不同浓度高氧对大鼠肺组织NF-κB和IL-8表达的影响

目的观察不同浓度高氧对大鼠肺组织NF-κB及IL-8表达的影响,探讨高氧所致肺损伤(HILI)的发生浓度及机制。方法 32只成年雄性SD大鼠随机分为4组,即对照组(吸入空气)、50%O2组、70%O2组和90%O2组,吸氧时间均为96 h。采用RT-PCR法检测肺组织NF-κB p65 m RNA表达水平,采用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)IL-8含量,测定肺组织湿干重比值(W/D)和BALF中性粒细胞计数,并在光镜下观察各组大鼠肺组织的病理学改变。结果随着吸氧浓度的增加,肺组织NF-κB p65 m RNA表达水平、BALF中IL-8的含量、肺组织W/D比值及BALF中性粒细胞计数均逐渐增加,其中90%O2组增加最明显,与对照组、50%O2组及70%O2组比较差异均有统计学意义(均P<0.05),而对照组、50%O2组和70%O2组之间各项指标比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。相关性分析表明,肺组织NF-κB p65 m RNA与BALF中IL-8含量之间呈正相关(r=0.858,P<0.01)。结论吸入氧浓度超过90%且持续96 h以上,即可导致大鼠肺组织损伤,其发生可能与高氧激活肺组织细胞表达NF-κB,上调IL-8表达,导致中性粒细胞聚集和活化而引起的炎症反应有关。     

小潮气量通气对机械通气导致肺损伤及多器官功能衰竭中核因子-кB活性的影响

目的探讨小潮气量通气对机械通气肺损伤导致多器官功能衰竭(MODS)的保护机制.方法选用24只新西兰兔,制作机械通气相关性肺损伤(VILI)模型,将动物随机分3组,即正常组、传统潮气量组及小潮气量组,在造模结束后6 h收集VILI的炎症反应标志物肺泡灌洗液(BALF)中的中性粒细胞计数及测定肺组织核蛋白核因子-кB(NF-кB)含量,VILI炎症损伤标志物BALF的蛋白含量、肺毛细血管通透指数、肺组织湿/干比和氧合指数,以及循环内皮细胞计数、肝肾功能等指标,同时检测外周血中NF-кB活性.结果根据参考文献建立VILI兔模型,与正常组相比,小潮气量组的BALF中中性粒细胞计数、肺组织核蛋白NF-кB含量、蛋白含量、肺毛细血管通透指数、肺组织湿/干比和氧合指数、循环内皮细胞计数、肝肾功能及外周血中NF-кB含量差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01).结论小潮气量可以降低VILI导致MODS的发生率,可能与小潮气量能够降低NF-кB通路活化有关.     

小窝蛋白-1和NF-κB在机械通气肺损伤大鼠肺组织中的表达

目的通过观察小窝蛋白-l(cav-1)及NF-κB p65、IL-8在大潮气量机械通气大鼠肺组织中的表达变化,探讨cav-1在通过对NF-κB信号转导通路的影响而导致对肺组织的损伤作用。方法将雄性SD大鼠随机分为三组:对照组、大潮气量通气0.5 h组(H-VT0.5h组)和大潮气量通气2 h组(H-VT2h组)。光镜下观察各组大鼠肺组织病理学改变;免疫组织化学染色法检测肺组织中cav-1的蛋白含量;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测NF-κB p65的m RNA表达;计算肺湿/干重比值(W/D);酶联免疫吸附试验(ELISA)测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-8的含量,并对cav-1及NF-κB p65进行相关性分析。结果 H-VT2h组肺组织中肺W/D比值、cav-1的蛋白表达、NF-κB p65 m RNA的表达水平及BALF中IL-8的含量均大于H-VT0.5h组,差异有统计学意义(均P<0.05);H-VT0.5h组肺组织中肺W/D比值、cav-1的蛋白表达、NF-κB p65 m RNA的表达水平以及BALF中IL-8的含量均大于对照组,但差异无统计学意义(均P>0.05)。相关性分析结果显示,各组大鼠肺组织cav-1蛋白表达水平与NF-κB p65 m RNA表达水平之间呈正相关(r=0.820,P<0.01)。结论 cav-1在机械通气导致肺损伤发生中可能起损伤作用。这种损伤作用可能与cav-1经过多种途径激活NF-κB炎症信号通路,使IL-8等细胞因子释放有关,最终导致炎症的加重和肺组织损伤。     

小窝蛋白-1、IL-8在机械通气致大鼠急性肺损伤中的作用研究

目的通过观察不同时间段肺组织中小窝蛋白-1(cav-1)及IL-8的表达水平,探讨二者在机械通气所致肺损伤(VILI)发生中的作用?方法雄性Wistar大鼠24只,按随机数字表法分为3组:对照组、大潮气量通气0.5 h组(H-VT0.5 h组)和大潮气量通气2 h组(H-VT2 h组)。在光镜下观察各组大鼠肺组织病理学改变,测定BALF总蛋白(TP)含量和肺湿/干重比值(W/D),采用免疫组织化学染色法测定肺组织cav-1及IL-8的表达水平,并进行相关性分析。结果 H-VT0.5 h组大鼠肺组织cav-1蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.01),而BALF总蛋白含量、W/D比值及肺组织IL-8表达水平与对照组比较无统计学意义(P>0.05),且肺组织无明显病理损伤改变。H-VT2 h组大鼠BALF总蛋白含量、W/D比值及肺组织cav-1和IL-8蛋白表达量均明显高于对照组和H-VT0.5 h组(均P<0.01),同时肺组织可见明显病理损伤改变。相关性分析结果显示,各组大鼠肺组织cav-1蛋白表达水平与IL-8表达水平之间呈正相关(r=0.737,P<0.01)。结论 cav-1在VILI发生中的作用可能具有两面性,早期以保护作用为主,后期以损伤作用为主,而损伤作用可能与IL-8的释放激活中性粒细胞有关。     

重度烟雾吸入致大鼠急性肺损伤的免疫应答及其机制探讨

目的分析重度烟雾吸入致吸人性急性肺损伤(ALI)对大鼠肺自然免疫及特异性免疫反应。方法分别复制一氧化碳(CO)浓度为2×10~(-3)(低浓度)和4×10~(-3)(高浓度)重度烟雾吸入致大鼠吸人性ALI模型。观察染毒后0～24 h大鼠肺组织病理学变化;检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中致炎及抗炎细胞因子的浓度;用流式细胞仪检测外周血及BALF中淋巴细胞亚群数,BALF中CD45~+淋巴细胞和非淋巴细胞数量以及CD4~+/CD8~+变化。结果肺组织病理学检查证实染毒后可致明显肺损伤。染毒2 h BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)呈一过性升高,高浓度组较低浓度组更明显,之后下降;4 h白细胞介素-6(IL-6)、γ-干扰素(IFN-γ)开始升高,其中IL-6低浓度组较高浓度组明显,IFN-γ高浓度组较低浓度组明显,至12 h达高峰,24 h开始下降,但仍高于正常对照组水平(P＜0．05或P＜0．01);6～24 h IL-10与正常对照组比较均显著升高,尤以24 h明显(P＜0．05或P＜0．01)。外周血及BALF中CD4~+、CD8~+、自然杀伤细胞、B细胞及总T细胞均较正常对照组明显下降(P＜0．05或P＜0．01)。BALF中CD45~+淋巴细胞数和CD4~+/CD8~+均较正常对照组明显减少,非淋巴细胞数较正常对照组明显增多,且高浓度组较低浓度组变化趋势明显(P＜0．05或P＜0．01)。结论重度烟雾吸入致吸入性ALI的过程中伴有持续且过度的肺自然免疫反应,这种自然免疫反应部分由活化的中性粒细胞及巨噬细胞所介导;而肺特异性免疫反应受到明显的抑制。     

原花青素对急性脊髓损伤大鼠核因子-кB和白细胞介素-6 表达的影响

目的观察原花青素对脊髓损伤后大鼠核因子-кB (NF-кB)、白细胞介素-6 (IL-6)表达变化的影响。方法36 只健康成年Sprague-Dawley 大鼠均分为3 组：原花青素治疗组(A组)、甲基泼尼松龙治疗组(B 组)和对照组(C 组)。采用Allen 法复制大鼠T9急性脊髓损伤模型,于术后1 d、3 d 和7 d 对各组大鼠行后肢运动功能BBB评分和斜板试验;免疫组织化学染色检测脊髓NF-кB和IL-6 的表达。结果术后3 d、7 d,A组、B组大鼠BBB评分和斜板试验成绩均优于C组(P<0.05)。A组术后各时间点NF-кB表达均明显低于C组(P<0.01),B组术后3 d、7 d 的NF-кB表达强度明显低于C组(P<0.01)。术后各时间点,A、B两组IL-6 表达均低于C组(P<0.05)。结论原花青素可抑制脊髓损伤后大鼠脊髓组织NF-кB、IL-6 的表达,有效抑制炎症反应,从而促进大鼠后肢运动功能的恢复。     

白藜芦醇对哮喘小鼠气道炎症干预作用的研究

目的探讨白藜芦醇对哮喘小鼠模型中气道炎症及相关细胞因子水平的影响。方法雾化吸入卵蛋白(OVA)-氢氧化铝[Al(OH)3]建立小鼠哮喘模型,雌性SPF级BALB/c小鼠18只,分为白藜芦醇组、阳性对照组和阴性对照组各6只。阿尔新蓝/过碘酸雪夫染色,观察黏液分泌情况,免疫组化检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)、核因子кB(NF-кB)水平,ELISA检测血清白介素4(IL-4),γ干扰素(IFN-γ)和免疫球蛋白E(IgE)含量,瑞氏染色计数支气管肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞。结果阳性对照组嗜酸粒细胞升高、黏液分泌增加,MMP-9及NF-кB蛋白表达,IL-4水平及IgE含量均明显增高(P<0.05);IFN-γ水平下降(P<0.05)。白藜芦醇组与阳性对照组比较,嗜酸粒细胞计数稍升高,MMP-9、NF-кB蛋白表达均降低,IL-4水平和IgE含量均降低;IFN-γ水平升高(P<0.05)。与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论白藜芦醇干预可降低气道炎症,改变哮喘相关细胞因子水平。     

小潮气量通气对机械通气导致肺损伤及多器官功能衰竭中核因子-κB活性的影响

目的:探讨小潮气量通气对机械通气肺损伤导致多器官功能衰竭(MODS)的保护机制。方法:选用24只新西兰兔,制作机械通气相关性肺损伤(VILI)模型,将动物随机分3组,即正常组、传统潮气量组及小潮气量组,在造模结束后6h收集VILI的炎症反应标志物肺泡灌洗液(BALF)中的中性粒细胞计数及测定肺组织核蛋白核因子-!B(NF-κB)含量,VILI炎症损伤标志物BALF的蛋白含量、肺毛细血管通透指数、肺组织湿/干比和氧合指数,以及循环内皮细胞计数、肝肾功能等指标,同时检测外周血中NF-κB活性。结果:根据参考文献建立VILI兔模型,与正常组相比,小潮气量组的BALF中中性粒细胞计数、肺组织核蛋白NF-κB含量、蛋白含量、肺毛细血管通透指数、肺组织湿/干比和氧合指数、循环内皮细胞计数、肝肾功能及外周血中NF-κB含量差异具有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论:小潮气量可以降低VILI导致MODS的发生率,可能与小潮气量能够降低NF-κB通路活化有关。     

血必净对创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织核因子-κB p65表达作用的研究

目的 观察创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织核因子-κB(NF-κB)p65基因及蛋白表达,并探讨血必净对其的干预作用.方法 SD大鼠110只,随机分为正常组(A组,n＝10)、创伤弧菌脓毒症组(B组,n＝50,采用大鼠左下肢皮下注射创伤弧菌悬液制作大鼠创伤弧菌脓毒症模型)和血必净治疗干预组(C组,n＝50,感染后半小时腹腔注射血必净4 mL/kg).B、C组于染菌后1、6、12、24、48 h活杀(各时间点n=10),采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) 法、Western blot法和双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测大鼠肺组织NF-κB p65的基因与蛋白表达及IL-10的含量,数据采用单因素方差分析.结果 与A组比较,B组大鼠肺组织创伤弧菌感染后6、12 h NF-κB p65 mRNA表达量与6、12、24和48 h肺组织NF-κB p65蛋白表达量均明显增高 (P<0.05);与B组相同时间点比较,C组6 h肺组织NF-κB p65 mRNA表达量与12、24及48 h肺组织NF-κB p65 蛋白表达量明显减少(P<0.05); 与A组比较,B组创伤弧菌菌感染12、24和48 h IL-10的含量明显增加(P<0.05),与B组相同时间点比较,C组24 h(52.444±9.605)肺组织IL-10的含量明显增高(P<0.05);感染后48 h,大鼠肺内血管明显充血,间质水肿并伴炎性浸润,肺泡腔塌陷,血必净干预后,肺组织损伤有所减轻.结论 NF-κB参与了创伤弧菌脓毒症肺损伤过程;血必净能抑制NF-κB p65的表达,从而起到保护创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织的作用.     

西维来司钠雾化吸入对重度脑损伤大鼠肺保护的作用研究

目的 探讨西维来司钠(sivelestat sodium)雾化吸入对重度脑损伤大鼠肺的影响,为重度脑损伤患者实施肺保护提供理论基础.方法 50只SD大鼠随机分为五组:正常组(A组)、重度脑损伤组(B组)、生理盐水对照组(C组)、地塞米松雾化吸入组(D组)、西维来司钠雾化吸入组(E组),每组10只.HE染色光镜观察肺组织病理改变;酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)的中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)和白细胞介素-8(IL-8)含量;免疫透射比浊法测定BALF中白蛋白浓度.结果 除正常组外,各组HE染色均可见不同程度的肺组织损伤,雾化吸入后E组改善最明显,其次为D组;B组BALF中NE、IL-8和白蛋白含量均高于其他组(P<0.05),治疗干预后D、E组均有所降低(P<0.05),E组更明显.结论 西维来司钠雾化吸入对重度脑损伤大鼠肺组织有一定的保护作用,其机制可能与抑制NE产生和活性,减轻NE对肺组织的直接损伤和抑制肺内炎性循环反应导致的肺损伤有关.     

高浓度氧对未成年大鼠肺部炎症反应的影响

目的 探讨高浓度氧对未成年大鼠肺部炎症反应的影响.方法 将40只出生21 d的SD大鼠按随机数字表法分为空气对照组及高氧暴露12、24、48、72 h组,每组8只,分别将大鼠置于空气和常压高氧箱(氧含量达92%～94%)中.于相应时间点采用放血法处死大鼠后取肺组织,并行支气管肺泡灌洗.采用硫代巴比妥酸法和比色法分别测定肺组织丙二醛(MDA)含量及髓过氧化物酶(MPO)活性;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-10含量;观察肺组织病理改变,并进行肺损伤评分.结果 与空气对照组比较,高氧暴露12 h肺组织MDA含量(mmol/g)即显著升高(2.24±0.43比1.57±0.31),MPO活性(U/g)于高氧暴露24 h显著升高(1.24±0.25比0.69±0.22),并均随高氧暴露时间延长逐渐增加(P<0.05或P<0.01).BALF中TNF-α、IL-6和IL-10含量于高氧暴露24 h时较空气对照组显著增加[TNF-α(ng/L):135.2±44.0比94.5±22.3,IL-6(ng/L):73.1±14.2比55.7±17.3,IL-10(ng/L):67.9±21.7比48.2±7.6,P<0.05或P<0.01];但高氧暴露48 h时较24 h时显著降低(48 h时BALF中TNF-α、IL-6、IL-10分别为105.4±17.0,54.3±17.4,50.9±6.9,均P<0.05).高氧暴露12 h时肺损伤评分(分)即较空气对照组显著升高(4.5±1.4比1.3±0.5),并随高氧暴露时间延长进一步升高(P<0.05或P<0.01).结论 高浓度氧可引起未成年大鼠肺部炎症损伤;炎症细胞因子的出现高峰均在高氧暴露24 h.     

脂氧素对机械通气所致肺损伤的实验研究

目的 研究脂氧素对机械通气致肺损伤的保护作用及相关保护机制.方法 36只健康雄性SD大鼠按随机数字表分组.采用大潮气量通气制作大鼠VILI模型.麻醉和气管切开及气管内插管后,对照组(Control组)保留自主呼吸;大潮气量组(HV组)采用大潮气量通气[潮气量(VT)30 mL/kg,呼吸频率(RR)40次/min];大潮气量组+脂氧素处理组(HV+LX组)于机械通气前5 min静脉注射脂氧素10 μg/kg,其余两组注射等量生理盐水.通气时间均为2 h.每组大鼠实验过程中监测血流动力学和动脉血气;通气2 h后处死大鼠取肺组织,测定肺湿/干质量(W/D)比值和髓过氧化物酶(MPO)活性,酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺泡灌洗液(BALF)中核转录因子(NF-κB)和白细胞介素-8(IL-8)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理学改变并进行肺泡损伤评分(DAD损伤评分).结果 与Control组相比,HV组和HV+LX组的动脉血氧分压(PaO2)、动脉血二氧化碳分压(PaCO2)、平均动脉压(MAP)均呈下降趋势;动脉血pH值呈上升趋势.HV+LX组MAP显著高于HV组(P<0.05).与Control组相比,HV组肺组织W/D比值、MPO活性、DAD评分、NF-κB、IL-8显著升高(P<0.05或P<0.01);与HV组相比,HV+LX组肺组织W/D比值、MPO活性、DAD评分及NF-κB和IL-8显著降低(P<0.05或P<0.01).结论 脂氧素在大鼠机械通气模型中可减少肺泡蛋白质的渗出,可抑制肺组织中NF-κB、IL-8的产生,减少中性粒细胞在肺泡内的浸润和黏附,从而减轻大容量机械通气造成的肺组织损伤.     

高氧致大鼠急性肺损伤Toll样受体2和4的变化及意义

目的 探讨Toll样受体(TLRs)在高氧致急性肺损伤(ALI)发病过程中的作用.方法 将32只SD大鼠按随机数字表法分为空气对照组和高氧暴露24、48、72 h组,每组8只.分别于相应时间点活杀8只大鼠,取肺组织标本,测定肺湿/干重(W/D)比值并行肺组织病理评分,用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定肺组织TLR2和TLR4的mRNA表达,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)测定肺组织TLR2和TLR4的蛋白表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺组织匀浆中白细胞介素-6(IL-6)含量.结果 各高氧暴露组肺W/D比值均较空气对照组明显增高(P均<0.01).高氧暴露48 h、72 h肺组织病理评分[(2.69±0.53)分,(3.94±0.62)分]均明显高于空气对照组[(0.41±0.38)分,P均<0.01].RT-PCR结果显示,高氧暴露组肺组织TLR2和TLR4 mRNA表达均明显高于空气对照组(0.67±0.15和0.63±0.19),并均于24 h达高峰(1.82±0.33,1.35±0.26,P均<0.05).Western blotting结果显示,高氧暴露组TLR2和TLR4蛋白表达均较空气对照组[(7.20±0.51)%和(14.26±0.19)%]明显增高,分别于48 h、72 h达峰值[(28.12±0.24)%,(81.35±0.82)%,P均<0.05].ELISA结果显示,高氧暴露组肺组织匀浆IL-6含量较空气对照组[(639.38±95.24)pg/L]明显增高,于72 h达高峰[(1 300.58±442.24)pg/L,P<0.05].结论 在高氧引起的ALI中,TLR2和TLR4在肺组织炎症启动和维持中起重要作用.     

三氧化二砷对哮喘小鼠肺组织IκB-α表达和核因子κB激活的作用

目的：研究三氧化二砷(As2O3)对哮喘小鼠肺组织核因子κB(NF-κB)激活和抑制蛋白IKB-α表达的影响，探讨As2O3抗炎作用的可能机制以及哮喘防治的新思路。方法：BALB／c小鼠36只随机分为对照组、哮喘组(卵蛋白末次激发后1，4。12和24h)和As2O3治疗组(4mg／kg)，每组6只。Diff-Quick染色观察支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)中嗜酸细胞募集特点，电泳迁移率实验和免疫印迹实验分别检测肺组织NF-κB活性和IκB-α表达水平。结果：①哮喘组BALF中嗜酸细胞募集[(48．72&;#177;5．38)％]较对照组[(0.56&;#177;0．21)％1增加(q=33.46，P&;lt;0.01)，治疗组较哮喘组减少(q=34．65，P&;lt;0．01)。②哮喘组肺组织NF-κB活性均较对照组增加(q=41．84，72．75，61．61，16．32，P&;lt;0．01或0．05)，以4h活性最高，治疗组较哮喘组减少(q=89．48，P&;lt;0.01)。③哮喘组肺组织IκB-α表达较对照组减少(q=30.94，P&;lt;0.01)，治疗组较哮喘组增加(q=23．67，P&;lt;0．01)。④BALF中嗜酸细胞募集、肺组织NF-κB活性与IκB-α表达水平均呈负相关(r=-0．82，-0．94，P&;lt;0．01)。结论：肺组织NF-κB过度激活可能是哮喘慢性气道炎症持续存在的基础；诱导肺组织IκB-α表达和抑制NF-κB激活，可能是As2O3发挥广泛抗炎作用的重要机制。     

急性百草枯中毒大鼠肺组织Toll样受体4和核因子-κB表达的变化

目的 观察急性百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织中Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB (NF-κB) mRNA表达的变化,探讨TLR4-NF-κB通路在急性PQ中毒肺损伤中的作用.方法 30只雄性SD大鼠随机分为2组:生理盐水(NS)对照组(6只,NS腹腔注射),PQ染毒组(24只,腹腔注射PQ溶液,20 mg/kg).PQ染毒组分别在染毒后6、24、48 h及72 h麻醉处死,NS对照组于处理后6h处死,进行肺组织HE染色,病理学观察,用实时定量PCR方法检测TLR4和NF-κB的mRNA表达情况,用ELISA方法测定肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血清中IL-6含量.结果 PQ染毒组大鼠肺组织病理表现为早期充血水肿明显,大量炎性细胞浸润.与NS对照组相比PQ染毒组肺组织中TLR4和NF-κB mRNA的表达量、TNF-α、IL-6含量在各时间点均有不同程度升高,差异均具有统计学意义(P＜0.01).结论 大鼠急性PQ中毒后肺组织中TLR4和NF-κBmRNA表达量、TNF-α、IL-6含量明显上调,TLR4-NF-κB通路参与了PQ中毒大鼠肺损伤的早期病理生理过程.     

失血性休克再灌注后肺组织的炎症病理机制的研究

目的 探讨失血性休克缺血／再灌注(I/R)损伤后肺组织炎症反应的分子病理机制。方法 采用失血性休克∥R家兔模型，进行动脉血气、肺湿／干(W／D)比值和支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)以及C3a、C5a、白蛋白含量和中性粒细胞数量的测定，并进行肺组织病理学光镜检查。用原位杂交、免疫组织化学结合图象分析检测肺组织IKK-βmRNA表达、NF-κB活性的变化。结果 模型组肺组织IKK-βmRNA表达、NF-κB活性和BALF中上述各项检测指标均有不同程度的升高，肺组织明显炎症病理改变。结论 NF-κB信号通路激活诱发的细胞因子和炎性介质释放可能是I/R过程中脏器损伤的重要病理机制。     

促血小板生成素在小胶质细胞炎症模型中的表达及与NF-кB的关系

目的 探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)干预小胶质细胞后细胞内NK-кB及促血小板生成素(thrombo-poietin,TPO)的分泌.方法 将BV2细胞分为6组:(1)空白12 h组;(2)LPS 0.5μg/ml 12 h组;(3)LPS 1μg/ml12 h组;(4)空白24 h组;(5)LPS 0.5μg/ml 24 h组;(6)LPS 1μg/ml 24 h组.采用ELISA法检测细胞内NF-кB和TPO的表达;实时荧光定量PCR法检测细胞内NF-кB及TPO mRNA的表达水平.结果 NF-кB和TPO的表达和mRNA均较空白组升高,且12 h组高于24 h组(P<0.05).TPO与NF-кB的表达呈显著的正相关(P<0.01).结论 LPS干预小胶质细胞后NF-кB和TPO表达升高,参与炎症、凋亡和神经元保护等多种调控机制.     

p38丝裂原活化蛋白激酶对大鼠肾脏分泌单核细胞趋化因子-1的影响

目的 动态观察单核细胞趋化因子-1(MCP-1)在单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾小管的表达,探讨它与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、核转录因子-кB(NF-кB)及肾损害之间的关系. 方法 雌性SD大鼠共36只,体质量150～170 g.随机分为2组:假手术组作为对照组;手术组根据梗阻时间分3组,每组6只.皮下注射水合氯醛(4 mg/kg)麻醉,开腹后结扎右侧输尿管,缝合腹腔,即制备UUO模型.假手术组开腹后不结扎输尿管,缝合腹腔.采用免疫组织化学检测NF-кB、MCP-1,Western印迹分析法检测p38MAPK的磷酸化水平和lVICP-1蛋白水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MCP-1 mRNA的表达.光镜检查肾组织的形态改变.生化方法测定血尿素氮、血肌酐. 结果 与对照组比,随着梗阻时间的延长,MCP-1蛋白表达明显上调,[对照组:0.401±0.039,UUO组8h:0.894±0.137;24 h:1.416±0.135;72 h:1.894±0.143,与对照组相比,P<0.05],MCP-1 mRNA表达明显上调,[对照组:50.08±3.210,UUO组8 h:108.25±4.325;24 h:179.34±3.237;72 h:230.12±3.026,与对照组相比,P<0.05],同时NF-кB、p38MAPK蛋白活性增高,[p38MAPK蛋白对照组:110.65±9.734,UUO组8 h:200.15±8.326;24 h:272.74±7.244;72 h:549.11±9.544,与对照组相比,P<0.05],肾小管MCP-1的表达与p38MAPK、NF-кB呈显著正相关(r=0.74、r=0.81,P<0.01). 结论 UUO大鼠.肾小管MCP-1表达增加参与了UUO大鼠.肾小管间质损害的发病机制;p38MAPK可能介导了NF-кB的表达,进而调节MCP-1的表达增多.     

柴油车尾气对小鼠肺部氧化应激作用及气道炎症变化的研究

目的观察柴油车尾气对小鼠肺脏的氧化应激及气道炎症、病理变化的影响。 方法将36只6~8周龄的雄性小鼠随机分成三组：A组（对照组）、B组（小排量车尾气污染组）、C组（大排量车尾气污染组）,每组12只。柴油车尾气对小鼠染毒4周（B、C组小鼠分别吸入1.4 L、2.8 L排量的尾气）,A组正常饲养,观察所有小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）细胞学、肺组织病理学变化,免疫组织化学检测核因子κB（NF-κB）的活化及硝基酪氨酸（3-NT）的表达。 结果B、C组小鼠BALF中的白细胞总数、淋巴细胞及中性粒细胞分类计数与A组比较,差异均有统计学意义（F=24.25、28.12、18.03,P均< 0.05）,且C组BALF中的淋巴细胞和中性粒细胞计数比B组更多（P均< 0. 05）。同样在小鼠肺组织中,B、C组淋巴细胞和中性粒细胞计数与A组相比,差异均有统计学意义（F=20.35、12.61,P均< 0. 05）,且C组肺组织中的淋巴细胞和中性粒细胞计数比B组更多（P均< 0.05）;另外B、C组肺组织内出现气道上皮细胞脱落、支气管周围炎性细胞浸润及基底膜纤维化等变化。免疫组织化学结果提示三组肺组织内NF-κB的活化[（6.5 ± 2.4）%、（12.9 ± 4.1）%、（19.4 ± 6.4）%]及3-NT的表达（2.2 ± 0.7、3.7 ± 1.1、5.6 ± 1.6）比较,差异均有统计学意义（F=23.90、24.35,P均< 0. 05）,且C组表达都高于B组（P均< 0.05）。进一步相关性分析显示,小鼠肺组织中3-NT蛋白表达与NF-κB的蛋白表达、BALF中淋巴细胞数量都具有正相关性（r=0.659、0.633,P均< 0. 05）。 结论柴油车尾气可促进小鼠肺组织的氧化应激,产生更多3-NT,从而激活NF-κB,产生更严重的气道炎症和病理改变。     

冷刺激诱导哮喘小鼠支气管上皮细胞炎症反应的研究

目的探讨冷刺激对哮喘小鼠支气管上皮细胞炎症反应的影响以及蛋白激酶C(PKC)-核因子-κB(NF-κB)信号转导通道的变化情况。方法原代分离培养哮喘模型小鼠支气管上皮细胞,并将细胞分为对照组(37℃培养)、24 h冷刺激组(18℃培养)和48 h冷刺激组(18℃培养),实时荧光定量PCR方法检测三组细胞炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及肿瘤坏死因子(TNF)-αmRNA表达,免疫荧光法检测磷酸化PKC及磷酸化NF-κB抑制因子(IκB)并测定其荧光值以判定PKC及NF-κB活性。结果各冷刺激后,除IL-1αmRNA表达量太低无法进行分析外,其余各基因表达量均显著升高(P0.05)。其中IL-1β和GM-CSF表达在冷刺激24 h后增加最为明显,IL-13表达在冷刺激48 h后增加最为明显,而IL-4、IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α冷刺激24 h和48 h,作用效果基本一致。并且与对照组相比,24 h冷刺激组和48 h冷刺激组的磷酸化PKC、磷酸化IκB蛋白表达量均明显增加(P0.05)。结论冷刺激能够诱导哮喘小鼠支气管上皮细胞的炎症反应,而PKC-NF-κB可能是这一过程中的重要信号转导途径。