辐射,肿瘤与α2—巨球蛋白

a_2-巨球蛋白(a_2M)是机体内广谱的蛋白水解酶抑制剂,既可清除体内蛋白水解酶,又可抑制自由基产生。虽然电离辐射后a_2M变化各家报道不一,但a_2M的抗辐射损伤功能在人及动物实验中均已被证实。肿瘤细胞多缺乏a_2M受体,也不能合成分泌a_2M,而a_2M具有抗肿瘤生长及转移的性质。推测a_2M在肿瘤治疗时,与放疗等的联合,具有积极的意义。     

α2巨球蛋白cDNA片段-增强型绿色荧光蛋白质粒的构建

目的：构建以巨球蛋白cDNA片段（FP6）-增强型绿色荧光蛋白（pEBFP）质粒（pEBFP／FP6双表达质粒）。方法：利用PCR技术克隆出FP6，将其克隆至pMD18-T载体中，再通过分子克隆技术将FP6插入pEBFP表达基因中，构建pEBFP／FP6质粒，双酶切和测序鉴定。结果：PCR方法能克隆FP6，并成功构建pEBFP／FP6质粒，双酶切和测序结果表明构建的pEBFP／FP6质粒完全符合设计要求。结论：利用PCR、酶切、连接反应等基因克隆手段，可以构建pEBFP／FP6双表达质粒。     

离子交换层析分离纯化人结合珠蛋白的研究

目的：探索应用离子交换层析从Cohn组分Ⅳ分离纯化人结合珠蛋白（haptoglobin,Hp）的方法,并对纯化产物进行初步鉴定及活性分析。方法 Cohn组分Ⅳ溶解液稀释后经利凡诺络合,收集上清并用50％硫酸铵进行沉淀,沉淀重溶后用Q Sepharose Fast Flow 层析分离纯化得到目的蛋白。然后利用SDS-PAGE及免疫印迹对目的蛋白进行鉴定,并利用Native-PAGE方法测定纯化产物的活性。结果 Cohn组分Ⅳ经过利凡诺络合及盐析处理后能有效去除部分杂蛋白,并使目的蛋白富集。利用离子交换层析方法从Cohn组分Ⅳ中纯化得到的主要产物为Hp2-2,SDS-PAGE显示Hp纯度较好,免疫印迹分析进一步证明,利用该法成功分离得到目的蛋白Hp,且利用Native-PAGE方法测得目的蛋白活性为2．8 U／ml。结论利用该法从Cohn组分Ⅳ中成功分离得到人Hp,方法简单,易于放大生产,具有较好应用前景。     

二肽基肽酶-Ⅳ的制备及其抑制剂体外筛选模型的优化

目的从分化的Caco-2细胞中提取二肽基肽酶-Ⅳ（DPP-Ⅳ）,并建立和优化分子水平DPP-Ⅳ抑制剂的通量筛选模型。方法诱导Caco-2细胞分化并高表达DPP-Ⅳ,提取DPP-Ⅳ,探索酶的存放时间对酶活性的影响;以甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺（Gly-Pro-PNA）为底物,采用发色底物法检测二肽基肽酶-Ⅳ活性,同时对反应体系的酶用量、底物浓度、反应温度和反应pH进行了优化。结果与结论 Caco-2细胞培养17 d时DPP-Ⅳ含量达峰值;在-80℃条件下,存放18个月对酶活性无明显影响;确定DPP-Ⅳ抑制剂筛选模型反应体系的最适反应条件为：反应酶用量为50μg/L蛋白、底物浓度为4 mmol/L、25℃、pH为7.6;通过该模型对所合成的靶向DPP-Ⅳ的抑制剂类化合物进行筛选,发现5个活性化合物。所述方法提取的DPP-Ⅳ酶及建立的DPP-Ⅳ抑制剂的筛选模型可用于DPP-Ⅳ抑制剂类的早期高通量筛选。     

高血糖素样肽-1与2型糖尿病

高血糖素样肽-1（GLP-1）是肠L细胞对摄食产生应答分泌的肠促胰岛素，它可促进胰岛素生物合成、胰岛素基因表达和现存的8细胞增生，并可促使新的腺管祖细胞成熟和抑制凋亡。由于GLP-1的多种抗高血糖作用，基于GLP-1的2型糖尿病治疗方法已成为研究热点。现就GLP-1的特点及治疗作用等作一综述。     

豚鼠及家兔rhIFNα-2b喷雾剂毒性试验与病理检查

 目的 观察rhIFNα-2b喷雾剂对豚鼠和家兔鼻腔黏膜是否具有刺激作用或伤害反应,同时观察其对上述动物内脏器官的毒性病理损伤.方法 将rhIFNα-2b喷雾剂喷入豚鼠和家兔鼻腔进行局部刺激试验、急性毒性试验及长期毒性试验,各试验分别设空白对照组、稀释液对照组及实验组.长期毒性试验实验组按给药浓度不同分低、中、高3个剂量组.每组用4只动物,实验组给予rhIFNα-2b喷雾剂,稀释液对照组喷入喷雾剂稀释液,空白对照组未喷任何物质.临床观察后全部活杀.剖检鼻腔、咽部和喉部黏膜及内脏等器官,10%中性甲醛液固定,常规病理制片,光镜观察.结果 鼻腔局部刺激试验、急性毒性试验及长期毒性试验中各实验组与稀释液和空白对照组之间的病理组织学所见相似,均未见明显毒性病理损伤.结论 rhIFNα-2b喷雾剂对豚鼠和家兔的鼻腔黏膜及内脏器官均未见明显毒性作用,证实rhIFNα-2b喷雾剂具有可靠的安全性.     

29例冬泳爱好者血浆TXB_2、6－K－PGF_（1α）含量观察

为了探索冬泳对人体血管内血小板聚集及抗聚集系统的影响，我们对苏州市冬泳队中老年冬泳人员进行了血栓素Ｂ_２及６－酮－前列腺素Ｆ_（１α）血浆含量的放射免疫法测定。结果血栓素Ｂ_２为１０７．６±６３．３ｐｇ／ｍｌ，与正常健康人群对照，两者有显著性差异（ｐ＜０．０５）。６－酮－前列腺素Ｆ_（１α）为６３．４±２１．９ｐｇ／ｍｌ，与正常健康人群对照，两者差异不显著（ｐ＞０．０５）。提示冬泳运动有抗血管内血小板非正常聚集而释放血小板素的作用。同时亦提示冬泳人员的血管内皮细胞合成前列环素水平与对照组的低年龄组相近，两者皆对预防老年人罹患的动脉粥样硬化所致的心、脑、肾及其他脏器的血管内血栓形成有一定意义。     

Pegα-2α-IFN联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎30例疗效观察

目的观察pegα-2α-IFN联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎的疗效及不良反应。方法将60例慢性丙型肝炎病人随机分为两组,治疗组和对照组各30例。治疗组给予pegα-2α-IFN135μg皮下注射,每周1次,联合利巴韦林1000~1200mg/d治疗;对照组给予α-2b干扰素300MIU,每周3次,利巴韦林使用量同治疗组,疗程24周。治疗期间1、2、4、6、8、12周,之后每4周随访1次,停药后继续观察24周,治疗及随访期间观察肝功能的生化指标,血常规,肾功,HCVRNA及用药期间的不良反应。结果治疗期间两组血清生理指标复常率,治疗终点应答率,不良反应无显著性差异,持续治疗的应答率分别为36.7%和63.3%有显著差异。结论Pegα-2α-IFN联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎能够提高持续治疗应答率,完全性好,可提高慢性丙型肝炎疗效。     

α-2a-干扰素抑制血管瘤血管内皮细胞增殖的体外实验

 为探讨α-2 a-干扰素治疗血管瘤的作用机制,采用新鲜皮肤血管瘤组织进行血管内皮细胞组织块培养并传代,通过加入α-2 a-干扰素,观察其对血管内皮细胞增殖的影响.结果:当α-2 a-干扰素应用剂量为5×105u/L和1×106u/L时,对血管内皮细胞的增殖有明显抑制作用.应用5×105u/L,培养第12 d后,血管内皮细胞数量和3H-TdR掺入量明显低于对照组.结论:α-2 a-干扰素可能是通过抑制血管瘤血管内皮细胞的增殖,促进血管瘤的退化而发挥治疗作用.     

干扰素α-1b对裸鼠HepG-2瘤形成的抑制作用

目的比较干扰素α-1b(IFNα-1b)与聚乙二醇化干扰素α-1b(PEGIFNα-1b)抑制荷HepG-2裸鼠肿瘤形成的效果。方法取对数生长期的人肝癌HepG-2细胞接种于BALB/c雄性裸鼠背部皮下制备荷瘤动物模型。接种后14d按肿瘤大小将荷HepG-2瘤鼠随机分为溶剂对照组、PEGIFNα-1b组和IFNα-1b组3组,均连续5周皮下注射,每周1次。用电子数显卡尺测量肿瘤体积,第5周末全身麻醉处死裸鼠后测量体重、肿瘤体积和重量。结果观察期内PEGIFNα-1b和IFNα-1b对肿瘤的抑制率分别达56%和42%,未见其对荷瘤鼠体重有明显影响。结论PEGIFNα-1b对裸鼠体内HepG-2肿瘤生长有明显的抑制作用。     

肺癌患者血清sIL-2R和TNF-α的检测及其临床意义

本文分析了73例原发生性肺癌患者治疗前后(手术切除16例,放疗28例,化疗29例)血清s IL-2R和TNF-α的变化.结果表明:①sIL-2R和TNF-α均显著高于正常对照组(P<0.01)、肿瘤越晚升高越明显(P<0.001);②治疗后s IL-2R和TNF-α都明显下降(P<0.01),但各治疗组下降程度不同,放、化疗组比手术切除组下降更显著;③slL-2R和TNF-α在肺癌病人呈正相关关系(r=0.34),其机理还不清楚。结果提示:血清s IL-2R和TNF-α可作为肺癌患者免疫功能的监测指标之一和疗效判断的参考。     

重组人干扰素α-2a口含片剂的豚鼠毒性试验

目的评价重组人干扰素α-2a(rIFNα-2a)口含片剂对豚鼠口腔黏膜及内脏器官的毒性作用。方法设试验组、赋形剂组及空白对照组,每组用6只豚鼠,试验组口含rIFNα-2a片剂(300 IU/片),1片/d,含5~7min,连续含服6 d。赋形剂组口含乳糖颗粒片剂(0.15 g/片),方法同上。空白对照组未含任何物质。临床观察6 d后全部活杀。剖检口腔黏膜、咽部黏膜及内脏等器官,10%甲醇液固定,常规病理制片,HE染色,光镜观察。结果试验组与赋形剂组和空白对照组之间的组织病理学所见相似,均未见明显毒性病理损伤。结论rIFNα-2a口含片剂对豚鼠口腔黏膜及内脏器官均未见明显毒性作用,证实rIFNα-2a口含片剂安全可靠。     

α-2b干扰素＋乙肝健治疗慢性乙型肝炎临床疗效分析

目的：了解α-2b干扰素＋乙肝健联合治疗的临床疗效。方法：①α-2b干扰素粉剂100万u,第1个月每日1次,第2个月隔日1次,第3个月每周2次,肌肉注射。3个月为1个疗程;②口服护肝药物肌苷片,维生素C片,ATP片;③乙肝健（AB片）A、B片各2片,每日3次,口服,连服3个月为1个疗程。结果：68例患者中治愈36例,有效20例,无效12例,总有效率82.3%。结论：乙肝健联合应用干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效显著,可供临床参考应用。     

聚乙二醇干扰素α-2a联合利巴韦林治疗丙型肝炎肝硬化代偿期患者的疗效与安全性分析

目的 观察丙型肝炎肝硬化代偿期患者接受聚乙二醇干扰素α-2a联合利巴韦林治疗的疗效与安全性.方法 对解放军302医院2007年～2010年丙型肝炎肝硬化代偿期患者应用聚乙二醇干扰素α-2a联合利巴韦林共51例进行回顾性研究.此51例患者均采取了起始剂量聚乙二醇干扰素α-2a 90 μg,皮下注射,1次/周,利巴韦林片,...     

重组人干扰素α-2b致发热抽搐胸闷1例

病人，男，21岁，军人。肌注重组人干扰素α-2b（商品名：利分能，哈药集团生物工程有限公司生产）300IU，3h后出现发热、抽搐伴胸闷。查体：体温：39．5℃，脉搏：125次／min，呼吸：20次／min，血压：98／65mmHg（1mmHg=0．133kPa），嗜睡状态，无口吐白沫，四肢肌张力增高，双肺呼吸音稍粗，未闻及哮呜音，心率：125次／min，律齐，肝脾未触及。给予吸氧、地西泮10mg肌注、物理降温等对症治疗。查血、尿、粪常规，心电图、胸片、头部CT等均未发现异常。未作特殊处理，1d后症状消失。     

IFN-α2a - GFE-1融合基因的构建及表达

 目的构建IFN-α 2a-GFE-1融合基因载体,检测其在转染细胞的表达,为肺癌基因导向药物治疗积累实验资料.方法应用聚合酶链式反应技术(PCR)对干扰素(IFN)-α 2a羧基端的酶切位点进行改造,并人工合成肺特异性结合多肽CGFECVRQCPERC(GFE-1)的寡核苷酸片段,二者连接后克隆入pGEM-3zf质粒,连接产物转化感受态DH5α细胞,挑选阳性克隆经EcoRⅠ+PstⅠ酶切鉴定后测序,将测序正确的目的基因从测序载体相应酶切位点消化回收并纯化后,与上述酶处理过的PBV220质粒连接,连接产物常规转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经筛选后随机挑选阳性菌落,提取质粒酶切鉴定.结果序列分析表明合成片段成功的插入IFN-α 2a羧基端,大小、位置、方向均正确无误;融合基因克隆入PBV 220表达载体在大肠杆菌中获得有效表达.结论IFN-α 2a-GFE-1融合基因载体的构建及表达,为检测其在肺内特异性分布及抑瘤活性研究提供了实验基础.     

严重钝性肝损伤后血浆TNFα、TXB2及PGI2变化的实验研究

目的 探讨兔钝性肝损伤（blunt hepatic injury,BHI）后血浆某些细胞因子含量变化及意义。方法 随机选取新西兰兔12只,雌雄不限。采用BIN-Ⅳ型生物撞击机撞击剑突部致伤,分别在伤前、伤后0.5、1、2小时采血测定血浆肿瘤坏死因子（TNFα）、血栓烷素B2（TXB2）和6-酮-前列腺素F1α（6-Keto-PGF1α）含量。结果 BHI后2小时,血浆TNFα含量增高（P〈0.05）;TXB2含量进行性升高（P〈0.01）;6-Keto-PGF1α含量在伤前后无明显变化（P〉0.05）。结论 兔BHI后,血浆部分细胞因子发生明显改变,这可能是BHI后引起器官功能障碍的原因之一。     

干扰素α-2b干粉吸入剂在大鼠体内的耐受性和初步安全性评价

目的对干扰素α-2b干粉吸入剂在大鼠体内的耐受性和初步安全性进行评价。方法通过测定肺泡灌洗液中总蛋白含量、细胞总数及中性粒细胞占白细胞的比例来考察干扰素α-2b干粉吸入剂的耐受性;通过考察肺组织的病理变化来评估干扰素α-2b干粉吸入剂的初步安全性。结果与完全对照组相比,空气对照组、空白干粉吸入剂组以及干扰素α-2b干粉吸入剂组的总蛋白含量及中性粒细胞占白细胞的比例均有显著性差异;与空气对照组相比,空白干粉吸入剂组在4h的总蛋白含量略有增高,干扰素α-2b干粉吸入剂组总蛋白含量及中性粒细胞占白细胞的比例均有显著变化;与空白干粉吸入剂组相比,干扰素α-2b干粉吸入剂组在4h时中性粒细胞占白细胞的比例有显著变化;大鼠的肺组织均呈均匀的海绵状,未出现水肿现象,肺泡中亦未发现巨噬细胞,但24h时空白干粉吸入剂组及干扰素α-2b干粉吸入剂组的组织切片中出现少量的中性粒细胞浸润。结论本文制备的干扰素α-2b干粉吸入剂可能会引起轻微的炎症反应。     

干扰素－α治疗慢性乙型肝炎的疗效观察

我国是HBV感染的高发区．其中3000万为慢性乙型肝炎患者,该病愈后差^[1,2],部分可发展为肝硬化和肝细胞癌。有效治疗慢性乙型肝炎,降低HBV感染是我们的当务之急。2005年中华医学会肝病学分会,感染病学分会联合制定的“慢性乙型肝炎防治指南”中,明确指出慢性乙肝的治疗关键是抗病毒^[3]．国外报道干扰素-α治疗慢性乙型肝炎,1年内复发率超过50％。为了解干扰素-α对我国慢性乙型肝炎的疗效,我们观察了干扰素-α治疗效果并记录随访24个月的结果．现报道如下。