CD4+CD25high调节T细胞及FOXP3基因在慢性移植物抗宿主病患者外周血中的表达及意义

移植物抗宿主病(GVHD)是异基因造血干细胞移植后最常见的并发症和主要致死原因之一,目前治疗GVHD的主要药物是非特异性免疫抑制剂,不良反应较大[1].CD4+CD25+调节T细胞是一群免疫调节(抑制)细胞,在自身免疫疾病和肿瘤免疫中均发挥着重要作用[2,3].     

异基因造血干细胞移植中供体CD4+CD25+T细胞与aGVHD的相关性研究

目的探讨供体CD4 CD25 免疫调控T细胞的表达水平与受者急性移植物抗宿主病(Agvhd)的相关性.方法 13例异基因造血干细胞移植中,采用流式细胞仪检测供体CD4 CD25 免疫调控T细胞的表达水平,并随访患者移植后Agvhd的发生情况及严重程度.结果 13例患者均获造血重建,Ⅰ (a)GVHD 5例, Ⅱ (a)GVHD 2例 ,ⅣaGVHD 1例.发生aGVHD组供体CD4 CD25 免疫调控T细胞水平为(1.52±1.25)%,未发生aGVHD组为(2.70±2.08)%,两组免疫调控T细胞水平差异有显著性(P<0.05).结论供体CD4 CD25 免疫调控T细胞的表达水平与受者aGVHD的发生有相关性,提高供体免疫调控T细胞水平有望减低移植后aGVHD发生率.     

单倍体相合造血干细胞移植后细胞免疫重建的动力学的临床研究

异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)属于造血免疫细胞移植,NK细胞是HSCT后最早开始恢复的淋巴细胞亚群.NK细胞受体分子(KIR)在HSCT中与移植物抗宿主病(GVHD)发生以及与移植后复发的关系引人注目[1].异基因供者移植物中的CD4+ CD25+细胞群(Tmg)细胞比例与GVHD发生有关[2-3].我们前期的实验研究发现供者未成熟DC细胞可以防止骨髓移植后GVHD发生而不减弱移植物抗白血病(GVL)效应[4].这些与GVHD密切相关的细胞在单倍体相合移植后免疫功能恢复状况及其与临床表现的关系值得深入研究.我们以相关不相合HSCT患者为研究对象,探讨移植后DC亚群、CD16+ CD158b+细胞和CD4+ CD25+细胞等免疫细胞造血恢复与GVHD发生和复发的关系.     

CD4+CD25+调节性T细胞及其与GVHD的关联性

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞是一群表型和功能特异的T细胞亚群，具有免疫无能和免疫抑制两大特性，通过细胞直接接触或分泌抑制性细胞因子发挥对CD4^＋CD25^＋T细胞的抑制作用。GVHD是异基因造血干细胞移植最严重的并发症之一，近来有关CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与GVHD关联性的研究得出了两种截然相反的结论，即该类细胞可有效防治GVHD的发生及该类细胞与GVHD的发生率成正比。这一研究结果的明确将为GVHD的临床治疗提供新的思路。本文就CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及其免疫表型、特性、免疫调节作用机制及CD4^＋CD25^＋T细胞与GVHD的关联性的一些新的研究进展作一综述。     

单倍体相合骨髓移植后CD4~+CD25~+ T细胞免疫恢复的临床研究

本研究探讨单倍体相合骨髓移植后CD4+CD25+T细胞免疫恢复及其与移植物抗宿主病(GVHD)和复发的关系。采集27例单倍体相合骨髓移植患者在移植后不同时间内的外周血标本,用流式细胞仪检测分析CD4+CD25+T细胞百分比和绝对数,同时比较该细胞亚群恢复与GVHD和白血病复发的关系。结果表明:经过G-CSF动员后供者外周血中CD4+CD25+细胞百分比明显增高(p0.05)。移植后30天CD4+CD25+细胞恢复到正常水平的20%,但在移植后3个月内恢复颇为缓慢,直到180天才恢复到正常水平的50%。CD4+CD25+细胞恢复与急性GVHD的发生无关,但是在慢性GVHD组CD4+CD25+显著增高。移植后1年内未发现复发与CD4+CD25+细胞绝对计数有关。结论:在骨髓移植后给予抗CD25抗体预防GVHD的治疗模式下,CD4+CD25+细胞恢复与急性GVHD的发生无关,但与慢性GVHD的发生似乎有关,而与白血病的复发的关系不明确。     

CD4+CD25+Foxp3+T调节细胞与小鼠异基因造血干细胞移植GVHD相关性研究

目的探讨CD4 CD25 foxp3 调节性T细胞与小鼠GVHD发生的相关性。方法取8～10周龄的SPF级CB6F1小鼠(H-2b/d,♀)30只,随机分为正常对照组、同基因移植组和GVHD组,每组10只,正常对照组不接受照射和移植,同基因移植组小鼠照射后接受CB6F1小鼠骨髓细胞(1×107)和脾细胞(3×107),GVHD组小鼠照射后接受C57BL/6(H-2b,♂)小鼠骨髓细胞(1×107)和脾细胞(3×107)。在发生GVHD的时间点检测3组小鼠脾细胞CD4 CD25 T细胞和foxp3 mRNA的表达。结果正常对照组、同基因移植组和GVHD组小鼠脾细胞中CD4 CD25 T细胞的比例分别为(8.47±1.03)%、(15.40±0.80)%和(24.03±0.85)%,均有显著性差异(P<0.01)。GVHD组小鼠脾细胞foxp3 mRNA的表达水平明显低于正常对照组和同基因移植组,有显著性差异(P<0.001)。结论CD4 CD25 foxp3 调节性T细胞与小鼠GVHD发生呈负相关,发生GVHD时小鼠脾细胞中CD4 CD25 foxp3 调节性T细胞明显减低。     

供体移植物CD4+CD25+Treg细胞表达水平对儿童异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病的影响

[目的]探讨供体移植物CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)表达水平对儿童异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响.[方法]选取本院进行治疗的allo-HSCT且获成功植入的158例患儿,根据移植性抗宿主病(GVHD)分级将患儿分为Ⅰ~Ⅱ度(64例)和Ⅲ~Ⅳ度(19例),观察不同分级患儿体内CD4+CD25+Treg细胞水平变化.[结果]①CD4+CD25+辅助T细胞在Ⅰ~Ⅱ度明显高于Ⅲ~Ⅳ度,差异有统计学意义(P<0.05);② 良、恶性疾病患儿Ⅰ~Ⅱ度CD4+CD25+Treg细胞比例均明显高于Ⅲ~Ⅳ度,差异有统计学意义(P<0.05);③复发患儿移植物CD4+CD25+Treg细胞比例与非复发患儿差异无统计学意义(P>0.05).[结论]CD4+CD25+Treg细胞有助于降低儿童allo-HSCT后GVHD发生率,且未增加移植后复发风险;移植物Treg细胞表达量对预测儿童异基因造血干细胞移植后GVHD具有一定意义.     

异基因造血干细胞移植后CD4+CD25+调节性T细胞与移植物抗宿主病关系的研究

目的研究异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)后患者CD4 CD25 调节性T细胞(CD4 CD25 Treg)与急性移植物抗宿主病(aGVHD)、慢性移植物抗宿主病(cGVHD)的关系。方法采用流式细胞术检测50例Allo-HSCT后患者及24例健康者外周血CD4 CD25 Treg在CD4 T细胞中的百分含量。结果50例患者均获得造血功能重建。正常对照组与无移植物抗宿主病(GVHD)组CD4 CD25高度敏感(CD4 CD25high)、CD4 CD25 CD127低度敏感(CD4 CD25 CD127low)T细胞百分比分别为(2.185±0.582)%和(6.365±2.155)%vs(2.320±2.813)%和(7.515±5.457)%(P>0.05)。aGVHD组为(1.270±1.385)%和(4.575±3.900)%,低于正常对照组与无GVHD组(均P<0.01);其中,Ⅱ~Ⅳ度aGVHD组显著低于Ⅰ度aGVHD组(P<0.01)。cGVHD组为(1.375±0.812)%和(5.620±1.770)%,低于无GVHD组(P<0.01);其中,广泛性cGVHD组低于局限性cGVHD组(P<0.05)。结论CD4 CD25 Treg的水平与Allo-HSCT后GVHD的发生及严重程度有密切关系;通过监测CD4 CD25 Treg水平对临床早期诊断GVHD及判断GVHD预后、指导免疫调节剂的应用具有重要意义。     

CD4+CD25+调节性T细胞与GVHD

源于胸腺的表达转录因子Foxp3的CD4＋CD25＋调节性T细胞具有免疫调节功能,在外周免疫耐受中有重要作用,可控制异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）的移植物抗宿主病（GVHD）,而不影响移植物抗白血病作用（GVL）,许多移植模型和临床试验均在探索中。植入CD4＋CD25＋调节性T细胞后所获得的抗GVHD作用的动物移植模型及早期HSCT临床研究结果表明,CD4＋CD25＋调节性T细胞输注将能极大改变allo—HSCT的现状。     

急性冠脉综合征患者CD4+CD25+调节性T细胞分析

动脉粥样硬化(AS)是涉及内皮细胞、巨噬细胞、平滑肌细胞和淋巴细胞间相互作用的多因素过程[1].斑块的增长影响器官血液灌流,导致脑血管事件和急性冠脉综合征(ACS)的发生.AS是一种慢性炎症性病变,受机体免疫反应的影响,抗原特异性效应T细胞(主要为CD4+T细胞)促进了斑块的产生和演变[2];调节性T细胞(Tregs)通过直接细胞接触机制和细胞因子调节机制对T细胞和B细胞产生调节作用,维持机体的免疫稳态;其中,CD4+CD25+Trges能通过对效应T细胞的抑制作用产生抗AS作用[3-4].为了解ACS患者外周血CD4+CD25+Trges数目变化和功能改变,我们检测了ACS患者外周血     

应用扩增的Treg预防异基因骨髓移植后移植物抗宿主病的实验研究

目的：探讨扩增后的CD4+CD25+调节T细胞(regulatory T cell ,Treg)输注对异基因骨髓移植(allo-BMT)后小鼠移植物抗宿主病(GVHD)的影响。方法：利用免疫磁珠法分选小鼠Treg细胞； 以抗鼠 CD3ε 单抗、抗鼠CD28 单抗 、鼠重组 IL-2及辐射过的Balb/C小鼠脾细胞为共刺激因子，扩增TREG细胞；建立C57BL/6→BALB/c小鼠allo-BMT模型,接受移植小鼠随机分为3组,移植骨髓后6-8小时后分别予尾静脉输注扩增的Treg细胞、CD4+CD25-T细胞和RPMI 1640培养液(空白对照)。以移植后GVHD表现,肝、脾、小肠组织病理形态、生存期为观察指标并进行组间比较。结果：经免疫磁珠法分选可获得高纯度(91.80±2.15)%及具较强活力(97.58±1.23)%的Treg细胞；移植后(四周左右)的扩增后Treg细胞移植组小鼠肝、脾、小肠GVHD病理损害较同期CD4+CD25-T细胞移植组与空白对照组小鼠有一定程度的减轻。3组小鼠移植后平均存活时间分别为（61. 45±27. 88）天、(18.58±12. 39)天和(26. 37±15. 65)天, 扩增后Treg细胞移植组小鼠平均存活时间较CD4+CD25-T细胞、空白对照组小鼠延长(P<0.05)。结论：allo-BMT后输注增殖的Treg细胞可以减轻移植后GVHD程度,延长小鼠生存时间。     

CD34+细胞分选及临床应用

CD34+是造血干细胞的免疫表型。采用某种方法选择CD34+细胞,选择后CD34+细胞浓集,其百分率有较大增高,并可以有效去除T细胞及某些恶性肿瘤细胞。选择CD34+细胞移植可以减少异基因移植后急性、重度移植物抗宿主病(GVHD),并可能减少自体移植后原发病复发。本文介绍了造血干细胞的免疫表型,生物学特性及CD34+细胞分选方法、临床应用等方面的研究进展。     

调节性T细胞与异基因造血干细胞移植中的移植物抗宿主病

移植物抗宿主病(GVHD)是异基因造血干细胞移植供者移植物中T细胞识别不同的异基因受者抗原导致的复杂疾病过程,移植物T细胞去除却影响植入、免疫抑制、失去移植物抗白血病作用.CD4+CD25+调T细胞(Tregs)在控制自身免疫性疾病中具有重要意义,在控制异源反应性免疫应答中也起重要作用.Tregs预防GVHD机制是抑制普通T细胞(Tcons)增殖与功能活性.本文主要对CD4+CD25+Tregs调控GVHD及免疫治疗现状及应用前景作一综述.     

骨髓间充质干细胞在CD4+CD25+调节性T细胞减轻大鼠移植物抗宿主反应中的作用

本研究探讨间充质干细胞(MSC)对GVHD的作用及其机制.建立大鼠同种异体骨髓移植模型,同时输入供者的T淋巴细胞诱导出移植物抗宿主反应,联合或不联合移植供体来源的MSC,观察受鼠的GVHD的发生情况;利用双荧光标记抗体标记受鼠脾脏和胸腺单个淋巴细胞,通过流式细胞术分析CD4+CD25+调节性T细胞亚群比例的变化,分析MSC的作用机制.结果显示实验组的GVHD的发生程度减轻,存活率提高,而CD4/CD8比值在GVHD组出现不同程度的减少,CD4+CD25+调节性T细胞在实验组中的脾淋巴细胞和胸腺淋巴细胞的比例分别为31.55±7.58%、93.20±2.69%,在GVHD组中的比例分别为20.90±1.90%、57.17±6.79%,实验组中CD4+CD25+调节性T细胞比例比GVHD组中增多,具有显著性差异.结论MSC能有效抑制HSC移植后致死性GVHD的发生,提高生存率,同时MSC可能通过作用于体内调节性T淋巴细胞而间接发挥了抑制GVHD的作用.     

CD4+CD25+调节性T细胞与T细胞的稳态增殖

在淋巴细胞减少的情况下，T细胞群体可通过稳态增殖机制维持自身的数量，但其组成却可能发生改变，导致免疫系统的保护性能力降低而自身反应能力增强。CD4＋CD25＋调节性T细胞可控制T细胞的稳态增殖，在抑制自身免疫性疾病的发生和诱导移植免疫耐受中发挥重要的调节作用。本文对CD4＋CD25＋调节性T细胞与T细胞的稳态增殖及其相关性方面作一综述。     

体外阻断CD40-CD40L共刺激途径减轻小鼠异基因骨髓移植中移植物抗宿主病的研究

目的在异基因骨髓移植移植物抗宿主病(GVHD)小鼠模型中,观察抗CD40L单克隆抗体(单抗)体外预处理供鼠T细胞输注,观察其减轻GVHD的作用并探讨其作用机制.方法供鼠(C57BL/6H-2b)脾T细胞作为反应细胞,受鼠(BALB/cH-2d)脾细胞作为刺激细胞,分别加抗CD40L单抗或不加单抗进行混合培养,培养第5天的细胞作为经体外诱导后的脾T淋巴细胞,分别混合供鼠骨髓细胞后移植给接受8.0 Gy全身照射预处理的受鼠.比较受鼠GVHD发生和造血重建.在移植后不同时间点采用流式细胞仪检测受鼠脾细胞中T细胞表型的改变,用ELISA法检测外周血血清中Th1和Th2类细胞因子的水平.结果移植后对照组受鼠均于25 d内死于GVHD,实验组GVHD的发生率为20%,与对照组小鼠相比,存活率和存活时间明显增高和延长(P<0.01);存活的实验组小鼠(8只)第40天时骨髓细胞中H-2Db阳性细胞为(93.54±2.32)%.实验组小鼠CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+CD25+、CD4+CD69+、CD8+CD25+、CD4+CD40L+和CD8+CD69+T细胞比例明显低于对照组(P<0.05),CD8+CD40L+和CD4+CD45RA+T细胞比例在两组中变化差异无显著性(P>0.05).实验组受鼠血清中细胞因子水平明显低于对照组(P<0.05).结论应用抗CD40L单抗体外孵育的脾T细胞与骨髓细胞混合移植,可明显减少GVHD的发生率,且不影响供鼠造血干细胞的植入,CD4+和CD8+T细胞对异体抗原发生耐受,耐受化T 细胞的活化障碍发生于活化的早期和成熟阶段,同时抑制了Th1和Th2类细胞因子分泌,为抗CD40L单抗应用于临床移植预防GVHD提供了实验依据.     

全相合异基因造血干细胞移植后免疫重建的研究

目的探讨人类白细胞抗原(HLA)全相合异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后免疫重建的规律。方法选择42例2009至2013年在瑞金医院血液科骨髓移植病区接受allo-HSCT患者,采用速率散射比浊法检测预处理前和移植后1、3、6、12及24个月的血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM及IgE水平,流式细胞术(FCM)检测预处理前,移植日,移植后14、21 d和1、3、6、12、18及24个月的T淋巴细胞(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+)、B细胞(CD19+)及自然杀伤(NK)细胞(CD56+CD16+),总结移植后免疫球蛋白及各淋巴细胞亚群的恢复情况并对影响免疫重建的因素进行探讨。结果 CD3+及CD3+CD8+T细胞移植后14 d开始恢复正常,CD3+CD4+T细胞恢复缓慢,在术后2年内低于或接近正常水平。CD56+CD16+细胞移植后恢复较快,21 d左右开始恢复正常水平。CD19+细胞在移植后6个月左右恢复正常,免疫球蛋白IgM、IgG、IgA恢复正常的时间分别为1、3及6个月。不同性别患者移植后免疫重建无明显差异,供体来自同胞的患者免疫重建速度较非血缘移植快。发生严重感染及Ⅲ~Ⅳ移植物抗宿主病(GVHD)患者CD3+CD8+T细胞水平移植后早期明显高于未发生GVHD及感染者。发生Ⅲ~ⅣGVHD患者移植后早期CD3+细胞明显高于未发生GVHD患者,并且CD3+CD4+T细胞恢复有延迟趋势。结论 allo-HSCT后淋巴细胞亚群的免疫重建顺序依次是:CD56+CD16+,CD3+CD8+,CD19+及CD3+CD4+。HLA全相合有利于免疫重建,移植治疗中抗胸腺球蛋白的应用、移植后GVHD发生等是影响免疫重建的最重要因素。     

供体Treg细胞对小鼠异基因骨髓移植后GVHD和GVL效应的影响

本研究探讨供体CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg cells)输注对异基因骨髓移植(allo-BMT)后小鼠移植物抗宿主病(GVHD)及移植物抗GVL)效应的影响。建立BALB/c→C57BL/6小鼠EL4白血病骨髓移植模型,体外磁珠分离纯化供鼠CD4+CD25+T细胞,在骨髓移植的同时分别予尾静脉输注CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25-T细胞。以移植后生存期、GVHD临床评分、组织病理形态等为观察指标并进行组间比较。结果显示:白血病对照组小鼠平均生存时间为(17.9±0.7)天,均存在白血病细胞浸润;移植对照组及效应T细胞组平均生存时间为(23.2±1.6)天和(22.3±1.9)天,肝脏、皮肤和小肠病理切片显示均存在GVHD病理改变;Treg细胞组小鼠平均生存时间为(47.3±6.5)天,70%的受鼠获得长期存活,病理显示无GVHD及白血病细胞浸润,其GVHD评分较移植对照组及效应T细胞组明显降低(p0.05)。结论:在小鼠allo-BMT中联合输注供体CD4+CD25+T细胞可减少及减轻GVHD,并保留GVL效应。     

CD4+CD25+调节性T细胞与造血干细胞移植免疫

CD4 CD25 调节性T细胞是抑制性T细胞的一种亚群,能抑制效应细胞CD4 T细胞和CD8 T细胞的活化与增殖。CD4 CD25 调节性T细胞在免疫调节中发挥重要作用,并能诱导移植免疫耐受。本文就CD4 CD25 调节性T细胞与造血干细胞移植免疫进行综述。     

血缘关系供者外周血干细胞移植中移植物细胞组分对造血重建移植物抗宿主病的影响

目的 探讨HLA全相合血缘关系供者外周血干细胞移植(PBSCT)中移植物细胞组分对恶性血液病患者移植后造血重建、移植物抗宿主病(GVHD)的影响.方法 回顾性分析我科107例接受HLA全相合血缘关系供者PBSCT的恶性血液病患者,其移植物细胞组分与移植后患者造血重建、GVHD的关系.结果 移植物各细胞组分与粒细胞重建时间无关;单个核细胞(MNC)、CD34+细胞数与血小板重建时间呈负相关(r值分别为-0.32和-0.21,P值均＜0.05).CD34+、CD34+CD38-细胞数与急性GVHD发生呈负相关(r分别为-0.24和-0.29,P值均＜0.05).淋巴细胞各亚群数量与急性GVHD发生均无明显关系.CD25+ CD4+、CD3+、CD4+ CD3+细胞数及CD4+/CD8+细胞比值与慢性GVHD发生均呈正相关(P值均＜0.05),且相关系数均大于0.4,其中CD25+ CD4+细胞数与慢性GVHD相关系数高达0.78.CD34+、CD34+ CD38-细胞数与慢性GVHD发生无明显关系.结论PBSCT中输入MNC、CD34+、CD34+ CD38-细胞数增加到一定阈值后,增加细胞数并不能进一步有效促进患者造血重建,反而有可能因输入淋巴细胞数增加而增加患者慢性GVHD、广泛慢性GVHD的发生率.