与脆性X智力低下基因同源的常染色体基因FXR1

作者利用FMR1的cDNA筛选了非洲蟾蜍laevis卵巢cDNA文库,所得到的两个克隆中,1个与人类的FMR1氨基酸有86％的同源,在其5′非转译区没有发现cGG重复,这提示cGG重复可能只在哺乳动物中出现。另1个克隆被称之为FXR1。非洲蟾蜍laevis FXR1 cDNA又被用来筛选人类Hela细胞文库得到了人类的FXR1 cDNA。顺序分析结果显示,FxR1与FMR1在KH区有86％的氨基酸顺序同源,在氨基末端区域有70％的同源,并都含有精氨酸富集区,但在羧基区域存在较大的差异,只有6％的     

fgl2凝血酶原酶多肽抗体的制备和应用

目的　利用人工合成多肽制备针对人源、鼠源fgl2凝血酶原酶 (hfgl2、mfgl2 )的特异性多克隆抗体 ,以期用于与fgl2表达异常密切相关的疾病的研究和诊治。方法　根据mfgl2、hfgl2基因编码的氨基酸序列合成多肽 3(Pep3)和多肽 4 (Pep4 ) ,并用化学方法与匙孔血蓝蛋白 (KLH)连接 ,纯品Pep3 KLH和Pep4 KLH免疫动物 ,所制备的抗血清用ELISA、Westernblot和前凝血质活性 (PCA)实验鉴定 ,并采用免疫组化法应用于乙型肝炎患者肝组织中hfgl2的检测。结果　ELISA检测表明 ,所制备的抗血清可分别与Pep3和Pep4发生特异性免疫反应 ;Westernblot结果显示 ,抗血清可识别MHV 3感染BALB cJ小鼠腹腔巨噬细胞特异性条带 ,相对分子质量 (Mr)为 6 5× 10 3;PCA实验提示 ,抗血清具有中和mfgl2分子酶活性的作用。对病毒性乙型肝炎患者肝组织免疫组织化学染色发现hfgl2仅在重型乙型肝炎患者高表达 ,而在慢性乙型肝炎和肝硬化患者的肝组织中无表达。结论　所制备的fgl2的多肽抗体 (多克隆抗体 )可识别mfgl2和hfgl2分子 ,具有与抗原特异性结合、中和其酶活性的特征 ,为深入研究这一新发现的分子提供了有力的科学手段。     

猪-人移植细胞性排斥反应相关候选基因pOSR1的克隆和鉴定

为寻找与异种移植细胞性排斥反应相关的新基因 ,在抑制消减杂交 (SSH )基础上 ,对一个与人氧化应激反应 1(OSR1)基因同源的猪内皮细胞上调表达基因片段CS3作进一步研究。半定量RT PCR结果证实 ,在人PBMC作用后 ,该基因表达的确上调。应用快速cDNA末端扩增 (RACE )方法 ,获得了猪OSR1(pOSR1)的全长cDNA序列。pOSR1cDNA序列全长 4 333个碱基 ,开读框架长 15 90个碱基 ,编码 5 2 9个氨基酸。与人OSR1(hOSR1)相比 ,编码区核酸一致性为 92 8% ,氨基酸一致性为 95 5 %。GenBank登录号为AY2 7135 6。其功能研究正在进行中。     

阴道毛滴虫两个Sir2同源基因的克隆和功能

目的探讨寄生性原虫阴道毛滴虫细胞生长和衰老的相关基因。方法从阴道毛滴虫的cDNA表达文库中分离出两个与酵母沉寂信息调节因子（Sir2）有较高同源性的cDNA克隆,分别命名为TvSir2和TvSir2-like,它们的编码框分别长915bp和1116bp。结果序列分析显示这两个cDNA克隆与酵母Sir2同源性很高,其氨基酸序列中含有Sir2p及其同源蛋白三个特征性保守结构域。分别从这两株cDNA克隆中扩增出表达片段植入表达载体pET-41a,转化宿主菌E.coli BL21并用IPTG（isopropylthio-β-D-galactoside）诱导表达到大量融合蛋白。用亲和层析法纯化的融合蛋白分别免疫豚鼠,获得的抗血清用Western-blot法识别到滴虫虫体全蛋白中大小为34000Mr和42000 Mr的条带。免疫荧光法检测TvSir2和TvSir2-like蛋白位于细胞核外的内质网和高尔基复合体区域。结论TvSir2和TvSir2-like克隆是酵酶Sir2的同源基因,为TvSir2和TvSir2-like在模式生物阴道毛滴虫的功能研究奠定了基础。     

阴道毛滴虫Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因的cDNA克隆和序列分析

Rab鸟苷三磷酸酶是细胞膜转运机制的关键调节分子,与原虫的分泌功能密切相关。本研究旨在克隆和分析阴道毛滴虫Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因,以便进一步探讨其功能。作者从阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离出2个Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因的cDNA克隆,其中1个cDNA序列长658对碱基,读码框含597对碱基,推测蛋白质序列具198个氨基酸。序列分析表明该氨基酸序列与Rab6a蛋白亚家族的同源性最高。另一cDNA序列长764对碱基,读码框含657对碱基,推测蛋白质序列具218个氨基酸。序列比对分析显示该氨基酸序列与Rab6b蛋白有较高的同源性。2个氨基酸序列都拥有Rab鸟苷三磷酸酶家族的所有保守结构域、特异性RabF结构域和典型的异戊烯化结构域。进化树分析提示毛滴虫的这2个基因系Rab6家族的同源基因,在进化上更接近原虫和单细胞的酵母Rab6亚家族。序列分析还显示这2个基因都无内含子,其基因组DNA序列与其cDNA序列完全一致。     

人雌激素受体cDNA:序列、表达及与v-erbA的同源性

作者以富含人雌激素受体(hER)mRNA的乳房癌细胞株(MCF-7)为材料,构建一个以λgt10为载体的cDNA库,并合成了一段与ER多肽顺序对应的寡聚核苷酸作为探针进行筛选,得到一个2.1Kb的克隆(λOR8),用它进行进一步的筛选,获得完整的ER cDNA克隆,并对其进行了序列分析。     

Fas死亡信号激发域cDNA的克隆、表达及体外生物学效应

目的：克隆及表达Fas死亡信号激发域(Fas Activation Domain，FasAD)片段，获得具有生物学活性的FasAD多肽。方法：应用半巢式逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增Fas死亡信号激发域cDNA片段，构建Intein表达型原核表达载体FasAD-pTYB12，应用IMPACT^TM-CN系统表达及进行一步法亲合层析分离、纯化FasAD多肽。结果：DNA序列测定显示克隆的FasAD cDNA碱基排列顺序与Genebank(M67454)所示完全一致。重组表达载体FasAD-pTYB12经IPTG诱导，成功表达可溶性融合蛋白，进一步分离、纯化获得分子量约5000的FasAD多肽，Westem blot显示FasAD多肽能被兔抗人Fas多抗识别。初步的生物学活性鉴定显示，该FasAD多肽抑制rhFasL诱导的细胞凋亡的生物学活性最高可达70％。结论：可利用IMPACT^TM-CN系统制备Fas死亡信号激发域的小分子量多肽，为深入研究Fas结构与功能的关系及与配体的相互作用提供了相关的实验基础，为进一步开发相关的生物免疫调节剂提供了实验依据。     

新城疫病毒HN糖蛋白促细胞融合区域内保守氨基酸基因突变分析

目的 确定新城疫病毒(NDV)血凝素神经氨酸酶(HN)糖蛋白促细胞融合区域内的保守氨基酸功能,探讨HN糖蛋白的促细胞融合机制.方法 采用PCR定点突变与体内同源重组相结合的方法将HN糖蛋白促细胞融合区域内6个保守氨基酸突变为丙氨酸(A),在BHK21细胞内表达后,流式细胞仪定量分析蛋白的表达效率,并分别检测其促细胞融合活性、血细胞吸附能力(也称为受体识别活性)和神经氨酸酶活性.结果 L74A蛋白表达效率降低为72.7％,各突变株蛋白表达效率与野毒株相比差别无统计学意义(P＜0.05).各突变株蛋白促细胞融合活性都有不同程度的下降,其中I103A下降幅度最大,为野毒株的9.1％,各突变株蛋白血细胞吸附能力也都出现不同程度的降低,其中I1iA的下降最明显,为28.2％,各突变株蛋白的神经氨酸酶活性变化程度不同,其中174A略有升高,为118.6％,L110A下降幅度最大,为5.2％,I103A仅次于L1 10A,为5.7％.结论 新城疫病毒HN糖蛋白促细胞融合区域内的保守氨基酸在细胞融合中发挥着重要作用,第103位异亮氨酸(Ⅰ)是此区域内的关键氨基酸.     

同源异型框基因Pem研究的概况

同源异型框 (ｈｏｍｅｏｂｏｘ)基因家族是一个重要的调节基因家族 ,其表达产物都定位于核内 ,作为转录因子调节动物胚胎的发育。这类基因最早是在果蝇中发现的 ,因包含有一段 1 80ｂｐ的同源异型序列而得名 ;这段序列编码了一段由 60个高度保守的氨基酸残基组成的多肽 ,称为同源异型域 (ｈｏｍｅｏｄｏｍａｉｎ) ,含有同源异型域的蛋白称为同源异型盒蛋白。除了一级结构 ,同源异型域的二级结构也极为保守。迄今为止 ,已在各种生物中发现了上千种含有同源异型框的基因[1] ,根据同源域蛋白中同源域序列的相似性和侧翼序列间的保守性 ,可划分…     

用T7噬菌体展示筛选系统筛选与靶蛋白相结合的蛋白

目的 :建立有效的T7噬菌体筛选系统 ,筛选与靶蛋白 (信号分子 )有结合关系的多肽或蛋白。方法 :以p38MAPK、PRAK为靶蛋白 ,分别用不同的介质 (ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂 ) ,通过结合 -洗脱 -扩增 3个步骤 ,筛选噬菌体cDNA文库 (T7人肝和 /或人肺cDNA文库 )。结果 :选择第四轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆 ,经EDTA处理后利用特异性PCR引物扩增插入片断 ,回收PCR产物并进行顺序 ,将获得的序列在美国国立卫生院 (NIH)的GenBank数据库中进行同源序列比较 ,获得若干编码蛋白的序列。在这些蛋白中有激酶、转录因子、细胞骨架…     

人P~(68)钙连接蛋白基因定位于5q32-q34

P~(68)是依靠Ca~(2+)连接膜或细胞骨架的一系列蛋白的成员之一,这些蛋白质以具有多拷贝的氨基酸同源系列为特征。P68属于细胞内蛋白,分子量为68000。通过cDNA克隆技术和序列分析已经确定了P~(68)8的一级结构。本文作者利用14个啮齿动物一人的杂交细胞系和编码P~(68)大部分顺序的P~(68)cDNA探针A_2,采用Southern印迹和原位杂交两种方法对P~(68)钙连接蛋白进行了基因定位。用限制性内切酶BglⅡ,BamHI或PstI对人、大鼠、小鼠、仓鼠以及人一大鼠,人一小鼠,人一仓鼠等杂交细胞系的基因组     

p62~(dok)蛋白氨基酸和cDNA序列测定和分析

目的 :分析p6 2 dok氨基酸和cDNA序列 ,探讨p6 2 dok酪氨酸磷酸化及其与p2 1ras鸟苷三磷酸酶激活蛋白(p2 1rasGAP)的关系。方法 :从过渡表达人类胰岛素受体的中国仓鼠卵巢细胞 (CHO/IR细胞 )中提取、纯化p6 2 dok,进行微肽序列分析 ,设计相应引物PCR、克隆cDNA并测序。利用免疫沉淀和蛋白免疫印迹检测p6 2 dok是否存在酪氨酸磷酸化及与p2 1rasGAP的关系。结果 :p6 2 dokcDNA由 186 3bp组成 ,编码 481个氨基酸 ,含 15个酪氨酸残基 ,富PXXP基序 ,并有一个pleckstrin同源区。当p6 2 dok酪氨酸磷酸化后 ,可与p2 1rasGAP相结合。结论 :p6 2 dok可能是一种新的信息分子 ,并通过p2 1rasGAP参与胰岛素信号转导系统中RAS/MAPK径路的调节。     

人类苯丙氨酸羟化酶基因的转移和表达

作者将人类的PAH全长cDNA(来自重组质粒ph PAH247)插入到真核生物的载体,然后转移到一种原来不能表达PAH的小鼠细胞。结果被转化的小鼠细胞能表达PAH mRNA、产生免疫活性蛋白并具有正常人肝脏所产生的酶活力特征。为了测定这个全长cDNA克隆是否包括了表达PAH酶活性必需的全部遗传信息,作者将2.4KbPAH cDNA插入到一个含有启动子和帽子位点能表达的载体(MT-Ⅱ)进行亚克隆,并应用磷酸     

十二指肠钩虫金属蛋白酶组织抑制剂同源物Ad-TIMPL-1基因克隆及其原核表达

目的克隆十二指肠钩虫金属蛋白酶组织抑制剂同源物（TIMPL）Ad-TIMPL-1基因并进行原核表达。方法分别用3’RACE及RT-PCR技术从十二指肠钩虫成虫cDNA中扩增编码Ad-TIMPL-1的cDNA3’末端及5’末端序列;序列经拼接后进行初步生物信息学分析;将Ad-TIMPL-1成熟肽编码序列克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组表达质粒;重组质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）后,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达情况。结果成功克隆获得了编码Ad-TIMPL-1的全长cDNA序列并登记到GenBank（accession no.EF495071）;Ad-TIMPL-1完整阅读框为396bp,编码132个氨基酸残基组成的蛋白,含16个氨基酸残基组成的信号肽;成功构建了原核表达重组质粒pET-32a/Ad-TIMPL-1,并在大肠杆菌中得到了表达。结论本研究首先从十二指肠钩虫中克隆到了Ad-TIMPL-1基因并进行了原核表达,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。     

原生动物阴道毛滴虫的酵酶长寿保障基因LAG1同源基因克隆和序列分析

为了探讨寄生性原虫阴道毛滴虫细胞生长和衰老相关基因,作者从阴道毛滴虫的cDNA表达文库中分离出一具910碱基对的cDNA克隆,其编码框长834 bp,推测蛋白质序列有277个氨基酸.序列分析显示该克隆与酵酶长寿保障基因LAG1同源性最高,其氨基酸序列中含有LAG1及其同源基因保守的Lag1结构域和TLC结构域以及6个跨膜螺旋区和一个C-未端的内质网保留信号域.因此推测该克隆系酵酶LAG1的同源基因,该基因可能参与阴道毛滴虫的神经酰胺生物合成以及调解细胞的生命期或细胞衰老.该基因的基因组DNA与其cDNA序列一致,提示该基因序列中可能无内含子.     

神经白细胞素

神经白细胞素(NLK)是一种对神经细胞和免疫细胞均有调节作用的蛋白质。在骨骼肌、脑及骨髓等组织中均可检测到较高的NLK活性。神经受损的肌肉组织和丝裂原刺激的T细胞均可产生NLK。NLK对脊髓神经元和感觉神经元有营养作用,可促进这些神经元的存活能力。NLK亦可促进成熟的B淋巴细胞分化成为抗体分泌细胞,但B细胞一旦分化成为抗体分泌细胞,其分泌抗体的能力则不再依赖于NLK的存在。NLK与6-磷酸葡萄糖异构酶(GPI)的氨基酸顺序高度同源,并具有GPI的酶活性,但酶活性与其对神经细胞和免疫细胞的作用无关。此外,NLK与HIV-1病毒包膜糖蛋白gp120的顺序部分同源,gp120能抑制NLK的生物活性,提示艾滋病的免疫缺陷和中枢神经系统症状可能与gp120干扰NLK的功能有关。     

白细胞间介素-2的分子生物学

本文简述了白细胞间介素-2(IL-2)在分子水平的某些研究进展,如IL-2的来源、性质、互补DNA的克隆化和全部核苷酸顺序的分析,以及对IL-2多肽链一级结构氨基酸顺序的报导和cDNA在哺乳动物细胞中的表达。此外,还概略论述了IL-2的生物学作用及其分子作用机制。     

膜形式的鸟苷酸环化酶是心房肽受体

心房肽(ANP)是一种利尿、利钠、扩管的多肽激素。ANP 是与膜形式的鸟苷酸环化酶结合而发挥其生物学效应的。本文作者报告了编码大鼠脑膜形式的鸟苷酸环化酶 cDNA 克隆的分离、测序和表达。作者用编码海胆膜形式的鸟苷酸环化酶作探针.从人 cDNA 文库中分离鸟苷酸环化酶克隆,再用     

转化生长因子β1/Smad信号通路对大鼠肾系膜细胞基质金属蛋白酶2及其组织抑制因子2表达的影响

目的　探讨转化生长因子 β1(TGF β1) /Smad信号通路对大鼠肾系膜细胞 (MsC)基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )及其组织抑制因子 2 (TIMP 2 )蛋白表达和酶活性的影响。方法　采用脂质体介导法 ,分别将Smad 2 3 7基因瞬时转染体外培养的大鼠MsC ,并用免疫荧光 逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和Western印迹法检测其转染成功与否 ;再分别用Western印迹 酶谱法或反式酶谱法 ,观察转基因MsC及其在TGF β1作用下MMP 2和TIMP 2蛋白表达和酶活性的改变。 结果　转染Smad 2基因的MsC ,MMP 2和TIMP 2蛋白表达和酶活性均略有升高 ,蛋白表达分别增强 1 4倍和 1 1倍 ;酶活性分别提高 1 4倍和 1 3倍 ,经TGF β1作用后有明显升高 ,蛋白表达分别增加 2 8倍和 3 0倍 (P <0 0 1) ;酶活性分别提高 3 0倍和 1 7倍 (P <0 0 1) ;转染Smad 3基因的MsC ,TIMP 2蛋白表达和酶活性略有升高 ,蛋白表达增强 1 2倍 ,酶活性提高 1 2倍 ,TGF β1作用后升高更为明显 ,蛋白表达增强 2 9倍 ,酶活性提高 1 8倍 ,而MMP 2蛋白表达和酶活性均无明显变化 ;转染Smad 7基因的MsC ,MMP 2和TIMP 2蛋白表达和酶活性均略有下降 ,蛋白表达均降低 1 2倍 ,酶活性均下降 1 2倍 ,在TGF β1作用下更为明显 ,蛋白表达分别     

大鼠不同发育阶段β-防御素-2基因

目的:探讨大鼠β-防御素-2基因在肺组织表达的发育调控。方法:根据Genbank大鼠β-防御素-2的cDNA序列,设计一对特异引物。采用RT-PCR技术在大鼠不同发育阶段的肺组织总RNA中,扩增其特异cDNA片段,并进行DNA序列测定。借助Genbank中BLAST程序,将从该cDNA序列推导的氨基酸序列与人的hBD-2和大鼠的rBD-1做相似性分析。结果:从足月胎鼠、出生8h和4d以及成年大鼠相同重量肺组织所提取的总RNA中,均扩增出一条密度相同、长度约为220bp的cDNA片段。在所推导氨基酸序列中与hBD-2氨基酸相同率为48.6%(17/35),与rBD-1氨基酸残基的相同率为31%(11/35)。其成熟分子链长35个氨基酸残基,含β-防御素共有的且排列次序相同的6个典型的半胱氨酸和其它保守氨基酸残基。结论:本实验表明不同发育阶段大鼠肺组织均表达β-防御素-2mRNA,提示该分子可能是肺组织天然抵抗微生物感染的一个重要分子基础。