PCR检测生殖器疱疹患者HSV—2

目的：用聚合酶链反应检测生殖器疱疹患者２型单纯疱疹病毒。方法：对１０１例生殖器疱疹和糜烂患者及２０例对照组用ＰＣＲ法检测ＨＳＶ－１,ＨＳＶ－２。结果：ＨＳＶ－２检出阳性率占６０．４％（６１／１０１）,ＨＳＶ－２和ＨＳＶ－１双重感染占４％（４／１０１）,对照组均为阴性,并且年龄轻者感染阳性率高于年龄长者,结论：ＰＣＲ具有操作较易,快速,敏感的特点,为临床对生殖疱疹的诊断和鉴别诊断提供了理想的新方法。     

CMV,HSV和TOX感染与先天性心脏病的关系

目的：为了探讨巨细胞病毒（ＣＭＶ）、弓形体（ＴＯＸ）帮单纯疱疹病毒（ＨＶＳ）感染与先天性心脏病病因学的关系．方法：收集先天性心脏病心肌组织６６份,非先心病心肌组织３８份,采用ＰＣＲ技术进行病原基因的检测．结果：在６６例先心病心肌组织中检测到ＣＭＶ,ＨＳＶ,ＴＯＸ的阳性率分别为＃２６％,４％和１５％,而３８例对照组中阳性率分别为２１％,３％和３％,ＴＯＸ在两组中检测有显著性差异（Ｐ〈０．０５）．结论     

PCR技术检测孕妇外周血中胎儿细胞的研究

根据Ｙ染色体序列特点，含有Ｙ染色体特异重复ＤＮＡ族（ＤＹＺ１）８００～５０００拷贝、新设计一对引物Ｙ３、Ｙ４经聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增该序列的特定片段，来检测孕妇血中胎儿细胞。作者用此方法扩增各妊娠早、中、晚孕妇外周血标本粗提ＤＮＡ，检测男性胎儿细胞，与相应的绒毛、羊水及娩出胎儿性别相比较，符合率分别为９３％、１００％、８７．５％。本研究为无创伤性产前诊断提供了新的途径。     

应用荧光定量PCR检测血清中HCV RNA

目的 :探讨荧光定量PCR(FQ PCR)法检测血清中丙型肝炎病毒 (HCV)含量的敏感性、特异性。方法 :采用FQ PCR和逆转录巢式PCR同步检测 76份HCV抗体阳性血清标本 ,并对两种方法的检测结果进行对照比较。结果 :FQ PCR定量HCVRNA拷贝数在 10 2 ～10 6拷贝·μl-1,其中低于 10 3 拷贝·μl-1占 2 0 .93 % ,10 3 ～ 10 5拷贝·μl-1占 60 .47% ,高于 10 5拷贝·μl-1占 18.60 %。 76份HCV抗体阳性血清中 ,巢式PCR检测阳性为 45份 ,FQ PCR检测阳性为 43份 ,二者相对符合率为 97.3 7%。结论 :FQ PCR检测HCVRNA与常规定性巢式PCR特异性、敏感性基本一致。     

用PCR检测乙型肝炎患者血清巨细胞病毒活动性感染

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测１２５例乙型肝炎患者血清中巨细胞病毒脱氧核糖核酸（ＣＭＶ－ＤＮＡ）诊断ＣＭＶ活动性感染、同时与酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测血清中ＣＭＶ－ＩｇＭ的结果相比较。结果显示：ＣＶＭ－ＤＮＡ阳性率为３２．８０％，同于ＣＭＶ－ＩｇＭ阳性率１５．０２％，各型肝炎中，急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化血清ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率分别为１９．０５％，３５．２９％。血清ＣＭＶ－ＤＮＡ阴性的乙     

衡阳地区性乱人群中HSV2感染的研究

目的：了解性乱人群典型皮损及无皮损的生殖道分泌物中2型单纯疱疹病毒（HSV2）的感染情况。方法：用PCR法对衡阳地区310例性乱者作HSV2－DNA检测。结果：187例典型皮损的性乱人群中,115例检出HSV2－DNA,阳性率为61．5％,其中男性阳性率为54．9％,女性阳性率为77．8％,男女之间差异显著（P＜0．05）。123例无皮损性乱人群中,28例检出HSV2－DNA,HSV2－DNA检出率为22．8％,其中男性阳性率为20．9％,女性阳性率为27．0％。结论：衡阳地区性乱人群中HSV2有较高的感染率,典型皮损区HSV2－DNA检出率高于无皮损的生殖道分泌物。     

鼻咽癌病人血浆和外周血白细胞EB病毒DNA定量分析

目的比较鼻咽癌(NPC)病人治疗前后血浆、外周血白细胞Epstein-Barr病毒(EBV)DNA水平的变化及癌组织EBV整合状况,探讨这些变化与NPC临床病理变化的关系.方法对150例初诊NPC病人治疗前后血浆和外周血白细胞、75名正常人血浆和外周血白细胞、49例NPC组织及47例鼻咽慢性炎组织EBV-DNA进行荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)分析.结果 NPC病人治疗前血浆EBV-DNA水平及检出率分别为82 500拷贝/ml(中位数)和92%,均显著高于治疗后(0拷贝/ml,19%)和正常人(0拷贝/ml,12%)(P<0.05),而NPC病人治疗后和正常人血浆EBV-DNA水平和检出率差异均无显著意义(P>0.05).NPC病人治疗前外周血白细胞EBV-DNA水平及检出率(0拷贝/肌动蛋白,24%)与治疗后(0拷贝/肌动蛋白,14%)和正常人(0拷贝/肌动蛋白,16%)三者间差异均无显著意义(P>0.05).NPC病人治疗前、后及正常人血浆EBV-DNA水平与对应外周血白细胞EBV-DNA水平均无显著相关性(P>0.05).EBV-DNA(荧光定量PCR法)和EBER1(原位杂交法)在NPC组织检出率均为100%,显著高于鼻咽慢性炎组织中EBV-DNA和EBER1检出率(分别为40%和0)(P<0.05).NPC组织EBV-DNA水平为27.8拷贝/肌动蛋白(中位值),显著高于鼻咽慢性炎组织(0拷贝/肌动蛋白)(P<0.0001),NPC组织EBV-DNA水平与对应癌组织内EBER1阳性细胞占组织总细胞比率(中位值0.35)有显著正相关性(相关系数r= 0.513)(P<0.0001).NPC病人治疗前血浆EBV-DNA水平随临床TNM分期越晚而显著增高(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期中位值分别为2500、32 590、86 000和166 200拷贝/ml)(P=0.004).而NPC治疗前外周血白细胞EBV-DNA水平在TNM各期均为0拷贝/肌动蛋白,差异无显著意义(P>0.05).结论研究结果提示NPC病人血浆EBV-DNA水平是反映NPC肿瘤消长情况的灵敏、可靠的指标,可在分子水平对NPC的TNM分期进行补充.NPC病人血浆EBV-DNA水平与外周血白细胞EBV-DNA水平没有相关性,提示血浆EBV-DNA可能来源于肿瘤细胞的裂解释放,并反映病人体内瘤荷大小.     

荧光定量PCR检测孕妇单纯疱疹病毒的感染

目的探讨荧光定量PCR技术(Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction, FQ-PCR)检测孕妇单纯疱疹病毒(HSV)感染的临床诊断价值.方法45例怀疑HSV-Ⅱ感染的孕妇用ELISA法检测血清HSV-ⅡIgM,同时用FQ-PCR检测血清及宫颈分泌物HSV DNA.结果该组孕妇血清HSV-ⅡIgM阳性率为20.0%,血清HSV DNA阳性率为33.3%,后者检出阳性率明显高于前者(P＜0.05).宫颈分泌物标本HSV DNA阳性率为40.0%,明显高于血清ELISA检测阳性率(P＜0.05),但与血清FQ-PCR检出阳性率无显著性差异(P＞0.05).结论荧光定量PCR检测孕妇HSV DNA感染可以提高诊断率及准确率.     

聚合酶链反应检测宫颈糜烂患者单纯疱疹病毒感染

目的 :探讨宫颈糜烂患者单纯疱疹病毒 (HSV)感染情况。方法 :用聚合酶链反应检测宫颈糜烂患者和正常对照组单纯疱疹病毒感染情况。结果 :10 2例宫颈糜烂患者中 ,HSV- 1和 HSV- 2阳性率分别是 4 .9%和 30 .4 % ,正常对照组中 ,HSV- 1和 HSV- 2阳性率分别为 2 .7%和 12 .0 %。结论 :HSV感染与宫颈糜烂关系密切 ,且以 HSV- 2感染为主。     

直接分型检测单纯疱疹病毒PCR方法的研究

作依据单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）ＤＮＡ聚合酶基因的核苷酸序列，设计三个引物，一个上游ＨＳＶ－１／ＨＳＶ－２型共同性引物，一个下游ＨＳＶ－１型特异性引物和一个下游ＨＳＶ－２型特异性引物，建立分型检测ＰＣＲ的方法，ＨＳＶ－１的扩增产物是４７７ｂｐＨＳＶ－２扩增产物为３９９ｂｐ，扩增产物的克隆及序列分析表明，该方法特异，用此方法对ＢＡＬＢ／ｃ幼鼠中枢神经系统ＨＳＶ感染的脑标本进行了检测，进一步证实直接分型     

鼻咽癌患者外周血白细胞及血清中EB病毒DNA的检测

目的探讨鼻咽癌患者外周血白细胞及血清中EB病毒DNA的分布及其与鼻咽癌的关系.方法采用多聚酶链反应检测24例鼻咽癌患者(实验组)及10例头颈部其它部位肿瘤(对照组-1)和10例慢性鼻咽炎患者(对照组-2)外周血白细胞及血清中EB病毒的DNA.同时采用免疫酶法检测以上各组患者血清中EB病毒VCA-IgA抗体的效价.结果发现实验组中10例患者外周血白细胞中EB病毒DNA为阳性,阳性率为41.67%(10/24).对照组-1阳性率为10%(1/10),对照组-2患者外周血白细胞中EB病毒DNA均为阴性.实验组与对照组-2比较阳性率差异有显著性(P＜0.05).在以上三组患者血清中EB病毒DNA均为阴性,三组间无差异.实验组VCA-IgA与对照组-1,对照组-2分别比较阳性率其差异均有显著性(P＜0.01).结论有些鼻咽癌患者外周血白细胞中可检测出EB病毒DNA.血清中未能检测出EB病毒DNA.鼻咽癌患者外周血白细胞EB病毒DNA的存在与血清VCA-IgA的效价之间有一定的关系.     

Detection of herpes simplex virus type 1 in rheumatic valvular tissue

Background Rheumatic heart disease (RHD) is the most important sequela of rheumatic fever (RF):evidence that streptococcal infection is aetiological is prominent, but sometimes contradictory. Acute HSV-1 infection in mouse leads to carditis and valvulitis whereas recurrent infection results in inflammatory granulomatous lesions that resemble Aschoff bodies. Cells containing HSV-1 inclusions or virus infected giant cells appear similar to Anitschkow cells or Asehoff cells respectively. We hypothesized that HSV-1 infection also may be involved in RHD.Methods Formalin-fixed, paraMn-embedded valvular tissue samples from 32 patients with RHD were investigated for evidence of HSV-1 infection. HSV-1 antigen was detected by immunohistoehemistry, using HSV-1-specific monoclonal and polyclonal antibodies. HSV-1 glyeoprotein D gene sequences were amplified by nPCR,using β-globin gene amplification in the same samples as internal control. Valvular tissue from 5 cases of sudden death and 3 cases died of neisseria meningitis without a history of valvular disease was used for comparison. HSV-1-infected lung tissue was used as positive control.Results HSV-I antigens were detected in valvular tissues from 21 of 32 (65.6%) patients. Fifteen of these 21 (46.9% of cases), but no antigen-negative sample, were positive also for HSV DNA. Nueleotide sequence of PCR products was homologous to the targeted region of the HSV-1 glycoprotein D gene. HSV-1 antigen was present also in one case of sudden death but viral DNA was not found in any tissue sample from tile comparison group. Results from reagent and positive controls were as anticipated.Conclusions This is the first study to show the presence of HSV-1 antigen and genomic DNA in valvular tissues from patients with RHD and provides evidence for an association of HSV-1 infection with some cases of rheumatic valvular disease.     

PCR直接测序法检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒DNA

目的 探索检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒(HPV)DNA的有效手段。方法 采用HPV通用引物对宫颈癌标本中的HPVL1区基因序列进行PCR扩增,根据PCR产物序列分析对HPV分型。结果 50例宫颈癌组织HPVDNA检出率为78%,其中HPV16和HPV18型混合感染最多见。检测出1例HPV58型,其L1区基因序列与德国标准株58型比对,未发现碱基变异。结论 PCR直接测序法是对宫颈癌组织中HPV检测和分型的一种有效方法,并可检测到HPV少见的特殊类型,同时也能提供已知的HPV型别的突变信息。     

丙型肝炎病毒NS5B区基因的扩增、克隆及序列分析

目的 对丙型肝炎病毒(HCV)NSSB区基因克隆并测序,研究其变异状况。方法 从HCV RNA阳性血清中抽提病毒RNA,利用巢式RT-PCR对NS5B区基因进行扩增,将扩增获得的靶cDNA克隆至P^KPL-3a质粒载体中,并以内引物为测序引物进行序列测定分析。结果 构建了已克隆HCVNS5B区基因的重组质粒KHC5—1;序列分析表明,与HCV-BDS株同源性最高,属于主要流行于我国的HCV 1b基因亚型。结论 证实了在NS5B区,与RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)活性密切相关的基元结构Gly-Asp-Asp及其相邻序列的同源性非常高。     

应用PCR技术诊断单纯疱疹病毒性角膜炎

目的探讨聚合酶链反应（PCR）技术诊断单纯疱疹（单疱）病毒性角膜炎的实用价值，为临床诊断提供依据和方法。方法应用PCR技术对60例按临床诊断标准诊断为单疱病毒性角膜炎患者的患眼泪液及角膜上皮进行病毒DNA检测。结果PCR检测60例患者标本结果，阳性46例占76．7％，阴性14例占23．3％。结论对单疱病毒性角膜炎诊断不能只根据其临床特征来诊断；PCR可为临床提供实验诊断依据。