miR-550a-5p在骨髓增生异常综合征中的表达及其靶基因预测

目的:探讨miR-550a-5p在骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓中的表达情况并通过生物信息学分析预测靶基因及其功能,为进一步研究miR-550a-5p及其靶基因在MDS发病机制中的作用提供依据。方法:采用realtime PCR技术检测miR-550a-5p在54例MDS患者、16例MDS转化白血病患者及19例健康对照中的表达量,并分析其与临床病理特征(包括染色体情况、骨髓原始细胞比例及外周血血象)的相关性。应用miRBase获得并分析多个物种miR-550的序列特征;应用Microcosm、Miranda和Targetscan预测miR-550a-5p的靶基因,并取预测结果交集,进一步进行基因功能的GO(富集)分析和信号转导通路(Pathway)的富集分析。结果:miR-550a-5p表达量在所有MDS患者骨髓中均比对照组升高:在低危+中危1组中表达量是对照组的1.7倍(P=1.23×10-10);在中危2+高危组中表达量是对照组的1.9倍(P=1.20×10~(-10));在MDS转化为白血病组中的表达量是对照组的2.0倍(P=5.61×10~(-10))。随着MDS疾病危险度增高,miR-550a-5p表达水平逐渐上升,但其表达量与MDS患者的临床病理特征(包括染色体情况、骨髓原始细胞比例及外周血血象)之间无明显相关。利用生物信息学预测miR-550a-5p在MDS中的靶基因,结合文献报道选出了其中2个可能与miR-550a-5p调控MDS发生发展的病理机制有关的靶基因——PDLIM2和PSME1。结论:miR-550a-5p在MDS患者骨髓细胞中呈现出特异性高表达,推测其可能通过调控靶基因PDLIM2和PSME1参与MDS病理生理过程。     

miR-99a-5p对人骨髓间充质干细胞分化能力的影响

目的:探讨micro RNA-99a-5p(mi R-99a-5p)对人骨髓间充质干细胞(BM-MSC)分化能力的影响。方法:贴壁培养BM-MSC,用mi R-99a-5p类似物或抑制物转染细胞,实时定量PCR检测转染效率。通过分化实验检测mi R-99a-5p对BM-M SC成脂和成骨分化能力的影响。结果:与对照组相比,转染mi R-99a-5p类似物能显著上调mi R-99a-5p表达水平(P0.001),反之转染mi R-99a-5p抑制物则下调其表达水平(P0.001)。在成骨分化实验中,茜素红染色后镜下观察显示:过表达mi R-99a-5p能促进成骨分化,下调mi R-99a-5p的表达则抑制其成骨分化。分光光度计半定量检测也得到相同的结果。在成脂分化试验中,转染mi R-99a-5p类似物或抑制物对BM-MSC成脂分化无明显影响。结论:过表达mi R-99a-5p可促进BM-MSC成骨分化,但对其成脂分化无明显影响。     

MiR-15a-5p在肾癌中的表达分析及临床意义研究

目的检测肾癌及癌旁配对组织、肾癌及正常肾细胞系中mi R-15a-5p的表达水平,比较配对组织及细胞系之间的表达水平,分析表达水平与患者临床特征之间的关系,探究mi R-15a-5p作为肾癌标记物应用于临床的可能性。方法提取肾癌及正常肾细胞系、36对肾癌与配对癌旁组织标本中的总RNA,经反转录、q PCR检测mi R-15a-5p的表达,使用统计软件分析组织间、细胞系之间mi R-15a-5p的表达差异,分析mi R-15a-5p表达水平与患者临床特征间的关系。通过转染mi R-15a-5p干扰敲低肾癌细胞中mi R-15a-5p表达水平,利用流式细胞术评估其对肾癌细胞的凋亡影响。利用SPSS 19.0进行配对t检验及Fisher确切概率检验。结果 mi R-15a-5p在肾癌组织中表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05),癌组织中表达水平为癌旁组织的(9.95±0.92)倍。肾癌细胞系(786-O、ACHN)中mi R-15a-5p表达量分别是正常肾细胞系(HEK-293T)的(8.40±1.74)倍、(2.94±0.11)倍(P<0.05)。标本中共有26例(72.2%)肾癌标本mi R-15a-5p表达上调,癌组织中mi R-15a-5p表达水平与肾癌临床分期相关(P<0.05)。敲低mi R-15a-5p表达水平可诱导肾癌细胞凋亡,786-O细胞凋亡率为(14.01±0.81)%(敲低mi R-15a-5p)和(2.47±0.28)%(阴性对照)(P<0.05),ACHN细胞凋亡率为(20.30±0.47)%(敲低mi R-15a-5p)和(11.45±0.61)%(阴性对照)(P<0.05)。结论 mi R-15a-5p在肾癌组织及细胞系中表达明显上调,且和肾癌分期相关,mi R-15a-5p可调节肾癌细胞凋亡,提示其在肾癌的发生发展中起着一定的作用,有作为肾癌标记物应用于临床的可能。     

LncRNA HOTAIR通过靶基因miR-20a-5p调控淋巴瘤细胞增殖、侵袭、迁移的分子机制研究

目的：探讨lnc RNA HOTAIR通过靶基因mi R-20a-5p对淋巴瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其分子机制研究。方法：合成HOTAIR si RNA和si RNA NC质粒后，分别转染淋巴瘤Raji细胞，RT-q PCR检测HOTAIR的m RNA表达，分别通过CCK-8实验、Transwell和细胞划痕愈合实验检测Raji细胞的增殖、侵袭和迁移情况。mi Rcode软件预测lnc RNA HOTAIR的靶基因，并通过双荧光素酶实验分析HOTAIR与靶基因的关系。合成mi R-20a-5p inhibitor和inhibitor NC后，瞬时转染Raji细胞，RT-q PCR检测mi R-20a-5p表达，分析下调mi R-20a-5p对Raji细胞的增殖、侵袭和迁移的影响。用lnc RNA HOTAIR过表达质粒和mi R-20a-5p模拟物同时转染Raji细胞，分析Raji细胞的增殖、侵袭和迁移能力。过表达或下调mi R-20a-5p后，分析JAK/STAT3信号通路相关蛋白的表达。结果：转染HOTAIR si RNA后Raji细胞中HOTAIR表达降低（P<0.0...     

p15、DAPK、SOCS1和FHIT 4基因甲基化联合检测在骨髓增生异常综合征早期诊断及预后评估中的价值

目的:探讨p15、DAPK、SOCS1和FHIT 4基因甲基化联合检测在骨髓增生异常综合征(MDS)早期诊断与预后评估中的价值。方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)对67例MDS患者骨髓进行上述4种基因甲基化检测,分析4个基因联检在MDS患者早期诊断及预后评估中的价值。结果:67例MDS患者p15、DAPK、SOCS1和FHIT 4个基因甲基化率分别为37.3%、35.8%、47.8%和52.2%,较对照组显著增高(P0.05),4个基因单检诊断MDS的阳性符合率分别为37.3%、35.8%、47.8%和52.2%,而4个基因联合检测诊断MDS的阳性符合率为82.1%,较单一基因检查阳性符合率明显增高(P0.001);相对高危组中≥2个基因甲基化共表达明显高于相对低危组(P0.05)。MDS患者中位生存时间18(13.3,22.7)个月,相对低危组患者中位生存时间明显长于相对高危组[27(20.3,33.7)vs 9(5.9,12.1)个月](P0.05)。在不同危险度患者中,随着表达基因数的增多,患者的生存时间呈明显缩短趋势(P0.05)。结论:p15、DAPK、SOCS1和FHIT 4种基因联合检测有利于提高MDS患者的早期诊断和预后判断。     

血浆miR-130a-3p在高原低氧环境中表达的研究

目的探讨人血浆中miR-130a-3p在高原低氧环境中的表达情况。方法分别采集150例长期居住在平原地区的健康汉族人(平原汉组)和80例从平原地区移居到高原地区的健康汉族人(高原汉组)血浆样本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组人群血浆miR-130a-3p表达水平,分析miR-130a-3p表达水平与血液学指标的相关性,采用生物信息学分析软件预测其存在的靶基因。结果高原汉组血浆miR-130a-3p表达水平高于平原汉组,差异有统计学意义(Z=-5.318,P0.05)。血浆miR-130a-3p表达水平与红细胞计数(r=0.58、P0.001)、血红蛋白(r=0.59、P0.001)、血细胞比容(r=0.69、P0.001)均呈正相关,而与血小板计数(r=-0.21、P=0.001 4)呈负相关。生物信息学分析发现miR-130a-3p存在一些与缺氧、红细胞生成、巨核细胞增殖与分化相关的靶基因。结论高原低氧环境能够影响血浆中miR-130a-3p的表达,miR-130a-3p可作为机体应对缺氧环境的一个循环因子。     

外周血miR-125b-5p和miR-155相对表达量对冠状动脉狭窄程度的预测价值

目的探讨冠心病患者外周血miR-125b-5p与miR-155相对表达量与冠状动脉病变程度的相关性及其对冠状动脉狭窄程度的预测价值。方法冠心病患者57例为冠心病组,体检健康者57例为对照组,采用实时荧光定量PCR法检测2组血浆miR-125b-5p和miR-155相对表达量,分析冠心病患者血浆miR-125b-5p和miR-155相对表达量与冠状动脉病变支数及最大狭窄程度的相关性;绘制ROC曲线,评估血浆miR-125b-5p和miR-155相对表达量对冠心病患者冠状动脉狭窄50%的预测价值。结果冠心病组患者血浆miR-125b-5p(0.81±0.10)和miR-155(0.64±0.09)相对表达量低于对照组(0.98±0.12、0.82±0.13)(P0.05);冠状动脉狭窄≥50%冠心病患者血浆miR-125b-5p(0.74±0.11)和miR-155(0.59±0.10)相对表达量低于狭窄50%冠心病患者(0.87±0.08、0.72±0.09)(P0.05)。冠心病患者血浆miR-125b-5p、miR-155相对表达量与冠状动脉病变支数(r=—0.643,P0.001;r=—0.669,P0.001)及最大狭窄程度(r=—0.718,P0.001;r=—0.728,P0.001)均呈负相关。当血浆miR-125b-5p相对表达量0.776、miR-155相对表达量0.641为最佳截断值时,预测冠心病患者冠状动脉狭窄≥50%的AUC分别为0.949(95%CI:0.892～0.982,P0.001)、0.907(95%CI:0.839～0.954,P0.001),敏感度分别为91.2%、79.4%,特异度分别为92.5%和92.5%。结论血浆miR-125b-5p和miR-155相对表达量与冠心病病变程度具有负相关性,对冠状动脉狭窄≥50%具有较好预测价值。     

miR-103a-3p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨mi R-103a-3p在人肺癌组织中的表达及对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法收集南通市肿瘤医院52例肺癌患者手术组织标本,q RT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中mi R-103a-3p的表达;采用Lipofecta mineTM3000将mi R-103a-3p mimic、mimic NC、mi R-103a-3p inhibitor及inhibitor NC转染至A549细胞中,q RT-PCR检测mi R-103a-3p的转染效率;CCK8实验检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞凋亡能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。结果 mi R-103a-3p在肺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织(P0.01);q RT-PCR结果显示,转染mi R-103a-3p mimic组细胞中mi R-103a-3p的表达水平明显高于mimic NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;而转染mi R-103a-3p inhibitor组细胞中mi R-103a-3p的表达水平低于inhibitor NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力增强;但细胞凋亡在4组中变化均不明显。结论 mi R-103a-3p在肺癌组织中低表达,mi R-103a-3p能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-20a-5p/miR-20b-5p在胃癌细胞和组织中的表达及调控靶基因信号通路富集分析

目的观察miR-20a-5p/miR-20b-5p在胃癌细胞和胃癌组织中的表达,并用生物信息学方法分析其靶基因和富集的信号通路,探讨其生物学行为和功能。方法采用实时荧光定量PCR法检测miR-20a-5p/miR-20b-5p在不同分化程度(高、中、低)的胃癌细胞和正常胃黏膜细胞以及其在胃癌组织和癌旁组织中的表达水平,并分析其临床意义,采用mir WALK网站数据库的预测软件预测其靶基因,选择该网站10个软件中具备3个以上软件支持的靶基因,用DAVID 6.7在线富集其靶基因参与的信号通路。结果 miR-20a-5p/miR-20b-5p在不同分化程度(高、中、低)的胃癌细胞中表达上调(P均0.05),胃癌组织相对于癌旁组织亦明显上调表达(P0.05),miR-20b-5p表达上调与胃癌淋巴结侵袭转移以及浸润深度关系密切(P均0.05);生物信息学分析提示,miR-20a-5p/miR-20b-5p的靶基因富集存在于肿瘤相关的多个信号通路中。结论 miR-20a-5p/miR-20b-5p在胃癌细胞系及组织中呈高表达,并于与淋巴结侵袭转移以及浸润深度有关,可作为胃癌潜在的生物学标志物。     

miR-146a-5p与激素性股骨头坏死的关系分析

目的分析微小核糖核酸-146a-5p(miR-146a-5p)与激素性股骨头坏死的关系。方法选取我院行全髋关节置换术治疗的39例激素性股骨头坏死患者(激素性股骨头坏死组),纳入同期31例创伤性股骨头坏死患者(创伤性股骨头坏死组)及22例无股骨头坏死患者(相对健康组),在全髋关节置换术中股骨髓腔开髓时提取骨髓组织,获取骨髓间充质干细胞(MSC),使用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测miR-146a-5p的表达水平。比较三组MSC中miR-146a-5p表达水平,并使用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析miR-146a-5p与激素性股骨头坏死的关系。结果创伤性股骨头坏死组MSC中miR-146a-5p表达水平高于激素性股骨头坏死组(P0.05),相对健康组MSC中miR-146a-5p表达水平高于创伤性股骨头坏死组和激素性股骨头坏死组(P0.05)。miR-146a-5p对激素性股骨头坏死具有较高的诊断效能,其曲线下面积(AUC)为0.881,95%CI为0.814～0.949,约登指数0.621,灵敏度92.31%,特异度69.81%。结论 miR-146a-5p与激素性股骨头坏死关系密切,临床可将其作为诊疗新靶点。     

去甲基化治疗对骨髓增生异常综合征患者microRNA-124表达的激活作用

目的:通过检测microRNA-124(miR-124)在MDS患者骨髓细胞中的表达水平及在地西他滨治疗前后的表达变化,探讨miR-124在MDS发病中的作用及表达调控机制。方法:采用茎环法实时荧光定量聚合酶链反应检测35例MDS患者骨髓单个核细胞中miR-124的表达水平,同步检测10例正常供者骨髓中miR-124表达水平作为对照组。结果:MDS患者的miR-124表达水平低于正常对照组。低危组(包括RA和RCMD亚型)与正常对照组比较,差异无统计学意义(P0.05),但高危组(包括RAEB1、RAEB2和CMML亚型)miR-124表达水平与正常对照组比较有统计学差异,前者miR-124中位数明显低于后者(P0.01)。对18例MDS患者应用小剂量地西他滨治疗前后的miR-124表达水平检测发现,7例治疗后miR-124表达水平升高,差异有统计学意义(P0.05)。此结果说明去甲基化可激活该基因的表达。结论:miR-124基因过度甲基化和表达沉默可能是诱发MDS患者细胞克隆性转化的重要因素。     

microRNA-124在白血病及骨髓增生异常综合征患者中的表达异常及其意义

本研究旨在探讨microRNA-124(miR-124)在白血病及骨髓增生异常综合征(MDS)骨髓细胞中的表达异常及其意义。采用茎环法实时荧光定量qRT-PCR技术检测10例正常骨髓组织、18例新确诊的白血病患者和15例MDS患者骨髓单个核细胞中miR-124的相对表达量;应用定量甲基化特异性聚合酶链反应检测部分MDS标本has-miR-124-1启动子甲基化水平。结果表明,部分白血病及MDS患者miR-124表达水平下调,其中下调至1/3以下的白血病患者比例为2/18,下调至1/3以下的MDS患者比例为5/15,下调至1/4以下的MDS患者比例为3/15。组间比较结果显示,miR-124在白血病组中的表达与正常骨髓相比差异无统计学显著意义(P=0.725),但在MDS标本中的表达水平降低有统计学显著意义(P=0.031);在7/11的MDS患者检测到miR-124启动子区甲基化水平升高,其中包括所有5例miR-124表达下调的患者。miR-124表达量与其启动子区域甲基化水平有相关性(R2=0.339,P=0.018)。结论:在部分MDS患者存在miR-124表达受抑,可能与其基因甲基化异常有关。     

miR-181b在慢性淋巴细胞白血病患者中的表达及其靶基因的预测

目的:探讨miR-181b在慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者CD19+B淋巴细胞中的表达水平,分析其表达与CLL预后关系,并利用生物信息学预测miR-181b在CLL中的潜在靶基因。方法:选取2013年6月至2018年6月在新疆自治区人民医院诊治的CLL患者84例、并选取健康者20例为对照组。应用磁珠分选CLL患者和对照组外周血CD19+B淋巴细胞后进行RNA提取,检测miR-181b的表达水平,分析其在不同IPI分组中表达差异,探讨miR-181b表达水平与CLL患者PFS相关性。使用网上数据库及文献预测miR-181b靶基因,对候选靶基因进行基因注释分析及相关信号通路分析。结果:miR-181b在CLL患者中表达显著低于对照组(P0.01)。miR-181b在低危组的表达水平高于高危组和极高危组(P0.05),但在低危组与中危组间表达无差异(P=1.00),中危组中miR-181b的表达水平高于高危组和极高危组(P0.05),但在高危组与极高危组间表达无差异。ROC曲线结果显示,曲线下面积(AUC)为0.792(P0.01),由此显示,miR-181b表达水平处于分界值0.279时,具有较好的敏感性(62.9%)和特异性(91.8%)。生存分析结果提示,与高表达组相比,miR-181b低表达CLL患者具有较差的PFS(log-rank:P=0.047)。使用starBase、Targetscan和PicTar数据库进行靶基因预测,结合文献报道,与血液疾病相关的靶基因有CARD11、ZFP36L1、RUNX1、NR4A3、ATP1B1、PUM1和PLAG1,其中上调的CARD11、ZFP36L1通过促进细胞增殖、抑制细胞衰老参与淋巴系统肿瘤形成。结论:miR-181b在CLL患者中的表达水平明显低于健康对照组,且miR-181b低表达与CLL不良预后有关。通过生物信息学预测并结合文献报道,推测CARD11及ZFP36L1可能作为miR-181b的靶基因参与CLL疾病发生发展,该结果还需要进一步实验进行验证。     

miR-33a-5p通过靶向作用于S1PR1抑制人乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的初步探讨miR-33a-5p和鞘氨醇1磷酸酯受体1(S1PR1)在人乳腺癌细胞中的表达水平,确认二者的潜在靶向关系并观察miR-33a-5p及S1PR1的表达调控对乳腺癌细胞增殖、迁移的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人正常乳腺上皮细胞HBL-100及4种乳腺癌细胞中miR-33a-5p、S1PR1的相对表达水平并分析二者相关性;生物信息学方法及双荧光素酶报告基因分别预测和鉴定miR-33a-5p与S1PR1基因的靶向关系,并检测miR-33a-5p mimics转染MDA-MB-231细胞后S1PR1蛋白的表达。后将细胞实验分5组:miR-33a-5p对照组(miRNC)、miR-33a-5p模拟物组(miR-33a-5p mimics)、S1PR1空载体组(pLV-NC)、S1PR1过表达组(pLV-S1PR1)以及miR-33a-5p mimics+pLV-S1PR1组,MTT和划痕实验分别检测各组细胞增殖和迁移能力。结果与正常乳腺上皮细胞HBL-100比较,miR-33a-5p及S1PR1在4种乳腺癌细胞系中的表达分别显著降低和升高(P0.05;P0.01),且二者呈显著负相关性(r=-0.994;P=0.006);预测及验证结果显示,S1PR1为miR-33a-5p的靶基因,且miR-33a-5p mimics能显著降低MDA-MB-231细胞中S1PR1蛋白的表达(P0.01);与miR-NC组比较,miR-33a-5p mimics显著降低了细胞增殖、迁移能力(均P0.01);与pLV-NC组比较,S1PR1过表达显著增加了细胞增殖、迁移能力(P0.05;P0.01);且与pLV-S1PR1组比较,miR-33a-5p mimics能显著逆转S1PR1过表达对细胞增殖、迁移能力的促进作用。结论 miR-33a-5p能显著抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移,其作用机制与靶向负调控S1PR1密切相关。     

血清miR-146a-3p、miR-155-5p表达水平在类风湿关节炎诊疗中的临床应用研究

目的探讨血清miR-146a-3p、miR-155-5p表达水平在类风湿关节炎(RA)诊疗中的应用价值。方法选用RA确诊病例46例(RA组,又分为高度活动组24例、低度活动组22例),健康对照20例作为对照组,采用qPCR SYBR GREENⅠ嵌合荧光染料法,以U6为内参,检测RA组和对照组血清miR-146a-3p、miR-125a-3p表达水平,分析其与RA诊断和疾病活动度的相关性。结果 RA组miR-146a-3p表达水平[0.015(0.005,0.055)]与对照组[0.001(0.001,0.002)]比较,差异具有统计学意义(P=0.001);RA组血清miR-155-5表达[0.039(0.020,0.079)]与对照组水平[0.008(0.005,0.016)]比较,差异具有统计学意义(P=0.001)。RA高度活动组血清miR-146a-3p表达[0.055(0.028,0.138)]与低度活动组水平[0.006(0.003,0.007)]比较,差异具有统计学意义(P=0.001);miR-155-5p表达[0.070(0.055,0.145)]与低度活动组水平[0.024(0.014,0.033)]比较,差异具有统计学意义(P=0.001)。结论 RA患者血清miR-146a-3p、miR-155-5p表达水平明显高于对照组,RA高度活动组血清miR-146a-3p、miR-155-5p表达水平高于低度活动组患者,可认为检测两种miRNA血清表达水平可作为RA诊断和活动度观察指标。     

基于生物信息学方法对胰腺癌血浆差异miRNA和基因表达的分析研究

目的采用生物信息学方法进一步筛选和验证胰腺癌血浆标志物,为明确其分子机制提供依据。方法通过关键词"胰腺癌、血浆、mi RNA"进行检索,搜集文献,并下载原始数据,进行生物信息学分析,寻找具有特异性的血浆mi RNA标志物,预测其靶基因,进行通路富集和互作分析,通过文献数据和数据库进行关键基因的验证,分析其差异表达谱及其与胰腺癌预后的关系。结果通过对GSE59856和GSE124158进行差异mi RNA的筛选,最后筛选得出mi R-12 2-5p。通过对mi R-12 2-5p预测得到了517个靶基因,并对靶基因作GO/KEGG富集分析。进一步对靶基因做蛋白互作图,并通过相关文献的查询与筛查,筛选出UBA52、ADAM10、CBL、VAMP3这4个关键基因。根据TCGA表达谱及文献数据论证,与健康人相比,胰腺癌患者高表达UBA52、ADAM10、CBL、VAMP3。VAMP3、ADAM10基因低表达的胰腺癌患者总体生存率更高(P0.05)。结论采用生物信息学方法对胰腺癌患者血浆差异mi RNA进行分析,筛选出的mi R-12 2-5p具有作为胰腺癌诊断标志物的潜力。mi R-12 2-5p作用的关键靶基因VAMP3、ADAM10与胰腺癌的预后密切相关。     

miR-34a-3p通过靶基因YAP1调控黑色素瘤A375细胞的增殖和凋亡

目的探讨miR-34a-3p通过靶基因YAP1调控黑色素瘤A375细胞的增殖和凋亡。方法通过荧光定量PCR检测miR-34a-3p在黑色素瘤和正常皮肤组织中的表达,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-34a-3p的靶基因,黑色素瘤A375细胞转入miR-34a-3p模拟剂(miR-34a-3p mimics组),转入对照物miR-NC(对照组miR-NC),miR-34a-3p mimics组转染YAP1表达载体(miR-34a-3p mimics+YAP1组)。通过MTT和流式细胞术分别检测miR-34a-3p和YAP1对黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响,并通过Western blot检测miR-34a-3p对YAP1蛋白表达的影响。结果黑色素瘤组中的miR-34a-3p的表达量(0. 67±0. 21)低于正常皮肤组织(1. 35±0. 47),差异具有统计学意义(P 0. 05)。双荧光素酶报告基因显示,miR-34a-3p mimics与YAP1 3'UTR WT载体共转染组荧光强度(0. 39±0. 11)明显低于对照miR-NC与WT载体共转染组(0. 98±0. 35),差异具有统计学意义(P 0. 05)。而miR-34a-3p mimics与YAP1 3'UTR MUT载体共转染组(1. 31±0. 23)与其对照miR-NC与MUT载体共转染组(1. 22±0. 21)之间的荧光强度无显著差异(P 0. 05)。在培养24 h、48 h和72 h后,miR-34a-3p mimics组细胞细胞活力低于对照组miR-NC,差异具有统计学意义(P 0. 05); miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞活力高于miR-34a-3p mimics组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。miR-34a-3p mimics组细胞的凋亡率高于对照组miR-NC,差异具有统计学意义(P 0. 05)。miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞凋亡率低于miR-34a-3p mimics组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。与对照组miR-NC比,miR-34a-3p mimics组细胞的YAP1蛋白表达量显著降低,cleaved caspase 9表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P 0. 05)。而与miR-34a-3p mimics组比较,miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞凋YAP1蛋白表达量显著增加,cleaved caspase 9表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。结论miR-34a-3p能够通过调控靶基因YAP1的表达,抑制黑色素瘤A375细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

骨髓增生异常综合征患者p73基因启动子区域异常甲基化的研究

目的 探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者抑癌基因p73启动子区域甲基化情况及其在预后中的意义.方法 收集135例初诊MDS患者及13名正常志愿者骨髓细胞,用甲基化特异性PCR (MS-PCR)方法检测p73基因启动子CpG岛甲基化发生情况,并利用亚硫酸盐测序法验证MS-PCR结果;荧光定量PCR法检测p73 mRNA表达情况;利用地西他滨处理MDS患者原代细胞,观察p73基因去甲基化及p73 mRNA表达情况;结合临床资料分析p73基因异常高甲基化在MDS中的作用.结果 37.0％的MDS患者p73基因启动子呈高甲基化状态,而且高危组MDS患者(RAEB-1、RAEB-2)甲基化发生率明显高于低危组(58.8％对29.7％,P=0.002);甲基化组患者p73 mRNA表达水平显著低于非甲基化组(P=0.032);用地西他滨处理后,可见MDS原代细胞p73去甲基化,且p73mRNA表达水平增高;p73高甲基化患者无白血病生存时间(DFS)及总体生存时间(OS)低于p73非甲基化患者(P值均＜0.01).在COX模型中,p73基因甲基化状况和骨髓原始细胞水平为影响患者DFS及OS的独立预后因素.结论 p73基因启动子高甲基化在MDS患者中较常见,且提示预后不良,可能为地西他滨治疗的靶点.     

miR-193a-3p在胃癌中调节细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨微小RNA 193-a-3p(miR-193a-3p)在胃癌中调节细胞凋亡的分子机制。方法运用实时荧光定量PCR在健康人胃黏膜细胞系GES-1、人胃癌细胞系MKN-45、SGC-7901、MGC-803、SNU16检测miR-193a-3p的相对表达水平;通过TargetScan在线分析和荧光素酶报告系统检测miR-193a-3p的靶基因;过表达或敲低miR-193a-3p后,免疫印迹试验检测靶基因和细胞凋亡标志蛋白的表达量以及细胞凋亡检测试验(Annexin V双染色法)检测细胞的凋亡水平。结果相比于健康人胃黏膜细胞系GES-1,miR-193a-3p在人胃癌细胞系MKN-45、SGC-7901、MGC-803、SNU16中低表达(P0.05),并且MGC-803的表达量最低。miR-193a-3p靶向P21活化激酶4(PAK4)的3端非编码区。过表达miR-193a-3p后,PAK4的表达量降低,而凋亡标志蛋白cleaved-caspase3表达量升高,胃癌细胞MGC-803的凋亡水平上升(P0.05)。敲低miR-193a-3p后,PAK4的表达量升高,而凋亡标志蛋白cleaved-caspase3表达量降低,胃癌细胞MGC-803的凋亡水平下降(P0.05)。结论 miR-193a-3p通过靶向调节PAK4促进胃癌细胞发生细胞凋亡。     

miR-181a-5p和miR-451a在胃癌诊断和预后评估中的临床价值

目的探讨miR-181a-5p和miR-451a在胃癌诊断和预后评估的临床价值。方法选取2014年1月至2016年12月在该院就诊的胃癌患者血清标本117例为胃癌组,选择同期在该院行胃镜检查诊断为息肉的患者血清标本75例和健康体检者血清标本45例分别设为胃息肉组和健康对照组。比较各组研究对象血清miR-181a-5p和miR-451a表达水平,观察胃癌患者血清miR-181a-5p和miR-451a表达水平与临床病理因素和随访2年胃癌患者预后的关系,以及其在诊断胃癌和预测胃癌患者2年内死亡的效能。结果胃癌组术前血清miR-181a-5p表达水平明显高于胃息肉组和健康对照组(P<0.01),而胃息肉组miR-181a-5p表达水平明显高于健康对照组(P<0.01),胃癌术后血清miR-181a-5p表达水平较术前明显降低(P<0.01);胃癌组术前血清miR-451a表达水平明显低于胃息肉组和健康对照组(P<0.01),而胃息肉组的血清miR-181a-5p表达水平明显高于健康对照组(P<0.01),胃癌组术后血清miR-451a表达水平较术前明显升高(P<0.01)。血清miR-181a-5p和miR-451a联合检测诊断胃癌的灵敏度为77.8%,特异度为97.3%,曲线下面积均明显高于miR-181a-5p和miR-451a单项检测(P<0.01),而miR-181a-5p与miR-451a的曲线下面积差异无统计学意义(P>0.05)。血清miR-181a-5p和miR-451a表达水平在不同分化程度、TNM分期、淋巴结转移和浸润深度的胃癌患者中差异有统计学意义(P <0.001)。死亡组患者血清miR-181a-5p表达水平明显高于存活组(P <0.01),而血清miR-451a表达水平明显低于存活组(P<0.01)。血清miR-181a-5p和miR-451a联合检测在预测胃癌患者2年内死亡的灵敏度为100.0%,特异度78.6%,曲线下面积明显高于miR-181a-5p和miR-451a单项检测(P<0.05),而miR-181a-5p与miR-451a的曲线下面积差异无统计学意义(P>0.05)。结论联合检测血清miR-181a-5p和miR-451a在胃癌诊断中具有重要临床价值,其表达水平与患者的预后具有重要关系,在预测2年内死亡具有较高的效能。