意识不清、昏迷.颅脑CT示左侧枕顶叶脑出血并破入脑室.术中见左顶叶机化血块伴畸形血管团样组织.例2 男性,75 岁,无明显诱因出现意识不清.颅脑CT示左侧脑出血.术中见左侧额顶皮层下血肿,脑皮层血管出血,皮层及血肿质地较硬,考虑血管淀粉样变性,不排除血管畸形.例3 女性,66 岁,无明显诱因头...     

阿尔茨海默病患者血清中抗淀粉样蛋白抗体的免疫耐受

目的:研究阿尔茨海默病(AD)血清中抗Aβ抗体与淀粉样蛋白结合的特性。方法:以AD患者和健康老人的血清作一抗,①用组织淀粉样斑块免疫反应(TAPIR)观察与Tg2576鼠脑内老年斑结合能力;②Western blot检测与Aβ42-GST融合蛋白的结合能力;③将Aβ42与PC12细胞培养,加入健康老人和AD患者的血清后,MTT法观察PC12细胞存活率。结果:AD患者的血清中抗Aβ抗体与成熟老年斑和Aβ42-GST融合蛋白的结合能力较弱;加入AD血清后,PC12细胞的A值较健康老人血清相比下降明显(P<0.01)。结论:AD血清中抗Aβ抗体对淀粉样蛋白可能存在着免疫耐受。     

人抗Aβ42自身抗体的纯化及鉴定

目的纯化并鉴定正常人血清中抗Aβ42自身抗体。方法采集正常人血清标本,测定抗体含量,用饱和硫酸铵沉淀血清得到IgG粗品,用CNBr Sephrose 4B层析柱对粗品IgG进一步纯化,采用PAGE电泳和Westernblot方法鉴定IgG纯度和免疫活性。结果用CNBr活化Sephrose4B柱可纯化出较高纯度的抗AB42自身抗体,纯度可达到90％。结论CNBr活化Sephrose4B层析柱可有效地从人血清中纯化出较高纯度的抗A％自身抗体,便于对自身抗体进一步研究,为AD的免疫治疗提供更多的信息。     

人抗Aβ_(42)自身抗体的纯化及鉴定

目的纯化并鉴定正常人血清中抗Aβ42自身抗体。方法采集正常人血清标本,测定抗体含量,用饱和硫酸铵沉淀血清得到IgG粗品,用CNBr Sephrose 4B层析柱对粗品IgG进一步纯化,采用PAGE电泳和Western blot方法鉴定IgG纯度和免疫活性。结果用CNBr活化Sephrose 4B柱可纯化出较高纯度的抗Aβ42自身抗体,纯度可达到90%。结论 CNBr活化Sephrose 4B层析柱可有效地从人血清中纯化出较高纯度的抗Aβ42自身抗体,便于对自身抗体进一步研究,为AD的免疫治疗提供更多的信息。     

老年痴呆噬菌体抗体库的构建及抗Aβ肽单链抗体的筛选

目的: 构建人源性的老年痴呆(AD)噬菌体抗体库,筛选1株人源性的β-淀粉样蛋白(Aβ)特异性单链抗体(scFv).方法: 利用噬菌体展示技术,用20个AD患者的外周血B细胞首次构建了AD患者的单链可变区噬菌体抗体库.以Aβ40为靶,挑选出77个阳性抗体克隆,从中筛选出一个抗Aβ scFv-H1,并对其重链和轻链可变区基因进行测序分析.利用预吸附实验及竞争性ELISA测定该抗体对Aβ40的特异性及结合位点. 结果: 成功构建出AD患者的单链可变区噬菌体抗体库,库容量为1.5×106.从库中筛选出1株抗Aβ40的单链噬菌体抗体-H1,DNA测序结果证实了其抗体的基因结构及氨基酸序列.预吸附及竞争性ELISA证实该抗体对Aβ40的结合表位位于蛋白氨基端的1到16个氨基酸内. 结论: 利用噬菌体抗体库技术可成功制备Aβ肽特异性scFv,为AD患者的临床诊断和被动免疫治疗提供了一种新的可供选择的途径.     

抗β-淀粉样多肽抗体治疗阿尔茨海默病研究进展

阿尔茨海默病（Alzheimerdisease,AD）是中枢神经系统一种常见的进行性神经退行性疾病,也是痴呆的常见类型,以记忆障碍和认知功能损害为突出临床表现。AD三大特征性病理改变为：老年斑（senile plague,SP）、神经纤维缠结（neurofibrillary tangles,NFT）和神经元（尤其是胆碱能神经元）缺失。其中老年斑的主要成分是B-淀粉样多肽（beta-amyloid peptide,A母）聚集形成的纤维,[第一段]     

抗阿尔茨海默病Aβ人源单链抗体基因的筛选和表达

目的 从人源噬菌体单链抗体库中筛选与阿尔茨海默病发病中起关键作用的β淀粉样多肽(Aβ)1-42特异性结合的单链可变区抗体(scFv)基因,利用原核生物大肠杆菌进行可溶性表达,以获得抗AB1-42人源抗体.方法 利用噬菌体展示技术对人源噬菌体单链抗体库进行多轮富集,以Aβ1-42为抗原经酶联免疫吸附(ELISA)检测,筛选与Aβ1-42特异性结合的阳性噬菌体克隆,再用阳性噬菌体感染E.coli HB2151进行可溶性表达,经SDS-PAGE、Western blot及ELISA法检测scFv单抗的可溶性表达水平及抗原结合活性.并对阳性scFv抗体基因进行基因测序鉴定.结果 获得了7个特异性的抗Aβ1-42 scFv阳性噬菌体克隆,其中4个克隆ELISA检测吸光度值(A值)高于阴性对照5倍以上;其中1株(A 10)获得可溶性单链抗体的成功表达,表达产物主要位于菌体中,ELISA效价显示在全菌蛋白中A值高于对照5倍以上.其相对分子质量约为33 000.DNA测序表明所获抗体的可变区基因属于scFv抗体基因,推导得到的氨基酸序列具有典型的抗体可变区结构.结论 用人源噬菌体单链抗体库筛选出抗Aβ1-42的人源抗体单链可变区基因,并成功表达了具有抗原结合活性的可溶性单链抗体,为进一步研究阿尔茨海默病的发病机制和治疗奠定了基础.     

抗阿尔茨海默病Aβ人-鼠嵌合抗体基因的真核载体构建和表达

目的 通过基因工程抗体技术构建和表达抗β-淀粉样多肽(Aβ)人-鼠嵌合抗体,减低鼠源单克隆抗体在临床应用中引起的人体免疫排斥反应.方法从分泌抗Aβ1-42鼠单克隆抗体杂交瘤细胞株中提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增鼠源性抗体全长基因,并通过Blast对其序列进行分析;利用重组PCR技术拼接重轻链可变区及人IgG1的恒定区基因,并对重链Fc段进行定点突变以降低排斥反应;分别构建人-鼠嵌合基因重轻链表达载体,用脂质体法将其同时导入COS-7细胞中表达,并利用ELISA和免疫组织化学(SP法)对分泌的抗体功能和性质进行初步鉴定.结果 Blast比对分析结果显示克隆的基因序列符合小鼠抗体基因序列,将可变区基因与人IgG1的恒定区基因拼接以及Fc定点突变后,成功构建了嵌合抗体的真核表达载体,并实现真核表达;ELISA和免疫组织化学方法证实了所分泌抗体的人源性和与Aβ的结合特异性.结论成功地构建和表达了抗阿尔茨海默病Aβ人-鼠嵌合抗体,为其在阿尔茨海默病的临床诊治中应用和进一步改造奠定了基础.     

β-淀粉样蛋白特异性单链抗体的制备及鉴定

目的制备1株人源性的β-淀粉样蛋白(Aβ)特异性单链抗体(scFv),并进行性能鉴定。方法利用噬菌体展示技术,用20个AD病人的外周血B细胞首次构建了AD患者的单链可变区噬菌体抗体库。以Aβ1-40为靶,挑选出77个阳性抗体克隆,从中筛选出一株抗Aβ单链抗体H1,对其重链和轻链可变区基因进行测序分析。通过表达载体pET28a(+)对目的蛋白进行大量表达,并利用Western-blot对单链抗体H1的免疫活性进行鉴定。结果成功构建出AD患者的单链可变区噬菌体抗体库,库容量为1.5×106。从库中筛选并表达出一株抗Aβ1-40的单链抗体H1,DNA测序结果证实了其抗体的基因结构及氨基酸序列。Western-blot检测证实该抗体可特异性结合Aβ1-40。结论利用噬菌体抗体库技术可成功制备Aβ肽特异性单链抗体,为AD患者的临床诊断和被动免疫治疗提供了一种新的可供选择的途径。     

β-淀粉样蛋白单链抗体表达和纯化条件的优化

目的:优化β-淀粉样蛋白单链抗体(scFv)的诱导表达和纯化条件。方法:在固定诱导表达时间和诱导表达温度的条件下,采用不同终浓度的IPTG进行诱导表达,通过SDS-PAGE分析全菌液总蛋白中目的蛋白E3 scFv的表达水平,确定所需诱导剂IPTG的最佳浓度。在目的蛋白结合到亲和层析柱之后,采用不同终浓度的咪唑溶液进行洗脱,通过收集各管洗脱液、Western blot等方法确定预洗脱液咪唑的最佳浓度。结果:E3 scFv在20℃诱导表达18 h时,所需诱导剂IPTG的最佳浓度为0.1 mmol/L;纯化时,预洗脱液咪唑的最佳浓度为10 mmol/L。结论:通过优化上述条件,我们建立了一个高效表达及纯化E3 scFv的方法,为后续的研究奠定了基础。     

阿尔茨海默病人外周血中抗淀粉样蛋白抗体的特性

目的比较AD病人和健康老年人外周血中的抗Aβ抗体特性。方法随机选择AD患者45例和健康老年人51例,①用间接ELISA法测定血清中的抗Aβ抗体滴度,②免疫组织化学ABC法观察AD病人和健康老人血清中的抗Aβ抗体与Tg2576鼠脑内老年斑的结合情况;③不同抗体水平的AD病人和健康老人的血清分别与PC12细胞培养,用MTT法检测PC12细胞的存活率。结果①AD病人和健康老人血清中的抗Aβ抗体分别为(119.78±84.50)μg/ml和(200.44±216.78)μg/ml,差异有显著性意义(P<0.05);②免疫组化发现用AD病人血清作一抗,抗Aβ抗体不能很好地显示已经形成的老年斑;③虽然AD病人血清中抗Aβ抗体较高,对PC12细胞的保护作用反而下降,且与Aβ42的剂量无相关性;而健康老人的血清仍能表现出较强的PC12细胞保护作用。结论AD病人血清中抗Aβ抗体滴度下降,与老年斑结合能力和对细胞的保护能力也下降。     

抗Aβ鼠源单克隆抗体的人源化改造及其表达鉴定

目的 将前期构建的抗Aβ人-鼠嵌合抗体进行可变区人源化改造,为抗Aβ抗体在临床人体中应用奠定基础。方法 采用模板替换法对已构建的人-鼠嵌合抗体基因中的重、轻链可变区框架区进行人源化改造,构建抗Aβ人源化抗体的真核表达载体。用脂质体法将重、轻链共转染CHO细胞进行表达,采用ELISA法检测表达产物效价、表达量;同时用SDS-PAGE及Western Blot检测表达产物分子量;免疫组化法鉴定其生物活性。结果 重组改造后的抗Aβ人源化抗体基因重链约为1500bp,轻链约为750bp,与预期一致。转染CHO细胞后获得表达,表达量为1.11mg/L,抗体重链相对分子量约为51ku,轻链约为25 ku。ELISA结果显示能与Aβ特异性结合（细胞培养上清A值：2.24）,与改造前的嵌合抗体比较效价基本相同。抗体人源化检测显示,只能被羊抗人抗体识别,不能被羊抗鼠抗体识别。免疫组化显示表达产物有结合Aβ抗原的活性。结论 将抗Aβ人-鼠嵌合抗体进行可变区人源化改造后,基本保持了原嵌合抗体的生物学特性,为其今后应用于临床提供了可能性。     

β-淀粉样多肽1-42(Aβ42)多克隆抗体的制备及其鉴定

目的：β—淀粉样多肽1—42(Amyloid β1-42，简称Aβ42)是存在于阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease，AD)患者脑组织中的特异病理改变之物，同时它在AD患者的脑积液及血浆中有所改变。我们制备Aβ42多克隆抗体及其建立测定方法，是希望找到—个特异性鉴定AD的生物指标。方法：将Aβ42多肽与匙孔虫戚血蓝蛋白(KLH)偶联，免疫新西兰白兔从而产生抗—Aβ啦多克隆抗体。此特异性抗体可用于ELISA、Western印迹法和免疫组织化学的方法中，并可测定AD脑组织中的特异性淀粉样沉淀物。结果：通过免疫组织化学法鉴定此抗—Aβ42多克隆抗体，结果显示在AD患者的脑组织淀粉样沉淀物中呈阳性。同时应用Western印迹法对Aβ42抗体进行了鉴定，结果显示Aβ42多肽的分子量与Aβ42多肽标准的4．5kDa分子量相一致。结论：我们所制备的Aβ42多克隆抗体能与Aβ42抗原呈特异性结合，这就为研究淀粉样前体蛋白(APP)在生理学和病理生理学上的机制提供了—个有效工具。     

血浆β-淀粉样蛋白对MCI及AD患者检测的诊断价值分析

目的:探讨血浆β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein,Aβ)在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)及轻度认知功能障碍(mild cognitive impairment,MCI)中的识别诊断作用,为寻求MCI识别诊断和转归预测的生物标志物提供依据。方法:选取2018年5月至2019年...     

早老性痴呆病-淀粉样蛋白Aβ研究进展

早老性痴呆病因世界人口的老龄化而逐渐成为人们研究的热点。β样淀粉蛋白(Aβ)在神经系统中的过量沉积是老年痴呆病人的显著特征，本文简单综述了Aβ的形成途径及影响因素，重点对目前世界范围内老年痴呆病的成因及治疗研究进展进行了介绍。     

阿尔茨海默病患者外周血Aβ抗体和细胞因子的变化

目的 探讨阿尔茨海默病（AD）患者外周免疫功能的变化。 方法 以2006-06～2007-04广州市老人院29例AD患者作为观察对象,其中轻中度AD患者19例,重度10例;对照组19例为同期健康老人。用夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定外周血Aβ抗体以及抗原特异性细胞因子的水平;流式细胞术(FACS)检测外周血淋巴细胞亚群变化;酶联免疫吸附斑点试验（ELISPOT）检测抗原特异性细胞因子的分泌细胞频数。 结果 轻中度和重度AD组患者外周血Aβ₄₂抗体水平较对照组有不同程度的下降(分别为P<0.05,P<0.01)。AD组CD8较对照组显著升高（P<0.05）; CD4较对照组显著降低（P<0.05）; 轻中度和重度AD组之间CD8、CD4及CD4/ CD8差异均无统计学意义(P>0.05)。AD组外周血单核细胞(PBMC)培养上清IFN-γ的含量较对照组降低（P<0.05）,以重度AD组更明显。ELISPOT检测结果,AD组每4×10⁵个PBMC中分泌IFNγ的细胞频数较对照组显著减少（P<0.01）,以重度AD患者更为明显。 结论 AD患者外周血Aβ抗体水平下降;淋巴细胞亚群失调,特异性细胞免疫功能受损。     

老年性痴呆研究中β淀粉样蛋白42C端类似物的抗体制备

老年性痴呆 (Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｄｉｓｅａｓｅ,ＡＤ)的病理特征之一是脑内大量出现 β淀粉样肽 (Ａβ)沉积 ,形成老年斑 ,并由此引起相关的一些病理改变。突变型 β淀粉样肽前体蛋白 (ａｍｙｌｏｉｄｐｒｅｃｕｒｓｏｒｐｒｏｔｅｉｎ ,ＡＰＰ)转基因小鼠可产生大量的Ａβ沉积 ,出现老年斑和神经元损伤 ,Ａβ是引起神经元损伤的重要原因之一。 1999年Ｓｃｈｅｎｋ等[1] 应用Ａβ1 4 2多次免疫转基因小鼠 ,获得了高滴度的抗Ａβ1 4 2抗体 ,对 6周龄小鼠免疫 ,可使小鼠不产生老年斑 ,对 11个月龄小鼠免疫则可减少老年斑和相关神经病理改变 ,…     

阿尔茨海默病与β-淀粉样蛋白相关性研究现状

阿尔茨海默病(AD)是一种中枢神经系统变性病,常伴随有认知障碍、记忆力减退、人格改变等。AD的病因和发病机制尚不明确,由β淀粉样蛋白沉积(amyloid-β,Aβ)所积聚的细胞外老年斑(SP),tau蛋白过度磷酸化产生的神经细胞内神经原纤维缠结(NFT)和神经元丢失伴胶质细胞增生是AD发生的病理学基础。本文综述归纳了AD与Aβ相关性的最新进展情况。     

大鼠原发性脑于损伤延脑淀粉样β蛋白及其蛋白前体的表达

目的 探讨早期诊断原发性脑干损伤(PBSI)中弥散性轴索损伤(DAI)的敏感标记.方法 应用免疫组织化学SP法及RT-PCR技术研究在大鼠原发性脑干损伤模型中,延脑DAI与淀粉样β蛋白(Aβ蛋白)的表达及淀粉样β前体蛋白(β-APP)mRNA的半定量分析,以此来评估进行DAI早期诊断的有效性.结果 免疫组化Aβ染色神经轴突测量3～24 h损伤组,轴突明显增粗,并且稳步增加,与对照组相比差异均有统计学意义,并且与时间呈正相关,β-APPmRNA表达增加最早从1 h损伤组开始,并于3 h达到高峰.结论 β-APP是DAI的敏感性和特异性标记,RT-PCR技术是一种快速的和敏感的方法,再结合免疫组化技术检测Aβ蛋白,可能对早期诊断DAI是非常有效的.     

以β淀粉样蛋白作为阿尔茨海默症治疗靶点的研究进展

β淀粉样前体蛋白(APP)是一种单次跨膜天冬氨酸蛋白质,其被β和γ分泌酶相继水解后会产生具有毒性作用的β淀粉样蛋白(Aβ).阿尔茨海默症(AD)最主要的病理特征是Aβ在神经元胞外大量聚集形成淀粉样斑及tau蛋白在胞内过度磷酸化形成纤维化缠结.长期以来,AD的发病被认为与Aβ聚集具有较大的相关性,以Aβ为靶点的抗体性治疗...