白血病细胞相关抑制物对红细胞系造血影响的初步探讨

本文以体外红系祖细胞培养方法。观察白血病细胞相关抑制物对正常红系祖细胞(CFU-E)的抑制作用。10/10例初发未治急性白血病病人的白血病细胞培养液对CFU-E的生长均有抑制,抑制率25.4～67.4％,平均抑制率为44.35％。结果提示,白血病细胞相关抑制物对正常红细胞系造血也有抑制作用。     

豚鼠胸腺与骨髓细胞混合培养体外造血的研究

本文对豚鼠胸腺与骨髓细胞混合培养,及其体外造血、上悬液中成纤维细胞集落生成细胞(FCFC)的再次培养,底层贴壁的基质祖细胞(CFU—F)分泌成集落刺激因子(CSF),粒一巨噬系祖细胞(CFU—GM)培养等进行了初步研究,并对胸腺与骨髓混合培养体外违血的作用机制进行了观察和讨论。     

造血祖细胞体外培养在研究病毒与骨髓衰竭关系中的意义

临床上已肯定病毒感染可引起严重的骨髓造血功能衰竭。近年造血祖细胞体外培养体系,即造血祖细胞集落形成分析法(CFUASSay)的建立,为研究病毒与造血衰竭的关系提供了重要的实验室依据,揭开了认识和研究病毒与骨髓造血功能衰竭关系的新篇章。1　肝炎病毒病毒性肝炎患者常伴有骨髓造血功能抑制。甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)均与再生障碍性贫血有关。近年应用造血祖细胞体外培养证实,肝炎病毒对造血祖细胞有直接作用。ZeldiS等[1]用HAV、HBV体外感染人骨髓单核细胞(MNC),将不同类型肝炎患者血清与正常…     

白血病患者多向造血祖细胞培养后的透射电镜观察

本文运用透射电镜证明,所运用的极限稀释多向造血祖细胞(CFu—Mix)微量培养体系是体外研究造血细胞分化的重要方法。在加入一系列生长因子后,正常人骨髓细胞可向红、粒、巨核细胞系方向分化,而白血病细胞却不能,其集落细胞仍带有明显的白血病性质,提示白血病可能为多向造血祖细胞阶段的恶性变。     

白血病红系、粒系造血祖细胞集落测定及血清调控作用研究

本文报告了应用我们已建立的红系造血细胞体外培养方法,并配合粒系造血祖细胞体外培养方法,观察了慢性粒细胞白血病(简称慢粒)红系和粒系造血祖细胞集落细胞的体外增殖特性、集落产率、集落细胞染色体核型变化,以及慢粒集落细胞对刺激因子反应特性。此     

人参总皂甙诱导人骨髓基质细胞表达GM-CSF的实验研究

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对人骨髓基质细胞表达GM—CSF的影响及其与人粒单系血细胞发生的关系。方法：采用造血祖细胞与骨髓基质细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学和核酸分子原位杂交等技术。结果：TSPG能显著刺激粒单系造血祖细胞(CFU—GM)增殖；经TSPG诱导制备的骨髓基质细胞条件培养液富含GM—CSF样活性；TSPG能显著促进骨髓基质细胞的GM—CSF蛋白和mRNA表达。结论：TSPG可能通过直接和/或间接途径促进造血诱导微环境中的骨髓基质细胞合成和分泌GM—CSF，进而促进CFU—GM的增殖分化。     

骨髓增生异常综合征患者血清造血抑制活性的研究

目的 :探讨骨髓增生异常综合征 ( MDS)患者血清对正常骨髓粒系及红系造血祖细胞的抑制作用。方法 :应用甲基纤维素体外培养法 ,以 DNA末端标记及流式细胞术分析观察患者血清体外抑制正常人骨髓造血祖细胞增殖及对正常人造血细胞凋亡的作用。结果 :2 3例患者中有 3例的血清具有抑制正常骨髓粒系祖细胞生长的作用 ,4例血清具有抑制正常骨髓红系祖细胞生长的作用。4例对正常骨髓红系祖细胞生长有抑制作用的患者中有 3例患者血清的抑制活性可被抗肿瘤坏死因子α( TNFα)单克隆抗体中和。 2例具有抑制正常骨髓红系祖细胞生长活性的血清在体外可促进正常骨髓造血细胞凋亡。结论 :部分 MDS患者血清中存在造血抑制因子 ,这种抑制因子主要是 TNFα,TNFα诱导造血细胞凋亡是致部分 MDS患者无效造血的重要原因     

外源性shh蛋白对c-kit+造血祖细胞增殖分化作用研究

目的 探讨sonic hedgehog(Shh)信号对小鼠造血祖细胞的扩增分化调控作用.方法 取孕14.5天Balb/C小鼠,分离培养小鼠胎肝基质细胞作饲养层.免疫磁珠法分选小鼠骨髓来源c-kit+造血祖细胞,将分选的造血祖细胞在不同实验组培养条件下培养7d(a.对照组;b.Shh组;c.以胎肝基质细胞为饲养层的Transwefi共培养组;d.Shh+Transvcell共培养组).通过绘制细胞生长曲线,免疫表型鉴定及功能分析,观察胎肝基质细胞饲养层以及Shh活性肽对细胞增殖、分化、集落形成的调控作用.结果 和对照组相比,胎肝基质细胞可以明显促进造血祖细胞增殖(P<0.05);单纯的外源性Shh蛋白可以同时促进造血祖细胞的增殖和分化(P<0.05);在与胎肝基质细胞共培养体系中,外源性Shh蛋白可以明显地促进细胞增殖,经过体外培养7 d后,细胞数迭80×105,其中c-kit+细胞占(84±9.44)%,集落形成能力亦明显增强.结论 Shh蛋白参与调控造血祖细胞的增殖与分化,在胎肝基质细胞的支持下,Shh蛋白对小鼠c-kit+造血祖细胞的扩增有明显的促进作用,表明Shh蛋白与胎肝基质细胞存在着某种整合作用,这种作用在一定程度上调控着造血祖细胞的增殖与分化.     

烷化溶血磷脂体外净化多发性骨随瘤的实验研究

目的 选用ET-18-OCH3作为多发性骨髓瘤(MM)体外净化的药物，处理U266细胞和MM骨髓细胞，研究ALP对骨髓瘤细胞的杀伤作用和骨髓净化效果，为ALP用于MM的体外净化提供实验依据。研究包括2个部分：(1)ET-18-OCH3对U266细胞的抗肿瘤效应。方法 不同浓度ET-18-OCH3与U266细胞作用一定时间，收集细胞，进行计数和集落形成实验(CFU-U266)观察ET-18-OCH3对U266细胞的杀伤作用；通过形态学观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞技术观察ET-18-OCH3诱导细胞凋亡现象；利用RT-PCR、流式细胞技术检测U266细胞bcl-2，c-myc mRNA水平及蛋白表达率，探讨ET-18-OCH3杀伤U266细胞的作用机制。结果 ET-18-OCH3对U266细胞具有明显的细胞毒作用，并可抑制U266细胞集落的形成，这些作用呈剂量和时间的依赖性；形态学特征及梯状DNA降解片段表明ET-18-OCH3；还可诱导U266细胞发生凋亡，并具有时效关系；流式细胞技术检测实验组细胞凋亡率为17．53％，而对照组细胞末出现凋亡现象；RT-PCR显示经ET-18-OCH3处理后U266细胞的bcl-2，c-mycRNA表达明显减少，分别减少了原来的86％和72％；流式细胞技术检测U266细胞的Bcl-2、C-myc蛋白水平明显下降，阳性率分别下降了原来的17％和60％。(2)ET-18-OCH3对MM管髓的体外净化作用。方法 MM患者骨髓细胞与75μg／mL ET-18-OCH3作用4h后，利用流式细胞技术检测CD38 ，CD55，CD45细胞数的变化、半巢式PCR检测IgH CDR Ⅱ基因的变化及粒-单核系造血祖细胞集落形成实验(CFU-GM)研究ET-18-OCH3对MM患者骨髓体外净化的效果；利用流式细胞技术检测正常骨髓CDM细胞和CFU-GM的变化分析ET-18-OCH3对正常造血祖细胞的影响；利用RT-PCR、流式细胞技术检测MM患者骨髓细胞bcl-2，c-myc mRNA及蛋白的变化，以探讨ET-18-OCH3体外净化MM的作用机制。结果 ET-18-OCH3可有效地杀伤骨髓溜细胞，使MM患者骨髓CD34，CD56，CD45细胞及IgH CDRⅡ基因表达明显减少；但不影响MM患者的造血功能，作用后MM患者的CFU-GM无明显变化。ET-18-OCH3对正常的造血祖细胞影响甚小，作用后正常骨髓CD34细胞与CFU-GM均无明显变化；RT-PCR、流式细胞技术检测显示经ET-18-OCH3处理后MM患者骨髓细胞的bcl-2，c-mycRNA水平及蛋白表达率均有所下降。结论(1)ET-18-OCH3可有效地杀伤U266细胞，并可通过下调bcl-2，c-myc mRNA及蛋白的表达，诱导U266细胞发生凋亡，具有显著的抗肿瘤效应。(2)ET-18-OCH3可有效地杀伤骨髓瘤细胞，而对正常的造血祖细胞影响甚小，可用于MM患者骨髓的体外净化。     

氧化应激对铁过载造血干祖细胞造血功能的影响

目的 体外诱导脐血来源的造血干祖细胞铁过载,检测参与氧化应激的活性氧物质(ROS)的水平以及对造血干祖细胞造血功能的影响.方法 通过体外培养脐血单个核细胞(MNC)的过程中添加枸橼酸铁铵(FAC),建立铁过载造血干祖细胞模型.实验分组:对照组、FAC组、FAC+N-乙酰半胱氨酸(NAC)组、FAC+谷胱甘肽(GSH)组.检测各组细胞内ROS水平,并用抗氧化剂处理,检验这一过程中ROS、细胞内可变铁池(LIP)、凋亡水平、造血集落形成和脐血各系造血细胞数目的变化.结果(1)在培养液中加入不同浓度FAC(50、100、200、400μmol/L)培养不同时间(6、12、24 h),发现ROS水平随着FAC的浓度和培养时间变化,且在200μmol/L FAC的培养液中培养24h时ROS水平达到最高.(2)用抗氧化剂(NAC、GSH)联合FAC处理细胞发现,抗氧化剂处理组细胞内总的ROS以及髓系细胞和红系细胞内的ROS明显低于FAC组(均P＜0.05).(3)在200 μmol/LFAC的浓度下,培养脐血MNC 24 h后细胞内总的LIP、髓系细胞和红系细胞内LIP水平均显著高于对照组(均P＜0.05),但抗氧化剂NAC和GSH对铁过载细胞内LIP没有明显影响.(4)对脐血造血干祖细胞造血功能的检测发现:FAC组细胞凋亡比例[(20.90±3.45)％]明显高于对照组[(9.20±1.29)％](P＜0.05);造血集落形成单位(CFU-E、BFU-E、CFU-GM、CFU-mix)计数明显低于对照组(前3项两组间差异具有统计学意义,P ＜0.05);CD34+、CD33+、GlyA+细胞比例及细胞计数均显著低于对照组(均P＜0.05);这些损伤都可以通过NAC或GSH处理部分恢复.结论 氧化应激在铁过载造血干祖细胞的损伤中扮演着重要角色,可以通过升高细胞内ROS水平抑制其造血功能,清除细胞内多余的ROS能减轻这些损伤.研究结果可为治疗铁过载患者因氧化应激诱导的造血功能低下提供新的靶点和研究思路.     

骨髓增生异常综合征发病机制探讨

目的 :探讨骨髓增生异常综合征 (MDS)的发病机制。方法 :采用造血祖细胞体外培养技术 ,观察 40例MDS患者骨髓细胞粒 巨噬细胞集落形成单位 (GM CFU)体外生长情况及患者血清、骨髓细胞对正常人造血祖细胞体外增殖作用的影响。结果 :MDS中的难治性贫血 (RA) 74%为造血干细胞缺损 (HSCD) ;原始细胞增多的难治性贫血 (RAEB)、转化中的原始细胞增多的难治性贫血 (RAEB T)、慢性粒单细胞白血病 (CMML) 10 0 %为免疫介导型 (IC) ;环形铁粒幼红细胞增多的难治性贫血 (RAS)仅 2例 ,造血微环境缺陷 (HMED)及IC型各 1例。结论 :RA、RAS与RAEB、RAEB T、CMML患者可能是两种本质不同的群体 ,研究MDS的发病机制对克服治疗上的盲目性 ,提高疗效、判断预后具有重要意义     

人胎肝造血干细胞的性能、保存及其临床应用

人和动物的胚胎发育中,肝脏是一个重要的造血器官。在小鼠胚胎第10天,人类胎儿发育第2月起,就开始了肝脏造血。随着胚胎的发育,造血组织中造血干细胞的数量及性能也随之发生相应的变化。用体外细胞团培养的方法可检出胎肝内含有大量的红系造血祖细胞(CFU—E)及粒系造血祖细胞(CFU—C)。这是人和动物进行胎肝移植后具有全面重建造血功能的主要物质基础。     

Ⅱ型登革病毒对骨髓红系造血细胞的影响

用体外造血祖细胞培养技术证明Ⅱ型登革病毒对红系造血祖细胞(CFUE)也有生长抑制作用,CFU-E的抑制效应与病毒的浓度呈正相关。说明登革热病人虽然无贫血表现,但骨髓红系造血已受到病毒的影响。     

再生障碍性贫血与免疫

<正> 近几年来,临床和实验室研究都表明:免疫因素在再生障碍性贫血(AA)发病机制中起重要作用。一、细胞免疫Camitta、Rasncay、Finly等认为,一些AA是由T淋巴细胞介导的免疫机制引起的伴有造血干细胞受抑的一种疾病。在这些病人中,淋巴细胞对造血祖细胞的抑制作用已经用体外培养的方法证实。Hoffman等观察7例重型再障(SAA),外周淋巴细胞对正常骨髓CFU-E有抑制作用,而患者血清无此作用,认为获得性AA可能是一种淋巴细胞自我攻击的结果。Baciglupo证实,SAA病人存在Tr细胞,可     

脐血库造血干/祖细胞的分离、保存和集落培养

目的探讨脐血库脐血分离、保存方法及造血干祖细胞的体外培养条件。方法采用建立在密度梯度离心基础上的HES分离法对脐血进行有核细胞分离、冻存及粒巨系造血祖细胞集落（CFU—GM）培养。结果离心管收集分离和四联袋采集分离的方法均可获得较高的单个核细胞量。但四联袋采集分离在回收率和浓缩程度上更为优越，且粒巨系造血祖细胞（CFU—GM）含量丰富。10％DMSO冻存液保存复苏后仍可获得较高活率和CFU—GM。结论我们建立的HES分离结合密度梯度离心分离脐血造血干祖细胞以及脐血长期冻存的方法为广泛、大规模地建立脐血库提供了基础。     

RSL-3在造血干/祖细胞体外分化成巨核细胞中的作用

目的:研究铁死亡诱导剂RSL-3对造血干/祖细胞在体外分化成巨核细胞中的作用.方法:收集广西医科大学第一附属医院住院的3例健康供者的骨髓采集物,利用磁珠分选出CD34+细胞(造血干/祖细胞),添加无血清培养基及巨核细胞定向扩增因子培养14 d,将RSL-3处理的细胞作为实验组,相同溶剂浓度的DMSO处理的作为对照组,处...     

IL-33转基因小鼠骨髓造血干/祖细胞向髓系细胞分化的能力增强

目的利用IL-33转基因小鼠研究IL-33对造血干/祖细胞的增殖和分化影响。方法利用流式细胞仪分析IL-33转基因小鼠及同窝野生对照小鼠的外周血、脾脏、骨髓细胞的免疫表型及造血干细胞分化不同阶段细胞的数量变化;利用体外成克隆实验和细胞周期分析研究IL-33对于造血干细胞增殖能力的影响。结果与野生型小鼠相比,IL-33转基因小鼠B细胞和T细胞在外周血中都明显降低,粒细胞在外周血和骨髓中都有明显增加;IL-33转基因小鼠的骨髓造血干细胞和多能祖细胞数量减少,共同淋系祖细胞数量减少,共同髓系祖细胞和粒单系祖细胞数量增加;IL-33转基因小鼠的造血干细胞处于S-G2-M的细胞增多;体外单克隆实验发现IL-33转基因小鼠造血干细胞形成的集落数增加。结论 IL-33转基因小鼠造血干细胞增殖能力增强,更易向髓系细胞分化。     

用胚胎干细胞诱导的造血干/祖细胞重建小鼠造血功能研究

目的 胚胎干细胞体外诱导分化出现CD34^ 造血干/祖细胞，然后将其注射入致死量照射小鼠体内，以研究其重建造血功能。方法 胚胎干细胞自由分化形成胚胎体后，加入造血刺激因子混合液以诱导产生CD34^ 造血干／祖细胞，将这些造血干／祖细胞注射入经致死剂量照射的小鼠，观察小鼠存活率的改变，并取存活2个月的小鼠骨髓和脾脏，PCR检测嵌合体形成。结果 体外分化第13日CD34^ 造血干／祖细胞比例可高达17．36％，将这些细胞注射入致死量照射小鼠后，可提高存活率达86．67％，存活小鼠的骨髓和脾脏均检测到供体来源的细胞。结论 胚胎干细胞体外分化获得CD34^ 造血干/祖细胞，且后者具有其相应的正常生物学功能。     

脐血造血干细胞体外培养及其特性研究

应用造血祖细胞体外培养和流式细胞术(FCM),观察了脐血中粒-单系祖细胞(CFU-GM)和红系祖细胞(BFU-E)的数量和特性,并对其细胞增殖周期和骨髓及成人外周血做了比较.结果表明,脐血中含丰富的CFU-GM和BFU-E,其数量低于成人骨髓而大大超过外周血水平;脐血红系祖细胞对促红细胞生成素(EPO)和爆式促进活性(BPA)表现出更高的敏感性,而粒系祖细胞对集落刺激因子(CSF)的敏感性和骨髓比较似无明显差别;脐血S期、G_2+M期及S+G_2M期细胞数均明显低于骨髓,虽略高于外周血各期细胞数,但差别无显著性意义.提示脐血造血干细胞体外培养可以得活性较高的祖细胞.     

动员人外周造血祖细胞定向诱导树突状细胞

目的 探讨由动员人外周造血祖细胞体外培养扩增获得的树突状细胞（DC）的生物学特性, 为临床应用肿瘤树突状细胞疫苗建立制备方法。方法 用CS-3000血细胞分离机分离预经干细胞动员的患者外周血单个核细胞（PBMC）,去除淋巴细胞和单核细胞,阴性选择得到外周造血祖细胞,加入rhGM-CSF和rhIL-4培养10~14 d成为树突状细胞,然后进行形态学检测、细胞表型和T细胞刺激能力分析。结果 由外周造血祖细胞来源的树突状细胞可以达到(0.5~1.0)×108数量级;高倍镜和电镜照片显示典型的树突状细胞形态和超微结构;流式细胞仪分析显示细胞高表达HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原和共刺激分子CD80、CD86;同种混合淋巴细胞反应显示细胞具有高效的刺激静止T淋巴细胞活化增殖的能力。结论 用血细胞分离机分离动员外周造血祖细胞体外定向诱导制备树突状细胞可以作为制备肿瘤疫苗的新途径。