从Wnt/β-catenin信号通路探讨透骨消痛胶囊对关节软骨的保护作用

目的:从Wnt/β-catenin信号通路观察透骨消痛胶囊对大鼠膝骨关节炎关节软骨的保护作用。方法:60只健康清洁级2月龄雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、模型对照组和透骨消痛胶囊组,每组20只。模型对照组和透骨消痛胶囊组采用质4%木瓜蛋白酶双膝关节腔注射,成功复制骨关节炎模型后,透骨消痛胶囊组给予透骨消痛胶囊287.5 mg·kg~(-1),正常对照组和模型对照组给予相同剂量的生理盐水。给药2个月后,采用Western blot法观察各组关节软骨中含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-5(ADAMTS-5)、Wnt-4、β-catenin和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组ADAMTS-5、Wnt 4、β-catenin和MMP-13表达升高(P0.05);与模型对照组比较,透骨消痛胶囊组ADAMTS-5、Wnt 4、β-catenin和MMP-13表达降低(P0.05)。结论:透骨消痛胶囊对关节软骨的保护作用与其降低Wnt/β-catenin信号通路表达相关。     

透骨消痛胶囊对膝骨关节炎大鼠软骨下骨Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨透骨消痛胶囊对膝骨关节炎大鼠软骨下骨Wnt/β-catenin信号通路表达的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、透骨消痛胶囊组,每组20只。除空白对照组外,其余大鼠采用改良Hulth法建造膝骨关节炎模型。空白对照组、模型对照组给予生理盐水灌胃,透骨消痛胶囊组给予10 mg·mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃。干预后,置于麻醉下取材,经RT-PCR、Western Blot分别检测软骨下骨中Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA与蛋白含量变化。结果:RT-PCR、Western Blot结果显示,与空白对照组比较,模型对照组大鼠软骨下骨中Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA与蛋白含量表达显著升高(P < 0.01);与模型对照组比较,透骨消痛胶囊组大鼠软骨下骨中Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA与蛋白含量表达显著降低(P < 0.01或P < 0.05)。结论:透骨消痛胶囊可通过调控改良Hulth法制备的膝骨关节炎大鼠模型软骨下骨中Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA与蛋白含量表达,从而延缓膝骨关节炎软骨下骨硬化。     

透骨消痛胶囊抑制脂多糖诱导软骨细胞炎症反应的机制研究

目的探讨透骨消痛胶囊抑制脂多糖(LPS)诱导的软骨细胞炎症反应作用机制。方法对4周龄雄性SD大鼠采用机械-Ⅱ型胶原酶消化法获取膝关节软骨细胞并进行体外培养,将软骨细胞分为空白组、模型组以及透骨消痛胶囊组,空白组加入含10%胎牛血清(FBS)的低糖型Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM/LOW)2 mL,模型组加入含10 ng/mL LPS、10%FBS的DMEM/LOW培养基2 mL,透骨消痛胶囊组加入含10 ng/mL LPS、透骨消痛胶囊(300μg/mL)、10%FBS的DMEM/LOW培养基2 mL。干预8 h后,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测各组微小RNA(miRNA)-140表达变化,免疫荧光观察各组带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶(ADAMTS)4、基质金属蛋白酶(MMP)-3表达变化,Image J分析各组平均光密度。结果与空白组相比,模型组MMP-3表达升高(P0.05)、ADAMTS4表达明显升高(P0.01);与模型组相比,透骨消痛胶囊组MMP-3表达下降(P0.05)、ADAMTS4表达明显下降(P0.01)。与空白组相比,模型组软骨细胞miRNA-140表达明显降低(P0.05);与模型组相比,透骨消痛胶囊组软骨细胞miRNA表达明显升高(P0.05)。结论透骨消痛胶囊能促进miRNA-140表达,降低ADAMTS4、MMP-3分泌,抑制炎症反应介导的软骨基质降解,从而延缓骨关节炎软骨退变。     

医用臭氧对膝骨关节炎兔软骨基质金属蛋白酶-1的影响

目的 探讨医用臭氧对膝骨关节炎兔软骨基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的影响.方法 新西兰大白兔30只,体重2.2～2.8 kg,雌雄不拘,并以左膝关节作为对比,随机分为3组,每组10只,建立右膝骨关节炎(OA)模型,分别于造模成功后第3天和第5天向右膝关节腔内注入空气(A组)、40μg/L(B组)和80 μg/L(C组)医用臭氧3 ml.造模成功后第7天处死动物,取两膝关节,光镜下观察关节软骨一般形态,甲苯胺蓝染色行Mankin评分;免疫组化法检测软骨基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的表达水平;分别于造模成功时和处死前即刻测定兔两膝关节活动度.结果 与左膝关节比较,各组造模成功时右膝关节活动度降低,软骨组织Mankin评分、软骨细胞MMP-1表达升高(P＜0.05);B组和C组处死前即刻右膝关节活动度较造模成功时升高(P＜0.05).与A组比较,B组软骨组织Mankin评分、软骨细胞MMp-1表达降低(P＜0.05);与B组比较,C组上述指标升高(P＜0.05).A组和C组软骨明显退变,程度重于B组.结论 关节腔内注射40 μg/L医用臭氧3ml治疗兔膝骨关节炎的机制可能与下调软骨MMP-1有关.     

骨形成蛋白2基因修饰的骨髓基质细胞与纤维蛋白复合物修复兔关节软骨缺损

目的 研究骨形成蛋白2（bone mophogenetic protein2，BMP-2）重组腺病毒（adenovirus）转染骨髓基质细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）后，与纤维蛋白凝胶构成的复合物（Ad—BMP-2＋MSCs-纤维蛋白凝胶）对兔关节软骨缺损修复的影响。方法 ①AdBMP-2转染原代培养的MSCs，通过RT—PCR、细胞免疫组织化学染色、甲苯胺蓝染色等观察转染后3～9d的MSCs其BMP-2、Ⅱ型胶原及蛋白多糖转录、表达水平的变化。②转染后的MSCs种植于纤维蛋白凝胶，在体外培养1～9d，通过上述指标及透射电镜观察三维培养条件下其软骨基质的产生。③42只日本大耳白兔先制成直径4．5mm全层软骨缺损模型，随机分为3组（n=14）：A组为Ad—BMP-2＋MSCs-纤维蛋白凝胶修复组，B组为MSCs-纤维蛋白凝胶修复组，C组为空白对照组。术后4、8和12周取材行大体观察、HE染色、甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学及12周关节软骨弹性常数检测。结果 ①Ad—BMP-2转基因MSCs的BMP-2、Ⅱ型胶原mRNART—PCR检测分别在3、5d呈阳性，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。②转基因MSCs三维培养物免疫组织化学和甲苯胺蓝染色呈阳性，电镜显示细胞生长良好，有基质合成。③A组各时间点大体、组织形态学和组织化学染色均显著优于B组和C组，12周时力学和组织学已接近正常关节软骨。结论 Ad—BMP-2能通过促进MSCs分泌BMP-2，诱导Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达，在纤维蛋白三维支架中形成软骨基质，移植入兔关节软骨缺损区可修复直径4．5mm缺损，其修复组织成分接近正常软骨。     

跳骨片抑制大鼠膝骨关节炎Wnt/β-catenin信号转导通路介导炎症反应的机制研究

目的探讨跳骨片对大鼠膝骨关节炎(OA)Wnt/β-catenin信号转导通路介导炎症反应的机制。方法将30只8周龄雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、跳骨片组,每组10只。空白组不予任何处理,模型组、跳骨片组均采用改良Hulth法建立OA动物模型。建模成功后跳骨片组每天予跳骨片0.32 g/kg灌胃,空白组和模型组每天予等量生理盐水灌胃,干预12周后分别取3组大鼠双侧膝关节股骨髁、关节软骨和滑膜,将股骨髁常规固定、脱钙、包埋及切片,对切片分别进行苏木精-伊红(HE)、甲苯胺蓝染色,光镜下观察关节软骨组织形态学变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测滑膜中白细胞介素(IL)-1β、基质金属蛋白酶(MMP)-13、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;蛋白质免疫印迹检测关节软骨β-catenin、Wnt-4蛋白表达。结果模型组滑膜中,IL-1β表达量明显高于空白组和跳骨片组(P0.01),MMP-13表达量高于空白组和跳骨片组(P0.05),TNF-α表达量明显高于空白组(P0.01)、高于跳骨片组(P0.05);模型组关节软骨中,β-catenin蛋白表达量明显高于空白组和跳骨片组(P0.01),Wnt-4蛋白表达量高于空白组和跳骨片组(P0.05)。HE染色显示跳骨片组软骨破坏程度低于模型组,甲苯胺蓝染色显示跳骨片组软骨细胞蛋白多糖含量高于模型组(P0.01)。结论跳骨片能抑制关节软骨Wnt/β-catenin信号转导通路,降低滑膜中IL-1β、MMP-13、TNF-α表达,抑制炎症反应介导的软骨基质降解,延缓关节软骨退变。     

不同剂量维生素D2对膝关节骨性关节炎大鼠IL-1β 和MMP-13表达的影响

目的 观察使用不同剂量维生素 D2 干预后膝关节骨性关节炎（knee osteoarthritis，KOA） 大鼠关节液中IL-1β 的浓度和关节软骨组织中 MMP-13 的表达情况，探讨其对炎症反应及软骨降解的影响。方法 选择 2 ~ 3 月龄的雌性 SD 大鼠 50 只，采用关节腔内注射木瓜蛋白酶法制备 KOA 大鼠模型，随机将大鼠分成 A 组（模型组）、B 组（维生素 D2 剂量为4 × 105 U/kg）、C 组（维生素 D2 剂量为5 × 105 U/kg）、D 组（维生素 D2 剂量为6 × 105 U/kg）和E 组（维生素 D2 剂量为7 × 105 U/kg），每组 10 只。除 A 组外，其余四组均给予维生素 D2 干预， 1 次/周，连续 4 周。4周后取大鼠膝关节组织制备切片，进行 HE 染色、甲苯胺蓝染色、改良的番红 O-固绿染色和 Mankin’s 评分，检测大鼠关节液中 IL-1β 浓度和软骨组织中 MMP-13 的表达情况。结果 经过不同剂量维生素 D2干预后，各组均可见软骨细胞增多，基质染色加深，软骨层增厚，Mankin’s 评分、关节液中 IL-1β 的浓度和软骨组织中 MMP 13 的表达水平均较模型组降低（P＜0.05）。其中，维生素 D2 剂量为 6 × 105 U/kg 组的软骨层增厚较其他维生素 D2 剂量组明显，Mankin’s 评分、关节液中 IL-1β 浓度及软骨组织中 MMP-13 的表达水平均低于其他维生素 D2 剂量组。结论 维生素 D2 可通过抑制 IL-1β 和 MMP-13 的表达水平，减轻关节内的炎症反应、减少软骨基质降解，促进关节软骨修复。且剂量为6 × 105 U/kg的维生素D2干预效果较好。     

鹿茸多肽对实验性膝骨性关节炎关节软骨中糖胺多糖和Ⅱ型胶原水平的影响

目的:检测膝骨性关节炎关节软骨中糖胺多糖和Ⅱ型胶原的水平及鹿茸多肽对其影响。方法:6月龄新西兰大白兔64只,随机分为正常组(8只)和模型组(56只)。模型组采用Hulth法造成膝骨性关节炎模型。造模成功后再将模型组随机分为鹿茸多肽组(24只)和对照组(24只),鹿茸多肽组给予鹿茸多肽稀释液0.5ml,每2日1次关节腔注射;对照组给予0.5ml生理盐水,每2日1次关节腔注射。分别于干预后第7、15、30天分3批取材,甲苯胺蓝染色观察两组关节软骨中糖胺多糖含量,免疫组织化学法观察软骨基质中Ⅱ型胶原的表达。结果:随着干预时间的延长,鹿茸多肽组和对照组软骨基质中糖胺多糖和Ⅱ型胶原表达量逐渐减少。鹿茸多肽组药物干预后第7、15、30天,Ⅱ型胶原阳性面积积分光密度值分别为(312.06±14.12)、(273.31±12.42)和(248.34±10.41),组间差异有统计学意义(P<0.05);对照组干预后第7、15、30天,Ⅱ型胶原阳性面积积分光密度值分别为(253.47±15.53)、(215.67±9.72)和(160.01±13.23),组间差异有统计学意义(P<0.05)。相同时间段内,鹿茸多肽组Ⅱ型胶原阳性面积积分光密度值高于对照组,组间差异有统计学意义。结论:鹿茸多肽通过阻止膝骨性关节炎关节软骨基质中糖胺多糖和Ⅱ型胶原含量的减少,一定程度上延缓关节软骨的退变。     

不同强度运动对大鼠膝关节软骨MMP-3、COL-Ⅱ、TIMP-3表达的影响

 目的 比较不同强度跑台运动对大鼠膝关节软骨MMP-3、COL-Ⅱ、TIMP-3基因及蛋白表达的影响。方法 8周龄雄性SD大鼠24只,随机分为高强度运动组、低强度运动组和对照组。运动组动物按照既定的运动处方在动物跑台上进行运动训练,6周后处死所有实验动物取材。采用COL-Ⅱ免疫组化染色观察膝关节标本COL-Ⅱ染色的平均光密度值,采用RT-RCR技术检测各组大鼠软骨MMP-3 mRNA、COL-Ⅱ mRNA及TIMP-3 mRNA表达,采用Western blot技术检测各组大鼠软骨MMP-3、COL-Ⅱ及TIMP-3蛋白的表达。结果 COL-Ⅱ免疫组化检测显示高强度运动组光密度值最低,且与低强度运动组和对照组的差异有统计学意义。随着运动强度的增加,MMP-3与COL-Ⅱ的mRNA表达水平上调,而TIMP-3的mRNA表达水平下调。虽然随着运动强度的增加,MMP-3和COL-Ⅱ的蛋白表达水平增高,TIMP-3的蛋白表达水平下降,但在高强度运动组COL-Ⅱ的蛋白表达却较低强度运动组降低,同时MMP-3的蛋白水平明显升高。结论 一定程度的运动强度会在基因转录水平调节MMP-3、COL-Ⅱ及TIMP-3的表达,使软骨基质的代谢处于活跃状态,但运动强度过大可能通过MMP-3的降解作用降低COL-Ⅱ蛋白水平的表达。适度的运动有利于关节软骨基质成分的更新,超负荷运动可能通过影响软骨基质的合成导致关节的退变。     

松质骨基质复合生物蛋白胶构建组织工程软骨的研究

目的尝试采用松质骨基质与生物蛋白胶复合材料构建组织工程软骨。方法体外培养大鼠软骨细胞,接种于松质骨基质／生物蛋白胶材料上行体外培养。采用HE、甲苯胺蓝染色免疫学检测、扫描电镜观察等方法观察所构建的组织工程软骨的特性。结果松质骨基质／生物蛋白胶组的组织学结构更接近于软骨样组织．其Ⅱ型胶原、蛋白多糖基因表达量及蛋白多糖含量明显高于松质骨基质组。结论松质骨基质／生物蛋白胶复合材料可用于构建组织工程软骨,是一种较理想的支架材料。     

两种软骨缺损模型制备效果比较

目的比较内侧副韧带切断加半月板切除与软骨刮除方法制备膝软骨缺损模型的差异,为软骨缺损造模方法选择提供参考。方法选择成年健康比格犬10只,雌雄不限,体质量5.0~10.0 kg,随机分成3组,A组4只为内侧副韧带切断加半月板切除组,B组4只为软骨刮除组,C组2只为正常对照组。造模术后16周各组行MRI检查、标本大体观察,HE、番红O、甲苯胺蓝组织学染色,并采用国际骨关节炎研究协会(OARSI)骨关节炎组织学评分表对A、B组进行评分。结果术后16周,与C组相比,A组MRI及组织学观察未见明显软骨缺损;B组MRI和组织学可见明显软骨缺损,大体标本见缺损部位呈暗红色。A、B组OARSI骨关节炎组织学评分分别为(0.940±0.574)、(4.500±0.516)分,差异有统计学意义(t=18.461,P=0.000)。结论采用软骨刮除方法制备软骨缺损模型效果较内侧副韧带切断加半月板切除好,是一种构建软骨缺损模型的良好方法。     

阳和汤对兔膝骨关节炎模型关节液中SOD、NO的影响

目的:通过观察阳和汤对兔膝骨关节炎模型关节液中超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)的影响,探讨阳和汤防治骨关节炎的作用机制。方法:将24只健康新西兰兔随机分为阳和汤组、阳性对照组、模型对照组、空白对照组,每组6只。除空白对照组外,其余各组均采用木瓜蛋白酶造模方法建立骨关节炎模型。阳和汤组以阳和汤灌胃,阳性对照组以筋骨痛消丸灌胃,空白对照组、模型对照组以生理盐水灌胃,每日1次,持续给药5周。采用HE染色观察软骨形态结构的变化,用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测关节液中SOD、NO含量的变化。结果:HE染色:软骨形态结构阳和汤组与阳性对照组明显优于模型对照组。关节软骨组织损伤Mankin's评分:与空白对照组比较,其余3组评分明显增加(P0.05);阳和汤组、阳性对照组与模型对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);阳和汤组与阳性对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。ELISA检测法:阳和汤组与阳性对照组关节液中SOD含量均高于模型对照组,差异有统计学意义(P0.05);阳和汤组与阳性对照组关节液中NO含量均低于模型对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:阳和汤可以通过升高兔膝骨关节炎模型关节液中SOD含量,降低其NO含量,从而对膝骨关节炎起到治疗作用。     

MMP-1、MMP-9 mRNA在创伤性骨关节炎软骨中的表达

目的 研究兔前交叉韧带横断术(ACLT)创伤性骨关节炎(OA)动态模型软骨中MMP-1、MMP-9 mRNA的表达,探讨MMP-1、MMP-9在OA软骨退变中的作用.方法 30只新西兰兔随机分为对照组(10只)、ACLT组(20只),ACLT组行右膝ACLT,对照组行关节囊切开缝合术,ACLT组于术后4、8 w各处死10只,对照组术后4 w处死.解剖显微镜观察股骨内髁软骨形态学变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测股骨内髁软骨MMP-1、MMP-9 mRNA的表达.结果 形态学示ACLT组软骨退变重于对照组(P<0.05),且ACLT 8 w组重于4 w组(P<0.05);RT-PCR示ACLT组MMP-1、MMP-9 mRNA表达量均高于对照组(P<0.01),且ACLT 8 w组均高于4 w组(P<0.01).结论 创伤性OA软骨退变过程中伴随着MMP-1、MMP-9 mRNA表达的上调,软骨中MMP-1、MMP-9 mRNA的表达一定程度上反映了OA软骨的退变程度.     

猪骨髓间充质干细胞体外构建软骨修复关节软骨缺损的实验研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMSC)体外构建软骨,移植修复大动物大面积关节软骨缺损的可行性。方法以7只长枫杂交猪为动物模型,建立软骨缺损模型,用自体BMSCs体外软骨定向诱导8周的组织工程软骨移植修复,以单纯材料组、空白对照组和正常对照组作为对照。术后6个月取材,行大体及组织学检测,同时于术前、术后抽取关节液,检测IGF-1、IL-1β、MMP-13及TNF-α的表达水平,综合评价修复效果。结果术后6个月取材,实验组获得了较理想的修复效果,修复区软骨组织大体观、组织学表现成熟,类似于正常软骨组织。关节液检测中,实验组IGF-1表达水平显著高于空白对照组及单纯材料组(P0.05),而IL-1β、MMP-13及TNF-α的表达水平则明显低于空白对照组及单纯材料组(P0.05)。结论 BMSC体外构建组织工程软骨可有效修复猪关节软骨缺损,从而避免或延缓骨关节炎的发生、发展。     

MR T2 mapping成像评估止痛健骨方治疗膝骨性关节炎关节软骨损伤疗效的实验研究

目的探讨MR T2mapping成像评价止痛健骨方治疗骨性关节炎软骨损伤疗效的价值。方法采用木瓜蛋白酶关节腔注射法制作新西兰大白兔膝骨关节炎模型,根据治疗方法不同将48只新西兰大白兔随机分为正常对照组、模型对照组、盐酸氨基葡萄糖治疗组、止痛健骨方治疗组。各组治疗4周后行膝关节MR T2mapping成像并对关节软骨基质金属蛋白酶1(MMP-1)含量进行免疫组化分析。比较各组间关节软骨T2值及关节软骨MMP-1含量的差异,并分析不同干预方法、关节软骨MMP-1含量与关节软骨T2值的相关性。结果模型对照组关节软骨T2值高于其他3组(P均0.01),其他3组间关节软骨T2值差异无统计学意义。盐酸氨基葡萄糖治疗模型组、止痛健骨方治疗模型组间关节软骨MMP-1含量差异无统计学意义,但2组关节软骨的MMP-1含量低于模型对照组(P均0.05)、高于正常对照组(P均0.05)。关节软骨MMP-1含量与T2值间为非线性关系,随着前者的升高,后者先缓慢上升再快速上升(P0.05)。结论 MR T2mapping成像有助于评价止痛健骨方治疗模型兔骨关节炎软骨损伤的疗效,关节软骨MMP-1含量与T2值间可能为非线性关系。     

低强度脉冲超声对兔膝骨关节炎软骨细胞外基质的影响及机制

目的：观察低强度脉冲超声（LIPUS）对兔膝骨关节炎软骨细胞外基质修复的影响并分析其作用机制。方法：选取60只成年雌性家兔,体质量（2.0±0.2）kg,采用随机抽签法分为实验组和对照组,每组30只。采用Hulth法复制膝骨关节炎模型。造模后2周,实验组予以LIPUS治疗,超声工作频率为（800±5%）KHz、最大输出空间平均声功率为（50±10%）mw/cm2,每日1次,每次20 min;对照组予以假LIPUS治疗（即操作与实验组相同,而探头无能量输出）。分别于治疗后第2、4、8周随机处死动物,每次实验组和对照组各10只。观察软骨大体改变、HE染色组织病理改变,采用免疫组化技术和RT-PCR技术分析软骨中的Ⅱ型胶原、蛋白多糖、MMP-3、MMP-7以及MMP-13,采用硝酸还原法分析软骨中的NO的含量。结果：同一时间点的实验组与对照组比较,实验组软骨的损伤程度比对照组轻微（P〈0.01）;实验组软骨中MMP-3、MMP-7、MMP-13和NO的含量均低于对照组（P〈0.01）;实验组软骨中Ⅱ型胶原和蛋白多糖的含量均高于对照组（P〈0.01）。结论：低强度脉冲超声可以通过降低软骨中MMP-3、MMP-7、MMP-13的表达,抑制NO的分泌,促进Ⅱ型胶原和蛋白多糖的合成,来加快损伤软骨的修复。     

低强度脉冲式超声对实验性兔骨关节炎软骨损伤修复的影响

目的 研究低强度脉冲式超声(LIPUS)对实验性兔骨关节炎软骨损伤修复的影响及其作用机制.方法 取36只成年新西兰兔,双膝关节经改良Hulth法建立骨关节炎模型,右膝为LIPUS组,左膝为对照组.2周后LIPUS组接受LIPUS治疗,超声强度30 mW/cm2,频率1.0 MHz, 频宽200 μs,重复频率1.0 KHz,每日一次,每次15 min;对照组接受假超声治疗(过程同LIPUS组,但超声治疗仪不开机,探头无能量输出).分别于治疗后2周、4周、8周处死实验动物,每批12只,观察软骨大体改变并行组织病理学(HE染色、Ⅱ型胶原免疫组化、MMP-13免疫组化)检测,结果采用统计学分析.结果 在相同观察时间点的软骨损伤程度,LIPUS治疗组比对照组轻微,LIPUS治疗组Ⅱ型胶原表达强度高于对照组,MMP-13表达强度低于对照组,差异均有统计学意义.结论 LIPUS能促进骨关节炎软骨Ⅱ型胶原的合成,并能通过降低MMP-13的表达,减少细胞外基质的降解,从而促进骨关节炎软骨损伤的修复.     

基质金属蛋白酶家族在骨关节炎软骨组织中表达的研究

[目的]观察骨关节炎关节软骨中MMP-7、MMP-9、MMP-13和TIMP-1的表达,探讨其与软骨退变的关系及可能的作用机制。[方法]选取20例因骨关节炎行关节置换的软骨组织,常规HE染色观察其组织学形态,ABC免疫组化法观察关节软骨MMP-7、MMP-9、MMP-13和TIMP-1的表达,2例因意外受伤截肢患者的正常膝关节软骨标本作为对照。统计采用Mann-Whitney U非参数检验及相关分析。[结果]骨关节炎关节软骨出现裂隙、纤维化,软骨细胞增多、排列紊乱,并出现大量簇聚软骨细胞和肥大软骨细胞。MMP-7和MMP-13在正常软骨全层均呈低表达,但在退变软骨中的表达则明显增多,光密度值行U检验,两组差异有显著性(P<0.01)。在正常与OA软骨的浅层,MMP-9和TIMP-1的表达无显著性差异(P>0.05);但在深层软骨中,OA软骨MMP-9和TIMP-1的表达较正常软骨明显增多,两组差异有显著性(P<0.01)。[结论]MMP-7,13在OA软骨全层表达均多于正常软骨;MMP-9,13仅在OA软骨深层出现过多表达。MMPs与TIMPs的失衡是导致关节软骨发生组织学退变的原因之一。