兔骨髓间充质干细胞移植后移植细胞凋亡的实验研究

目的利用TUNEL法检测5-氮胞苷体外诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）移植后的凋亡情况。方法5-氮胞苷体外诱导骨髓间充质干细胞MSCs向肌源性心肌细胞分化,通过免疫组化,鉴定诱导后的MSCs是否向类心肌细胞转化。建立兔心肌梗死模型,将细胞移植于心梗区域。移值2周后,利用TUNEL法检测植入细胞的凋亡率。结果移植2周后,可见DAPI标记带蓝色荧光的供体细胞核,分布比较广泛,形态呈椭圆形类似心肌细胞核,并与心肌纤维排列方向一致,证明移植细胞已存活。移值细胞表达troponinT,证明移植的MSCs分化为类心肌细胞。移植细胞均出现不同程度细胞凋亡。结论移植的MSCs细胞可在缺血的心肌组织存活,并分化为类心肌细胞,但移植细胞均出现不同程度凋亡。     

血运重建对骨髓间充质干细胞移植后凋亡影响的实验研究

目的 研究血运重建与兔骨髓间充质干细胞移植后凋亡之间的关系.方法 无菌条件下采集兔骨髓间充质干细胞,用荧光标记.直接结扎法建立兔心肌梗死模型,实验动物随机分两组:①1 h后开放阻断的冠脉,将干细胞移植于兔心肌梗死区(20只).②不开放冠脉,1 h后将干细胞移植于兔心肌梗死区(20只).心梗后1 h在心梗区域注人MSCs.2周后用荧光显微镜观察移值细胞是否存活,利用TUNEL法检测植入细胞的凋亡率.结果 移植2周后,用荧光显微镜观察梗死区组织,可见DAPI标记带蓝色荧光的供体细胞核,形态呈椭圆形类似心肌细胞核,并与心肌纤维排列方向一致,证明移植细胞已存活.利用TUNEL法检测,两组移植细胞均出现细胞凋亡,差异无统计学意义.结论干细胞移植入心肌组织后的凋亡与植入区血运重建有关.     

骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的研究进展

骨髓间充质干细胞是一种多能干细胞,在体外培养时,可以通过诱导使其分化为心肌细胞等。目前进行的动物实验和临床Ⅰ期实验表明骨髓间充质干细胞具有促进血管增生以及改善心肌梗死后心脏功能的作用,为心肌梗死的治疗提供了广阔前景。     

骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的新技术

骨髓间充质干细胞移植是治疗心肌梗死的新途径之一,其技术和方法不断发展。诸如建立更好的大型活体实验动物模型；改进对植入细胞的标记追踪技术；进一步研究细胞植入的适宜方式和时间等。骨髓间充质干细胞移植和基因疗法相结合可能得到叠加的治疗效果。     

骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的新技术

骨髓间充质干细胞移植是治疗心肌梗死的新途径之一,其技术和方法不断发展.诸如建立更好的大型活体实验动物模型;改进对植入细胞的标记追踪技术;进一步研究细胞植入的适宜方式和时间等.骨髓间充质干细胞移植和基因疗法相结合可能得到叠加的治疗效果.     

自体骨髓间充质干细胞移植对急性心肌梗死后心功能的影响

目的观察骨髓间充质干细胞（MSCs）经冠脉移植对急性心肌梗死后心功能的影响。方法24只日本大耳白兔,随机分为MSCs移植组（n=12）和培养液对照组（n=12）。从兔股骨抽取骨髓,体外培养MSCs。通过结扎左冠前降支建立急性心肌梗死模型。冠脉结扎后7d,细胞移植组和对照组直接经冠脉注入MSCs和培养液。于心肌梗死前、细胞移植前、细胞移植后1、2和4周对兔进行超声心动图检查。移植后4周处死动物,进行BrdU和第Ⅷ因子相关抗原免疫组化检测。结果移植后2周,MSCs移植组在射血分数（LVEF）和左室收缩末直径（LVESD）方面与移植前和对照组相比有显著改善（P<0.05）;移植4周后,LVEF、LVESD和左室舒张末直径（LVEDD）在MSCs移植组与移植前及对照组相比均有显著改善（P<0.05）。免疫组化检测发现,MSCs移植组BrdU染色阳性,血管计数较对照组明显增多（P<0.01）。结论经冠脉移植的MSCs可在梗死区心肌内存活并逐渐分化成心肌样细胞,促进毛细血管生成,显著改善心功能。     

骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死机制的研究进展

心肌梗死（myocardial infarction,MD是由于冠状动脉循环改变引起冠状血流和心肌需求之间不平衡而导致的心肌损害,是临床上一种严重的缺血性心脏病（ischemic heart isease,IHD）。梗死的心肌细胞逐渐被瘢痕组织取代,由于瘢痕组织缺乏弹性,难以满足心脏收舒功能的要求,     

骨髓间充质干细胞经静脉移植到心肌梗死大鼠体内后的分布

目的 探讨经静脉注射骨髓间充质干细胞（MSCs）于心肌梗死大鼠模型后在体内的分布及对心功能的影响。方法 心肌梗死后1周将标记的MSCs注射到大鼠舌下静脉内,在细胞移植后不同时间点取心、肝、脾、肺、肾脏器,进行组织学检查观察移植细胞的分布。通过心脏超声复查移植后3周、6周心功能改变情况。结果 MSCs 经静脉注射后各脏器的组织结构无明显异常改变。移植细胞在早期主要分布在正常心肌组织内,1周后主要分布在梗死及交界区内,正常心肌组织内很少见细胞存留。细胞移植后3周、6周实验组左心室没有进一步扩大,心功能没有进一步恶化。结论 静脉注射移植MSCs后细胞可以分布到重要组织器官内,并不影响其组织结构;移植细胞有向梗死心肌组织内迁移的趋势,能明显延缓左心室重构而导致的心功能恶化。     

骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后心室肌细胞钾离子通道Ito Kv4.2的影响

目的 研究心肌梗死后移植骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)对心室肌细胞钾离子通道Ito亚单位Kv4.2基因表达的影响方法 40只SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分成4组(10只/组):假手术组、心肌梗死组、心肌梗死+干细胞组和心肌梗死+细胞培养基组.开胸结扎冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,建模成功后,在梗死周围分别注入BMMSCs和细胞培养基,心肌梗死组仅建立心肌梗死模型,假手术组仅开胸子以前降支穿线但不结扎.2周后行心肌组织HE染色和荧光显微镜观察移植细胞,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测钾离子通道Ito亚单位Kv4.2基因mRNA和蛋白水平.结果 (1)心肌组织免疫荧光检测发现,BMMSCs集中分布于梗死区和梗死心肌周围;(2)心肌梗死组和心肌梗死+细胞培养基组Kv4.2 mRNA量(0.39±0.02,0.41±0.04)和蛋白量(0.47±0.02,0.50±0.05)明显下降,与假手术组(0.76±0.05,0.74±0.06)相比差异有统计学意义(P＜0.01);心肌梗死+干细胞组Kv4.2 mRNA量和蛋白表达量(0.57±0.05,0.64±0.03)较心肌梗死组(0.39±0.02,0.47±0.02)明显升高(P＜0.01).结论 骨髓间充质干细胞移植后心肌梗死大鼠钾离子通道Ito亚单位Kv4.2基因表达上升,可能减少心律失常发生.     

骨髓间充质干细胞移植治疗脑出血

脑出血起病急骤、病情凶险、病死率很高,目前缺乏真正有效的治疗措施和药物.骨髓间充质干细胞在特定微环境诱导下具有向多种细胞分化的潜能,而且已在不同微环境条件下将其成功诱导分化为成骨细胞、成软骨细胞、心肌细胞、神经元、神经胶质细胞等,为脑出血的治疗带来了新的希望.     

Protective effect of bone marrow mesenchymal stem cells in intestinal barrier permeability after heterotopic intestinal transplantation

AIM: To explore the protective effect of bone marrow mesenchymal stem cells (BM MSCs) in the small intestinal mucosal barrier following heterotopic intestinal transplantation (HIT) in a rat model.METHODS: BM MSCs were isolated from male Lewis rats by density gradient centrifugation, cultured, and analyzed by flow cytometry. The HIT models were divided into a non-rejection group, saline-treated rejection group (via penile vein), and BM MSC–treated group (via penile vein). Intestinal mucosal barrier injury was estimated by diamine oxidase (DAO) and D-lactic acid (D-LA) expression levels. Tumor necrosis factor-α (TNF-α), interferon-γ (INF-γ), interleukin-10 (IL-10), and transforming growth factor-β (TGF-β) were detected by enzyme-linked immunosorbent assay. Ultrastructural change of tight junctions (TJs) was observed under transmission electron microscope. Expression levels of the TJ proteins occludin and zona occludens (ZO)-1, affected by the inflammatory factors, were measured using real-time polymerase chain reaction and Western blotting.RESULTS: The pathological score at each time point after surgery indicated significantly less serious injury in the BM MSCs-treated group than in the rejection group (P < 0.05). In the former, graft levels of DAO and D-LA were reduced, and TNF-α and INF-γ production was inhibited (at day 7: 10.6473 ± 0.0710 vs 17.2128 ± 0.4991, P < 0.05; 545.1506 ± 31.9416 vs 810.2637 ± 25.1175, P < 0.05). IL-10 and TGF-β production was increased greatly (at day 7: 125.7773 ± 4.7719 vs 80.3756 ± 2.5866, P < 0.05; 234.5273 ± 9.3980 vs 545.1506 ± 31.9416, P < 0.05). There was increased expression of occludin and ZO-1 protein (at day 7: 0.2674 ± 0.0128 vs 0.1352 ± 0.0142, P < 0.05; at day 5: 0.7189 ± 0.0289 vs 0.4556 ± 0.0242, P < 0.05) and mRNA (at day 7: 0.3860 ± 0.0254 vs 0.1673 ± 0.0369, P < 0.05; at day 5: 0.5727 ± 0.0419 vs 0.3598 ± 0.0242, P < 0.05).CONCLUSION: BM MSCs can improve intestinal barrier permeability, repair TJs, and increase occludin and ZO-1 protein expression. With altered cytokine levels, they can protect the intestinal mucosa after transplantation.     

Study on bilibrubin induced apoptosis of human bone marrow mesenchymal stem cells

正Objective To investigate the effects of bilirubin on human bone marrow mesenchymal stem cell(BMMSC)and to provide the evidence for selecting patients with liver function failure suitable for BMMSC transplantation therapy.Methods Bilirubin of different concentration(0,10,20,30,40 and 50μmol/L)was separately added into     

骨髓间充质干细胞的培养及低氧条件对其影响

目的 骨髓间充质干细胞(BMMSC)的体外培养和低氧对于BMMSC增殖作用的影响.方法 成年雄性SD大鼠断颈处死后于75％酒精中浸泡5 min.用全骨髓贴壁法培养细胞,选取生长状态良好的第3代细胞进行鉴定.以单克隆抗体CD45、CD90行流式细胞术鉴定大鼠BMMSC.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定第3代BMMSC以及低氧处理的第3代BMMSC的增殖情况.结果 用全骨髓贴壁法分离并培养SD大鼠BMMSC;流式细胞仪检测显示:第3代BMMSC表面特异性标志CD90表达率为96.0％,而非BMMSC表面标志CD45仅为2.5％.MTT结果显示低氧条件下的BMMSC比常氧条件下增殖速率高,并且光镜下观察到细胞状态均一,折光性更好.结论 用全骨髓贴壁法可以在体外分离、培养出纯度较高的SD大鼠来源BMMSC,低氧环境可以刺激BMMSC的增殖.     

自体成肌细胞和骨髓间充质干细胞移植对缺血坏死心肌的修复作用

目的 观察自体骨骼肌成肌细胞(SMs)和骨髓间充质干细胞(BMSCs)经冠脉移植至缺血坏死心肌后的分化情况及对缺血坏死心肌的修复作用.方法 取日本大耳白兔45只,随机分为SMs、BMSCs移植组和对照组,每组15只.移植组分别取臀肌和骨髓体外培养SMs和BMSCs.各组均结扎左前降支建立缺血坏死心肌模型.分别于再灌注后1 h经左前降支注射5-溴脱氧尿核苷(BrdU)标记的SMs、BMSCs悬液1 ml(5×1012个/L)或等量DMEM培养液.移植后24 h和4周用超声心动仪检查心脏功能变化.移植后4周以病理组织学检查HE染色及BrdU抗体、结蛋白(Desmin)抗体和骨骼肌特异性慢肌球蛋白重链(Slow-MHC)单克隆抗体,免疫组化染色评价移植细胞的分化情况.结果 移植后4周,SMs和BMSCs组在左室射血分数[(61.9±3.6)%、(62.4±2.6)%]和左室短轴收缩率[(31.6±2.3)%、(30.8±1.9)%]较对照组[(53.2 ±2.3)%、(23.8±0.9)%]均有明显改善(P＜0.05);SMs与BMSCs组比较差异无统计学意义(P＞0.05);HE染色显示移植组心肌纤维排列有序,其中SMs组可见新生的多核肌样细胞.移植SMs和BMSCs BrdU抗体免疫组化染色阳性.SMs组SMsDesmin抗体和Slow-MHC单克隆抗体免疫组化染色阳性.结论 经冠脉自体移植的SMs和BMSCs可在缺血坏死心肌内存活.对心肌损伤具有修复作用,并同等程度地提高了心脏功能.     

Anti-leukemic therapies induce cytogenetic changes of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells

Both bone marrow hematopoietic cells (BM-HCs) and mesenchymal stem cells (BM-MSCs) may have cytogenetic aberrations in leukemic patients, and anti-leukemic therapy may induce cytogenetic remission of BM-HCs. The impact of anti-leukemic therapy on BM-MSCs remains unknown. Cytogenetic studies of BM-MSCs from 15 leukemic patients with documented cytogenetic abnormalities of BM-HCs were investigated. To see the influence of anti-leukemic therapy on BM-MSCs, cytogenetic studies were carried out in seven of them after the completion of anti-leukemic therapy, including anthracycline/Ara-C-based chemotherapy in two patients, high-dose busulfan/cyclophosphamide-based allogeneic transplantation in two patients, and total body irradiation (TBI)-based allogeneic transplantation in three patients. To simulate the effect of TBI in vitro, three BM-MSCs from one leukemic patient and two normal adults were irradiated using the same dosage and dosing schedule of TBI and cytogenetics were re-examined after irradiation. At the diagnosis of leukemia, two BM-MSCs had cytogenetic aberration, which were completely different to their BM-HCs counterpart. After the completion of anti-leukemic therapy, cytogenetic aberration was no longer detectable in one patient. Unexpectedly, BM-MSCs from three patients receiving TBI-based allogeneic transplantation acquired new, clonal cytogenetic abnormalities after transplantation. Similarly, complex cytogenetic abnormalities were found in all the three BM-MSCs exposed to in vitro irradiation. In conclusion, anti-leukemic treatments induce not only “cytogenetic remission” but also new cytogenetic abnormalities of BM-MSCs. TBI especially exerts detrimental effect on the chromosomal integrity of BM-MSCs and highlights the equal importance of investigating long-term adverse effect of anti-leukemic therapy on BM-MSCs as opposed to beneficial effect on BM-HCs.     

骨髓间充质干细胞在造血重建中的作用

目的 探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSC)在造血损伤修复中的作用.方法 将同系小鼠股骨、骨壳、注入骨髓条的塑料管及经20 Gy γ-射线照射的股骨分别植入同一小鼠腹部皮下,观察1、2、3、4 w各移植物造血重建情况.观察髓腔内微循环结构与机能、组织学、分化不同阶段的造血细胞数目与机能等变化,以及骨皮质体外间充质干细胞(MSC)培养与扩增规律.结果 乏造血干细胞(HSC)的骨皮质异位移植完全可以造血重建,在移植后4 w,移植物已形成完整的封闭的具有正常造血组织的股骨,其重建的程序、速度与具有大量HSC的完整股骨移植的重建基本一致.而经射线破坏和注入塑料管内的骨髓条完全失去造血重建功能.结论 骨皮质可能是骨髓MSC的源泉,BM-MSC是造血重建的不可缺少的因素.     

受体骨髓间质干细胞在大鼠原位肝移植中对免疫排斥的影响

目的:观察受体骨髓间质干细胞(BM-MSCs)在大鼠原位肝移植后体内的分布与作用.方法:以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体采用双袖套法制作原位肝移植模型,密度梯度离心法分离与贴壁法富集受体BM-MSCs.CFSE标记术后经门静脉注入,荧光显微镜分别观测术后1wk,2 wk,1mo肝脾肺肾组织中BM- MSCs的分布及各时间点检测肝功能及肝组织免疫排斥情况.结果:密度梯度离心所得到的BM-MSCs为比较一致的球形单个核细胞,台盼蓝染色细胞活力达98%左右,其他细胞少见.BM-MSCs体外分离培养扩增至第3代后较为纯化.应用CFSE可快速高效的标记贴壁BM-MSCs.移植的BM-MSCs主要在受体肝脏中聚集,1mo后略有减少,而脾肺肾组织内BM-MSCs在1mo后仅有极少分布.B组无BM-MSCs输入与C组有BM-MSCs输入肝功能比较,C组肝功能有明显好转,B,C组间差异有显著意义(F=63.179,P<0.01),B,C组各时段肝功能差异有显著性意义(F=221.026,P<0.01).C组肝组织免疫排斥反应明显减轻.结论:原位肝移植术后输注受体BM-MSCs可有效缓解免疫排斥反应.     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠重症急性胰腺炎的治疗作用观察

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对重症胰腺炎（SAP）的治疗作用及相关机制。方法将雄性SD大鼠120只随机分为假手术组、模型组及移植组各40只。模型组和移植组采用5%牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射方法制作SAP模型,假手术组开腹后翻动肠壁即关腹。造模成功后移植组经门静脉植入MSCs;模型组及假手术组采用同样方法给予等量生理盐水。于24、48、72 h每组分别处死10只大鼠,对胰腺和肾脏损伤进行大体形态和光镜下观察,测定血清淀粉酶（AMY）、BUN、Cr、TNF-α和IL-6水平。结果模型组胰腺和肾脏组织损伤明显,各时间点血清AMY、BUN、Cr、TNF-α和IL-6水平均高于假手术组,P均〈0.05。移植组胰腺和肾脏组织损伤有所减轻;各时间点血清中AMY、BUN、Cr、TNF-α和IL-6水平均低于模型组及假手术组,P均〈0.05。结论经门静脉移植MSCs治疗SAP效果确切,可降低多器官功能障碍的发生率。