气虚血瘀型腰椎管狭窄症患者增生肥厚与正常黄韧带之间的蛋白质表达差异

背景：从西医的病理机制来看,黄韧带增生肥厚是腰椎管狭窄症的关键致病因素,目前缺乏气虚血瘀型腰椎管狭窄症的生物学信息。目的：分析气虚血瘀型腰椎管狭窄症患者增生肥厚黄韧带与同证患者正常黄韧带之间的蛋白质表达差异。方法：选择2022年2-8月广东省第二中医院(黄埔医院)收治的气虚血瘀型腰椎管狭窄症患者6例,其中黄韧带增生肥厚者3例(实验组),黄韧带厚度正常者3例(对照组),采集所有患者黄韧带组织标本,进行4D Label free定量蛋白组学检测,筛选差异蛋白,运用GO、KEGG进行富集分析。结果与结论：(1)实验组与对照组表达差异的蛋白总数为183个,其中上调蛋白87个,下调蛋白96个;(2)表达差异蛋白的GO富集分析显示,生物进程主要集中在细胞进程、生物调节、对刺激的反应等;细胞组成则集中在细胞、细胞内、蛋白质复合物种;分子功能主要为连接、催化活性、分子功能调节剂等;(3)上调蛋白主要富集到溶酶体信号通路、类风湿性关节炎信号通路、金黄色葡萄球菌感染信号通路;下调蛋白共富集到8条信号通路,分别为p53信号通路、肾细胞癌信号通路、转化生长因子β信号通路、泛素介导的蛋白水解作用信号通路、Ca信...     

腰椎管狭窄及肥厚黄韧带中细胞因子的表达

背景:临床上大多数研究都是针对肥厚黄韧带的形态学与组织学方面的研究,而对于黄韧带肥厚在腰椎管狭窄症中的病因学意义,目前尚缺乏统一的认识,尤其在细胞因子水平上的研究甚少。目的:通过在细胞因子水平的研究探讨腰椎黄韧带变性、肥厚的病因及其与腰椎管狭窄症的关系。方法:选择华北煤炭医学院附属骨科医院(唐山市第二医院)2008/2009腰椎管狭窄症和椎间盘突出症住院患者各25例,比较2组患者黄韧带中白细胞介素6、转化生长因子β1、肿瘤坏死因子α阳性表达程度及黄韧带中3种炎性因子阳性表达率。结果与结论:两组患者黄韧带中白细胞介素6、转化生长因子β1、肿瘤坏死因子α阳性表达程度比较,腰椎管狭窄症组明显高于腰椎间盘突出症组(P0.01)。提示白细胞介素6、转化生长因子β1、肿瘤坏死因子α在椎管狭窄症肥厚黄韧带中的表达呈相对一致性,有80%左右均明显增高。黄韧带变性、增殖、肥厚,也是无菌性炎性因子作用的结果。     

黄韧带退变与腰椎管狭窄症椎管形态的变化

背景：目前研究发现Ⅰ型及Ⅱ型胶原在结缔组织的增殖与分化、软骨的形成和吸收等过程中起十分重要的作用。 目的：探讨腰椎黄韧带退变与腰椎管狭窄症椎管形态变化的相关性。 方法：收集中央型腰椎管狭窄症36例和外伤性腰椎骨折20例患者的黄韧带标本分别为实验组和对照组,采用酶联免疫吸附法测定Ⅰ型和Ⅱ型胶原;CT测量腰椎硬膜横截面积;黄韧带行苏木精-伊红和Masson染色,观察组织病理学变化。 结果与结论：实验组黄韧带厚度、Ⅰ型及Ⅱ型胶原含量高于对照组,腰椎硬膜横截面积和Ⅰ型/Ⅱ型比值低于对照组(P <　0.05);病理学显示实验组黄韧带弹性纤维排列紊乱,数量减少,胶原纤维增生。提示腰椎黄韧带Ⅰ型、Ⅱ型胶原含量及Ⅰ型/Ⅱ型比值发生改变,可能引起黄韧带厚度增加,导致椎管横截面积减小,参与腰椎管狭窄症的发生。关键词：黄韧带;腰椎管狭窄症;Ⅰ型胶原;Ⅱ型胶原;病理学 型/II型比值 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.17.001     

肥厚腰椎黄韧带中成纤维细胞生长因子、转化生长因子及结缔组织生长因子的表达

背景:腰椎黄韧带肥厚是临床上引起腰椎管狭窄的主要因素之一,但其分子机制仍不是非常清楚。目的:分析纤维化相关细胞因子碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子β1和结缔组织生长因子在腰椎黄韧带肥厚过程中的作用。方法:取临床手术所取黄韧带,对照组6例(椎管内占位且无腰椎不稳患者黄韧带)、突出组(单纯腰椎间盘突出症患者黄韧带)6例、腰椎管狭窄症组6例。采用实时定量RT-PCR的方法检测各组黄韧带中碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子β1、结缔组织生长因子及Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ型胶原蛋白的mR NA含量,分析3个细胞因子在黄韧带肥厚过程中的作用。结果与结论:腰椎管狭窄症组碱性成纤维细胞生长因子mR NA表达均明显高于突出组和对照组(均P0.05);腰椎管狭窄症组转化生长因子β1 m RNA在3组中的表达明显高于对照组和突出组(均P0.01);结缔组织生长因子mR NA 3组间差异无显著性意义(P0.05)。腰椎管狭窄症组Ⅰ型胶原蛋白mR NA表达明显高于突出组和对照组(均P0.05);Ⅲ型胶原蛋白、Ⅴ型胶原蛋白mR NA表达3组之间差异无显著性意义(P0.05)。结果说明碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子β1在腰椎黄韧带肥厚形成过程中有重要作用,引起黄韧带肥厚的主要胶原产物为Ⅰ型胶原蛋白。     

山梨醇增加糖尿病患者腰椎管狭窄症炎性反应因子的表达

目的探讨糖尿病腰椎管狭窄患者黄韧带增生肥厚的发生机制。方法 24例糖尿病和20例非糖尿病的腰椎管狭窄患者列为研究对象,观测黄韧带标本结构,D-Sorbitol/Xylitol试剂盒检测山梨醇水平。体外实验中使用小鼠成纤维细胞(NIH3T3)细胞系,用Western blot及q PCR分别检测高糖培养条件及醛糖还原酶抑制剂(ARI):依帕司他(EP)作用对细胞炎性反应因子及TGF-β表达水平的影响。结果糖尿病组较非糖尿病组的山梨醇水平更高、黄韧带平均厚度更大、标本弹力纤维降解、胶原纤维增生更为显著、免疫组化CD68阳性染色率更高(P0.01);体外实验中,NIH3T3细胞系在高糖培养与正常糖浓度培养相比山梨醇、促炎性细胞因子和TGF-β表达水平更高,而山梨醇、促炎性细胞因子和TGF-β增高的表达水平可被醛糖还原酶抑制剂所抑制并且呈剂量依赖(P0.05)。结论糖尿病腰椎管狭窄患者黄韧带中山梨醇水平显著增高,进而促进炎性反应因子及纤维化相关因子TGF-β表达增加,使得黄韧带炎性增生。     

基于p16通路探索参黄冲剂对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡和细胞周期的影响

目的：探究参黄冲剂对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡和细胞周期的影响。方法：利用不同浓度(0、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2和6.4 g/L)的参黄冲剂处理SH-SY5Y细胞48 h后,用CCK-8法检测不同浓度的参黄冲剂对SH-SY5Y细胞活力的影响。在此基础上设置空白组、模型组及低、中、高剂量参黄冲剂组。采用倒置相差显微镜观察细胞形态,Hoechst 33342荧光染色法观察细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,Western blot分析细胞凋亡、细胞周期及p16信号通路相关蛋白的表达变化。结果：与模型组相比,参黄冲剂给药组细胞凋亡率降低,抗凋亡蛋白Bcl-2表达升高,促凋亡蛋白Bax和cleaved caspase-3表达下降;同时,参黄冲剂可以逆转由Aβ_25-35导致的G₀/G₁期阻滞;与模型组相比,参黄冲剂可以上调p16蛋白的表达,下调p16下游细胞周期相关蛋白CDK4、CDK6、cyclin D1和p-RB的表达。结论：参黄冲剂可能通过干预p16信号通路,...     

人黄韧带细胞骨化发生过程中的自噬

文题释义： 黄韧带骨化症：是由于脊柱黄韧带发生骨向分化而形成的一种韧带骨化疾病,常导致椎管狭窄,造成脊髓受压,并产生不可逆损害,出现肢体感觉障碍,严重的将导致瘫痪。目前对黄韧带骨化病因学研究取得了一定的进展,但其具体的发病机制仍未完全明确。 自噬：因外界或自身环境的改变,细胞器和胞内蛋白通过溶酶体进行分解消化并重新利用,从而达到适应外界环境、维持细胞内环境稳定的过程,是真核细胞特有一种表现形式。 MAPK信号通路：是生物体内重要的信号转导系统之一,它可以被物理应激、炎性细胞因子、生长因子以及细胞复合物等一系列细胞外信号或刺激激活,从而参与介导细胞生长、发育、分裂以及分化等多种生理及病理过程。在哺乳动物细胞中MAPK信号通路的主要信号分子包括ERK1/2、JNK以及P38等。 背景：黄韧带骨化发生的病理机制尚不清楚,临床上无有效的药物或非手术治疗的方法。目前研究发现,骨桥蛋白与自噬在成骨过程中均发挥重要作用,二者在黄韧带骨化中的作用尚不清楚。 目的：通过对骨桥蛋白和自噬在黄韧带骨化发生机制的研究,尝试找出药物治疗的潜在作用靶点。 方法：①黄韧带骨化病、胸椎骨折或单纯腰椎间盘突出症患者行后路全椎板切除减压获取黄韧带,将标本分为骨化组和非骨化组,每组各取8例标本,通过免疫组化染色观察骨桥蛋白、骨钙素及自噬指标Beclin-1、LC3、P62的表达;②通过组织块贴壁法进行黄韧带细胞的分离培养,并用不同质量浓度的骨桥蛋白干预不同时间来构建体外黄韧带细胞骨化模型;③非骨化组黄韧带细胞用不同浓度的自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤干预后,再用100 μg/L骨桥蛋白诱导,应用Western blot检测骨化指标碱性磷酸酶、骨钙素的表达变化;④用100 μg/L骨桥蛋白干预非骨化黄韧带细胞,并在0,15,30,60,120 min终止骨化诱导过程,应用Western blot检测MAPK信号通路中重要分子ERK1/2、JNK、P38的磷酸化情况;⑤非骨化组黄韧带细胞用ERK1/2特异的磷酸化阻滞剂U0126阻断ERK1/2通路磷酸化后,再用100 μg/L骨桥蛋白诱导,应用Western blot检测碱性磷酸酶以及骨钙素的表达变化。 结果与结论：①骨化黄韧带和非骨化黄韧带组织骨钙素、骨桥蛋白的免疫组化均呈阳性表达;骨化黄韧带组织中Beclin-1呈阳性表达,而LC3及P62未见明显阳性结果;非黄韧带骨化组织中Beclin-1、LC3、P62均呈阳性表达;②与非骨化组比较,骨化组黄韧带细胞中碱性磷酸酶和骨钙素的表达增加;骨桥蛋白可诱导黄韧带骨化,骨桥蛋白的作用具有浓度相关性和时间相关性;③自噬强弱与骨化程度呈负相关,即自噬越明显,骨化作用越弱;④骨桥蛋白能使MAPK信号通路磷酸化,并具有一定的时间相关性;抑制MAPK磷酸化过程后,骨桥蛋白仍然能够诱导黄韧带细胞的骨化;⑤结果表明,黄韧带骨化发生过程中,信号通路上ERK1/2、骨桥蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶分子的上下游关系为：ERK1/2→骨桥蛋白→骨钙素/碱性磷酸酶。 ORCID: 0000-0003-0008-9802(许国峰) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

凋亡调节蛋白Bcl-2、p53和Caspase-3在乳腺癌组织中的表达及其相互关系

目的通过观察人乳腺癌组织中凋亡调节蛋白p53、bcl-2和caspase-3表达,探讨bcl-2、p53和caspase-3在乳腺癌发生、发展过程中的作用及其相互关系,为乳腺癌的生物治疗提供实验依据。方法收集手术切除的人乳腺癌组织和癌旁相对正常乳腺组织,用免疫组织化学方法和图像分析技术对21例乳腺癌标本进行检测。结果乳腺癌组织中bcl-2蛋白阳性表达率(52.4%,11/21)明显高于相对正常乳腺组织(19.0%,4/21);乳腺癌组织中p53蛋白阳性表达率(57.1%,12/21)也明显高于相对正常乳腺组织(0%);而乳腺癌组织中caspase-3蛋白阳性表达率(38.0%,8/21)明显低于相对正常乳腺组织(76.1%,16/21)。结论p53、bcl-2和caspase-3蛋白在乳腺癌发生、发展过程中发挥着既独立又协同的作用。     

牵张应力对人黄韧带细胞成骨分化的影响

目的探讨牵张应力在胸椎黄韧带骨化症中的作用。方法牵张应力作用于胸椎黄韧带细胞后,通过PNPP法、Real-timePCR等实验方法,观察牵张应力对黄韧带细胞成骨分化的影响。结果牵张应力可以促进黄韧带细胞碱性磷酸酶活性增强,骨钙素的表达增高。结论牵张应力可促进胸椎黄韧带骨化症黄韧带细胞向成骨方向分化。     

重新认识老年人腰椎管狭窄症的手术治疗

目的：探讨老年人腰椎管狭窄症的特点,提出一种更好的手术方法。方法：通过对216例老年人腰椎管狭窄症患者的影像学等临床资料及手术进行总结分析。结果;老年人腰椎管狭窄来自多方面：1．椎间盘突出;2．黄韧带肥厚;3．椎板及关节突增生;4．纤维环及椎间盘2钙化。腰椎管狭窄呈节段性,主要在椎间隙对应的平面,狭窄范围多涉及两个以上节段。节段性双侧开潜式扩大和／或黄韧带椎间盘切除和／或侧隐窝扩大术可获得良好的效果,优良率灰96．6％。结论：正确分析腰椎管狭窄的因素,有的放矢地手术解除这些因素,即可获得良好疗效。     

腰椎黄韧带肥厚骨化的数字化表现

目的　通过对腰椎退变黄韧带的数字化重建,为影像诊断和临床手术规划,提供立体直观的形态学依据。 方法　收集腰腿痛患者薄层螺旋CT影像资料,在后处理工作站中观察退变黄韧带形态及分布,选取轴位像中黄韧带厚度大于4 mm和/或有钙化患者63例,男31例,女32例,年龄32~80岁。将原始数据导入Mimics16.0软件重建图像,观察其形态、分布。 结果　315个腰椎节段中205个节段出现黄韧带肥厚和/或骨化。黄韧带单纯肥厚占总出现节段79.51%,单纯骨化占6.34%,肥厚伴骨化占14.15%。205个节段全部成功建模,肥厚黄韧带建模形态有合页状、不规则片状和柱状;骨化黄韧带建模形态有短柱状、短锥状、不规则片状;肥厚伴骨化黄韧带重建后形态各异。 结论　数字化技术重建黄韧带能清楚显示其分布、形态、邻近结构,还可将所建退变黄韧带模型与腰椎骨性模型随意组合、切割,便于立体直观地显示病变细节。     

The Lumbar Ligamentum Flavum Does Not Have Two Layers and Is Confluent with the Interspinous Ligament: Anatomical Study with Application to Surgical and Interventional Pain Procedures

Numerous authors over the years have reported that the lumbar ligamentum flavum has two layers. Our routine cadaveric dissections raised the question whether this understanding is correct, as we always have observed only one layer. Thus, the goal of this cadaveric study was to reevaluate the layers of the ligamentum flavum. Twenty lumbar levels from five fresh-frozen cadaveric specimens were used in this study. After dissection of the lumbar spine, the ligamentum flavum and interspinous ligament were exposed. Each lumbar level was transected through the zygapophyseal joint, and hematoxylin and eosin staining, Masson's trichrome staining and Verhoeff-van Gieson staining were performed. Continuation of the interspinous ligament and ligamentum flavum were observed invariably. There was no evidence of the existence of a two-layered ligamentum flavum. The lumbar ligamentum flavum does not consist of two layers, but is confluent instead with the interspinous ligament that attaches to the zygapophyseal joints. To convey this anatomy better, we suggest describing the lumbar ligamentum flavum as a structure that consists of interlaminar and interspinous parts. Precise knowledge of the ligamentum flavum's anatomy can be of clinical value, particularly when epidural anesthesia or lumbar puncture are performed. Clin. Anat. 32:34–40, 2019. © 2019 Wiley Periodicals, Inc.     

Histological investigation of rabbit ligamentum flavum with special reference to differences in spinal levels

The structure of the ligamentum flavum has yet to be fully elucidated and no studies have investigated fine structural differences at different spinal levels in any animals. The aim of the present study was to clarify structural differences in the ligamentum flavum at different spinal levels (cervical: C3/4 and C5/6; upper thoracic: T2/3; lower thoracic: T9/10; lumbar: L3/4) using light and electron microscopy of rabbit specimens. Light microscopy using resorcin—fuchsin staining revealed that the distribution of elastic fibers was diffuse in the cervical and upper thoracic regions, but was generally dense in the lower thoracic and lumbar regions. Electron microscopy demonstrated that the cervical and upper thoracic regions were rich in collagen fibers. Conversely, the lower thoracic and lumbar regions were rich in elastic fibers. Quantitative image analyses displayed thick elastic fibers in the lower thoracic and lumbar regions, with high area ratios. Radiographic examinations revealed that ranges of motion were large at the cervical region, but small at the lower thoracic and lumbar regions. These findings suggest that structure of the ligamentum flavum varies at different spinal levels with respect to differences in motion.     

人脊柱棘间韧带与黄韧带应力松弛实验的研究

从应力松弛力学特性角度对棘间韧带和黄韧带进行定量分析,为人工韧带材料研究和韧带损伤吻合手术提供应力松弛力学参数。将标本装夹于软组织夹具中,之后装夹于电子万能试验机夹头内,驱动机器以1%/s的应变增加速度对标本施加拉应变,在36.5℃温度场下进行实验,采集90个数据,实验结束后计算机自动输出7 200 s之间应力松弛数据和曲线。棘间韧带组7 200 s应力松弛量为1.06 MPa,黄韧带组7 200s应力松弛量为1.62 MPa。棘间韧带和黄韧带具有不同的应力松弛力学特性。     

经椎板间隙内窥镜下分开黄韧带切除椎间盘

背景：经椎板间隙途径内窥镜下间盘切除需游离黄韧带,后者如果辅助连续扩张器及工作通道进行操作,无论切口多小(甚至3-5 mm),均可完整保留黄韧带。 目的：介绍经椎板间隙内窥镜下分开黄韧带切除椎间盘的应用。 方法：采用经椎板间隙内窥镜下分开黄韧带椎间盘切除治疗16 例男性患者和14例女性患者,平均年龄(48±15)岁,主诉单下肢根性疼痛,病变位于L_3-4间隙1例,L_4-5间隙13例,L₅-S₁间隙16例,其中间盘向上脱出游离者4例,向下脱出游离者7例,所有患者术中电生理监测,在工作通道中分开黄韧带,间盘切除撤出工作通道后,黄韧带可自行复位。 结果与结论：操作时间20-40 min,治疗后随访时间(149±108) d。治疗中电生理监测无异常,椎间盘切除症状均得以改善。经核磁随访显示：脱出间盘组织已完全摘除,黄韧带保留完整,所有患者无相关并发症。结果可见经椎板间隙内窥镜下分开黄韧带切除脱出的间盘组织,是一种可行的操作方式。     

The thickness of the ligamentum flavum in relation to age and gender

Hypertrophy of the ligamentum flavum (LF) can reduce the diameter of the spinal canal posteriorly. Such stenosis may significantly compress the dural sac and nerve roots, resulting in symptoms, even without a bulging anulus fibrosus or herniated nucleus pulposus. We conducted an anatomical study to determine the influence of age and gender on the thickness of the LF at the lower lumbar levels using magnetic resonance imaging (MRI). The thickness of 1,280 ligaments was determined at the L4‐L5 and L5‐S1 levels from MRIs. We screened 320 patients (152 males [47.5%] and 168 females [52.5%]) between 21 and 82 years of age. There were no significant differences in LF thickness with respect to gender (P > 0.05). Age was not correlated with the thicknesses of the LF. The left LF at the L4‐L5 and L5‐S1 levels was significantly thicker than on the right side (P < 0.05). Furthermore, the LF thicknesses at L5‐S1 bilaterally were significantly greater than on the corresponding sides at L4‐L5 (P < 0.05). The LF is an important anatomical structure, which might cause low back or leg pain. Therefore, the thickness of the LF should be measured and evaluated carefully in the case of spinal stenosis. Clin. Anat. 23:79–83, 2010. © 2009 Wiley‐Liss, Inc.