高效液相色谱法测定大鼠血浆中伊立替康及其活性代谢产物SN-38的含量

目的:建立同时测定大鼠血浆中伊立替康(CPT-11)及其活性代谢产物7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)浓度的高效液相色谱法。方法:以10-羟基喜树碱作为内标,先用7%高氯酸酸化血浆,再用7%高氯酸-乙腈(50∶50)沉淀蛋白。采用Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)进行分离;以0.05 mol·L-1的磷酸氢二钠-甲醇-三乙胺(50∶50∶0.025,磷酸调pH 3.0)为流动相;荧光检测波长:激发波长380 nm,发射波长550 nm。结果:大鼠血浆中CPT-11和SN-38线性范围分别是20～5000 ng·mL-1(r=0.9997)和2～500 ng·mL-1(r=0.9999)。两组分最低检出限分别为15 ng·mL-1和1.7 ng·mL-1。2组分平均相对回收率分别是98.7%和99.9%;平均绝对回收率分别87.2%和94.7%。2组分日内、日间精密度均小于12%。结论:本方法快速、简便、准确,灵敏度高,可用于CPT-11及其活性代谢产物SN-38药代动力学的研究。     

HPLC法测定血浆中伊立替康及其代谢产物SN-38、SN-38G浓度及方法学研究

目的：建立同时测定晚期结直肠癌患者血浆中伊立替康（CPT-11）及其活性代谢产物7-乙基-10-羟基喜树碱（SN-38）和非活性代谢产物的SN-38葡萄糖醛酸化（SN-38G）的浓度测定方法,并进行方法学验证。方法：以Kromacil C₁₈为色谱柱,甲醇-水（含5 mmol·L^-1 KH₂PO₃,pH=3.0）=55∶45为流动相,激发波长λ_ex=385 nm、发射波长λ_em=535 nm。结果：CPT-11在20~5000 ng·mL^-1范围内线性良好,SN-38在2~500 ng·mL^-1范围内线性良好,r值均为0.999。CPT-11和SN-38的提取回收率分别为53.26%~59.86%和66.83%~71.30%。CPT-11低、中、高三种浓度的日间和日内精密度均小于6.32%;SN-38低、中、高三种浓度的日间和日内精密度均小于7.02%。血浆样品反复冻融3次、室温放置8 h、进样器中放置24 h及长期冻融,稳定性均良好,样品浓度均未见显著改变。结论：使用高效液相色谱-荧光定量检测法简便、准确、灵敏,适用于晚期结直肠癌患者血浆中伊立替康及其代谢产物SN-38、SN-38G的血药浓度测定。     

高效液相色谱法测定血浆中伊立替康的含量

目的建立血浆中伊立替康含量的测定方法。方法以C18色谱柱、0．05mol／LNa2HPO4(pH=3．0,内含0．05mol／L辛烷基磺酸钠)-乙腈=68：32为流动相分离、荧光检测伊立替康,外标法定量。结果伊立替康浓度在25．0-1000μg／L内,浓度与峰面积之间有良好的线性关系(C=0．00249A-8．15,r=0．9994)。最小检出质量浓度为2．0μg／L。50,100,500μg／L伊立替康的相对回收率(％)分别为96．4、98．3和100．4。三个浓度的平均日内RSD为2．87％,平均日间RSD为4．30％。结论本方法快速、简便、准确,可用于科研和临床工作中伊立替康血药浓度的快速检测。     

伊立替康及其主要活性代谢物血药浓度和药代动力学测定

目的 测定抗癌药物伊立替康(CPT-11)及其主要活性代谢物SN-38,SN-38G的血药浓度和药代动力学指标.方法 样品先经甲醇-乙腈(50 ∶ 50体积比)沉淀蛋白,并用盐酸酸化使内酯环开环.用高效液相色谱仪定量:以喜树碱作内标;Xterra RP18柱,激发波长370 nm,检测波长为470 nm和534 nm.结果 血浆CPT-11及其活性代谢物、酸性提取物在此条件下的稳定性较好.三种待测物线性范围皆为1～1000 ng/ml,检测限都是1 ng/ml.相对标准差为3.1％～11.7％的血浆.测定回收率为93.2％～109.8％.中位提取回收率为91％.结论 所建立的方法可用于测定CPT-11,SN38和SN38-G在人血浆中的药物浓度,可满足临床进行CPT-11人体药代动力学研究.     

沙利度胺对伊立替康及其代谢物SN-38在大鼠体内药动学的影响

目的:研究伊立替康合用沙利度胺后伊立替康及其代谢物SN-38在大鼠体内的药动学情况。方法:以健康♂SD大鼠为受试对象,随机分成伊立替康注射液10、20mg·kg-1单用组(对照组)及与沙利度胺(20mg·kg-1)合用组(实验组),给药后0.083、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10、12h采集血样并测定伊立替康、SN-38血药浓度,采用DASver2.0软件拟合二者的药动学参数。结果:与对照组比较,伊立替康10mg·kg-1实验组伊立替康AUC0～t、Cmax显著增加(P<0.05),SN-38的AUC0～t降低(P<0.05);20mg·kg-1实验组伊立替康Cmax显著增加(P<0.05),SN-38的Cmax、AUC0～t显著降低(P<0.05)。结论:联用沙利度胺可以增加伊立替康AUC0～t同时减少SN-38的AUC0～t及Cmax。     

HPLC-荧光法测定人血浆中伊立替康及其活性代谢产物的浓度

目的:建立同时测定人血浆中伊立替康(CPT-11)及其活性代谢产物7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)浓度的方法。方法:血浆样品经乙腈沉淀蛋白及盐酸酸化后,以喜树碱为内标,采用高效液相色谱-荧光法测定。色谱柱为Waters Luna C_(18),流动相为0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液-乙腈(70∶30,V/V,用磷酸调节pH至4.0),流速为1 mL/min,激发波长为380 nm,发射波长为480 nm(CPT-11)、535 nm(SN-38),柱温为25℃,进样量为20μL。结果:CPT-11和SN-38血药浓度分别在200~1 000、5~45 ng/mL范围内线性关系良好(r分别为0.999 4、0.999 2,n=5),定量下限分别为200、5 ng/mL;日内、日间RSD为1.68%~5.57%;CPT-11和SN-38的相对回收率分别为90.12%~106.93%(RSD<8%,n=5)、92.07%~102.56%(RSD<6%,n=5),提取回收率分别为72.23%~86.56%(RSD<6%,n=5)、71.98%~83.44%(RSD<7%,n=5)。采用该方法测得5例结肠癌患者体内CPT-11和SN-38的血药浓度分别为431.13~617.19、13.97~31.89 ng/mL(静脉滴注结束后1 h),398.14~584.43、11.61~29.94 ng/mL(静脉滴注结束后2 h)。结论:该方法样品处理简单、快速,且灵敏度高、重复性好,适用于临床常规监测CPT-11及其代谢物SN-38的血药浓度及药动学研究。     

伊立替康浓度测定及其输液稳定性考察

目的建立反相高效液相色谱法测定伊立替康浓度的方法。方法以C18为固定相,30%乙腈（含0.06mol·L^-1三乙胺,0.05mol·L^-1醋酸钠,0.17mol·L^-1醋酸）为流动相,检测波长254nm。结果伊立替康在10～80μg·mL^-1范围内呈良好的线性关系。结论6h内伊立替康在0.9%氯化钠输液中有良好的稳定性,可以满足静脉配置中心集中配置和临床使用的要求。     

高效液相色谱法测定人血浆中替米沙坦的浓度

目的:建立HPLC法测定人血浆中替米沙坦浓度。方法:采用Dimak Diamonsil钻石C18色谱柱(200 mm×4．6 mm,5μm);流动相,水-三乙胺-乙腈(73:0．12:27);荧光检测激发波长为305 nm,发射波长为380 nm。结果:替米沙坦线性范围为1 -200 ng·ml-1,最低检测限为0．25 ng·ml-1。结论:该法准确、灵敏、简便。     

高效液相色谱荧光检测法测定人血浆中替米沙坦浓度及其应用

目的:建立高效液相色谱荧光检测人血浆中替米沙坦浓度的方法,并用于研究替米沙坦片的人体药代动力学。方法:采用固相萃取方法提取血浆中的替米沙坦,色谱柱为 Diamonsil C_(18)柱(5μm,4.6mm×150mm),以乙腈-磷酸二氢钾缓冲液(61∶39,磷酸调 pH=3.74)为流动相,流速1.0mL·min~(-1),坎地沙坦为内标,荧光检测波长λ_(Ex)=305nm,λ_(Em)=365nm。结果:本法测定替米沙坦的线性范围为0.5-144ng·mL~(-1),r=0.9998,绝对回收率在79.62%-85.69%(n=5),相对回收率在101.9%-109.0%(n=5),日内和日间 RSD 分别为4.23%-9.80%和4.03%-9.95%(n:5)。结论:本法灵敏、准确,操作简捷,适用于替米沙坦的血药浓度测定及药代动力学研究。     

人血浆中伊立替康及其活性代谢物7-乙基-10羟基喜树碱浓度高效液相色谱-荧光测定方法的建立

目的:建立人血浆中伊立替康(CPT-11)及其代谢物7-乙基-10羟基喜树碱(SN-38)的浓度测定方法并进行方法学考证。方法:用Luna 5u CN100A(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,乙腈与醋酸铵缓冲溶液(50 mmol.L-1,pH4)为流动相梯度洗脱,CPT-11的检测波长为Ex/Em=368 nm/432 nm,SN-38的检测波长为Ex/Em=368 nm/535 nm。结果:CPT-11保留时间为(9.3±0.3)min,SN-38保留时间为(4.8±0.3)min。空白样品在CPT-11、SN-38及内标喜树碱出峰位置均无干扰。CPT-11在46.9～6 000.0nmol.L-1的范围内线性良好,SN-38在2.0～250.0nmol.L-1的范围内线性良好,r值均为0.998。低浓度点RSD均在20%内,其余浓度点的RSD均在15%内,准确度均在85%～115%之间。血浆样品长期冻存稳定性良好,反复冻融3次及提取后室温放置24 h条件下,样品浓度均无显著变化。结论:使用高效液相色谱-荧光检测方法简便,准确,灵敏,适用于伊立替康及其活性代谢物SN-38的血药浓度检测。     

反相高效液相色谱荧光检测法测定尿液儿茶酚胺的浓度

目的：建立高效液相色谱荧光法检测尿液中儿茶酚胺的浓度。方法：通过自制氧化铝固相萃取小柱对尿液样本预处理,以3,4-二羟基苄胺（DHBA）为内标,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18（250mm×4．6mm,5μm）;流动相为甲醇：0．02mol·L^-1磷酸二氢钾=2：98（含有0．2mmol·L^-1乙二胺四乙酸二钠）;流速0．9ml·min^-1;进样量：20山,柱温：23℃;荧光检测器,λEx为286nm,λEm为318nm。结果：去甲肾上腺素、肾上腺素和多巴胺的线性范围分别为3．6-115．2．14．85～475．2和28．65～916．8ng·ml^-1,提取回收率约为80％左右,RSD〈7％,且在避光条件下较稳定。结论：本法灵敏准确可靠,可用于测定尿液中儿茶酚胺浓度。     

The transformation of irinotecan (CPT-11) to its active metabolite SN-38 by human liver microsomes Differential hydrolysis for the lactone and carboxylate forms

Irinotecan (CPT-11) is a new camptothecine derivative presently in development for the treatment of several advanced malignancies. It is converted in vivo to a highly potent metabolite, SN-38, by carboxylesterases. All camptothecine derivatives undergo lactonolysis in a pH-dependent reversible manner, generating inactive carboxylate forms. We have investigated in vitro the kinetics of transformation of CPT-11 to SN-38 by human liver microsomes originating from several donors. Microsomes from seven livers were studied individually or as a pooled preparation. CPT-11, either in its lactone or its carboxylate form, was added at a range of concentrations. The SN-38 formed was measured by HPLC with fluorometric detection. In the deacylation-limited carboxylesterase reaction, the linear steady-state kinetics between 10 and 60min were determined. At all concentrations of CPT-11, the steady-state velocity of SN-38 formation as well as the intercept concentrations of SN-38 were about 2-fold higher when the substrate was under the lactone form than under the carboxylate form. We estimated the values (±SD) of K’_m and V _max to be 23.3±5.3μM and 1.43±0.15pmol/min/mg for the lactone and 48.9±5.5μM and 1.09±0.06pmol/min/mg for the carboxylate form of CPT-11, respectively. We conclude that the greater rate of conversion of CPT-11 lactone may contribute to the plasma predominance of SN-38 lactone observed in vivo. The inter-individual variation of SN-38 formation was relatively high (ratio of 4 between extreme values) but no large age- or gender-related differences were seen. The effect of twelve drugs of different therapeutic classes (antibiotics, antiemetics, antineoplastics, antidiarrhoeics, analgesics), which could be administered in association with irinotecan in the clinical setting, was evaluated in this system (drug concentration: 100μM; CPT-11 lactone concentration: 10μM). Loperamide and ciprofloxacine where the only drugs exerting a weak inhibition of CPT-11 conversion to SN-38. Received: 30 December 1996 /Accepted: 30 April 1997     

高效液相色谱串联质谱法测定人血浆硝苯地平浓度

目的建立测定人血浆硝苯地平浓度的高效液相色谱-质谱串联（HPLC-MS/MS）分离法。方法以咪达唑仑为内标,血浆样品经乙腈沉淀,HPLC MS/MS分离 分析。Diamonsil C18柱（2.1 mm×150 mm,5 μm）,流动相：甲醇：水（77.7：23.3）;流速：0.3 mL&#8226;min－1。采用电喷雾离子源（ESI）,以多离子反应监测方式（MRM）进行正离子监测,硝苯地平和内标咪达唑仑定量分析离子对分别为m/z 369.1/224.2和m/z 325.9/291.0。结果硝苯地平血浆浓度测定方法线性范围为1.205～241.000 ng&#8226;mL－1,r＝0.996 9。定量下限为 1.205 ng&#8226;mL－1,方法回收率85%～115%。批内和批间RSD＜9%。结论该方法灵敏、准确、可靠,适用于硝苯地平的人体药动学研究。     

反相高效液相色谱荧光检测法测定血浆及膀胱中阿霉素的浓度

目的建立测定血浆及膀胱组织中阿霉素含量的反相高效液相色谱法。初步应用于膀胱癌患者膀胱内灌注阿霉素预防膀胱肿瘤术后复发的疗效观察。方法血浆中样品用二氯甲烷-异丙醇混合液提取,膀胱组织制成匀浆后经二氯甲烷-异丙醇混合液提取,Hypersil ODS柱(4.6 mm×200 mm,10μm)为分析柱,甲醇-0.01 mol.L-1磷酸二氢钾-冰醋酸(85∶15∶0.5)为流动相,检测波长为E4X75 nm、E54M5 nm,以柔红霉素为内标。结果血浆及膀胱组织中阿霉素的线性范围分别为10~300 ng.ml-1和0.1~1.0μg.g-1,日内、日间误差RSD均小于10%,平均回收率分别为104.39%和94.52%。结论本法测定血浆及膀胱组织中阿霉素含量准确、简便,适用于阿霉素药代动力学的研究。     

反相高效液相色谱荧光检测法测定血浆及膀胱中阿霉素的浓度

目的 建立测定血浆及膀胱组织中阿霉素含量的反相高效液相色谱法。初步应用于膀胱癌患者膀胱内灌注阿霉素预防膀胱肿瘤术后复发的疗效观察。方法 血浆中样品用二氯甲烷-异丙醇混合液提取,膀胱组织制成匀浆后经二氯甲烷-异丙醇混合液提取,Hypersil ODS柱(4.6 mm×200 mm,10μm)为分析柱,甲醇-0.01 mol·L^-1磷酸二氢钾-冰醋酸(85∶15∶0.5)为流动相,检测波长为E_X^{475 nm}、E_M^{545 nm},以柔红霉素为内标。结果 血浆及膀胱组织中阿霉素的线性范围分别为10～300 ng·ml^-1和0.1～1.0μg·g^-1,日内、日间误差RSD均小于10%,平均回收率分别为104.39%和94.52%。结论 本法测定血浆及膀胱组织中阿霉素含量准确、简便,适用于阿霉素药代动力学的研究。     

SN-38 active loading in poly(lactic-co-glycolic acid) nanoparticles and assessment of their anticancer properties on COLO-205 human colon adenocarcinoma cells

Abstract

SN-38 is a highly effective drug against many cancers. The development of an optimal delivery system for SN-38 is extremely challenging due to its low solubility and labile lactone ring. Herein, SN-38 encapsulated in poly(d,l-lactide-co-glycolide) nanoparticles (NPs) is introduced to enhance its solubility, stability and cellular uptake. SN-38-loaded NPs prepared by spontaneous emulsification solvent diffusion (SESD) method had an average diameter of 310?nm, a zeta potential of ?9.69?mV and a loading efficiency of 71%. They were able to protect the active lactone ring of SN-38 against inactivation under physiological condition. A colorectal adenocarcinoma cell line (COLO-205) was used to assess the NPs effects on cytotoxicity and cellular uptake. Result showed a significant decreased cell proliferation and cell apoptosis. These results suggest that these SN-38-loaded NPs can be an effective delivery system for the treatment of colon cancer and potentially for other types of cancers.