12味止血中药对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞产生一氧化碳的抑制作用

目的研究12味止血中药对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞产生一氧化氮(NO)的抑制作用,并探讨其止血机制.方法以1μg·mL-1 LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW 264.7,22h后以Griess法测定NO的终产物亚硝酸盐的含量,观察LPS对NO生成的影响.结果12味止血药均可抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7中NO的生成.三七、地榆、仙鹤草、槐花、艾叶、蒲黄、侧柏叶及白茅根的抑制作用显著(P＜0.05).结论本实验为12味止血中药对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞产生NO的抑制作用提供了一定的理论依据.     

11种中药提取物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞生成一氧化氮的影响

目的研究11味中药提取物对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7产生一氧化氮(NO)的抑制作用。方法使用MTT法测试样品对RAW264.7的细胞毒作用,Griess法测定样品对LPS刺激RAW264.7细胞产生NO的含量,N-单甲基-L-精氨酸单乙酸酯(L-NMMA)为阳性对照。结果 11味中药甲醇提取物均具有一定的抑制RAW264.7细胞生成NO的作用,其中秦艽、五加皮、独活、雷公藤、仙鹤草提取物的抑制作用最强(IC50在4.3±0.6~14.8±2.6μg·m L-1),且选择指数较高(SI>27)。结论本研究系统评价了11味常用中药提取物对LPS诱导RAW 264.7细胞产生NO的影响,研究结果进一步证实这些中药的抗炎活性。     

红花对活化巨噬细胞产生一氧化氮的影响作用

目的 水提醇沉法对红花进行提取,研究红花提取物对脂多糖(LPS)活化小鼠巨噬细胞RAW264.7产生一氧化氮(NO)的影响作用,同时测定提取物中的总黄酮含量.方法 ATP-Lite法测定红花对RAW264.7细胞毒性的影响,姜黄素为阳性对照.采用Griess法测定由LPS活化RAW264.7细胞产生NO的含量,阿司匹林为阳性对照.以山奈酚为标准品测定红花提取物中总黄酮的含量.结果 姜黄素对RAW264.7的半数致死浓度为(29.9±4.3)μg/ml.红花提取物在低于125μg/ml时,对RAW264.7细胞的致死率低于5％.在12.5～100 μg/ml的浓度范围内,红花表现出对LPS活化RAW264.7细胞产生NO的抑制作用.以山奈酚计,1 g生药红花中含1.14 mg总黄酮.结论 红花对LPS活化巨噬细胞产生NO具有抑制作用,其作用可能与其所含黄酮类成分有关.     

青蒿乙素对脂多糖诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制及机制

目的 探讨青蒿乙素的抗炎活性及其作用机制.方法 采用细菌脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7建立炎症反应模型,经青蒿乙素处理后,采用Griess试剂检测NO的含量;采用酶联免疫法(ELISA)检测促炎症因子的水平;采用Western Blot检测炎症相关蛋白及激酶的表达水平.结果 青蒿乙素能明显抑制RA...     

糖萜素对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮的影响

目的:探讨糖萜素对小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的影响。方法:在饲料中添加不同剂量糖萜素喂养NIH小鼠,以基础饲料为对照,检测环磷酰胺免疫抑制组与非抑制组不同时间段小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的含量。结果:含糖萜素饲料组于不同时间测得NO含量均较基础饲料组显著增高(P<0.05)。免疫抑制状态下,含糖萜素饲料组NO含量也较基础饲料组高(P<0.05)。体外糖萜素不能直接影响NO的生成。结论:糖萜素能显著提高小鼠体内巨噬细胞产生NO。体外则不能直接影响NO的生成     

糖萜素对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮的影响

目的：探讨糖萜素对小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的影响。方法：在饲料中添加不同剂量糖萜素喂养NIH小鼠,以基础饲料为对照,检测环磷酰胺免疫抑制组与非抑制组不同时间段小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的含量。结果：含糖萜素饲料组于不同时间测得NO含量均较基础饲料组显著增高（P＜0．05）。免疫抑制状态下,含糖萜素饲料组NO含量也较基础饲料组高（P＜0．05）。体外糖萜素不能直接影响NO的生成。结论：糖萜素能显著提高小鼠体内巨噬细胞产生NO。体外则不能直接影响NO的生成。     

多抗甲素诱导小鼠巨噬细胞产生一氧化氮及其抗肿瘤作用

本研究采用肿瘤细胞与小鼠腹腔巨噬细胞混合培养的方法,以Ｇｒｉｅｓｓ’ｓ法测定一氧化氮（ＮＯ）产量,ＭＴＴ法测定肿瘤细胞活力。结果发现多抗甲素９Ｐｏｌｙａｃｔｉｎ Ａ,ＰＡＡ）对小鼠巨噬细胞ＮＯ的释放有促进作用,同时可在体外通过ＮＯ直接杀伤肿瘤细胞。     

人参总皂苷在巨噬细胞RAW264.7中降低脂多糖诱导的炎症和氧化应激

目的:通过脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7建立炎症和氧化应激模型,探讨人参总皂苷的抗炎和抗氧化效果以及对脂多糖诱导的巨噬细胞RAW264.7自噬水平的影响。方法:培养RAW264.7细胞,给予脂多糖刺激并加入不同浓度人参总皂苷,使用硝酸还原酶法检测细胞内一氧化氮水平;ELISA法检测小鼠肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的分泌;DCFH-DA荧光探针法检测人参总皂苷处理后活性氧的变化;超氧化物阴离子荧光探针(dihydroethidium, DHE)检测细胞内超氧化物阴离子水平;吖啶橙染色法检测自噬体的形成;Western Blot法检测COX-2、NF-кB、Nrf2、HO-1、GCLC、GCLM、Beclin1、ATG7和LC3的蛋白表达。结果:与脂多糖模型组相比,随着TGS的浓度增加,细胞一氧化氮水平、TNF-α的分泌降低,细胞内活性氧和超氧阴离子的含量降低,巨噬细胞RAW264.7酸性自噬体的数量增加;Nrf2、HO-1、GCLC、GCLM、Beclin1、ATG7及LC3的蛋白表达提高,COX-2、NF-кB的蛋白表达降低。结论:在...     

鱼腥草素钠对脂多糖诱导单核巨噬细胞RAW264.7炎性反应的抑制作用

目的 探讨鱼腥草素钠(SH)对脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7炎性反应的抑制作用及其机制。方法 实验分为空白对照组(等体积培养基)，模型组(等体积培养基)，SH低、中、高剂量组(1.25,5,10μmol/L)，以含不同浓度SH的常规培养基培养细胞2 h，后4组细胞加入LPS继续培养24 h。收集细胞上清液，测定一氧化氮(NO)水平，采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及前列腺素E₂(PGE₂)的水平；提取细胞总蛋白，采用Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)蛋白及核因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白(NF-κB-P-P65蛋白和P-IκB-α蛋白)的表达水平。结果 与模型组比较，SH中、高剂量组细胞NO水平显著降低，SH低、中、高剂量组细胞TNF-α,IL-6,PGE₂水平和COX-2,NF-κB-P-P65,P-IκB-α蛋白表达水平均显著降低，SH中、高剂量组细胞iNOS蛋白表达水平显著降低...     

Inhibitory activity of Chinese herbal medicines toward histamine release from mast cells and nitric oxide production by macrophage-like cell line, RAW 264.7

One hundred and six species of traditional Chinese herbs were collected from the northeast of China, extracted with 60% ethanol, and tested for activity inhibiting histamine release and nitric oxide (NO) production. We found that 18 of the 106 species showed strong histamine-release inhibitory activity (inhibition >80%, 100 g/ml), of which Bidens parviflora Willd. was recognized to present the strongest activity (inhibition 97.8%, 100 g/ml). Seven species exhibited strong NO-production inhibitory activity (inhibition >50%, 100 g/ml) with Pholidota chinensis Lindl. as the most active one (inhibition 86.2%, 100 g/ml).     

长春碱对RAW264.7细胞增殖和分泌一氧化氮的影响

目的:研究长春碱对RAW264.7细胞增殖和分泌一氧化氮(NO)的影响。方法:采用MTT法检测长春碱对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术观察长春碱对细胞周期的阻断作用;Western blot法检测细胞中cyclin B1蛋白含量的变化;Griess试剂盒检测长春碱对脂多糖(LPS)刺激的细胞分泌NO的影响。结果:长春碱可抑制RAW264.7细胞的增殖,使细胞周期阻滞于G2～M期,呈浓度依赖性地降低细胞中cyclin B1的含量,并抑制LPS刺激的RAW264.7细胞的NO分泌(P<0.05或P<0.01)。结论:长春碱可能通过抑制RAW264.7细胞表达cyclin B1,使细胞周期停滞于G2～M期,从而抑制了RAW264.7细胞的增殖,影响RAW264.7细胞的生物学行为。     

Shikonin Directly Inhibits Nitric Oxide Synthases: Possible Targets That Affect Thoracic Aorta Relaxation Response and Nitric Oxide Release From RAW 264.7 Macrophages

Recently, an isomeric mixture of herbal anti-inflammatory naphthoquinones shikonin and alkannin, and their derivatives, have been found to impair cellular responses involving nitric oxide (NO) and NO synthesis, like the acetylcholine-induced relaxation response of rat thoracic aorta and NO release from murine RAW 264.7 macrophages. However, the mechanisms of such effects, including whether NO synthase (NOS) activity is affected, remained unclear. We herein investigate possible targets of shikonin in these NOS-related events. Shikonin by itself dose-dependently inhibited the rat thoracic aorta relaxation in response to acetylcholine (pD′₂ value: 6.29). Its optical enantiomer, alkannin, was equally inhibitory in the aorta relaxation–response assay. In RAW 264.7 cells, shikonin inhibited the lipopolysaccharide-induced NO production by 82% at 1 μM. A cell-free assay to verify direct effects on NOS activity showed that shikonin inhibits all isoforms of NOS (IC₅₀ s, 4–7 μM), suggesting NOS as an inhibition target in both the events. Further possible targets of shikonin that might be involved in the inhibitions of the acetylcholine-induced aorta relaxation response and the NO generation by RAW 264.7 cells are also discussed. It is shown for the first time that shikonin inhibits NOS activity.     

Production of Cytokine and NO by RAW 264.7 Macrophages and PBMC In Vitro Incubation with Flavonoids

Flavonoids, a group of low molecular weight phenylbenzopyrones, have various pharmacological properties including antioxidant activity, anticancer, and immunomodulatory effects. In the present study, lipopolysaccharide (LPS) and phorbol 12-myristate 13-acetate/phytohemagglutinin (PMA/PHA) were used as stimulants for RAW 264.7 macrophages and human peripheral blood mononuclear cell (hPBMC), and tumor necrosis factor (TNF)-alpha and interleukin (IL)-2 productions were measured. In addition, flavonoids were examined for their effects on LPS-induced NO production in RAW 264.7 macrophages. The results showed that all compounds were not strongly cytotoxic at the tested concentrations on hPBMC and RAW 264.7 macrophages. On immunomodulatory properties, catechin, epigallocatechin (EGC), naringenin, and fisetin repressed NO production and TNF-alpha secretion. Furthermore, catechin, epigallocatechin gallate (EGCG), epicatechin (EC), luteolin, chrysin, quercetin, and galangin increased IL-2 secretion while EGC, apigenin, and fisetin inhibited the secretion. These results indicated that flavonoids have the capacity to modulate the immune response and have a potential anti-inflammatory activity. There was no obvious structure-activity relationship regard to the chemical composition of the flavonoids and their cell biological effects.     

芦荟大黄素对LPS诱导的RAW264.7细胞NO生成及iNOS表达的影响

目的观察芦荟大黄素(aloe-emodin)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞一氧化氮(NO)生成及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的作用。方法采用LPS诱导的RAW264.7细胞株建立细胞炎症反应模型。采用Griess试剂法测定NO释放量;采用硝普钠释放NO法测定NO自由基含量的变化;采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析iNOS mRNA表达改变。结果芦荟大黄素在0.69～2.50mg·L-1剂量范围内可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的释放,并呈剂量和时间依赖关系;芦荟大黄素在0.63～5.00mg·L-1剂量范围内可下调LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS mRNA含量;而此范围内芦荟大黄素无直接清除NO自由基作用,不影响iNOS活性。结论芦荟大黄素可明显降低LPS诱导的RAW264.7细胞NO释放,呈时间和剂量依赖关系,此作用并非通过捕捉NO或抑制iNOS活性来实现,而是通过抑制iNOS mRNA表达发挥作用的。     

五味子甲素对脂多糖诱导的小鼠RAW264.7细胞的抗炎作用

目的：探讨五味子甲素对脂多糖诱导的小鼠RAW264.7细胞的抗炎作用。方法：检测五味子甲素对于脂多糖诱导的RAW264.7细胞的增殖、凋亡、吞噬及细胞内白细胞介素-lβ（IL-lβ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、前列腺素E2（PGE2）和环氧合酶-2（COX-2）水平的影响。脂多糖诱导后加入不同浓度五味子甲素,CCK8法测定RAW264.7细胞增殖,中性红试剂检测诱导后RAW264.7细胞的吞噬能力。经酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定细胞培养血清中IL-lβ、TNF-α、PGE2和COX-2水平的表达。Annexin V-FITC/PI双染检测五味子甲素对诱导后RAW264.7细胞凋亡的影响。结果：五味子甲素可明显抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞的增殖、吞噬能力及诱导刺激的细胞凋亡;ELISA结果显示,五味子甲素可以抑制细胞IL-lβ、TNF-α、PGE2和COX-2的水平。结论：五味子甲素对脂多糖诱导的小鼠RAW264.7细胞炎症具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制炎症细胞的增殖、吞噬,减少炎症因子释放,减轻脂多糖诱导引起的细胞凋亡有关。     

氧化还原蛋白1对RAW264.7巨噬细胞炎症反应的刺激作用

目的 研究过氧化还原蛋白1(PORD1)对RAW264.7细胞炎性介质一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNFα)释放量的影响.方法 用MTT法检测重组蛋白PORD1对RAW264.7细胞的毒性,一步法检测RAW264.7细胞上清液中NO的含量;ELISA法检测RAW264.7细胞上清中TNFα的含量.结果 与空白组比较,50 nmol· L-1PORD1对细胞有显著毒性,20、10、5 nmol·L-1均无细胞毒性;PORD1可以诱导RAW264.7细胞中NO和TNFα大量表达.结论 外源性重组蛋白PORD1可以促进炎症反应的发生,其机制可能与增强炎症介质的释放有关.