非同位素标记脆弱类杆菌DNA探针的研究

为探索应用分子生物学技术检测厌氧菌的方法，选择脆弱类村抽提其染色体ＤＮＡ，用生物素和地高辛配基标记制备ＤＮＡ探针，检测厌氧和需氧菌９４株，临床标本４５份，并和＾３２Ｐ标记探针及培养生化鉴定比较，该探针可检出临床上常见的类杆菌属细菌与其它细菌无交叉反应，结果：地高辛配基标记探针的灵敏度（１０ｐｇＤＮＡ和１０＾３ＣＦＵ／ｍｌ）接近＾３２Ｐ标记探针的灵敏度（１ｐｇＤＮＡ和１０＾３ＣＦＵ／ｍｌ）。地高辛配     

应用DNA探针直接检测结核分枝杆菌DNA

由于ＤＮＡ探针杂交反应特异性高 ,国内外研究者已采用ＤＮＡ探针杂交技术检测结核分枝杆菌。但该检测方法敏感性较低 ,通常采用与聚合酶链反应 (ＰＣＲ)扩增相结合的方法。但这样增加了实验的费用和交叉污染的机会。我们在对ＤＮＡ探针与ＰＣＲ结合检测临床标本进行系统研究的基础上 ,发现临床标本简化法处理 ,即ＤＮＡ探针化学发光检测 ,ＤＮＡ损失较少 ,还可提高检测的敏感性 ,现将结果报道如下。材料与方法一、菌种来源受试分枝杆菌标准株来自中国药品生物制品检定所。二、标本收集结核患者痰标本 2 31份 ,血液标本 85份 ,脑脊液、胸、…     

应用Digoxigenin标记探针定量检测血清HBV DNA

本文报道采用非同位素Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记探针定量检测血清ＨＢＶ ＤＮＡ。显色膜经空气干燥，液体石蜡透明处理后，即可置酶联免疫检测仪上测定各斑点的光密度值，液长６３０ｎｍ。结果发现已各含量的ＨＢＶ ＤＮＡ在２－５００ｐｇ／样点范围内与其相应的ＯＤ值有着良好的线性关系。标本测得ＯＤ值后，便可知其含量，该法重复性试验试验结果良好，１１份ＨＢＶ ＤＮＡ阳性的血清经定量测定，其ＨＢＶ ＤＮＡ含量在２０     

结核杆菌DNA探针板杂交方法及其应用研究

我们建立了一种在酶标板上进行了ＤＮＡ：ＤＮＡ杂交的方法，该方法与ＥＬＩＳＡ类似，简单，易操作，可半定量，便于临床实验室推广应用。对其杂交条件及影响因素进行了详细的探讨。通过该方法，地高辛标记的结核分支杆菌全染色体ＤＮＡ探针和１２种分地杆菌，７种非分支杆菌全染色ＤＮＡ的杂交百分率有显著差异，除卡介苗，堪萨斯分支杆菌杂交百分率超过３０％，蓁受试菌株均低于１０％。     

DNA探针检测间日疟原虫的初步研究

由于间日疟原虫目前尚不能体外培养,抗原制备困难,使间日疟的流行病学调查及诊断受到限制。本文报道以间日疟原虫红内期基因组DNA库0.24kb DNA片段为探针,用~(32)P标记后进行点杂交试验检测间日疟原虫的初步结果。 材料与方法 含间日疟原虫红内期基因组DNA库亚克隆VPL101/5 0.24kb DNA片段的重组质粒pUC19由澳大利亚昆士兰医学研究所Kidson赠送。按文献方法进行感受态细胞JM 109的制备、重组质     

聚合酶链反应及DIG标记DNA探针检测猪囊尾蚴

猪带绦虫的幼虫猪囊尾蚴侵入宿主器官组织中寄生 ,可引起囊尾蚴病 (俗称囊虫病 ) ,是一种世界性分布危害严重的寄生虫病。内蒙古自治区是囊虫病的高发区之一 ,近年来人群发病率呈上升趋势。因此 ,寻找敏感、特异性高的诊断方法以便及早诊断囊虫病的原发性感染甚为重要。目前 ,该病的诊断多依据临床表现、ＣＴ扫描和血清免疫学检测等 ,但特异性较差。我们根据猪囊尾蚴 2 7ｋＤａ蛋白基因保守序列设计了一对特异性引物 ,建立ＰＣＲ与地高辛(ＤＩＧ)标记特异性核酸探针相结合 ,快速、准确检测猪囊尾蚴的方法 ,现将结果报告如下。1　材料与方法1…     

DNA技术检测什曼原虫的现场应用及其实用性

本文综述了ＤＮＡ技术检测利什曼原虫的方法，发展状况及优缺点，并展望了其在现场应用方面的前景。     

寄生虫DNA探针及其应用

DNA 探针技术在寄生虫学领域内的应用方兴未艾。为使该项技术在国内寄生虫学研究中发挥其应有的作用,作者综述了寄生虫 DNA 探针研究概况。这篇综述分五个部分:(1) 简述了探针和印渍的基本概念,重点介绍了斑点印渍;条块印渍和接触印渍等概念。(2) 归纳了寄生虫 DNA 探针检测的7个特点。正是这些特点使得DNA 探针技术在寄生虫学领域具有广阔的应用前景。(3) 介绍了寄生虫 DNA 探针的制备,即制备目标 DNA 和标记目标 DNA。目标 DNA 多为寄生虫高度重复的 DNA 序列,它们没有编码功能,演变迅速,具有种特异性。目标 DNA 的标记除介绍了同位素标记和生物素标记外,还提及一些正在研究中的新的标记方法。(4) 描述了寄生虫 DNA 探针检测的操作方法.包括原位杂交、斑点杂交、Southern Blot 和电印溃等,并介绍了大分子核酸凝胶电泳的脉冲场梯度法和周期性倒转电场法。(5) 回顾了国外 DNA 探针技术在寄生虫学中的应用近况。目前DNA 探针已用于锥虫、疟原虫、丝虫、血吸虫、小泰氏梨浆虫、旋毛虫及利什曼原虫等研究,本文重点介绍了 DNA探针在锥虫病、疟疾和丝虫病中的应用。     

不同DNA探针检测疟原虫的灵敏度比较

本文通过分子杂交技术,以恶性疟原虫为靶DNA,对从恶性疟基因文库中筛出的含有高度重复顺序的pBF_4DNA探针和含单考贝基因的pBF_(13)DNA探针以及恶性疟原虫全基因组DNA探针进行了杂交比较,结果pBF_(13)DNA探针比全基因组DNA探针敏感度低10倍,比pBF_4DNA探针敏感度低100倍,全基因组DNA探针可检到的DNA含量为100pg。     

采用高敏检测技术检测血清HBV DNA载量筛选低病毒血症的无偿献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染研究

目的 探讨采用高敏检测技术检测血清乙型肝炎病毒(HBV)DNA筛选低病毒血症(LLV)的无偿献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)的价值。方法 2017年2月～2021年12月我市收集的11352份血清HBsAg阴性的无偿献血人群血液标本,采用电化学发光法定性检测血清HBeAg、HBeAb和HBcAb),定量检测血清HBsAb,使用AU5800型全自动生化分析仪检测血生化指标,使用ABI ViiA7型荧光定量PCR扩增仪,采用高敏PCR法检测血清HBV DNA载量,对所有经高敏PCR法检测为HBV DNA阳性的血清再使用Cobas AmpliPrep/Cobas TaqMan全自动核酸定量检测系统复核。结果 以全自动核酸定量检测系统检测结果为金标准,发现高敏PCR检测为HCV DNA阳性的67例(0.59%)为LLV人群,结果显示,该方法诊断OBI人群LLV的灵敏度和特异度均为100.0%和100.0%;金标准方法与高敏PCR检测血清HCV DNA载量差异无统计学意义【(110.7±20.2)IU/ml对(108.2±19.6)IU/ml,P>0.05】;经高敏PCR法检验发现...     

肝细胞癌端粒酶活性检测及其临床应用价值

端粒酶是一种核糖蛋白酶,该酶具有逆转录酶活性,能以端粒酶RNA(hTR)为模板,向染色体末端添加T2AG3序列.     

应用DNA探针检测蚊体内疟原虫的研究

本文用生物素标记的克隆ＤＮＡ探针，以斑点杂交法检测蚊体内恶性疟原虫。将一组蚊虫在还原性缓冲液中研磨后集体检测时，在２５只蚊中有１只感染蚊即可检出，亦可将单个蚊虫直接压在硝酸纤维素膜上进行检测。本技术的高特异性，敏感性以及试剂的稳定性等表明，它可作一个适用的流行病学调查工具。     

人生长激素受体DNA探针建立及mRNA检测

用多聚酶链反应方法建立了人生长激素受体（ｈＧＨＲ）ＤＮＡ探针。探针片段长度为６７０ｂＰ，两端分别为ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切末端。克隆在ＰＴＺ１９Ｕ质粒上。用此探针检测成人外周静脉血和脐血淋巴细胞的ｈＧＨＲｍＲＮＡ的表达水平，表明成人ｈＧＨＲ基因转录水平显著高于新生儿。     

合成间日疟DNA探针在疟疾监测中的应用研究

本文报道了应用合成间日疟ＤＮＡ片段经同位素末端标记作为探针，检测了２１份经镜检确诊的产是日疟病人血样，结果全产啊阳性，敏感性可测出０．００１３３％的原虫病血症，与培养的恶性疟及正常人血没有交叉反应，随后将该探针应用到疟疾监测中，在山东采集的３１０份四热病人血和２４５份流动人口血，应用于探针检测，未出现阳性结果，经镜检复核，结果相符，在安徽省滁州市采集３５２份病灶点人群血，有２８份出现了阳性，阳性率