四氯化碳诱导大鼠肝纤维化过程中肝内细胞骨架蛋白表达的变化

探讨肝纤维化发生过程中，细胞骨架蛋白—结蛋白（Ｄｍ）和α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）阳性细胞动态变化的规律以及这些阳性细胞之间的关系。方法用四氯化碳辅以低胆碱饲料诱导大鼠肝纤维化，应用免疫组化、电镜技术和图像分析方法对肝纤维化过程中出现的Ｄｍ和α－ＳＭＡ阳性细胞进行定位和定量研究。结果α－ＳＭＡ阳性细胞的变化几乎与Ｄｍ阳性细胞同步，两者于实验早期均有增生，但前者少于后者，至纤维间隔大量形成时（１２周），两者增生均达到最高峰，但前者多于后者，以后两者均逐步下降；从形态分析，Ｄｍ和α－ＳＭＡ阳性细胞主要为贮脂细胞（ＦＳＣ），部分卵圆细胞和新生胆管上皮细胞也表达此两种骨架蛋白。结论除了ＦＳＣ以外，α－ＳＭＡ和Ｄｍ阳性卵圆细胞也可能在肝纤维化发生发展中起重要作用。     

肺纤维化大鼠炎性细胞因子的对比研究

目的：了解肺纤维化大鼠肺局部细胞因子水平及其与肺泡巨噬细胞的关系。方法：对比观察支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）和肺泡巨噬细胞（ＡＭ）培养上清肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）、血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）的动态变化。二种细胞因子检测分别采用ＥＬＩＳＡ和生物活性法。结果：①ＢＡＬＦ中ＴＮＦ－α于第１ｄ增高，第３ｄ达高峰，其高峰时间先于ＡＭ源ＴＮＦ－α；ＢＡＬＦ中ＴＮＦ－α与其中中性粒细胞数呈正相关；②ＢＡＬＦ中ＰＤＧＦ与ＡＭ源ＰＤＧＦ同步于第７ｄ达高峰，与ＡＭ总数呈正相关。结论：ＡＭ释放高水平ＴＮＦ－α、ＰＤＧＦ；ＢＡＬＦ中也存在ＴＮＦ－α、ＰＤＧＦ，且呈动态变化；ＢＡＬＦ中ＴＮＦ－α可能还来自ＡＭ外的其它细胞，如ＰＭＮ，而ＢＡＬＦ中ＰＤＧＦ则可能主要来源于ＡＭ。     

单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的产生机制

目的 探讨单侧输尿管梗阻后肾间质纤维化形成机制。方法 将30只大鼠采用单侧输尿管梗阻（uu0）模型，术后第3、7、14天观察双肾组织病理改变，并应用免疫组织化学方法检测肾间质中核转录因子（NF-KB），转移生长因子岛（TGF-β1），α-平滑肌肌动蛋白（α-sMA）的表达，并检测肾间质胶原蛋白的含量。结果随着梗阻时间延长，梗阻侧肾间质中NF-KB、TGF-β1、α-SMA及胶原蛋白的含量增加，对侧无明显变化，两组相比有明显差异（P〈0．05）。结论 单侧输尿管梗阻的大鼠肾间质NF-KB、TGF-β1、α-SMA的过度表达，可上调肾间质胶原蛋白的含量，是形成肾间质纤维化的主要原因之一。     

CD自杀基因联合GM-CSF基因治疗的抗肿瘤作用及免疫机理

目的：研究自杀基因与粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因联合治疗抗肿瘤作用及免疫机制。方法：小鼠皮下接种黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞３ｄ后,分别在肿瘤局部直接注射表达小鼠ＧＭ－ＣＳＦ的重组腺病毒ＡｄＧＭ－ＣＳＦ和表达大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因的腺病毒ＡｄＣＤ,然后连续１０ｄ腹腔注射５氟胞嘧啶（５ＦＣ）（ＡｄＣＤ／５ＦＣ／ＡｄＧＭＣＳＦ组）、单用ＡｄＣＤ／５ＦＣ组、单用ＡｄＧＭ－ＣＳＦ组、注射对照病毒ＡｄｌａｃＺ／５ＦＣ组或ＰＢＳ组。结果：与接受ＡｄＣＤ／５ＦＣ、ＡｄＧＭ－ＣＳＦ、ＡｄｌａｃＺ／５ＦＣ或ＰＢＳ治疗的荷瘤小鼠比较,经联合治疗后荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长明显受到抑制,荷瘤小鼠的存活期明显延长（Ｐ＜０．０１）。经ＡｄＣＤ／５ＦＣ／ＡｄＧＭＣＳＦ联合基因治疗后,肿瘤瘤体内或瘤周有大量树突状细胞、ＣＤ８＋Ｔ细胞浸润,黑色素瘤细胞表达ＭＨＣ－Ⅰ和Ｂ７－１分子明显增加,荷瘤小鼠脾细胞对Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤细胞特异性杀伤功能增强。结论：联合应用自杀基因和ＧＭ－ＣＳＦ基因转移可以直接杀伤肿瘤细胞,又可提高机体对肿瘤的免疫应答,两者可协同发挥抗肿瘤作用。     

大鼠单侧输尿管梗阻致肾间质纤维化与TGFβ1 mRNA表达的关系

探讨转化生长因子β１在单侧输尿管梗阻所致肾间质纤维化中的作用,方法应用原位杂交,生化分析及病理形态学观察等技术,研究ＵＵＯ术后１、３、７、１４、２１ｄ不同时相肾皮质中ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达与小管间质病变,羟脯氨酸代谢的关系。结果ＵＵＯ肾组织中羟脯氨酸含量农渐增加及间质面积增宽,伴ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达增高。结论ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达增加是ＵＵＯ致肾间质纤维化的重要原因之一。     

STZ－实验性糖尿病大鼠肾组织氧自由基与血浆6－酮前列腺素F_（1α）和血栓素B_2的关系

目的：研究糖尿病早期高滤过状态与前列腺素及氧自由基生成之间的关系，以探求发病机理。方法：采用低温ＥＳＲ技术动态检测大鼠肾组织的氧自由基水平，同时用ＲＩＡ试剂盒测定血浆中６－酮前列腺素Ｆ＿（１α）（６－ｋｅｔｏ＋ＰＧＦ＿（１α））和血栓素Ｂ＿２（ＴＸＢ＿２）含量。对ＳＴＺ诱导的糖尿病大鼠模型，分别在造模后１、２、３、７、１４和２８ｄ测量上述指标。同时与对照组相比较。用ＰＲＩＭＥＲ程序完成数据的ｔ－检验和相关分析。结果：证实糖尿病肾组织氧水平及血浆６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿（１α）含量均较正常对照组明显增高（ｐ＜０．０５），并且糖尿病大鼠肾组织氧自由基水平增加与６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿（１α）／ＴＸＢ＿２呈显著正相关（ｒ＝０．８７９６）。结论：糖尿病早期肾组织氧自由基水平增加可能是导致血浆中６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿（１α）增加的原因之一，并且两者在糖尿病早期肾小球血流动力学改变过程中起某种协同作用。     

5—甲基硫代腺苷对培养鼠脑星形胶质细胞反应性胶质化的抑制

观察５－甲基硫代腺苷（５－ＭＴＡ），作为碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）受体的酪氨酸激酶抑制剂，对反应性星形胶质化的影响。原代培养大鼠星形胶质细胞（ＡＳ）行机械刮伤后，应用免疫组织化学及原位杂交法检测增生细胞核怕（ＰＣＮＡ），胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）及其ｍＲＮＡ表达。结果：与对照组相比，损伤后１－２ｄ，实验组ＡＳ胞体瘦小，突起短少，增生减弱（ＰＣＮＡ阳性细胞数减少，Ｐ〈０．０１），ＧＦＡＰ－     

纤维连接蛋白及其整合素受体在人胚胎和成熟肾中的表达

为探讨纤维连接蛋白（ＦＮ）及其β１整合素受体在人胎儿和成熟肾中的表达及意义，采用免疫组化的方法观察纤维连接蛋白及其整合素受体（α５β１）的α５亚单位在胎儿和正常成熟肾组织中的分布。结果发现：在胚胎肾组织中，ＦＮ及α５在输尿管芽细胞周围有弱阳性表达，在肾小球发育早期，ＦＮ及α５在肾单位中表达较弱，其在间质网状分布，当血管插入肾单位后，ＦＮ表达明显增加，主要分布于系膜区和毛细血管壁。成熟肾组织中ＦＮ及α５在肾小球基底膜（ＧＢＭ）强阳性表达且以血管极节段明显，间质及小血管壁亦为阳性。结果提示，ＦＮ和整合素的表达和相互作用在肾小球系膜区，肾间质及ＧＢＭ的形成、发育过程中发挥重要作用     

动脉成形术对血管表皮生长因子受体表达影响的免疫组化研究

目的：观察动脉成形术对血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）表达的影响,探讨ＥＧＦＲ与再狭窄的关系。方法：于兔右颈总动脉成形术前及术后２４,４８,７２ｈ,７ｄ和１４ｄ,取实验动脉段用免疫组化ＬＳＡＢ法检测ＥＧＦＲ的表达。结果：正常颈总动脉中膜未见ＥＧＦＲ阳性表达;动脉成形术后２４ｈ,中膜部分ＳＭＣ显示ＥＧＦＲ阳性表达;４８和７２ｈ中膜ＥＧＦＲ阳性表达均进一步增加;７和１４ｄ动脉中膜ＥＧＦＲ阳性表达的ＳＭＣ均较７２ｈ显著减少,但新生内膜中增殖的ＳＭＣ均显示大量ＥＧＦＲ阳性表达。阳性染色以胞膜处最明显。结论：动脉成形术使血管ＳＭＣＥＧＦＲ表达显著增加,再狭窄形成过程中ＳＭＣ增殖与ＥＧＦＲ有关。     

TNF,IFN,MHCⅠ类分子基因“正反馈”式放大表达的重组腺病毒载体

目的：为使外源性 Ｔ Ｎ Ｆ, Ｉ Ｆ Ｎ 基因和内源性主要组织相容性复合物Ⅰ类（ Ｍ Ｈ ＣⅠ）分子基因表达呈现“正反馈”式放大效 应,构建在 Ｈ Ｌ Ａ Ｂ７ 启动子调控、 Ｉ Ｒ Ｅ Ｓ连接下协同表达 Ｔ Ｎ Ｆα和 Ｉ Ｆ Ｎβ基因的重组腺病毒载体。方法和结果：从ｐ Ｇ Ｌ３ Ｂ７ Ｔ Ｎ Ｆ及ｐ Ｉ Ｒ Ｉ Ｆ中切下 Ｂ７ｐｒｏ Ｔ Ｎ Ｆ和 Ｉ Ｒ Ｅ Ｓ Ｉ Ｆ Ｎβ基因片段,先后插入ｐ Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｓｋ （＋ ）, 构建成ｐ Ｂ Ｌ Ｂ７ Ｔ Ｎ Ｉ Ｒ Ｉ Ｆ。回收 Ｔ Ｎ Ｆα Ｉ Ｒ Ｅ Ｓ Ｉ Ｆ Ｎβ基因片段,连入 Ａｄ Ｃ Ｍ Ｖ Ｌｉｎｋ１ 中,构建成 Ｃ Ｍ Ｖ 启动子驱动表达的 Ａｄ Ｃ Ｍ Ｖ Ｔ Ｎ Ｉ Ｒ Ｉ Ｆ（＋ ）。回收 Ｂ７ｐｒｏ Ｔ Ｎ Ｆ Ｉ Ｒ Ｅ Ｓ Ｉ Ｆ Ｎβ基因片段,连入缺失 Ｅ１ 和 Ｅ３ 区及启动子的 Ａｄ ＢｇｌⅡ中, 构建成 Ｈ Ｌ Ａ Ｂ７ 启动子驱动表达的 Ａｄ Ｂ７ Ｔ Ｎ Ｉ Ｒ Ｉ Ｆ（－ ）。结论：此两种载体为“正反馈”式放大肿瘤免疫原性提供一条新途径。     

四氯化碳诱导大鼠肝纤维化过程中肝内细胞骨架蛋白表达的 …

目的 探讨肝纤维化发生过程中，细胞骨架蛋白－结蛋白（Ｄｍ）的α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）阳性细胞动态变化的规律以及这些阳性细胞之间的关系。方法 用四氯化碳辅以低胆碱饲料诱导大鼠肝纤维化，应用免疫组化、电镜技术和图像分析方法对肝纤维化过程中出现的Ｄｍ和α－ＳＭＡ阳性细胞进行定位和定量研究。结果 α－ＳＭＡ阳性细胞的变化几乎与Ｄｍ阳性细胞同步，两者于实验早期均有增生，但前者秒于后者，至纤维间隔大量     

体外鼠脑星形胶质细胞损伤后c-fos蛋白、GFAP及其mRNA的动态表达

研究ｃ－ｆｏｓ蛋白、ＧＦＡＰ—ｍＲＮＡ和ＧＦＡＰ在鼠脑星形胶质细胞（ａｓｔｒｏｃｙｅ，ＡＳ）损伤后反应性星形胶质化时的动态变化。用ＡＳ原代培养技术建立体外ＡＳ机械损伤模型．并结合应用免疫组织化学和原位杂交方法．结果：（１） ｃ－ｆｏｓ蛋白于损伤后 ４５ ｍｉｎ即有阳性表达，伤后 ２ ｈ消失； （２损伤边缘的 ＡＳ于损伤后 ６ ｈ开始表达 ＧＦＡＰ－ｍＲＮＡ， １ｄ达高峰，３ ｄ则在损伤边缘少数 ＡＳ中可检出 ＧＦＡＰ－ｍＲＮＡ；（３）损伤后 １ｄ，ＧＦＡＰ表达明显增强，胞体肥大，粗大突起伸向损伤区形成反应性星形胶质化。结论：（ｌ） ＡＳ受损后原癌基因 ｃ－ｆｏｓ首先被激活，ｃ－ｆｏｓ蛋白呈－过性的表达，参与调节ＡＳ的激活；（２）ＡＳ损伤后，ＧＦＡＰ－ｍＲＮＡ的转录增加，ＧＦＡＰ表达增强是由于在转录水平上ＧＦＡＰ－ｍＲＮＡ表达增强的结果；（３）反应性星形胶质化是ＡＳ的自身特性，以ＡＳ肥大为主，ＡＳ受损后，原癌基因ｃ－ｆｏｓ的蛋白参与调节ＡＳ激活的确切机制尚待阐明。     

神经干细胞的单层培养及分化过程中ＨＥＳ１和ＭＡＳＨ１的表达变化

摘 要： 【目的】 建立神经干细胞（ＮＳＣ）体外培养方案,使ＮＳＣ的体外可以得到增殖和分化,并检测ＮＳＣ分化过程中ＨＥＳ１和ＭＡＳＨ１的表达变化。【方法】无菌条件下取ＳＤ大鼠胚胎端脑,无血清悬浮培养,形成Ｐ２代神经球后,将神经球消化成单细胞,分为神经球悬浮培养和单层贴壁培养,并对两种不同培养方式下的ＮＳＣ进行干性鉴定和分化能力鉴定。用不同浓度（２０、４０、８０ μｇ／Ｌ）的脑源性神经生长因子（ＢＤＮＦ）诱导ＮＳＣ分化,选出最合适的浓度。用ＢＤＮＦ最佳诱导浓度诱导ＮＳＣ分化,Ｑ－ＰＣＲ检测分化过程中ＨＥＳ１和ＭＡＳＨ１的表达变化。【结果】神经球悬浮培养和单层贴壁培养均可得到的ＮＳＣ;分化３ ｄ后,在不加入任何诱导因素的情况下,单层贴壁培养的ＮＳＣ能更高比例［（１９．５５ ± １．０９）％］地分化为β－ｔｕｂｕｌｉｎ Ⅲ阳性细胞;ＢＤＮＦ ４０ μｇ／Ｌ能诱导出更多的β－ｔｕｂｕｌｉｎ Ⅲ阳性细胞［（３４．１７ ± ０．６０）％］;在分化１、３ 和７ ｄ时,Ｑ－ＯＣＲ结果表明ＭＡＳＨ１在ＢＤＮＦ诱导下组较ＮＳＣ和对照组表达水平明显上升。【结论】单层贴壁培养的神经干细胞更利于分化为神经元,ＢＤＮＦ为４０ μｇ／Ｌ时能诱导出更高比例的神经元,ＢＤＮＦ可以诱导ＭＡＳＨ１在ＮＳＣ分化过程中表达明显上升。     

瘢痕成纤维细胞的MMP-3 mRNA表达及其基因转染

目的：探讨增生性瘢痕组织中细胞外间质（ＥＣＭ）的过度沉积机制，并探索其基因治疗途径。方法：体外培养瘢痕成纤维细胞（ＨＳＦ），构建间质溶解素１（ＭＭＰ－３）逆转录病毒载体，利用基因转染技术将ＭＭＰ－３基因转入ＨＳＦ，核酸分子杂交检测ＭＭＰ－３的ｍＲＮＡ表达水平。ＤＮＰ－多肽降解法检测间质金属蛋白酶（ＭＭＰｓ）活性，辅以正常皮肤成纤维细胞作对照。结果：ＨＳＦ表达ＭＭＰ－３ｍＲＮＡ水平及降解ＤＮＰ－多肽     

EHF肾组织肾小球超微结构和细胞表型的研究

目的 研究流行性出血热（ＥＨＦ）肾组织中肾小球超微结构和细胞表型的改变及其意义。方法 应用多重ＰＡＰ３０例ＥＨＦ肾组织中肾小球α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）,结蛋白（ｄｅｓｍｉｎ）和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达及意义;应用电子显微镜观察肾小球的超微结构。结果 ＥＨＦ肾脏仅４例肾小球显示痕量的ａ－ＳＭＡ阳性表达,无ｄｅｓｍｉｎ和ＰＣＮＡ的表达。电镜下观察肾小球毛细血管内皮细胞不同程度肿胀。部分     

α-平滑肌肌动蛋白在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达

目的观察α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在单侧输尿管梗阻大鼠中的表达情况,探讨其与肾间质纤维化的关系。方法采用单侧输尿管结扎术制备肾间质纤维化模型,将60只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,每组分别于术后7、14、21d各处死10只大鼠,取梗阻侧肾组织行HE、Masson染色观察肾间质纤维化程度,行免疫组化方法检测两组大鼠不同时间段α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达水平。结果假手术组中,肾小球、肾小管和间质细胞均无α-SMA,与假手术相比,模型组手术后7d,肾间质中α-SMA阳性细胞数增多,呈进行性升高趋势,其与肾间质纤维化程度呈正相关。结论α-平滑肌肌动蛋白在肾间质纤维化的进展过程中发挥重要作用。     

丹参对大鼠环孢素A慢性肾毒性的保护作用

目的：为提高同种肾移植术后患者的长期存活率，研究丹参对环孢孢素Ａ慢性肾毒性的防护作用。方法：观察大鼠灌服ＣｓＡ及低盐饮食２８ｄ，肾功能、病理和转化生长因子－β（ＴＧＦ－β１）免疫组化的改变及复方丹参注射液对上述改变的防护作用。结果：ＣｓＡ能诱导大鼠肾小球滤过率下降，增加尿中Ｎ－乙酰－β－Ｄ－氨基葡萄糖苷酶（ＮＡＧ）的排泄，引起肾间质纤维化和小动脉病变等。丹参能改善上述病变，减低肾内ＴＧＦ－β１的表     

9—羧酸蒽对大鼠离体灌流心脏c—fos表达的影响

目的：通过对氯通道抑制剂９－羧酸蒽（９－ＡＣ）诱导离体心肌ｃ－ｆｏｓ表达的观察，研究９－ＡＣ敏感性心肌细胞的分布，并与β－受体激动剂异丙肾上腺素（Ｉｓｏ）相比较。方法：采用离体心脏灌流技术和免疫组化ＡＢＣ法。结果：２５μｍｏｌ／Ｌ的９－ＡＣ灌注９０ｍｉｎ后，与对照组相比，心肌组织内ＦＯＳ蛋白表达明显增加（Ｐ〈０．０１）。ＦＯＳ阳性细胞以左室外层、右室内层的心肌组织最多，其次是右室外层心肌，而左室内     

PAF受体拮抗剂治疗颈髓损伤的早期观察

目的：探讨全血血小板活化因子（ＰＡＦ）受体拮抗剂ＢＮ５２０２１对颈髓损伤患者早期治疗的效果及其机制。方法：颈髓损伤患者分为地塞米松组和ＢＮ５２０２１组（ｎ＝１８），观察两组颈髓损伤患者ＰＡＦ、血浆血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）、６－酮－前列腺素１α（６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α）含量的变化、多系统器官衰竭（ＭＳＯＦ）发生率及脊髓神经功能恢复状态。结果：ＢＮ５２０２１组血液中ＰＡＦ、ＴＸＢ２含量、Ｔ／Ｋ值、伤后ＭＳＯＦ发生率较地塞米松组明显降低，而脊髓神经功能恢复优于地塞米松组。结论：ＰＡＦ受体拮抗剂对颈髓损伤后神经功能具有较好的保护作用，并且是早期治疗脊髓损伤的潜在理想药物     

TNF—α与烧伤后胰岛素抑抗相关性的研究

目的：确证ＴＮＦ－α在烧伤后胰岛素抵抗发生中的作用。方法：利用３０％ＴＢＳＡⅢ°烫伤小鼠模型，检测伤后不同时相点血浆ＴＮＦ－α血糖，胰岛素，乳酸和胰高血糖素的动态变化并进行要关性分析。同时用重组人ＴＮＦ－α（ｒｈ－ＴＮＦ－α）注射下沉小鼠和单克隆抗体（ＴＮＦ－ＭｃＡｂ）注射烫伤小鼠，观察上述相关指标的变化。结果：严重烫伤小鼠３ｈ后出现胰岛素抵抗指标增高并被ＴＮＦ－ＭｃＡｂ减轻。结论：烧伤后机体ＴＮ