IKZF1基因突变是成人B系急性淋巴细胞白血病患者预后不良的因素

目的:分析合并IKZF1基因突变的成人B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)患者的预后,探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)可否改善患者预后。方法:收集经毛细管电泳法检测骨髓IKZF1基因突变164例成人B-ALL患者的临床资料,分析IKZF1基因突变与成人B-ALL患者的预后关系。结果:164例成人B-ALL患者中IKZF1基因突变阳性80例,阴性84例。80例IKZF1基因突变阳性患者根据诱导化疗缓解后的治疗方式分为移植组(48例)和化疗组(32例)。分析结果显示,移植组中IKZF1突变阳性患者的3年总生存(OS)率、无白血病生存(LFS)率分别为50.3%±8.3%和41.6%±8.5%,化疗组分别为33.7%±12.8%和31.5%±9.5%,均明显低于IKZF1突变阴性患者率(79.5%±7.6%、64.0%±8.4%)和(54.4%±9.9%、40.6%±9.6%)(P<0.05)。IKZF1突变阳性80例患者中移植组3年OS和LFS率(55.3%±7.5%和48.3%±7.6%)明显高于化疗组(32.9%±11.8%和28.4%±10.3%)(P<0.05)。结论:IKZF1基因突变是成人B-ALL预后不良的因素,allo-HSCT可明显提高IKZF1突变阳性成人B-ALL患者的3年OS和LFS率,从而改善其预后。     

IKZF1基因IK6亚型在成人急性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

本研究通过检测IKZF1基因在成人急性淋巴细胞白血病（ALL）患者骨髓细胞中的表达亚型,探讨IK6功能缺陷亚型患者的临床特征及预后。应用巢式RT-PCR方法检测79例初诊ALL患者IKZF1基因表达亚型,统计IK6亚型阳性患者比例,分析IK6阳性患者年龄、性别、白细胞计数、融合基因、危险分层特点,比较IK6阳性组与IK6阴性组患者总生存率、无病生存率的差异。结果表明：在ALL患者中检测到IKZF1基因表达的功能亚型为IK1、IK2/3,功能缺陷亚型主要为IK4、IK6、IK8、IK9;表达IK6亚型患者占B-ALL患者的34.4%,占T-ALL患者的22.2%;B-ALL中IK6阳性组患者BCR/ABL1阳性率及高危组患者比例均高于IK6阴性组（P=0.027,P=0.048）,而两组的年龄、性别、白细胞计数无显著性差异,T-ALL中IK6阳性组与IK6阴性组的年龄、性别、白细胞计数、危险分层均无显著性差异,在Ph染色体阴性的B-ALL患者中,IK6阳性组的总生存率和无病生存率均低于IK6阴性组（P=0.009,P=0.002）。结论：在成人ALL中IKZF1基因IK6表达亚型为主要功能缺陷亚型,IK6亚型的表达可作为Ph染色体阴性的B-ALL患者预后危险因素,指导成人ALL治疗。     

IKZF1基因缺失在急性B淋巴细胞白血病患者中的预后意义北大核心CSCD

目的分析IKZF1基因缺失在急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者中的预后意义。方法回顾性分析2016年3月至2019年9月南方医科大学附属南方医院收治的142例接受儿童样化疗方案的B-ALL患者的临床资料,分析IKZF1缺失患者的临床特征。无事件生存(EFS)和总生存(OS)的多因素分析使用Cox回归模型。将患者分为IKZF1缺失/单纯化疗组(A组)、IKZF1缺失/移植组(B组)、IKZF1非缺失/单纯化疗(C组)、IKZF1非缺失/移植(D组)四组比较患者生存。结果142例患者,50例(35.2%)检出IKZF1基因缺失,其中4~7号外显子缺失占44.0%;与非缺失型比较,IKZF1缺失组B-ALL患者初诊时白细胞计数升高比例更高(52.0%对28.3%,P=0.005)、诱导治疗第14天微小残留病转阴率更低(MRD1,40.0%对70.7%,P<0.001)以及Ph染色体阳性比例更高(52.0%对21.7%,P<0.001)。单因素分析显示,IKZF1缺失组3年EFS率、OS率明显低于IKZF1非缺失组[(37.1±7.3)%对(54.7±5.4)%,P=0.025;(51.8±7.9)%对(73.9±4.7)%,P=0.013];多因素分析显示IKZF1缺失是影响B-ALL患者EFS(HR=1.744,95%CI 1.082~2.812,P=0.022)、OS(HR=2.036,95%CI 1.119~3.705,P=0.020)的独立危险因素。其中,A组的3年EFS、OS、无病生存率(DFS)均明显低于其他亚组。在IKZF1缺失患者中,接受异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)组3年OS率为(67.9±10.4)%,3年EFS率为(46.6±10.5)%,均明显高于非移植组的(31.9±11.0)%和(26.7±9.7)%(P值分别为0.005、0.026)。结论IKZF1基因缺失的B-ALL患者整体预后差,儿童样化疗方案不能完全纠正IZKF1缺失对预后的不良影响;儿童样方案联合allo-HSCT可显著改善IKZF1缺失B-ALL的整体预后。     

实时荧光定量RT-PCR检测急性白血病患者骨髓HB-1的表达

目的:探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓细胞HB-1基因的表达水平以及HB-1基因在监测ALL微小残留病(MRD)方面的意义。方法:建立实时荧光定量RT-PCR方法(Taqman探针),检测HB-1基因的表达水平,并对其灵敏度、特异性和重复性进行检测。应用此方法检测了急性淋巴细胞白血病183例次,急性髓系白血病(AML)70例,血液系统非恶性疾病52例和造血干细胞健康供者24例的骨髓细胞HB-1基因的表达水平,并分析33例急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者HB-1基因的表达水平与疾病诊断、复发的相关性。结果:构建的实时荧光定量PCR方法的灵敏度达10-4水平,批间变异系数为6.79%,批内变异系数为4.80%。检测到HB-1基因特异性表达于B-ALL细胞:初发/复发B-ALL中HB-1基因表达的中位水平明显高于ALL完全缓解组、初发T-ALL、初发AML、血液系统非恶性病及健康骨髓供者(33.0%vs 0.68%、0.07%、0.02%、0.58%、0,P0.01),而初发TALL、初发AM L、血液系统非恶性疾病和健康供者HB-1基因的表达水平无统计学差异(P0.05)。B-ALL患者血液学缓解时HB-1基因水平明显下降至0.68%(0-7.99%),疾病复发时HB-1表达水平再次升高(共3例,HB-1分别为7.69%、8.08%和484.0%),其检测结果与流式细胞学检测结果变化一致。结论:HB-1基因特异性表达于B-ALL细胞,所建立的实时荧光定量RT-PCR法在检测骨髓细胞HB-1基因的表达水平方面具有很好的灵敏度、特异性和重复性。HB-1基因可作为B-ALL患者的临床检测、监测MRD和早期预测复发的分子学标志。     

急性淋巴细胞白血病患者ROCK1基因表达水平变化及其临床意义

目的:研究ROCK1基因在急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中的表达变化及其临床预后意义。方法:选择自2017年4月-2018年4月在本院接受治疗的60例ALL患者,同时选取60例健康体检者作为对照,从受试者静脉取血后分离单个核细胞,采用RT-PCR实验检测样本的ROCK1基因表达水平,采用Western blot实验检测ROCK1蛋白表达水平,统计学分析ROCK1基因表达与ALL患者临床特征的相关性。结果:ALL患者ROCK1基因相对表达水平为1.37(1.28-1.46),对照组ROCK1基因相对表达水平为1.06(0.96-1.12),ALL患者ROCK1基因水平显著高于对照组(P0.05)。ALL患者ROCK1蛋白表达水平高于对照组(P0.05)。ROCK1基因表达水平与ALL患者的年龄、白细胞计数、乳酸脱氢酶(LDH)水平及外周血幼稚细胞数有显著相关性(P0.05)。ROCK1基因表达水平与ALL患者的性别、血红蛋白(Hb)水平、血小板数及免疫表型无相关性(P0.05)。ROCK1低表达的B-ALL和T-ALL患者患者标危比例均显著高于ROCK1高表达的患者(P0.05)。ROCK1低表达的B-ALL和T-ALL患者极高危比例均显著低于ROCK1高表达的患者(P0.05)。ROCK1低表达组CR比例显著高于ROCK1高表达的患者(P0.05)。ROCK1低表达组复发比例显著低于ROCK1高表达的患者(P0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明,ROCK1低表达ALL患者的OS和DFS均优于ROCK1高表达的患者(P0.05)。多因素Cox回归分析结果表明,年龄及ROCK1基因是OS独立影响因素(P0.05);白细胞计数及ROCK1基因是DFS独立影响因素(P0.05)结论:ROCK1基因在ALL患者中表达水平较高,其高水平表达可能刺激ALL的发生,而下调ROCK1基因表达可能有助于提高ALL的治疗效果。     

急性淋巴细胞白血病的免疫分型和基因的研究

目的:回顾性分析30例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的免疫分型,融合基因及基因突变的分子生物学检测结果,并探讨其与临床治疗效果及预后的关系。方法:选取哈尔滨市第一医院血液肿瘤研究中心2015年8月到2016年6月经过骨髓细胞形态学、免疫表型、细胞遗传学、分子生物学等检查确诊的ALL患者30例,按照FAB标准分类,27例为B系ALL,3例为T系ALL。分析ALL患者白血病细胞膜表面及胞浆内分化抗原,并且对所有患者都进行43种融合基因定性筛查(BCR-ABL,AML1-ETO,PML-RARα等)和ALL基因突变(IKZF1,TP53,PAX5,JAK1,JAK2,CRLF2,PHF6,NOTCH1,FBXW7,PTEN)的二代测序(NGS)检测。结果:30例ALL患者中男性14例,女性16例,年龄2-74岁,中位年龄11.5岁。30例ALL中B-ALL发病率(90.00%)明显高于T-ALL(10.00%)。27例B-ALL患者主要表达CD19、CD22、CD10和CD34等。CD19和CD22是B-ALL最具有诊断价值的抗原;3例T-ALL主要表达cCD3、CD7、CD10和cTDT等,CD7和cCD3是T-ALL最具有诊断价值的抗原。30例ALL患者的43种融合基因定性筛查发现,BCR-ABL、TEL-AML1、E2A-PBX1、MLL-AF6、MLL-AF4和SIL-TAL融合基因阳性各1例,ALL相关基因突变的NGS检测结果表明,3例B-ALL患者发生TP53突变,1例B-ALL患者发生TET2 I1762V突变;3例患者(2例T-ALL,1例B-ALL)发现NOTCH1基因突变。1个疗程后成人B-ALL的治疗效果(28.57%)明显差于儿童B-ALL(95.00%),截止至2017年7月10日儿童B-ALL的生存率明显优于成人B-ALL,其差异都具有显著性意义。结论:白血病免疫分型技术及分子生物学检测技术在白血病的诊断、治疗方案的选择及疗效评价方面具有重要指导作用,是骨髓细胞形态学诊断的补充。     

急性淋巴细胞白血病病人Ikaros6基因表达及意义

目的探讨Ikaros6基因在急性淋巴细胞白血病（ALL）病人中的表达及临床意义。方法对95例ALL病人进行R-显带染色体核型分析,再采用逆转录PCR方法检测Ikaros6基因的表达,基因测序确定Ikaros6基因突变的位置及类型;应用荧光定量PCR测定初诊及缓解病人Ikaros6mRNA的表达,并通过临床随访观察不同病人采用不同治疗方案的疗效。结果 95例ALL病人中有45例Ph染色体阳性,50例Ph染色体阴性;在Ph染色体阳性和阴性病人中分别有13例和2例表达Ikaros6,差异有显著性（χ2=11.03,P〈0.05）。健康对照组均未检测到Ikaros6基因的表达。表达Ikaros6的病人基因测序均显示IKZF1中外显子4~7的缺失。初诊病人Ikaros6mRNA平均表达量明显高于缓解病人（t=4.054,P〈0.05）。Ph染色体阳性ALL病人接受络氨酸酶抑制剂（TKIs）治疗后,有Ikaros6基因表达的病人其缓解率明显低于未表达该基因病人（χ2=6.20,P〈0.05）;未表达Ikaros6基因Ph染色体阳性ALL病人,接受TKIs治疗的缓解率明显高于VDCP治疗方案（χ2=5.43,P〈0.05）。表达Ikaros6的Ph染色体阳性ALL病人20个月平均累积复发时间明显短于未表达Ikaros6病人（Waldχ2=13.72,P〈0.05）。结论 IKZF1外显子4~7缺失导致Ikaros6基因在Ph染色体阳性ALL病人中高表达,表达该基因的病人对TKIs具有明显的抵抗作用,TKIs和VDCP方案对于此类病人的治疗效果均不理想,复发率高。     

WT1基因在骨髓增生异常综合征及急性白血病患者中的表达

为了研究WT1基因在骨髓增生异常综合征 (MDS)和急性白血病 (AL)患者中的表达及其与临床预后的关系 ,采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测 2 2例MDS和 6 9例AL的WT1mRNA的表达。结果表明 ,WT1mRNA在MDS RA及MDS RAS中低表达 ,阳性率为 10 % (1/10 ) ;在MDS RAEB和MDS RAEB t中高表达 ,阳性率为 91.7% (11/12 ) ,两者差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。WT1mRNA在各型急性白血病中均有表达 ,初发和复发急性白血病中WT1mRNA的阳性率 (6 9% )高于缓解患者 (12 .5 % ) (P <0 .0 1)。初发与复发AL的WT1mRNA的相对表达量无差异 ,而MDS RAEB和RAEB t的表达量低于初发AL患者。WT1mRNA阳性的AML患者的化疗缓解率 (4 1% )低于阴性患者 (78% ) ;WT1基因相对表达量≥ 1的AML患者的CR率 (18% )低于 <1的患者 (5 5 % )。结论 :WT1基因在MDS RAEB和MDS RAEB t中的表达明显高于MDS RA和MDS RAS ,动态监测WT1基因的表达可能有助于监测MDS的病情变化。WT1基因表达与否及表达高低与初发AL的预后有关 ;WT1基因是急性髓细胞白血病的一个独立的预后因素。     

N-cadherin在急性白血病患者骨髓白血病细胞中的表达及意义

目的:探讨神经钙粘蛋白(N-cadherin)在急性白血病患者骨髓白血病细胞中的表达及意义。方法:应用流式细胞术检测N-cadherin在113例急性白血病患者骨髓白血病细胞中的表达并分析其与临床特征及预后的相关性。结果:N-cadherin在急性白血病患者骨髓白血病细胞中的表达存在差异,表达水平波动在0%-99.7%;成人急性髓系白血病患者N-cadherin~+组CD34~+率较N-cadherin~-组显著升高(67.39%vs 33.33%)(P=0.013),两组间1疗程CR率、总CR率及复发率间的差异无统计学意义(P0.05);急性淋巴细胞白血病患者N-cadherin~+组白细胞数(21.31±7.07 vs 51.10±23.69)(P=0.008)和外周血原始细胞比例〔(43.22±5.75)%vs(66.45±5.65)%(P=0.015)〕显著低于N-cadherin~-组,1疗程CR率和总CR率低于N-cadherin-组,复发率高于N-cadherin-组,但差异无统计学意义(P0.05);儿童急性淋巴细胞白血病患者N-cadherin~+组CD33~+率较N-cadherin-组显著增高(47.62%vs 0%)(P=0.012),两组间1疗程CR率和总CR率无显著差异。N-cadherin~+组复发率高于N-cadherin~-组(30.00%vs 0%)(P=0.115)。成人AML、非M3-AML、ALL和儿童ALL患者N-cadherin~-组中位生存时间、3年总生存(OS)率和3年无复发生存率均好于N-cadherin~+组,但其差异无统计学意义。结论:N-cadherin在急性白血病患者骨髓白血病细胞中的表达水平与部分临床特征有关,对急性白血病患者的生存有一定影响。     

CD146在儿童与成人急性B淋巴细胞白血病细胞中表达及其意义

目的:探讨CD146在儿童与成人急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞中表达的差异及其与其他抗原、临床、分子生物学及细胞遗传学特征的关系。方法:应用流式细胞仪检测CD146在儿童(44例)与成人(24例)BALL中的表达情况,并分析CD146异常高表达与性别、初诊时外周血血象、骨髓原始淋巴细胞与幼稚淋巴细胞比例等参数的关系,比较CD146与其他抗原之间的相关性,以及CD146异常高表达患者1个疗程的缓解率。结果:成人B-ALL中CD146异常高表达率为29.17%(7/24),儿童B-ALL中CD146异常高表达率为9.09%(4/44),在成人组显著高于儿童组(P0.05);在成人组中CD146与CD64(r=0.491,P0.05)和CD117(r=0.578,P0.05)呈正相关关系,在儿童组中CD146与CD71(r=0.419,P0.01)、CD58(r=0.301,P0.05)呈正相关关系;经1个疗程的正规化疗后,异常高表达CD146的成人组和儿童组的缓解率均低(P0.05)。结论:成人B-ALL患者的CD146表达率高于儿童B-ALL患者。CD146与预后较差的抗原呈正相关。CD146可能是一个预后不良的指标。     

E-cadherin基因在儿童急性白血病中的表达及其临床意义

目的:研究E-cadherin基因在儿童急性白血病(AL)中的表达及其与临床指标的相关性,并探讨其可能的调控机制。方法:采用实时荧光定量PCR检测135例初诊AL患儿骨髓单个核细胞中E-cadherin mRNA的表达水平,并分析其表达水平与临床指标的相关性;应用Western blot法检测E-cadherin、β-catenin、Akt、p-Akt信号通路相关蛋白的表达;同时收集22例非恶性血液病患儿的骨髓作为对照。结果:B-ALL、T-ALL、AML组中E-cadherin mRNA的表达均低于对照组(P0.01)。在B-ALL中,中危组患儿E-cadherin基因表达水平较标危组显著下降(P0.05);伴有脾脏浸润的患儿E-cadherin基因表达水平亦显著降低(P0.01);而在T-ALL、AML患儿各临床指标分组中,E-cadherin基因表达水平均无显著差异。在B-ALL患儿中,免疫分型为Common-BALL的患儿E-cadherin基因表达水平较其他B-ALL患儿显著升高(P0.01)。而在3种AL的FAB分组间均未见E-cadherin表达差异。基于计量资料的相关性分析表明,B-ALL患儿中,随着E-cadherin表达水平的下调,初诊外周血白细胞(WBC)计数、乳酸脱氢酶(LDH)水平有升高趋势(r=-0.419,r=-0.269),而初诊外周血血小板水平呈下降趋势(r=0.335);在T-ALL患儿中,E-cadherin表达水平与LDH、初诊骨髓幼稚细胞比例呈显著负相关(r=-0.567,r=-0.557);而在AML患儿中,随着E-cadherin表达水平下调,初诊WBC计数水平和初诊骨髓幼稚细胞比例呈上升趋势(r=-0.368,r=-0.391)。与对照组比较,3种AL患儿中E-cadherin表达水平下调(P0.001),而β-catenin、Akt则上调(P0.01),p-Akt、p-Akt/Akt表达量在T-ALL中上调(P0.01)。结论:E-cadherin基因表达降低或缺失是儿童急性白血病的预后不良相关因素,可能通过激活Wnt/β-catenin和PI3K/Akt信号通路,促进肿瘤的发生,并引起细胞的一系列恶性生物学行为,E-cadherin有望成为判断预后和指导个性化治疗的指标。     

Ikaros和FUT4在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及其相关性研究

目的:通过分析临床样本Ikaros功能状态与岩藻糖基转移酶Ⅳ(fucosyltransferaseⅣ,FUT4)表达水平的相关性,探讨Ikaros调控FUT4表达的可能分子机制,为儿童ALL的个性化治疗靶点提供理论依据。方法:采用巢式PCR及克隆测序法鉴定儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL) Ikaros的表达亚型,计算功能型比率;通过荧光定量PCR检测FUT4 mRNA的相对表达水平,以血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患儿的骨髓样本为对照组,利用ΔΔCt法分析初诊未治的ALL患儿FUT4相对表达水平;分析Ikaros的功能状态与FUT4表达的相关性。结果:110例ALL中,功能亚型Ikaros以Ikaros1(Ik1)和Ikaros2(Ik2)为主,无功能亚型以Ikaros6(Ik6)为主,其Ik6的表达率为20. 91%,其中3例患儿单纯表达Ik6(2. 73%);功能型与Ik6杂合表达比例为18. 18%,且在复发患儿中Ik6表达比例升高。初诊ALL的FUT4的表达水平高于对照组,随着治疗缓解其表达降低,复发患儿的FUT4表达升高。通过2者的相关性分析,Ikaros的功能型比例与FUT4呈负相关(r=-0. 6329),而Ik6的表达量与其成正相关(r=0. 6605)。结论:显性负向型Ik6是预后的独立危险因素,与儿童ALL复发密切相关,Ikaros调控FUT4的表达且呈负相关可能是儿童急性淋巴细胞白血病预后的机制之一。     

CD123在淋巴细胞白血病细胞中的表达及在微量残留病监测中的作用

目的 探讨CD123在淋巴细胞白血病中的表达特点及意义.方法 应用多参数流式细胞术检测139例淋巴细胞白血病患者CD123的表达.以10名正常人骨髓淋巴细胞作对照.对105例急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者行细胞遗传学分析.对97例B-ALL患者进行白血病微量残留病(MRD)分析.结果 ①10名正常人骨髓中B淋巴干/祖细胞、成熟B淋巴细胞及T淋巴细胞均不表达CD123.139例淋巴细胞白血病患者中,5例T-ALL和23例慢性B淋巴细胞白血病(B-CLL)患者CD123均阴性.111例B-ALL患者中106例CD123阳性(阳性率95.49%),其中包括12例早期前B-ALL、57例普通B-ALL、37例前B-ALL;5例成熟B-ALL患者CD123阴性.②在B-ALL患者中,CD123表达水平与p-Akt表达水平呈正相关,超二倍体患者组CD123表达水平高于非超二倍体患者组.③MRD阳性与阴性组患者比较,12个月内复发率分别为63.04%和21.56%,差异有统计学意义(P<0.01).MRD阴性组无病生存率[(48.23±1.82)%]高于MRD阳性组[(36.06±2.62)%].CD123在复发B-ALL患者中表达稳定性高.结论 CD123在B-ALL患者中普遍中度至强度表达,复发时表达稳定性高,是MRD分析较好的标志之一.     

急性白血病细胞的乳腺癌耐药蛋白基因表达与化疗耐药的关系

为了探讨急性白血病 (AL)患者乳腺癌耐药蛋白 (BCRP)基因表达与化疗耐药及预后的关系 ,本研究应用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)的方法 ,以 β2 微球蛋白 (β2 MG)作阳性对照 ,检测了 72例AL患者的白血病细胞及 15名正常对照者白细胞的BCRPmRNA的表达 ,将BCRP/ β2 MG≥ 0 .5定为BCRP基因表达阳性。结果显示 :初治组BCRP基因表达的阳性率为 37.6 % ,BCRP基因表达阳性与BCRP基因表达阴性患者的首次完全缓解 (CR1)率分别为 31.6 %和 79.3% (P =0 .0 0 1) ;临床耐药组 (NR组 )与化疗敏感组 (CR组 )BCRP基因的表达水平分别为 0 .96 2± 0 .4 2 6和 0 .315± 0 .2 96 (P =0 .0 0 0 1) ;复发 /难治组BCRP基因表达水平显著高于初治组 (P =0 0 0 2 5 ) ;正常对照组及长期生存组BCRP基因表达的水平较低 ;BCRP基因表达与FAB分型有关。结论 :BCRPmRNA过度表达可导致临床化疗耐药 ,是AL患者 (除M3 外 )预后的重要不利因素。     

PRPS1基因在儿童急性白血病中的表达及其临床意义

目的:研究PRPS1基因在儿童急性白血病(AL)中的表达及其与该病临床特征的相关性。方法:采用实时荧光定量PCR和Western blot的方法分别检测176例儿童AL(初诊126例,完全缓解50例)中PRPS1 mRNA和蛋白的表达水平,分析其表达水平与临床特征的相关性。以21例非恶性血液病患儿骨髓作为对照。结果:①在BALL组中,PRPS1在初诊组表达水平显著高于对照组,同时高于完全缓解组(P均0.0001);在T-ALL及AML组中,仅在初诊组与完全缓解组中有差异(P均0.0001);②在B-ALL样本中,PRPS1表达水平随危险度升高而增加(P0.01);在T-ALL中各危险度分层组间则无明显差异(P0.05);在AML样本中,仅低危组与高危组差异具有统计学意义(P0.05);③PRPS1高表达与B-ALL患儿的高WBC计数及MRD阳性相关(P=0.020,P=0.026);4PRPS1与之前证实的复发相关基因NT5C2表达水平呈正相关(P0.05)。结论:PRPS1是儿童B-ALL预后不良相关危险因素,有望成为判断预后,指导个性化化疗的指标。     

苯乙酸对胶质瘤细胞C6中同源盒基因表达的影响

目的　观察诱导分化剂苯乙酸 (PA)抑制胶质瘤细胞C6增殖过程中 ,生物发育调节的主控基因———同源盒基因 (Hox基因 )表达的变化。方法　根据引物的不同 ,将已知的 2 2种HOX基因分为 3组 (P1,P2 ,P3)。用逆转录PCR(RT PCR)及图像分析法检测应用PA前后 ,Hox基因组在胶质瘤细胞C6中表达的变化。针对应用PA前后表达显著不同的Hox基因组 ,用组内包含的特异Hox基因的引物 ,重复上述实验 ,检测特异Hox基因的表达。Hox基因 (组 )表达水平用基因 (组 ) β 肌动蛋白 (β actin)灰度比值表示。结果　胶质瘤细胞C6中 ,P2组Hox基因表达明显弱于P1、P3组(0 6 82 5± 0 0 987<0 8817± 0 0 731,0 86 0 8± 0 0 881,P <0 0 0 1)。应用PA后 ,P2组Hox基因表达 (0 8386± 0 0 811)显著增强 ,与用药前比较 ,差异显著 (P <0 0 0 1)。P2组中 ,HoxB2基因应用PA后比未用药组表达显著增强 (0 7763± 0 12 4 1>0 4 839± 0 1343,P <0 0 0 1)。HoxB4基因在应用PA前后于胶质瘤细胞C6中均未见表达。结论　胶质瘤的发生可能与HoxB2基因表达减弱有关。PA在分化诱导胶质瘤过程中 ,对HoxB2基因mRNA水平的表达有明显的上调作用 ,PA的作用机理与调节胶质瘤细胞转录过程有关。     

TRPV1/TRPV4和CEACAM6共表达与结直肠癌患者总生存期的关系*

摘要:目的探讨辣椒素 受体( TRPV1)及瞬时性受体电位通道香草酸受体4(TRPV4)与癌胚抗原相关细胞黏附分子6(CEACAM6)共表达对结直肠癌(CRC)患者预后的影响。方法使用GEPIA交互分析软件根据基因表达中值将620例CRC患者分为高表达和低表达两组(中值1例不入组),以设定阈值对TCGA和GTEX数据库中TRPVI和TRPV4基因的表达量进行log2(TPM+1)转换及差异分析,采用Wilcoxon检验分析TRPVI/TRPV4和CEACAM6基因共表达与CRC患者总体生存期(0S)的关系,采用基因组数据分析及免疫组化染色法对上述结果进行验证。结果CRC 患者癌组织中TRPV1的表达量显著低于癌旁组织( 1.70+0.51 vs 3. 10+0.46,t=-53.56 ,P<0.01),而TRPV4显著高于癌旁组织( 1.47+0.78 vs 0.67+0.33,t= 25.98,P<0.01)。TRPVI 和CEACAM6双高表达组CRC患者的OS显著高于CEACAM6单高表达患者(中位0S:6.8年vs5.5年,log-rank P=0.0479)。 结论检测 TRPV1及TRPV4水平可有效评估CEACAM6高表达CRC患者的预后。     

实时定量RT-PCR检测急性白血病患者骨髓细胞WT1基因表达

目的探讨急性白血病 (AL)患者骨髓细胞WT1基因表达水平。方法建立实时定量RT PCR方法 ,检测了 10 8例AL患者和 2 3例非白血病患者骨髓细胞WT1基因及内参照 β 胆色原脱氢酶 (GAPDH)基因的表达水平。结果初诊与复发AL患者骨髓细胞WT1基因中位表达水平经GAPDH校正后分别为 75 .10和 89.5 6 ,明显高于完全缓解组和对照组 (分别为 2 .0 7和 1.5 1) ,对照组与完全缓解组之间及初诊与复发组之间无统计学差异 ;70例初诊AL中急性淋巴细胞白血病、M1、M2 、M3 亚型WT1基因表达水平明显高于M5,即粒系表达明显高于单核系 ,且WT1基因表达水平与白细胞计数、骨髓原始细胞比例、mdr1基因表达无相关性 ,但与染色体核型有关。对其中 2例患者动态检测WT1基因表达可提示白血病复发情况。结论WT1基因在AL患者骨髓细胞高表达 ,可作为白血病疗效评价及监测残留病灶的指标。     

成人急性淋巴细胞白血病骨髓中miR-34a的表达及其在细胞耐药中的意义

目的:探讨miR-34a在成人急性淋巴细胞白血病(ALL)骨髓中的表达及其与耐药性的关系。方法:47例初诊ALL患者,分别于初诊和复发或完全缓解时留取骨髓样品,初诊-完全缓解组标本26对,初诊-复发组标本21对。利用实时荧光定量PCR对患者骨髓样品、人CCRF-CEM细胞株及其耐药株CEM-C1细胞中miR-34a表达水平进行检测。利用电穿孔转染法抑制CCRF-CEM细胞并上调CEM-C1细胞中miR-34a表达,分别用不同浓度喜树碱进行培养,利用CCK-8法对细胞存活情况进行分析,计算细胞增殖抑制率(%)和耐药指数(RI)。结果:初诊-完全缓解组中,初诊时患者骨髓样品中miR-34a表达水平显著低于完全缓解时和对照组,差异具有统计学意义(P0.05),初诊-复发组中,初诊时和复发时患者骨髓样品中miR-34a相对表达量均低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);miR-34a在CEM-C1细胞中表达水平为(2.64±1.37),显著低于CCRF-CEM细胞中的(5.14±2.06)(P0.05);转染miR-34a抑制物的CCRF-CEM细胞中miR-34a表达水平为(3.14±1.15),显著低于miRNA抑制剂阴性对照CCRF-CEM细胞(P0.05),转染miR-34a抑制物的CCRF-CEM细胞增殖抑制率显著高于转染阴性对照细胞(P0.05),IC_(50)分别为28.73和2167.00 ng/ml,RI=75.43;转染miR-34a模拟物的CEM-C1细胞中miR-34a表达水平(5.06±1.73),显著高于miRNA模拟物阴性对照CEM-C1细胞(P0.05),转染miR-34a模拟物的CCRF-C1细胞增殖抑制率显著低于转染阴性对照细胞(P0.05),IC_(50)分别为112.57 ng/m L和1.27 ng/m L,RI=88.64。结论:miR-34a在成人ALL骨髓样品中呈低表达,可能与ALL复发及耐药性的发生有关。     

荧光定量PCR检测急性白血病患者外周血 WT1基因表达及其临床意义

为研究WT1基因表达与临床疗效和预后的关系,探讨其在白血病微小残留病检测中的作用,用荧光定量RT-PCR方法检测55例初发白血病患者外周血及10例正常人外周血的WT1基因表达,跟踪20例急性白血病患者外周血WT1基因表达。结果显示,白血病初治组(40例ANLL、15例ALL)与正常人外周血WT1基因表达有显著差异(P<0.001)。在急性白血病患者中,WT1≤6.8×10-3组生存期长于WT1>6.8×10-3组(P=0.027);白血病患者初发时WT1呈高度表达,完全缓解后,迅速或缓慢下降至少1个对数级,复发时再次增高。跟踪检测20例急性白血病患者外周血WT1基因表达,结果7例复发,5例在临床复发前2-3月WT1的水平明显增高,至少上升0.8个对数级。结论:荧光定量RT-PCR方法检测白血病外周血WT1表达具有简便易行、准确性高、特异性好的特点。与正常人外周血比较,WT1在各类白血病外周血中呈高度表达,且表达水平与预后负相关;对外周血WT1基因表达进行定量分析,可用于微小残留病的监测。