β-榄香烯对人骨髓瘤细胞RPMI-8226增殖与凋亡的影响

为了研究β-榄香烯对人骨髓瘤细胞系RPMI-8226增殖、凋亡的影响,探讨其作用的分子机制,用MTT法检测β-榄香烯对人骨髓瘤细胞系RPMI-8226增殖的影响;Annexin V/PI双染色流式术检测β-榄香烯对RPMI-8226骨髓瘤细胞凋亡的作用;Western blot法检测β-榄香烯对RPMI-8226骨髓瘤细胞BCL-2、caspase-3、DR-4和NF-κB P65蛋白表达影响。结果表明:β-榄香烯对RPMI-8226骨髓瘤细胞生长具有明显抑制作用,且呈浓度和时间依赖性;10-80μmol/Lβ-榄香烯作用48小时可诱导骨髓瘤细胞凋亡,凋亡率随药物浓度而递增;β-榄香烯以时间依赖方式上调caspase-3、DR-4蛋白表达,并可下调BCL-2、NF-κB P65蛋白表达。结论:β-榄香烯通过诱导细胞凋亡有效抑制骨髓瘤细胞增殖,其诱导细胞凋亡与细胞内、外凋亡通路激活、抗凋亡机制被抑制有关。     

TRAIL对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226黏附和凋亡的影响及其作用机制的初步探讨

本研究探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL对人多发性骨髓瘤细胞系RMPI8226的生长抑制作用,对细胞黏附和凋亡的影响及其作用机制。用MTT法检测TRALL对RPMI8226黏附功能和生长的影响;用AnnexinⅤ/PI检测细胞凋亡;流式细胞学检测细胞表面黏附分子的表达;RT-PCR法测定凋亡相关基因表达水平和Western blot法检测凋亡相关蛋白表达。结果表明:TRAIL抑制RPMI8226细胞生长;可诱导RPMI8226细胞凋亡,并伴有抗凋亡基因Mcl-1、XIAP、cFLIP、CARP1、CARP2和Bcl-2mRNA表达水平下降,促凋亡基因Bax mRNA表达水平升高;RPMI8226细胞内的凋亡执行蛋白caspase-3和NF-κB P65(RelA)表达水平随TRAIL浓度的增加而下降。此外,TRAIL明显上调了RPMI8226细胞表面黏附分子CXCR4的表达。结论TRAIL上调人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞表面的黏附分子CXCR4表达水平。TRAIL可诱导人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226凋亡。在一定的浓度范围内,TRAIL对人骨髓瘤细胞株RPMI8226的生长抑制呈时间-剂量依赖性。     

姜黄素对多发性骨髓瘤细胞株MOLP-2/R的耐药逆转作用及与FA/BRCA途径的关系

目的 研究姜黄素与马法兰联用对人多发性骨髓瘤耐药细胞株MOLP-2/R的耐药逆转作用及其与FA/BRCA途径可能存在的关系,进一步探讨其作用机制.方法 采用MTT法检测细胞增殖抑制率;采用Western blot方法 检测FA/BRCA途径中的关键蛋白FANCD2单泛素化表达;采用流式细胞术测定细胞周期、细胞内药物浓度及细胞凋亡率.结果 姜黄素可增强马法兰对多发性骨髓瘤耐药细胞株MOLP-2/R的毒性,马法兰的IC50值由44.5 μmoL/L降至19.0 μmol/L.该作用是通过抑制FA/BRCA途径中的关键蛋白FANCD2单泛素化来实现的.姜黄素和马法兰联合作用组与单用马法兰组相比,MOLP-2/R细胞的凋亡率由(23.3±0.6)%增至(52.6±0.8)%,G2/M期细胞由9.1%增至18.5%,细胞内药物荧光强度由15.2±0.3增至21.4±0.8.而姜黄素单药作用则无此效应,也不伴有FA/BRCA途径受抑制.结论 姜黄素与小剂量马法兰合用可产生协同作用,姜黄素通过抑制FA/BRCA途径中的FANCD2单泛素化来逆转MOLP-2/R细胞对马法兰的耐药性.姜黄素介导的FA/BRCA途径受抑制,能增强马法兰对MOLP-2/R细胞的凋亡诱导及G2/M期阻滞作用,提高细胞内药物浓度.     

siRNA干扰β-catenin基因表达情况与喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭的关系

目的探讨小干扰RNA(siRNA)干扰β-链蛋白(β-catenin)基因表达对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法前瞻性选取喉癌Hep-2细胞,随机分为空白对照组、阴性对照组和干扰组,其中干扰组转染靶向β-catenin的siRNA,阴性对照组转染空白siRNA。采用荧光定量PCR和Western-blot检测β-catenin mRNA和蛋白表达,MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transell法观察细胞侵袭能力。结果干扰组β-catenin mRNA和蛋白相对表达量分别为(0.304±0.015)和(0.234±0.065),明显低于空白对照组和阴性对照组(P0.05);干扰组培养48 h和72 h吸光值分别为(0.721±0.250)和(0.942±0.321),明显低于空白对照组和阴性对照组(P0.05);干扰组细胞凋亡率为(19.10±1.24)%,明显高于空白对照组和阴性对照组(P0.05);干扰组穿膜细胞数为(22.41±3.25)个,明显低于空白对照组和阴性对照组(P0.05)。结论干扰β-catenin基因,可抑制喉癌Hep-2细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡。     

Wnt/β-catenin信号通路在肝癌耐药中的作用研究

目的 建立肝癌顺铂耐药细胞系,探讨Wnt/β-catenin信号通路在肝癌顺铂耐药中的作用.方法 使用顺铂逐步增加剂量法诱导人肝癌HepG-2细胞,以建立其多药耐药细胞株HepG-2/DDP;MTT细胞毒实验检测顺铂对HepG-2和HepG-2/DDP细胞的生长抑制作用;荧光定量-PCR检测β-catenin 基因的表达;基因转染双链SiRNA干扰β-catenin基因的表达;Western blot实验检测目的蛋白的表达改变.结果 成功建立了人肝癌HepG-2顺铂耐药细胞株;MTT细胞毒实验结果显示顺铂对HepG-2和HepG-2/DDP细胞的IC50值分别为(2.29±0.14) μmol/L和(20.51±0.84)μmol/L(t=95.68,P＜0.01),与HepG-2细胞比较,HepG-2/DDP细胞对顺铂耐药8.96倍.荧光定量PCR结果显示:HepG-2和HepG-2/DDP细胞中β-catenin基因表达的2-△Ct值分别为0.323±0.065和0.674±0.097(P＜0.01),Western blot检测也显示β-catenin蛋白的表达在HepG-2/DDP细胞也显著高于HepG-2细胞.化学合成的靶向SiRNA可以显著下调β-catenin的表达,顺铂对照组、SiRNA靶向干扰组、SiRNA阴性干扰组HepG-2/DDP细胞的IC50值分别为(21.02±1.64)、(6.23±0.68)、(20.44±1.26) μmol/L,对照组和SiRNA靶向干扰组之间差异有统计学意义(P＜0.01).结论 顺铂耐药细胞HepG-2/DDP出现了Wnt/β-catenin信号通路的激活,SiRNA干扰β-catenin基因表达可显著提高顺铂耐药细胞HepG-2/DDP对顺铂的敏感性,为克服肝癌顺铂新靶点的寻找提供了理论依据.     

土木香内酯对RPMI-8226细胞的增殖抑制作用及其相关机制研究

目的:探讨土木香内酯(alantolactone)对多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法:使用浓度为1、2.5、5、7.5及10μmol/L的土木香内酯处理RPMI-8226细胞48 h,应用CCK-8检测细胞活力,并计算其半数抑制浓度(IC50)值;使用浓度为2.5,5及7.5μmol/L的土木香内酯处理RPMI-8226细胞48 h后,应用AnnexinV/PI双标记法分析细胞凋亡;Western blot方法检测呈切割的caspase-3及ERK信号通路的变化;裸鼠荷瘤并给予土木香内酯以进一步验证其对多发性骨髓瘤细胞的促凋亡作用。结果:土木香内酯可抑制RPMI-8226细胞活力,并呈现剂量依赖效应(r=-0.9784,P=0.0007);RPMI-8226细胞48 h的IC50为4.32±0.15μmol/L;流式细胞术分析凋亡结果显示,随着土木香内酯浓度的增高,细胞早期凋亡率显著增加(r=0.9601,P0.05);Western blot结果显示,土木香内酯处理RPMI-8226细胞后,活化了caspase-3,降低ERK磷酸化水平;体内结果显示,给药组小鼠瘤体积明显小于对照组(P0.05);免疫组织化学检测结果显示,与对照组相比,实验组瘤内细胞核增殖相关抗原Ki67及p-ERK的水平降低。结论:土木香内酯可有效地抑制多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能是通过抑制ERK信号通路的活性,抑制裸鼠皮下多发性骨髓瘤的生长。     

MiR-144调控Wnt4/β-catenin信号通路抑制多发性骨髓瘤细胞恶性生物学行为的研究

目的:探讨miR-144对多发性骨髓瘤细胞生物学行为的影响及机制。方法:RT-PCR检测miR-144在多发性骨髓瘤细胞及多发性骨髓瘤(MM)患者血浆中的表达情况;MTT法检测miR-144模拟物转染至骨髓瘤细胞后细胞的增殖情况及细胞克隆形成能力;流式细胞术检测过表达miR-144的骨髓瘤细胞周期分布情况;Tunel法检测过表达miR-144的骨髓瘤细胞的凋亡情况;Transwell细胞侵袭实验与迁移实验检测过表达miR-144的骨髓瘤细胞的侵袭及迁移能力;Western blot法检测过表达miR-144的骨髓瘤细胞的MMP-9、MMP-2的蛋白表达水平及Wnt4/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平。结果:MM细胞株及MM患者血中miR-144表达水平明显低于正常对照组(P0.05)。过表达miR-144的骨髓瘤细胞的增殖、侵袭、迁移能力明显降低(P0.05),细胞凋亡水平增加(P0.05)。过表达miR-144的骨髓瘤细胞的MMP-9、MMP-2、Wnt4/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平均明显低于对照组(P0.05)。结论:MiR-144能抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导其凋亡,其具体机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性有关。     

雷公藤内酯醇对人多发性骨髓瘤细胞耐地塞米松细胞株的实验研究

我们前期的研究表明,雷公藤内酯醇(triptolide,TPL)在体外能诱导多发性骨髓瘤(MM)细胞系RPMI 8226和U266细胞的凋亡,而对正常骨髓单个核细胞无明显的细胞毒作用[1].但TPL对骨髓瘤耐药细胞株是否有作用尚不清楚.因此,我们以人MM耐地塞米松细胞株MM.1R细胞及其敏感株MM.1S细胞为研究对象,观察TPL对耐药细胞株的作用以及是否与地塞米松(Dex)有协同作用.     

阿霉素诱导的骨髓瘤细胞化疗耐药的分子机制分析

本研究旨在探讨阿霉素诱导的骨髓瘤细胞RPMI8226化疗耐药的分子机制,分析Notch信号过度活化在化疗耐药机制中的作用.以浓度梯度递增法建立耐阿霉素的骨髓瘤细胞系RPMI8226/DOX,针对化疗耐药的瘤细胞RPMI8226/DOX,用RT-PCR法检测细胞耐药前后Notch2、Jagged1、Jagged2、HES1基因表达变化;Western blot检测耐药细胞系与敏感细胞系P-170蛋白表达变化;ELISA方法分析IL-6、VEGF水平变化.结果显示,Notch2、Jagged1、Jagged2基因随着耐药程度的增高表达逐渐增高,而HES1则相反,随着耐药程度增高表达逐渐减低.P-170蛋白随着耐药程度的增高表达逐渐增高.耐药细胞组培养上清中细胞因子VEGF和IL-6水平显著高于普通培养组.结论：建立的人骨髓瘤细胞系RPMI8226/DOX可以作为骨髓瘤耐药研究的有效模型,Notch信号通路的活化与多发性骨髓瘤的耐药密切相关,Notch信号通路有望成为多发性骨髓瘤治疗的新靶点.     

马法兰和阿霉素耐药人骨髓瘤细胞系的建立

目的:建立对马法兰和阿霉素耐药的人骨髓瘤细胞系。方法:在人骨髓瘤细胞系RPMI8226培养体系中分别加入1.0×10-8M的阿霉素(DOX)和1.0×10-6M的马法兰(LP),每周3次换液,DOX于10月后增加至1.0×10-7M,LP于47周后增加至5×10-6M。MTT法测定敏感细胞系和耐药系8226/DOX的IC50值,在耐LP细胞系8226/LP中加入丁硫氨酸亚砜胺(BSO)阻断谷胱甘肽的合成,MTT法测定细胞系8226/S、8226/LP细胞及8226/LP+BSO细胞的IC50值。HE染色普通光学显微镜下观察各组细胞形态,流式细胞仪检测各组细胞表面P-糖蛋白、CD38、CD45、CD19。台盼蓝拒染法测出8226/S、8226/DOX、8226/LP细胞的生长曲线。结果:所培养耐药细胞系8226/DOX、R8226/LP具有亲母细胞系的生物学特点,形态相似,均为CD38+CD45-CD19-表达细胞,倍增时间与亲母细胞系相近。比较IC50,8226/DOX对DOX的耐药约15倍于亲母细胞系。8226/LP对LP的耐药约7倍于亲母细胞系,而经过BSO阻断,其敏感性明显增加。结论:建立的骨髓瘤细胞系RPMI8226/LP、RPMI8226/DOX可作为骨髓瘤耐药研究的有效模型。     

2,5二羟基苯乙酮通过Wnt/β-catenin信号通路诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡

目的观察2,5二羟基苯乙酮(DHAP)对多发性骨髓瘤(MM)细胞的影响,并探索其相关作用机制。方法体外培养RPMI8226细胞,分别加入浓度为100μM、200μM、400μM DHAP,对照组加入等量磷酸盐缓冲液(PBS)处理。48 h后收集各组细胞,利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。实时荧光PCR检测各组细胞Wnt/β-catenin信号通路相关基因β-catenin、Survivin、C-myc以及C-cyclin D1 mRNA表达。Western blotting检测β-catenin、Survivin、Cmyc以及C-cyclin D1蛋白表达。结果 48 h后对照组细胞凋亡率为(0.02±0.01)%,100μM、200μM、400μM DHAP组细胞凋亡率为(7.34±2.56)%、(12.18±3.07)%、(15.76±2.77)%,并呈剂量依赖趋势(P0.05);实时荧光PCR结果显示,DHAP组β-catenin,Survivin、C-myc以及C-cyclin D1 mRNA表达显著低于对照组,并呈剂量依赖趋势(P0.05);Western blot显示,DHAP组β-catenin、Survivin、C-myc以及C-cyclin D1蛋白表达显著低于对照组,并呈剂量依赖趋势(P0.05)。结论 2,5二羟基苯乙酮呈剂量依赖性诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡,可能与Wnt/β-catenin信号通路相关。     

木犀草素对人骨髓瘤细胞RPMI-8226增殖与程序性死亡的影响

目的:探讨木犀草素对人骨髓瘤细胞系RPMI-8226增殖、死亡的影响,并分析其作用的分子机制。方法:用CCK-8法检测木犀草素对人骨髓瘤细胞系RPMI-8226增殖的影响,同时得出有效抑制细胞增殖的最低浓度,并用于处理RPMI-8226细胞。使用Western blot法检测木犀草素和氯喹对RPMI-8226细胞Cleaved-caspase3以及LC3蛋白表达影响。结果:木犀草素对RPMI-8226骨髓瘤细胞生长具有明显抑制作用,且呈计量依赖性; 24h时40-80μmol/L以及48 h时20-80μmol/L木犀草素可显著抑制骨髓瘤细胞增殖,这种抑制作用随药物浓度而递增(24 h,r=-0. 983; 48 h,r=-0. 985); 20μmol/L木犀草素作用RPMI-8226细胞48 h后,Cleavedcaspase3的表达与LC3Ⅱ/Ⅰ的比值显著增加,使用氯喹后,Cleaved-caspase3的表达与LC3Ⅱ/Ⅰ的比值均显著降低。结论:木犀草素通过激活细胞程序性死亡的两条途径即细胞凋亡与细胞自噬来有效抑制骨髓瘤细胞增殖,且引起的凋亡和自噬之间存在互相合作或/和互相推动的关系。     

Notch1 siRNA对骨髓瘤细胞硼替佐米药物敏感性的影响

目的探讨Notch1 siRNA对体内外人骨髓瘤细胞RPMI-8226细胞硼替佐米药物敏感性的影响。方法体外采用Notch1 siRNA转染RPMI-8226细胞,CCK-8实验检测细胞增殖及硼替佐米药物的敏感性;Western blot检测各组细胞Notch1蛋白表达变化;将RPMI-8226细胞皮下注射于NOD/SCID小鼠,建立人多发性骨髓瘤(MM)小鼠移植瘤模型,将成瘤小鼠分为三组:NS+bortezomib(Notch1 siRNA转染联合硼替佐米)组;CS+bortezomib(Control siRNA转染联合硼替佐米)组;UN+bortezomib(硼替佐米)组,观察各组肿瘤体积变化,免疫组化染色法观察Notch1变化,TUNEL法检测细胞凋亡。结果 Notch1 siRNA有效下调骨髓瘤细胞RPMI-8226细胞Notch1蛋白表达;Notch1 siRNA在96 h抑制细胞增殖作用明显增加,与CS及UN组比较对细胞增殖的作用可见明显差异(P<0.01);Notch1 siRNA转染组细胞对硼替佐米IC50值为1.21μmol/L,与Control siRNA转染组及未转染组相比均存在统计学差异(P<0.01);Notch1 siRNA降低移植瘤Notch1蛋白表达,Notch1 siRNA转染组细胞的AI明显高于Control siRNA转染组及未转染组(P<0.01);Notch1 siRNA转染联合硼替佐米组肿瘤体积明显减小,13、17及21 d与Control siRNA转染联合硼替佐米组比较均有统计学差异(P<0.05)。结论体外实验Notch siRNA抑制人骨髓瘤细胞RPMI-8226细胞增殖增加硼替佐米的敏感性,体内试验证实Notch siRNA联合硼替佐米可以明显减小荷瘤MM小鼠肿瘤体积、增加凋亡,提示Notchl是治疗MM的有效分子靶点。     

下调Met表达对骨髓瘤RPMI 8226细胞生物学行为的影响

目的:探讨下调c-Met表达对多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:将RPMI 8226细胞根据转染,分为对照组(RPMI8226细胞不做转染)、RPMI 8226/shRNA-control组和RPMI 8226/shRNA-Met组。采用Western blot检测c-Met蛋白表达水平以验证转染情况;采用MTT法检测细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡;与ECM(FN和Matrigel)和ECV304细胞的粘附检测其粘附能力;Transwell法检测细胞侵袭能力。结果:shRNA-Met可成功转染于RPMI 8226细胞,并有效抑制c-Met的表达,下调c-Met表达能有效抑制RPMI8226细胞增殖。与对照组相比较,shRNA-Met组在G_0/G_1期细胞比例和凋亡率(sub-G_1)明显增加,而粘附率和迁移细胞的数量均明显下降;而与对照组相比,shRNA-control组各项指标均未见统计学差异(P0.05)。结论:下调Met表达可影响骨髓瘤RPMI 8226细胞的增殖、粘附、侵袭和凋亡等生物学行为。     

骨髓瘤细胞系对硼替佐米敏感性与β-连环素表达水平关系的研究

目的 探讨β-连环素(β-catenin)与骨髓瘤细胞系对硼替佐米(Bortezomib)敏感性的关系.方法 以骨髓瘤细胞系RPMI8226、CZ-1、NCI-H929细胞为研究对象,采用锥虫蓝拒染法及改良四呷基偶氮唑盐比色(MTT)法检测药物对细胞的增殖抑制,Annexin V及PI染色流式细胞术检测药物对细胞凋亡的影响,RT-PCR及Western blot法比较硼替佐米、2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol,2ME2)单药或联合处理后,不同细胞系胞质内β-连环素的表达及变化,分析β-连环素表达水平与骨髓瘤细胞系对硼替佐米敏感性的关系.结果 β-连环素蛋白在不同骨髓瘤细胞系的基础表达水平由高到低依次为RPMI8226、CZ-1、NCI-H929细胞,对应的硼替佐米半数抑制浓度(IC50)分别为(49.8±0.6)、(24.7±0.4)、(8.4±0.2)nmol/L;硼替佐米(0、1、5、10 nmol/L)单药处理后,各细胞系β-连环素蛋白水平呈时间、剂量依赖性升高,而相应mRNA水平无明显变化;与硼替佐米(5 nmol/L)单药处理组相比,硼替佐米(5 nmol/L)联合2ME2(1 μmol/L)处理后,RPMI8226、CZ-1及NCI-H929细胞胞质β-连环素蛋白水平分别降低64.03%、52.56%和51.48%,凋亡细胞比例分别增加8.00、1.86、1.19倍.结论 β-连环素表达水平较高的骨髓瘤细胞系对硼替佐米敏感性较低;小剂量2ME2联合硼替佐米可降低β-连环素水平,增强骨髓瘤细胞系对硼替佐米的敏感性.     

MicroRNA-15a抑制骨髓瘤细胞生长及其机制研究

目的:研究microRNA-15a(miR-15a)在多发性骨髓瘤(MM)细胞生长中的作用及可能机制。方法:慢病毒颗粒感染MM细胞株U266和RPMI8226,流式细胞术(FCM)分选获得稳定转染MM细胞株。CCK-8法检测miR-15a高表达前后MM细胞的增殖情况;AO/EB染色、Hoechst 33258荧光染色法及FCM检测miR-15a高表达前后MM细胞凋亡的情况;FCM检测miR-15a高表达前后MM细胞周期的情况;real-time PCR方法检测miR-15a高表达前后MM细胞miR-15a、BMI-1及BCL-2 mRNA的表达;Western blot方法检测miR-15a高表达前后MM细胞BMI-1蛋白表达。结果:获得高表达miR-15a的MM稳定转染细胞株。CCK-8结果显示miR-15a高表达可抑制M M细胞(U266和RPM I8226)的增殖;AO/EB、Hoechst 33258染色和FCM结果显示,miR-15a高表达可显著诱导MM细胞(U266和RPM I8226)的凋亡,U266和RPM I8226细胞高表达组与对照组细胞凋亡率分别为:90.52%vs37.08%,59.40%vs 44.17%;同时,miR-15a高表达可诱导MM细胞(U266和RPM I8226)G1期阻滞,G1期细胞分别为(41.50±0.64)%、(45.31±0.77)%。real-time PCR结果显示,在高表达miR-15a抑制骨髓瘤细胞生长的过程中BCL-2 mRNA表达显著降低,BMI-1 mRNA表达则没有改变,但是Western blot结果却显示BMI-1蛋白表达出现显著降低。结论:miR-15a高表达通过诱导骨髓瘤细胞周期阻滞和凋亡抑制骨髓瘤细胞生长,其机制涉及miR-15a在转录后水平对BMI-1、BCL-2基因的负调控。     

白桦脂酸对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226凋亡的诱导

为了探讨白桦脂酸对多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226的诱导凋亡作用,用MTT、Annexin—V／PI双标记流式细胞术、PI单标记流式细胞术和Hoechst33258染色分别检测白桦脂酸对RPMI一8226增殖抑制、凋亡诱导、细胞周期的作用和形态学变化.用RT—PCR技术检测加药后RPMI-8226凋亡相关基因bcl—xl和caspase3的表达的变化。结果表明：白桦脂酸对RPMI-8226作用24和48小时的Ic50值分别为10．156±0．659和5．434±0．212ng／ml,在一定浓度范围内,白桦脂酸对其增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖性。RPMI．8226细胞的凋亡率随药物浓度的增加而增加。细胞周期测定显示,随药物浓度的增加G0／G1期的细胞比例增高,处于S期的细胞比例减低,药物对G2／M期细胞影响不明显。Hoechst33258染色在荧光显微镜下可见药物处理组和对照组之间细胞形态的显著变化。RT—PCR测定示,随加药浓度的增加,bcl—xl基因的表达呈降低趋势,而caspase3基因的表达呈增高趋势。结论：在一定的浓度范围内,白桦脂酸可诱导RPMI-8226发生凋亡且呈时间剂量依赖性,该过程可能与其上调caspase3和下调bcl—xl基因的表达有关。白桦脂酸还可以影响RPMI-8226细胞系的G1／S期,使细胞阻滞在G0／G1期。     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷联合古曲霉素A对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞增殖、凋亡及DLC-1基因表达的影响

本研究旨在探讨DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-cdR）联合组蛋白去乙酰化抑制剂古曲霉素A（TsA）对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞的生物学活性及DLC-1基因表达调控的影响。5-Aza-cdR及TsA单独或联合作用于RPMI8226细胞系,用CCK-8法检测细胞增殖活性,实时定量PCR（RT-PCR）检测药物作用后DLC-1基因表达情况,EusA检测药物作用后RhoA及Racl蛋白表达水平。结果表明,5-Aza-cdR及TsA对多发性骨髓瘤细胞具有明显生长抑制作用并呈剂量依赖性（P〈0．05）;与5-Aza-cdR及TSA单药组比较,联合用药组对细胞的抑制作用更强,细胞凋亡率明显升高（P〈0．05）;对照组RPMI8226细胞DLC-1基因微弱表达,5-Aza-cdR组DLC-1基因表达增强,且呈剂量依赖性重新表达（P〈0．05）,TsA虽不能诱导基因重新表达,但两药联合应用时可明显增强细胞DLC-1基因的表达;实验组与对照组多发性骨髓瘤细胞相比,rhoA及Racl蛋白表达明显下降（P〈0．05）。结论：5-Aza-cdR及TsA能有效的逆转RPMI8226细胞DLC-1基因的表达,并明显增强对多发性骨髓瘤细胞的生长抑制及促凋亡作用。这种抑制作用可能与其抑制Rh0／R0cK信号途径有关。     

三氧化二砷联合硼替佐米对骨髓瘤细胞株增殖、凋亡及β-连环蛋白水平的影响

本研究探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,AS2O3）联合硼替佐米对骨髓瘤细胞株增殖、凋亡及β-连环蛋白（β-catenin）水平的影响。硼替佐米、As2O3单用及联合处理RPMI8226、CZ-l、NCI-H929骨髓瘤细胞株48小时后,采用台盼蓝拒染法检测活细胞比例,用改良的四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,AnnexinV/PI双染色流式细胞术检测凋亡细胞比例,免疫印迹法比较用前药后β-连环蛋白的水平。结果表明：硼替佐米对RPMI8226、CZ-l、NCI-H929的半数抑制浓度（IC50）为46.9、20.7、6.8nmol/L;As2O3（1μmol/L）联合硼替佐米（5nmol/L）作用后,活细胞比例分别由88.99%、72.23%、51.06%降至54.01%、39.59%、25.00%（p〈0.05）,凋亡细胞比例由（11.1±0.1）%、（26.8±1.7）%、（36.8±5.5）%增加为（36.1±2.2）%、（60.4±3.8）%、（76±5.6）%,两组Q值介于增强与明显增强之间（1.198-3.75）。联合用药组RPMI8226、CZ-l、NCI-H929胞浆β-连环蛋白水平与单药组相比,分别下降24.15%,31.85%,33.72%。结论：As2O3能增强硼替佐米对骨髓瘤细胞的增殖抑制和凋亡诱导,降低β-连环蛋白表达水平,提高骨髓瘤细胞对硼替佐米的敏感性。     

Hedgehog信号通路异常对多发性骨髓瘤化疗耐药的影响

目的:探讨Hedgehog信号过度活化与多发性骨髓瘤耐药的关系。方法:以浓度梯度递增法建立骨髓瘤耐药细胞株RPMI8226/R,实验分为RPMI8226/R,RPMI8226/S,GANT61+RPMI8226/R和GANT61+RPMI8226/S4组,用CCK8法检测4组细胞的增殖抑制率;RT-PCR检测RPMI8226/S和RPMI8226/R耐药前后Gli1,Gli2,Shh,Ihh,Smo和Sufu mRNA表达的变化;Western blot法检测耐药蛋白Cyclin D1,P21和BCL-2及MDR相关信号通路蛋白p-Akt,p-MAPK和STAT3在耐药前后两组细胞的表达。加入不同浓度的GANT61后,Western blot法检测RPMI8226/R,RPMI8226/S组细胞Gli2的表达。结果:Shh、Ihh、Smo、Gli2在RPMI8226/R中表达明显升高,Sufu抑制子则相反,Hedgehog通路下游靶点相关蛋白在RPMI 8226/R中的表达显著高于RPMI8226/S,GANT61体外处理之后,骨髓瘤细胞中Gli2表达量显著减低,GANT61对Gli2表达的减低作用在RPMI8226/R细胞中较RPMI8226/S细胞更为显著,GANT61处理后RPMI8226/R细胞对DOX的敏感性(IC_(50))由7.11±0.061μmol/L升为0.99±0.053μmol/L,相应的耐药指数从5.51降至1.69。结论:Hedgehog信号通路的活化与多发性骨髓瘤的耐药密切相关,GANT61能够阻断Hedgehog信号通路,因此后者可能成为临床克服MM的化疗耐药的一种新的治疗靶点。