尿液外泌体长链非编码 ＲＮＡ ＭＡＬＡＴ１ 和 ＨＩＦ１Ａ ＡＳ２ 对膀胱癌诊断的价值

摘要：目的 检测膀胱癌患者尿液外泌体中人肺腺癌转移相关转录因子 １ （ＭＡＬＡＴ １）和缺氧诱导因子 １α 反义 ＲＮＡ２ （ＨＩＦ１Ａ ＡＳ２）的表达水平，分析其与患者临床病理参数的关系，探讨其在膀胱癌诊断中的临床应用价值。方法 收集 ２０１９ 年 １ 月至 ２０２０ 年 １２ 月于西安医学院第一附属医院就诊的膀胱癌、膀胱良性疾病患者及健康人各 ４０ 例尿液样本，采用 ＥＬＩＳＡ 法 检测各组尿液外泌体中 ＭＡＬＡＴ１ 和 ＨＩＦ１Ａ ＡＳ２ 的表达水平。进一步分析其与膀胱癌患者临床病理参数的相关性；绘制 ＲＯＣ 曲线并分析 ＭＡＬＡＴ１ 和 ＨＩＦ１Ａ ＡＳ２ 对膀胱癌的诊断价值。结果 膀胱癌组中 ＭＡＬＡＴ１ 和 ＨＩＦ１Ａ ＡＳ２ 的表达水平显著高于膀 胱良性疾病和健康人对照组，差异具有统计学意义 （Ｐ＜０．０５）；ＭＡＬＡＴ１ 和 ＨＩＦ１Ａ ＡＳ２ 的表达水平与膀胱癌患者的病理分级 和分期的差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），而与肿瘤的大小密切相关（Ｐ＜０．０５）；尿液外泌体中 ＭＡＬＡＴ１ 诊断膀胱癌的曲线下面 积（ＡＵＣＲＯＣ ）为 ０．７４８，敏感性为 ７５．０％，特异性为 ６６．２５％；ＨＩＦ１Ａ ＡＳ２ 诊断膀胱癌的 ＡＵＣＲＯＣ 为 ０．７５７，敏感性为 ７５．０％，特异性 为６８．７５％；ＭＡＬＡＴ１ 和 ＨＩＦ１Ａ ＡＳ２ 联合检测诊断膀胱癌的 ＡＵＣＲＯＣ 为 ０．８２０，敏感性为 ８５．０％，特异性为 ８１．２５％，均高于两项指 标的单独诊断价值。结论 尿液外泌体中高表达的 ＭＡＬＡＴ１ 和 ＨＩＦ１Ａ ＡＳ２ 可作为膀胱癌诊断的潜在生物学标志物。     

miR-29a在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响

摘要：目的：检测miR-29a在乳腺癌组织中的表达水平并探讨其对人乳腺癌细胞增殖和迁移的影响。 方法：用荧光定量RT-PCR检测乳腺癌组织及癌旁组织中miR-29a的表达水平;用脂质体法将miR-29a mimic及miR-29a inhibitor分别转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231,通过MTT实验和 Transwell实验观察miR-29a对MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力的影响;miRanda软件预测miR-29a的靶基因,western blot验证其表达结果。 结果：荧光定量RT-PCR检测结果表明,与癌旁组织（2.17±0.89）比较,miR-29a在乳腺癌组织（5.65±1.45）中的表达水平上调（t=3.94,P＜0.01）;MTT实验和Transwell实验结果显示,与mimics阴性对照组［（106.36±5.15)%,(216.70±7.20）个］相比,miR-29a mimics组［（133.32±6.31）%,(294.30±8.60)个］乳腺癌细胞的增殖和迁移能力增加（t分别为3.36和6.85,P均＜0.01）;与inhibitor阴性对照组［（105.35±3.42）%,(240.30±9.50）个］相比,miR-29a inhibitor组［（66.63±3.82）%,(156.30±7.80）个］乳腺癌细胞的增殖和迁移能力降低（t分别为8.18和6.81,P均＜0.01）。miRanda软件预测人第10号染色体缺失的同源性磷酸酶-张力蛋白基因（PTEN）可能为miR-29a的靶基因。western blot结果显示,与mimics阴性对照组（0.55±0.01）相比,乳腺癌细胞转染miR-29a mimic后,其PTEN蛋白质的表达水平（0.22±0.01）下调（t=14.29,P＜0.01）;与inhibitor阴性对照组（0.49±0.02）相比,转染miR-29a inhibitor后,PTEN蛋白质的表达水平（1.25±0.02）上调（t=19.39,P＜0.01）。 结论：miR-29a在乳腺癌组织中的表达水平增高,并可能通过下调PTEN蛋白的表达促进乳腺癌细胞的增殖和转移。     

ＴＲＩＭ４７ 在肝癌中的表达及对肝癌细胞功能调控的影 响

摘要：目的 检测三基序蛋白 ４７（ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ ｍｏｔｉｆ ｐｒｏｔｅｉｎ４７，ＴＲＩＭ４７）与肝癌的关系及其对肝癌细胞增殖和迁移的调控作用。方 法 通过 ＴＣＧＡ、ＨＰＡ 和 ＨＣＣＤＢ 数据库检测肝癌组织和癌旁组织中 ＴＲＩＭ４７ 的表达，进一步评估 ＴＲＩＭ４７ 与肝癌患者预后及 临床病理参数的关系；通过基因集富集分析（ＧＳＥＡ）预测 ＴＲＩＭ４７ 基因在肝癌中的相关信号通路。利用慢病毒构建过表达 ＴＲＩＭ４７ 的 ＨｅｐＧ２ 肝癌细胞，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 检测 ｍＴＯＲ 和 ＷＮＴ 信号通路中关键分子的激活及表达；ＣＣＫ ８法和平板细胞克隆形 成试验检测 ＴＲＩＭ４７ 对 ＨｅｐＧ２ 肝癌细胞增殖的影响；Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ 试验和细胞划痕愈合试验检测 ＴＲＩＭ４７ 对 ＨｅｐＧ２ 肝癌细胞迁移 的影响。结果 与癌旁组织相比，ＴＲＩＭ４７ 在肝癌组织中的表达水平显著上调（Ｐ＜０．０５）；高表达的 ＴＲＩＭ４７ 与肝癌患者的不良 预后密切相关（Ｐ＜０．０５）；临床数据分析结果所示，在年龄＞５０ 岁、男性患者和非亚洲籍的肝癌患者中 ＴＲＩＭ４７ 的表达水平降 低，在 ＡＦＰ＞２０ ｎｇ ／ ｍＬ、肿瘤组织学分级＞Ｇ２、病理分级＞Ⅱ级的肝癌患者中 ＴＲＩＭ４７ 的表达水平升高（Ｐ＜０．０５）；ＧＥＳＡ 的预测结 果显示，ＴＲＩＭ４７ 基因在肝癌中与 ｍＴＯＲ 和 ＷＮＴ 信号通路密切相关（Ｐ＜０．０５），Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 结果表明，在过表达 ＴＲＩＭ４７ 的 ＨｅｐＧ２ 细胞中，ｍＴＯＲ 信号通路中 ｐ ｍＴＯＲ 及 ＷＮＴ 信号通路分子 β ｃａｔｅｎｉｎ 的表达水平显著升高；过表达 ＴＲＩＭ４７ 的肝癌细胞 增殖率和迁移率显著高于对照组。结论 ＴＲＩＭ４７ 在肝癌中表达升高，并且可以作为肝癌临床预后的评估指标，ＴＲＩＭ４７ 促进 肝癌细胞的增殖和迁移，与 ｍＴＯＲ 和 ＷＮＴ 信号通路的激活有关。     

槐角黄酮调控miR-199a-3p/p38MAPK/NF-κB对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和炎症因子分泌的影响

目的 探讨槐角黄酮对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和炎症因子分泌的影响。方法 将乳腺癌细胞BT549分为正常对照(NC)组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、miR-NC组、miR-199a-3p组、高剂量+anti-miR-NC组、高剂量+anti-miR-199a-3p组。采用CCK-8、克隆形成实验评估细胞增殖;采用Transwell法评估细胞迁移和侵袭。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-199a-3p表达。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)以及白细胞介素-1β(IL-1β)水平。采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测p-p38MAPK和p-p65蛋白表达。结果 与NC组比较,低、中、高剂量组BT549细胞活力、克隆形成数、迁移数、侵袭数降低,miR-199a-3p表达升高,细胞培养液上清中TNF-α、IL-6以及IL-1β水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-199a-3p组BT549细胞活力、克隆形成数、迁移数、侵袭数降低,细胞...     

过表达FOXB2对肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨叉头框蛋白B2（FOXB2）对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 采用定量PCR检测正常肝细胞LO2细胞和肝癌细胞系Hep3B、Huh7细胞FOXB2 mRNA的表达,构建过表达FOXB2的细胞模型,逆转录实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测过表达效率,细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测FOXB2对Huh7细胞增殖能力的影响;平板克隆实验检测FOXB2对Huh7细胞克隆形成能力的影响;Transwell实验检测FOXB2对Huh7细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 FOXB2在肝癌细胞系Huh7和Hep3B细胞中的表达水平低于正常肝细胞LO2（P<0.001）;过表达FOXB2抑制了Huh7细胞的增殖（P=0.005）和克隆形成（P<0.001）;FOXB2过表达肝癌细胞的迁移（P<0.001）和侵袭（P=0.002）能力低于Vector对照细胞。结论 FOXB2在肝癌细胞中低表达,FOXB2过表达抑制了肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

沉默lncRNA THAP9-AS1对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的:探讨沉默长链非编码RNA THAP9反义RNA1(lncRNA THAP9-AS1)对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。方法:选取贵州省肿瘤医院2017年6月至2020年6月25例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测lncRNA THAP9-AS1和miR-505-3p表达水平。将MDA-MB-231细胞随机分为si-THAP9-AS1组、si-NC组、miR-505-3p组、 miR-NC组、si-THAP9-AS1+anti-miR-NC组、si-THAP9-AS1+miR-505-3p inhibitor组。采用四甲基偶氮唑盐比色(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活性,平板克隆实验检测细胞集落形成数,流式细胞术实验检测细胞凋亡,划痕实验和Transwell检测细胞迁移及侵袭,双荧光素酶报告实验检测lncRNA THAP9-AS1和miR-505-3p的靶向关系。结果:与癌旁组织相比,乳腺癌组...     

过表达miR-129-5p对胶质瘤细胞增殖、迁移 及CDK6、N-cadherin表达的影响

目的:研究过表达miR-129-5对胶质瘤细胞增殖、迁移及细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达的影响。方法:培养胶质瘤U87细胞并分为转染阴性对照mimic的对照组、转染miR-129-5p mimic的miR-129-5p组,采用MTS实验检测增殖活力、划痕实验检测迁移活力、Western blot检测CDK6及N-cadherin的表达量,验证miR-129-5p对CDK6、N-cadherin的靶向调控作用。结果:miR-129-5p组的OD490值(0.78±0.15),明显低于对照组的(1.21±0.34)(P0.05);相对愈合面积(32.39±8.79)%,明显低于对照组的(73.39±17.85)%(P0.05);CDK6的表达量(0.28±0.09)及N-cadherin的表达量(0.34±0.08),明显低于对照组的(0.88±0.18)及(0.67±0.15)(P0.05);生物信息学分析及双荧光素酶报告表明miR-129-5p靶向调控CDK6、N-cadherin基因mRNA 3’UTR。结论:过表达miR-129-5p能够抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移,其机制可能与靶向调控CDK6、N-cadherin有关。     

miRNA-195靶向调控 CCND2和 MYB抑制宫颈癌细胞增殖、迁移的机制研究

目的　研究 miRNA-195在宫颈癌组织和细胞中的表达,分析其对宫颈癌细胞增殖、迁移的影响和作用机制。方法　检测 35例临床宫颈癌组织及其对应癌旁正常组织中 miRNA-195,通过 Kaplan-Meier Plotter数据库分析其与宫颈癌患者预后的关系;采用细胞增殖实验和划痕迁移实验验证 miRNA-195对宫颈癌 siHa,Hela细胞增殖、迁移的影响;通过 microRNA数据库预测 miRNA-195的靶基因,双荧光素酶基因实验验证靶向结合关系; qRT-PCR验证 miRNA-195对靶基因的调控;分析宫颈癌中靶基因的表达作用及与 miRNA-195的相关性,通过细胞回补实验验证 miRNA-195是否通过靶向调控蛋白表达在宫颈癌中发挥功能。结果　宫颈癌组织中 miRNA-195相对表达低于癌旁正常组织（ 21.03±5.17 vs 40.67±7.92）,差异有统计学意义（ t=12.285,P<0.001）,且具有低表达预后差的临床特征（ Logrank P=0.032）。过表达 miRNA-195抑制了宫颈癌细胞的增殖（ t=6.725~21.433,均 P＜ 0.01）和迁移速率（ t=12.443,16.749,均 P<0.001）。CCND2和 MYB是 miRNA-195的靶基因,过表达 miRNA-195显著抑制了 CCND2和 MYB mRNA的蛋白表达（ P<0.01）。宫颈癌组织中 CCND2较癌旁正常组织显著高表达（ 52.67±4.79 vs 39.86±6.39）,差异有统计学意义（ t=12.453,P<0.001）;MYB较癌旁正常组织显著高表达（ 43.06±6.43 vs 22.07±6.85）,差异有统计学意义（t=13.217,P<0.001）;且分别与 miRNA-195表达呈负相关（ r=-0.726,-0.592,均 P<0.05）。过表达 CCND2和 MYB显著促进了宫颈癌细胞的增殖和迁移速率,敲低 CCND2和 MYB表达则得到与之相反的结果（ F=144.947,875.160,均 P<0.001）;在过表达 miRNA-195细胞中分别回补过表达 CCND2和 MYB后细胞增殖、迁移速率基本回归到正常水平。结论　miRNA-195可通过靶向调控 CCND2和 MYB表达抑制宫颈癌癌细胞的增殖和迁移,进而参与宫颈癌的发生发展。     

长链非编码RNA MCM3AP-AS1对NSCLC细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)微小染色体维持蛋白3相关蛋白反义链1(MCM3AP-AS1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、侵袭、迁移的影响及作用机制.方法 体外培养A549肺癌细胞株,并将其分为空白对照(Control)组、阴性对照(NC)组、过表达MCM3AP-AS1组和敲低sh-MCM3AP-AS...     

ECE2通过上调E2F1和MYC来促进乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的　通过检测内皮素转化酶2（ECE2）在乳腺癌中的表达,探究其对乳腺癌细胞增殖、迁移的影响及潜在分子机制。方法　选取20 例临床乳腺癌组织及其对应癌旁正常组织样本,通过qRT-PCR 检测ECE2 基因在乳腺癌组织中的表达特征。通过siRNA 介导敲低ECE2 表达,利用细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕迁移实验和细胞周期实验分别验证敲低ECE2 表达对乳腺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及凋亡的影响。通过分析与ECE2 共表达基因参与的信号通路,探索ECE2 在乳腺癌发展进程中的潜在分子机制,进一步通过细胞增殖回补实验进行验证。结果　20 例临床乳腺癌组织中ECE2 表达较癌旁正常组织显著上调（30.342±6.564 vs 21.753±8.244）,差异有统计学意义（t=3.645,P=0.000）。转染敲低ECE2 表达后,siECE2#1 组和siECE2#2 组在24,48,72 h 的吸光度值较对照组明显降低,差异有统计学意义（F=71.409~211.681,均P ＜ 0.01）。siECE2#1 组（0.515±0.014）和siECE2#2 组（0.511±0.006）细胞克隆形成速率明显低于对照组（3.473±0.147）,差异有统计学意义（F=467.152,P ＜ 0.001）。siECE2#1 组（56.423±1.137）和siECE2#2 组（42.036±0.754）细胞迁移愈合速率显著低于对照组（78.124±1.352）,差异有统计学意义（F=805.162,P ＜ 0.001）。siECE2#1 组和siECE2#2 组细胞凋亡率较对照组明显降低,细胞周期显著阻滞在G1 期。siECE2#1 组和siECE2# 组细胞中E2F1 mRNA 和蛋白表达水平明显低于对照组,差异均有统计学意义（F=703.020,136.301,均P＜ 0.001）;MYC mRNA 和蛋白表达水平也明显低于对照组（F=613.395,102.573,均P ＜ 0.001）。在敲低ECE2 表达的乳腺癌细胞中分别回补E2F1 和MYC 后,细胞增殖速率回归至正常水平。结论　ECE2 高表达诱导促癌基因E2F1和MYC 的高表达进而促进乳腺癌细胞的增殖及迁移,阻碍细胞周期停滞在G1 期,参与乳腺癌的发展进程。     

精原干细胞移植后的体内迁移、增殖和分化

背景:精原干细胞移植对男性不育的治疗具有潜在的临床应用价值,但移植后干细胞体内迁移、增殖、分化的过程目前尚不完全清楚.目的:观测精原干细胞移植后的体内迁移、增殖和分化过程.方法:以出生后6～10 d的雄性C57BL/6小鼠为供体,通过复合酶消化、差速贴壁结合非连续性Percoll密度梯度离心的方法获取精原干细胞;以出生后6周的雄性C57BL/6小鼠为受体,腹腔注射白消安,破坏其内源性生精功能.实验组采用曲细精管微注射法将供体精原干细胞移植入受体睾丸内,对移植后细胞进行PKH26-GL荧光追踪分析,观察其体内迁移过程,以Western Blot和RFQ-PCR法检测睾丸组织α6-Integrin,c-kit,SCF蛋白及mRNA的变化.以未接受化疗和细胞移植的正常同系生小鼠作为阳性对照组,以单侧睾丸曲细精管微注射移植细胞递质作为阴性对照组.结果与结论:PKH26-GL荧光追踪移植细胞,移植后1周部分精原干细胞已向曲细精管基底膜迁移,移植后1个月精原干细胞已从曲细精管管腔迁移至曲细精管基底膜,并分裂增殖,移植后3个月曲细精管管腔内可见大量精子细胞形成.移植后1,2,3个月,各组α6-Integrin,c-kit蛋白表达均呈增加趋势(P < 0.01),阴性对照组、实验组SCF蛋白表达有增加趋势(P < 0.05);各组α6-Integrin,c-kit,SCF mRNA的表达均有增加趋势(P < 0.05).提示大剂量化疗后,生精上皮内仍存在一定数量的Sertoli细胞,这种精子发生的微环境并未完全破坏,外源性精原干细胞移植后能在受体Sertoli细胞所提供的微环境中增殖和分化.     

LncRNA PTPRG-AS1通过靶向miR-5590-3p调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的 探讨LncRNA PTPRG-AS1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法 以正常乳腺上皮细胞MCF-10A为对照,qRT-PCR法检测乳腺癌细胞系(MCF-7、T47D和BT549)中LncRNA PTPRG-AS1和miR-5590-3p表达.分别转染si-LncRNA PTPRG-AS1、miR...     

他莫昔芬对小胶质细胞氧糖剥夺后迁移和增殖的影响

目的:观察他莫昔芬(TAM)对氧糖剥夺(OGD)模型中小胶质细胞BV-2增殖和迁移的影响。方法:将BV-2细胞分为对照组(常规正常氧浓度+高葡萄糖+无胎牛血清培养基)、OGD组(1%氧浓度+无糖+无血清培养基)、OGD+TAM组(1%氧浓度+无糖+无血清培养基+TAM),采用划痕试验,通过免疫荧光技术检测小胶质细胞BV-2在不同氧浓度下的增殖和迁移情况。同时观察TAM对小胶质细胞活化的调节作用。结果:与对照组相比,BV-2在OGD后细胞迁移加快(P<0.05);OGD+TAM组迁移较OGD组下降(P<0.05);OGD组Ki67阳性率的BV-2明显高于对照组(P<0.05);OGD+TAM组Ki67阳性率则明显低于OGD组(P<0.05)。结论:缺氧可诱导小胶质细胞活化,雌激素受体拮抗剂TAM能有效抑制这种活化。     

微小RNA-498在肝癌中的表达及其对细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响

目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-498在肝癌细胞株中的表达,及其对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法 实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测miR-498在肝癌细胞株中表达水平;根据细胞转染不同的片段,分别将肝癌癌细胞分为3组：空白对照组、miR-498模拟物组和miR-498抑制物组。采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)实验检测肝癌细胞的增殖能力;Transwell法检测miR-498对肝癌癌细胞株侵袭能力;细胞划痕实验检测miR-498对肝癌癌细胞株迁移能力的影响。结果 miR-498在4种肝癌细胞株MHCC97H、HCCLM3、HepG2、HEP3B的表达显著下调,分别为0.19±0.03、0.24±0.02、0.38±0.05、0.53±0.05,差异均有统计学意义(t_MHCC97H=9.831,P=0.001;t_HCCLM3=7.382,P=0.002;t_HepG2=5.476,P=0.002;t_HEP3B=5.476,P=0.005)。C...     

骨髓基质细胞对微血管内皮细胞增殖、迁移、管腔化的影响

目的:观察骨髓基质细胞(BMSC)对微血管内皮细胞的增殖、迁移、血管新生的影响并探讨其作用机制.方法:体外培养BMSCs,通过体外BMSC/微血管内皮细胞共同培养模型,在倒置相差显微镜下,利用图像分析系统观察BMSCs条件培养基对微血管内皮增殖、迁移的影响,利用细胞外基质管腔形成实验评价BMSCs对微血管内皮细胞血管新生的影响.结果:BMSCs上清条件培养基、BMSCs/微血管内皮细胞共培养上清条件培养基与对照组比较可促进微血管内皮细胞增殖[(0.165±0.011)vs(0.170±0.008)vs(0.152±0.010),P＜0.05]、划痕修复能力[(1850.269±32.64)μm vs(2025.420±134.300)μm vs(1695.891±32.073)μm,P＜0.05]和管腔形成能力[(3.69±O.28)mm/mm2 vs(6.59±0.24)mm/mm2 vs(1.47±0.21)mm/mm2].结论:BMSCs分泌的因子可以促进微血管内皮细胞增殖、细胞迁移和血管新生.BMSCs移植治疗脑缺血,不仅通过神经保护起作用,也通过影响微血管内皮细胞,促进血管新生发挥治疗作用,改善神经功能.     

miR-505-3p 对胃癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭的影响及机制研究

目的 检测胃癌组织及细胞中miR-505-3p 表达,并探究其对胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响及潜在分子机制。方法 利用实时荧光定量PCR 实验（qRT-PCR）检测胃癌组织、癌旁正常组织及胃癌细胞和人正常胃黏膜细胞中miR-505-3p 相对表达;构建miR-505-3p 过表达、c-MYC 过表达和敲低表达细胞系,通过CCK-8 法,克隆斑点形成实验、Transwell 侵袭/ 迁移实验检测miR-505-3p 和c-MYC 对胃癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭的影响;裸鼠皮下成瘤实验验证miR-505-3p 对裸鼠肿瘤生长的影响;双荧光素报告实验验证miR-505-3p 和c-MYC 的靶向关系,并探究其两者间的表达调控作用;Western blot 检测miR-505-3p 和c-MYC 对Wnt/β-catenin 通路关键蛋白表达的影响。结果 临床胃癌组织中miR-505-3p 表达水平较正常癌旁组织显著下调（0.92±0.37 vs 1.74±0.59）,差异有统计学意义（t=3.723,P ＜ 0.01）。胃癌细胞系MGC803（1.12±0.35）,AZ521（2.31±0.24）和HGC-27（2.28±0.43）中miR-505-3p 相对表达较人正常胃黏膜细胞系GES1（4.62±0.79）明显降低,差异有统计学意义（F=26.109,P ＜ 0.001）。miR-505-3p 过表达组细胞增殖（0.92±0.27）、克隆形成（51.67±21.75）、迁移（43.25±15.47 ）、侵袭（38.53±14.76）能力较NC组（1.85±0.34,128.36±36.42,100.08±2.12,100.12±1.94）明显降低,差异均有统计学意义（t=3.131 ～ 7.166,均P ＜ 0.05）;miR-505-3p 过表达抑制了裸鼠生长。c-MYC 是miR-505-3p 的靶基因,miR-505-3p 靶向负调控c-MYC。c-MYC 过表达组细胞增殖（2.72±0.68）、迁移（147.15±20.36）、侵袭（145.46±22.73）能力较NC 组（1.85±0.34,100.08±2.12,100.12±1.94）明显增高,差异均有统计学意义（t=2.455 ～ 4.456,均P ＜ 0.05）;c-MYC 过表达可逆转miR-505-3p 对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。miR-505-3p 过表达组Wnt（0.46±0.07 ）,β-catenin（0.50±0.05）蛋白相对表达水平明显低于NC 组（1.01±0.02,1.02±0.02）,差异均有统计学意义（t=8.139,7.342,均P ＜ 0.001）;过表达c-MYC 能够逆转miR-505-3p 对Wnt 和β-catenin 蛋白表达的抑制作用。结论 胃癌中miR-505-3p 显著低表达,其可通过靶向调控c-MYC 表达介导Wnt/β-catenin 信号通路激活进而发挥作用参与胃癌的发生发展过程。     

二氢杨梅素对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响

目的研究二氢杨梅素(DMY)对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响。方法 2014年3月至2015年2月,该院采用99%纯度的DMY为抑制剂,以乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,采用MTT法、流式细胞术法和免疫细胞化学来分析乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的情况。结果当使用浓度大于20μg/mL的DMY处理细胞时,出现了抑制效果,但效果不佳;当用40与80μg/mL的DMY时,明显地抑制了乳腺癌细胞MCF-6的增殖,且有不同程度的敏感性。当DMY为80μg/mL时,其IC50为226.9μg/mL。抑制率和IC50分别与0μg/mL DMY比较,差异有统计学意义(P0.05)。40与80μg/mL的DMY处理乳腺癌细胞MCF-6可以诱导其周期阻滞在G2/M期(P0.01),并表现出明显的细胞凋亡现象,同时,G0/G1期也受到阻滞,S期细胞比例降低明显,差异有统计学意义(P0.05);当使用浓度大于20μg/mL的DMY时,PCNA阳性率有所下降,当浓度为40μg/mL的DMY时,乳腺癌细胞MCF-6的PCNA阳性率明显下降(P0.01),尤其浓度为80μg/mL的DMY时,阳性率为10.00%。与0μg/mL DMY比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论对乳腺癌患者采用DMY可以有效抑制癌细胞快速增殖,加速器凋亡,减缓患者病情,疗效突出。     

体外冲击波对大鼠成骨细胞增殖、分化、黏附及迁移的影响

背景:体外冲击波是治疗骨折延迟愈合或不愈合的一种有效方法,成骨细胞在此过程中发挥着重要的作用.目的:研究成骨细胞在体外冲击波促进骨折愈合过程中的作用,为提高冲击波治疗效果提供理论支持.方法:将原代培养的SD大鼠成骨细胞随机分成冲击波组和对照组,应用不同能量的冲击波进行处理后接种于96孔培养板,根据细胞存活率和细胞增殖情况确定适宜的冲击波能量值.钙钴法染色观察成骨细胞碱性磷酸酶,CCK-8试剂盒检测细胞存活,AKP试剂盒检测AKP表达,茜素红染色观察矿化结节,流式细胞仪检测整合素β1及RT-PCR检测整合素β1 mRNA表达,伤口愈合试验观察成骨细胞的迁移率.结果与结论:冲击波处理体外原代培养成骨细胞的适宜能量为10 kV(500脉冲),冲击波组细胞增殖速度快,细胞分泌碱性磷酸酶水平高,矿化结节面积大,细胞黏附率高,整合素β1及其mRNA的表达均高于对照组(P<0.01),且冲击波组细胞迁移的平均距离大于对照组(P<0.05),提示适宜能量冲击波可促进成骨细胞的增殖、分化、黏附及迁移,同时,整合素β1在细胞黏附及迁移过程中可能扮演了重要的角色.     

miR-103a-3p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：目的〓探讨miR-103a-3p在人肺癌组织中的表达及对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法：收集南通市肿瘤医院52例肺癌患者手术组织标本,qRT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中miR-103a-3p的表达;采用Lipofecta mineTM 3000 将miR-103a-3p mimic、mimic NC、miR-103a-3p inhibitor及inhibitor NC转染至A549细胞中,qRT-PCR检测miR-103a-3p的转染效率;CCK8实验检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞凋亡能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。 结果：miR-103a-3p在肺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织（p＜0.01）;qRT-PCR结果显示,转染miR-103a-3p mimic组细胞中miR-103a-3p的表达水平明显高于mimic NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;而转染miR-103a-3p inhibitor 组细胞中miR-103a-3p的表达水平低于inhibitor NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力增强;但细胞凋亡在4组中变化均不明显。 结论：miR-103a-3p在肺癌组织中低表达,miR-103a-3p能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。